HBV相關(guān)肝衰竭患者抗病毒治療后免疫重建與CCL3L1及CCL4L基因表達(dá)的相關(guān)性

韓光，于秀霞，國松，宋永嬌，高慶偉，張凡

(大連市第六人民醫(yī)院肝病科，遼寧 大連116000)

HBV相關(guān)肝衰竭患者抗病毒治療后免疫重建與CCL3L1及CCL4L基因表達(dá)的相關(guān)性

韓光，于秀霞，國松，宋永嬌，高慶偉，張凡

(大連市第六人民醫(yī)院肝病科，遼寧 大連116000)

目的 探討HBV相關(guān)肝衰竭的易感性及其抗病毒治療后免疫重建1型趨化因子配體3(CCL3L1)與趨化因子配體4(CCL4L)基因表達(dá)的相關(guān)性。方法 收集我院感染科2011年1月至2014年5月HBV相關(guān)肝衰竭患者全血標(biāo)本200例、HBsAg攜帶者全血標(biāo)本100例以及健康者全血標(biāo)本50例為研究對(duì)象，熒光定量PCR檢測CCL3L1、CCL4L基因，對(duì)HBV相關(guān)肝衰竭患者進(jìn)行抗病毒治療，流式細(xì)胞術(shù)檢測治療各階段的CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞水平；比較三組研究對(duì)象CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)，分析影響HBV相關(guān)肝衰竭并發(fā)急性腎損傷(AKI)預(yù)后的臨床或?qū)嶒?yàn)室指標(biāo)等相關(guān)因素，計(jì)算CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞變化值與變化率。結(jié)果HBV相關(guān)肝衰竭患者CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)顯著低于HBsAg攜帶者與健康者(P＜0.05)，HBsAg攜帶者與健康者相比拷貝數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；HBV相關(guān)肝衰竭并發(fā)AKI的預(yù)后與年齡、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(ALB)、凝血酶原活動(dòng)度(PTA)、尿素氮(BUN)合并肝性腦病等因素有關(guān)，CD8+變化值與CD4+/CD8+變化率在CCL3L1低拷貝組、平均拷貝組與高拷貝組三組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.891、6.286，P＜0.05)，CD8+變化值、CD4+/CD8+變化值與變化率在CCL4L低拷貝組、平均拷貝組與高拷貝組三組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.304、4.867、6.453，P＜0.05)。結(jié)論HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭肝衰竭患者拷貝數(shù)平均下降1個(gè)拷貝，初步顯示CCLSLI拷貝數(shù)與HBV相關(guān)肝衰竭易感性有關(guān)，且CCL3L1、CCL4L基因表達(dá)水平與HBV相關(guān)肝衰竭抗病毒治療后免疫重建有相關(guān)性，可初步得出CCL3L1基因表達(dá)水平越高，越有利于免疫重建。

HBV相關(guān)肝衰竭；類1型趨化因子配體3；趨化因子配體4；易感性；免疫重建；相關(guān)性

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是我國呈高度流行的感染性疾病，也是全球范圍內(nèi)導(dǎo)致肝硬化、肝癌、肝衰竭等慢性肝病以及終末期肝病的常見病因[1]。其中，肝衰竭因病情嚴(yán)重、進(jìn)展迅速、并發(fā)癥復(fù)雜而具有較高的致死率，且80%～90%為HBV相關(guān)肝衰竭[2]，表現(xiàn)為肝細(xì)胞大量壞死，局部微循環(huán)障礙，肝臟合成分泌、解毒等代謝功能與免疫功能急劇惡化而出現(xiàn)多種嚴(yán)重并發(fā)癥的臨床癥候群[3]，其中以HBV相關(guān)肝衰竭并發(fā)急性腎損傷(acute kidney injury，AKI)較為常見，且病情兇險(xiǎn)。早期、長期應(yīng)用抗病毒藥物是HBV相關(guān)肝衰竭的治療關(guān)鍵，不僅可對(duì)抗病毒，對(duì)促進(jìn)機(jī)體免疫應(yīng)答亦有一定作用，抗病毒治療后機(jī)體免疫功能的重建情況可用于判斷疾病預(yù)后。近年來，不僅是HBV相關(guān)肝衰竭的臨床相關(guān)因素得到研究分析，從基因水平研究拷貝數(shù)異常與疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系逐漸成為研究熱點(diǎn)，類1型趨化因子配體3 (CCL3L1)和趨化因子配體4(CCL4L)屬于CCR5的天然配體，有研究表明其基因多態(tài)性與肝衰竭的易感機(jī)制有關(guān)[4]，但CCL3L1、CCL4L與HBV相關(guān)肝衰竭治療預(yù)后的相關(guān)性研究較為少見。本研究探討了HBV相關(guān)肝衰竭的易感性及其抗病毒治療后免疫重建與CCL3L1、CCL4L基因表達(dá)的相關(guān)性，旨在為HBV相關(guān)肝衰竭的有效防治提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集大連第六人民醫(yī)院肝病科2011年1月至2014年5月收治住院的HBV相關(guān)肝衰竭患者全血標(biāo)本200例、同時(shí)期門診乙肝表面抗原(HBsAg)攜帶者全血標(biāo)本100例以及體檢中心健康志愿者全血標(biāo)本50例為研究對(duì)象。HBV相關(guān)肝衰竭組中男性162例，女性38例；年齡23～72歲，平均(40.78± 11.58)歲。肝衰竭分型均為慢加急性肝衰竭，并發(fā)肝性腦病者94例，并發(fā)消化道出血者40例，并發(fā)急性腎損傷者50例，并發(fā)自發(fā)性腹膜炎者18例，并發(fā)電解質(zhì)紊亂者24例。HBsAg攜帶者男性79例，女性21例；年齡28～70歲，平均(41.32±9.81)歲。健康志愿者組中男性40例，女性10例；年齡21～69歲，平均(39.86±14.17)歲。三組受檢者在年齡、性別等一般資料構(gòu)成方面比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)(1)慢加急性肝衰竭診斷參照我國2006年肝衰竭指南，有慢性肝病基礎(chǔ)，TBIL≥17.1μmol/L，凝血酶原活動(dòng)度(PTA)＜40%；(2)肝衰竭并發(fā)急性腎損傷診斷標(biāo)準(zhǔn)：48 h內(nèi)腎功能急劇下降，血肌酐(Scr)增加≥26.4μmol/L或增加≥50%，或尿量＜0.5 mL/(kg·h)持續(xù)6 h以上；(3)HBsAg攜帶者診斷標(biāo)準(zhǔn)：HBsAg(+)，HBeAg(-)，HBV DNA(-)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)在正常范圍內(nèi)。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn)(1)排除合并其他肝炎病毒感染，排除自身免疫性、藥物性、酒精性等其他因素所致的肝炎；(2)排除接受肝移植的患者；排除合并惡性腫瘤、嚴(yán)重臟器功能障礙者。

1.4 方法

1.4.1 CCL3L1、CCL4L基因檢測DNA提取試劑QIAamp DNAKit(250)由德國QIAGEN公司提供，按照試劑盒說明書進(jìn)行全血DNA提取。采用熒光定量PCR檢測CCL3L1、CCL4L基因，根據(jù)GenBank的CCL3L1、CCL4L基因序列，通過Primer Premier 5.0 Software設(shè)計(jì)引物。CCL3L1上游引物為5'-catggtcaggcagaggaagata-3'，下游引物為5'-gcttgcctcttttggtttggaat-3'；CCL4L上游引物為5'-cgtgatagtagtagctgccttctg-3'，下游引物為5'-cgaaatagcagctgcaaaagtagac-3'。以管家基因β-Globin為內(nèi)參對(duì)照，設(shè)計(jì)引物P1：ggcaaccctaaggtgaaggc，P2：ggtgagccaggccatcacta。反應(yīng)體系包括模板2μL，上游引物0.5μL，下游引物0.5μL，探針0.2μL，去離子水6～7μL，緩沖液20μL等；循環(huán)溫度條件：55℃2 min，95℃10 min，95℃10 s與60℃1 min，40個(gè)循環(huán)；凝脂瓊膠電泳并于成像系統(tǒng)中拍照，獲取擴(kuò)增曲線，通過Copy Caller Software進(jìn)行基因表達(dá)分析，CCL3L1拷貝樣本0～1為低拷貝數(shù)，2～3為平均拷貝數(shù)，4～7為高拷貝數(shù)。

1.4.2 抗病毒治療后免疫重建情況評(píng)價(jià) 對(duì)200例HBV相關(guān)肝衰竭患者進(jìn)行抗病毒治療，采用拉夫米定片(湖南千金湘江藥業(yè)股份有限公司，準(zhǔn)字文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H20103481，規(guī)格0.1 g)口服，每次0.1 g，1次/d，聯(lián)合阿德福韋酯片(辰欣藥業(yè)股份有限公司，準(zhǔn)字文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H20080034，規(guī)格10 mg)口服，每日10 mg，1次/d，同時(shí)給予營養(yǎng)支持、糾正低蛋白血癥與電解質(zhì)紊亂，以及護(hù)肝、免疫治療等，必要時(shí)給予輸注新鮮冰凍血漿或全血。流式細(xì)胞術(shù)檢測患者治療各階段的CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞水平，計(jì)算CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞變化值(抗病毒治療48個(gè)月內(nèi)的月平均變化值)與變化率(抗病毒治療后48個(gè)月時(shí)的數(shù)值與治療前數(shù)值比值的對(duì)數(shù)值)，以此來評(píng)估抗病毒治療后的免疫重建情況。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù) 比較三組研究對(duì)象CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)以分析HBV相關(guān)肝衰竭與CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)的關(guān)系。

1.5.2 相關(guān)因素分析HBV相關(guān)肝衰竭并發(fā)AKI預(yù)后的相關(guān)因素：以出院或在院死亡為截止點(diǎn)，將病情轉(zhuǎn)歸分為死亡與存活兩種預(yù)后，統(tǒng)計(jì)死亡組與存活組的臨床及實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，包括性別、年齡、ALT、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)、TBIL、PTA、尿素氮(BUN)、合并肝性腦病等情況。

1.5.3 CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞變化 計(jì)算CD4+、 CD8+T淋巴細(xì)胞變化值與變化率，分析CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)與抗病毒治療后免疫重建的關(guān)系。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多個(gè)獨(dú)立樣本采用SNK-q檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用多分類資料的Logistic回歸；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBV相關(guān)肝衰竭易感性與CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)的關(guān)系 健康者CCL3L1平均拷貝數(shù)為3，HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭肝衰竭患者平均拷貝數(shù)下降1個(gè)拷貝。CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)在三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，組間兩兩比較，HBV相關(guān)肝衰竭CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)與其他兩組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，HBV相關(guān)肝衰竭患者拷貝數(shù)低于HBsAg攜帶者與健康者(P＜0.05)，HBsAg攜帶者與健康者相比CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

表1 HBV相關(guān)肝衰竭易感性與CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)的關(guān)系(±s)

表1 HBV相關(guān)肝衰竭易感性與CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)的關(guān)系(±s)

注：aHBsAg攜帶者與HBV相關(guān)肝衰竭相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t= 2.854、2.372，P＜0.05)；b健康者與HBV相關(guān)肝衰竭相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.671、3.067，P＜0.05)。

?

2.2 HBV相關(guān)肝衰竭并發(fā)AKI預(yù)后的相關(guān)因素200例HBV相關(guān)肝衰竭患者中60例并發(fā)AKI，以出院或在院死亡為截止點(diǎn)分為死亡與存活兩種預(yù)后，死亡組47例，存活組13例。其中，男性死亡組40例，存貨組9例；女性死亡組7例，存活組4例。不同性別HBV相關(guān)肝衰竭并發(fā)AKI預(yù)后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2= 0.051 6，P=0.745)。性別、ALT、GLB、TBIL與HBV相關(guān)肝衰竭并發(fā)AKI的預(yù)后無相關(guān)性，與其有關(guān)的因素有年齡、AST、ALB、PTA、BUN、合并肝性腦??；如表3所示，對(duì)相關(guān)因素行Logistic回歸分析顯示，年齡與BUN為獨(dú)立影響因素(P＜0.05，OR值＞1)，肝性腦病為最強(qiáng)影響因素(OR值＞5)，見表2。

表2 HBV相關(guān)肝衰竭并發(fā)AKI預(yù)后與臨床、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系[±s，例(%)]

表2 HBV相關(guān)肝衰竭并發(fā)AKI預(yù)后與臨床、實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的關(guān)系[±s，例(%)]

組別死亡組(n=47)存活組(n=13) t值P值年齡(歲) 61.43±17.84 42.57±12.07 0.762 0.031 ALT(IU/L) 209.68±342.57 125.11±108.31 0.581 0.611 AST(IU/L) 176.34±265.19 122.04±138.56 0.311 0.267 ALB(IU/L) 19.03±7.71 29.44±4.58 -0.817 0.317 GLB(g/L) 33.64±10.09 35.81±9.96 -0.174 0.893 TBIL(μmol/L) 926.13±159.47 423.40±111.51 0.633 0.611 PTA(%) 26.51±9.04 34.67±7.05 -3.946 0.005 BUN(mmol/L) 23.14±17.78 9.16±6.88 2.75 0.015合并肝性腦病38(63.33) 22(36.67) 3.094 0.023

表3 相關(guān)因素的Logistic回歸分析(n=60)

2.3 CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞變化值和變化率與CCL3L1、CCL4L基因表達(dá)的相關(guān)性200例HBV相關(guān)肝衰竭患者中CCL3L1 0～8拷貝，中位數(shù)為2，分為低拷貝組112例、平均拷貝組51例與高拷貝組37例；CCL4L 0～7拷貝，中位數(shù)為3，分為低拷貝組98例、平均拷貝組54例與高拷貝組48例。如圖1、圖2所示，CD4+變化值與變化率、CD8+變化率在CCL3L1低拷貝組、平均拷貝組與高拷貝組三組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.673、0.978、1.127，P＞0.05)，CD8+變化值與CD4+/CD8+變化率在CCL3L1低拷貝組、平均拷貝組與高拷貝組三組間差異則有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=4.891、6.286，P＜0.05)，且在三組間CD8+變化值依次減少，CD4+/CD8+變化率則有上升趨勢(shì)；如圖3、圖4、圖5所示，CD8+變化值、CD4+/CD8+變化值與變化率在CCL4L低拷貝組、平均拷貝組與高拷貝組三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.304、4.867、6.453，P＜0.05)，CD4+變化值與變化率、CD8+變化率在CCL4L低拷貝組、平均拷貝組與高拷貝組三組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.743、0.684、1.196，P＞0.05)。

圖1 CD8+T淋巴細(xì)胞變化值與CCL3L1拷貝數(shù)直方圖

圖2 CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞變化率與CCL3L1拷貝數(shù)直方圖

圖3 CD8+T淋巴細(xì)胞變化值與CCL4L拷貝數(shù)直方圖

圖4 CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞變化率與CCL4L拷貝數(shù)直方圖

圖5 CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞變化值與CCL4L拷貝數(shù)直方圖

3 討論

肝衰竭為病情嚴(yán)重、進(jìn)展迅速、并發(fā)癥復(fù)雜且治療困難的一種終末期肝病，其中80%～90%為乙型肝炎病毒感染所致的肝衰竭，由于HBV在我國發(fā)病率較高，使得HBV相關(guān)肝衰竭成為我國常見的肝病死亡原因，表現(xiàn)為肝細(xì)胞大量凋亡、壞死超過肝臟細(xì)胞再生能力，肝功能急劇下降，其合成分泌、轉(zhuǎn)化代謝、解毒等多種功能遭到破壞，引起黃疸、腹水、凝血異常、肝性腦病、肝腎綜合征等一系列并發(fā)的癥候群[5-6]，臨床治療棘手，預(yù)后極差。目前認(rèn)為HBV相關(guān)肝衰竭的發(fā)病機(jī)制是病毒與宿主兩方面相互作用的結(jié)果[7]，乙肝病毒基因進(jìn)入機(jī)體宿主細(xì)胞的復(fù)制、變異在宿主生物遺傳特征的基礎(chǔ)上可導(dǎo)致免疫損傷，引起細(xì)胞凋亡、壞死等，例如在抗病毒治療或應(yīng)用某些藥物時(shí)可使病毒基因發(fā)生耐藥變異而打破機(jī)體免疫耐受，或直接影響機(jī)體免疫功能而導(dǎo)致肝衰竭的發(fā)生，因此，免疫應(yīng)答在肝衰竭的發(fā)病中起關(guān)鍵作用。臨床治療上，早期、長期應(yīng)用抗病毒藥物時(shí)HBV相關(guān)肝衰竭的治療關(guān)鍵，不僅發(fā)揮著抗病毒作用，且有助于促進(jìn)機(jī)體免疫應(yīng)答，但是抗病毒治療后的免疫重建情況與個(gè)體差異如宿主細(xì)胞的基因表達(dá)水平等生物遺傳學(xué)特征有關(guān)[8]。近年來，從基因水平研究拷貝數(shù)變異與疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系逐漸成為研究熱點(diǎn)，有研究表明CCL3L1與CCL4L的基因多態(tài)性與肝衰竭的易感機(jī)制有關(guān)[9]。

CCL3L1與CCL4L基因位于人類17號(hào)染色體同一17q11.2區(qū)域，對(duì)表達(dá)CCR1、CCR5的單核、淋巴細(xì)胞均有趨化作用[10]。CCL3L1是CCR1、CCR5的天然配體，在不同人群中的表達(dá)水平有差異性，它與CCR5特異性結(jié)合后可下調(diào)其在單核巨噬細(xì)胞中的表達(dá)，從而抑制病毒侵入細(xì)胞內(nèi)，CCL4L與CCL3L1作用類似，在抑制病毒感染宿主細(xì)胞過程中表現(xiàn)出劑量相關(guān)性[11]。對(duì)于CCL3L1與CCL4L基因表達(dá)水平與HBV相關(guān)肝衰竭的是否存在關(guān)聯(lián)性，有學(xué)者認(rèn)為兩種基因通過表達(dá)調(diào)控CCL3L1、CCL4L兩種配體的水平可影響多種感染性疾病的易感性與進(jìn)程[12]，在本研究結(jié)果中，HBV相關(guān)肝衰竭患者的CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)與HBsAg攜帶者、健康者相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且顯著低于HBsAg攜帶者、健康者的CCL3L1、CCL4L基因表達(dá)水平，表明CCL3L1、CCL4L基因表達(dá)水平較低者可能更容易發(fā)生HBV相關(guān)肝衰竭，這可能與兩種基因的表達(dá)水平低導(dǎo)致機(jī)體對(duì)病毒的抵抗性降低引起免疫耐受下降所致。

CD4+、CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)可在一定程度上反映HBV相關(guān)肝衰竭患者抗病毒治療后的免疫重建情況，在本研究中顯示CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)與CD8+T淋巴細(xì)胞變化值、CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞變化值與變化率有相關(guān)性，說明CCL3L1、CCL4L基因表達(dá)水平與HBV相關(guān)肝衰竭抗病毒治療后免疫重建有相關(guān)性，且發(fā)現(xiàn)CCL3L1基因表達(dá)水平越高，越有利于免疫重建，這與劉莉等[13]在探討HIV患者免疫重建與CCL3L1、CCL4L基因表達(dá)水平的研究結(jié)果基本一致。CD8+T淋巴細(xì)胞是HBV感染后機(jī)體發(fā)生免疫反應(yīng)的重要效應(yīng)細(xì)胞，具有殺傷感染肝細(xì)胞、分泌細(xì)胞因子、破壞病毒復(fù)制等多重效應(yīng)[14]，有研究表明CCL3L1低水平表達(dá)可抑制CD8+T淋巴細(xì)胞的功能，從而表現(xiàn)出對(duì)抗原刺激的敏感性減弱、分泌IFNγ等細(xì)胞因子減少且殺傷效力下降，使機(jī)體出現(xiàn)持續(xù)的CD8+淋巴細(xì)胞激活狀態(tài)，但這并不利于治療后的免疫重建[15]，這可能解釋了本研究中得出的CCL3L1、CCL4L基因拷貝數(shù)與CD8+T淋巴細(xì)胞變化值、CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞變化值與變化率的相關(guān)性。

急性腎損傷(AKI)是腎功能在48 h內(nèi)急劇下降的一種危重病癥，有相關(guān)研究表明HBV相關(guān)肝衰竭的住院患者中約有21%并發(fā)AKI，以腎前性為主，多有上消化道出血、感染、電解質(zhì)紊亂所誘發(fā)，病情兇險(xiǎn)、致死率很高。由于國內(nèi)尚缺乏與HBV相關(guān)肝衰竭并發(fā)AKI預(yù)后相關(guān)因素的研究，因此我們?cè)诒狙芯恐刑接懥瞬糠钟绊慔BV先關(guān)肝衰竭并發(fā)AKI預(yù)后的臨床因素，發(fā)現(xiàn)年齡可作為獨(dú)立影響因素，老年患者中AKI的發(fā)病率較高，這與老年患者普遍存在低蛋白血癥，腎功能出現(xiàn)生理性衰退，且免疫力低下易并發(fā)感染，因此并發(fā)AKI預(yù)后相對(duì)差，另外，HBV相關(guān)肝衰竭并發(fā)AKI預(yù)后尚與AST、ALB、PTA、BUN、合并肝性腦病等臨床或?qū)嶒?yàn)室指標(biāo)相關(guān)，尤其是并發(fā)肝性腦病患者，為最強(qiáng)影響因素。這些相關(guān)因素對(duì)我們?cè)谂R床工作中注意評(píng)估分析患者的臨床特征與預(yù)后，以提高早期診療、降低住院病死率有重要意義。

綜上所述，從基因水平研究拷貝數(shù)異常與HBV相關(guān)肝衰竭發(fā)生發(fā)展的關(guān)系有重要意義，健康者CCL3L1平均拷貝數(shù)為3，HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭肝衰竭患者拷貝數(shù)下降1個(gè)拷貝，初步顯示CCLSLI拷貝數(shù)與HNV相關(guān)肝衰竭易感性有關(guān)，且CCL3L1、CCL4L基因表達(dá)水平與HBV相關(guān)肝衰竭抗病毒治療后免疫重建有相關(guān)性，且初步得出CCL3L1基因表達(dá)水平越高，越有利于免疫重建。

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Correlation of immune reconstitution with CCL3L1 and CCL4L gene expression in patients with HBV-relatedliver failure after antiviral therapy.

HAN Guang,YU Xiu-xia,GUO Song,SONG Yong-jiao,GAO Qing-wei,ZHANG Fan.Liver Disease Department,the Sixth People's Hospital of Dalian,Dalian 116000,Liaoning,CHINA

ObjectiveTo investigate the susceptibility of HBV-related liver failure,and the correlation between immune reconstitution and expression of type 1 chemokine ligand 3-like 1(CCL3L1)and chemokine ligand 4(CCL4L)gene after antiviral therapy.MethodsFrom January 2011 to May 2014,200 blood samples of HBV-related liver failure patients,100 blood samples from HBsAg carriers and 50 blood samples from of healthy persons were collected in Infectious Disease Department in our hospital.The expression levels of CCL3L1,CCL4L gene were detected by fluorescence quantitative PCR.The HBV-related liver failure patients al received antiviral therapy.CD4+,CD8+T lymphocyte level in each treatment stage were detected by flow cytometry.CCL3L1,CCL4L gene copy number were compared between the three groups,clinical or laboratory indexes that affect the prognosis of HBV-related liver failure complicated with acute kidney injury(AKI)were analyzed.The CD4+and CD8+T lymphocyte change value and rate of change were calculated.ResultsThe copy number of CCL3L1 and CCL4L gene was significantly lower in HBV-related liver failure patients than those in HBsAg carriers and healthy persons(P＜0.05),and the copy number in HBsAg carriers and healthy persons had no statistically significant difference(P＞0.05).The prognosis of HBV-related liver failure complicated with AKI was related to age,aspartate aminotransferase(AST),albumin(ALB),prothrombin time activity(PTA),blood urea nitrogen(BUN),combined with hepatic encephalopathy.The CD8+change value and CD4+/CD8+change rate showed statistically significant difference among CCL3L1 low copy number group,CCL3L1 average copy number group and CCL3L1 high copy number group(F=4.891,6.286,P＜0.05).The CD8+change value,CD4+/CD8+change value,and rate of change showed statistically significant difference among CCL4L low copy number group,CCL4L average copy number group and CCL4L high copy number group(F=5.304,4.867,6.453,P＜0.05).ConclusionThe copy number of CCL3L1 and CCL4L gene in HBV-related chronic and acute liver failure patients is decreased 1 copy in average.CCLSLI copy number is related to the susceptibility of HBV-related liver failure,and CCL3L1,CCL4L gene expression level is correlated to immune reconstitution after antiviral treatment of HBV-related liver failure.Higher CCL3L1 gene expression level is conducive to immune reconstitution.

HBV-related liver failure;Type 1 Chemokine ligand 3-like 1(CCL3L1);Chemokine ligand 4;Susceptibility;Immune reconstitution;Correlation

R575.3

A

1003—6350（2017）02—0191—05

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.02.007

2016-04-20)

遼寧省大連市醫(yī)學(xué)衛(wèi)生科學(xué)研究計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：2014-92)

韓光。E-mail：1589725541@qq.com