山羊接種小反芻獸疫疫苗后不同檢測試劑的檢測效果田間試驗(yàn)

李芳++蘇益瓊++羅生++覃周嵐++覃萬福++吳雙燕++余波++經(jīng)孝紅++施佳露++梁麗娟

摘要 為了切實(shí)掌握山羊小反芻獸疫疫苗免疫狀況，評(píng)估免疫效果。通過用不同廠家的試劑盒來評(píng)估小反芻獸疫疫苗的大田效果，其中一種是由青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心生產(chǎn)的小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測抗體試劑盒，另一種為法國ID-VET生產(chǎn)的ID Screen？誖PPR Competition小反芻獸疫抗體檢測試劑盒。結(jié)果表明，其檢測結(jié)果一致，只是法國ID-VET生產(chǎn)的試劑盒檢測的OD值較青島立見的高0.07。說明國產(chǎn)試劑盒與進(jìn)口試劑盒效果一致，但青島立見的試劑盒經(jīng)濟(jì)實(shí)惠許多。

關(guān)鍵詞 山羊；小反芻獸疫；疫苗；檢測試劑；效果；田間試驗(yàn)

中圖分類號(hào) F858.27 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2017）01-0233-01

小反芻獸疫（Peste des Petits Ruminants，PPR）也稱羊瘟，是由副粘病毒科麻疹病毒屬的小反芻獸疫病毒（PPRV）引起的，以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征的一種急性接觸性傳染病。山羊和綿羊易感，山羊發(fā)病率和死亡率均較高。該病是我國的一類動(dòng)物疫病，OIE規(guī)定疫情必須上報(bào)[1]。2014年在我國大范圍暴發(fā)，一直呈擴(kuò)大趨勢，成為了嚴(yán)重危害畜牧業(yè)生產(chǎn)安全的重大跨國動(dòng)物疫病之一[2]。2014年我國農(nóng)業(yè)部共發(fā)布小反芻獸疫疫情260起，涉及21個(gè)省份，給我國的養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大損失[3]。2015年我國將其列為強(qiáng)制免疫病種，為了準(zhǔn)確掌握山羊小反芻獸疫疫苗臨床免疫狀況和評(píng)估免疫效果，研究了小反芻獸疫疫苗不同劑量免疫接種山羊的田間試驗(yàn)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 疫苗。試驗(yàn)所使用疫苗為政府采購，由新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：2015005-1，規(guī)格100頭份/瓶；批號(hào)：2016020，規(guī)格50頭份/瓶），凍干苗。試驗(yàn)用疫苗均取自廣西鹿寨縣疫苗儲(chǔ)備庫。

1.1.2 試驗(yàn)羊場。臨床免疫試驗(yàn)羊場為鹿寨縣中渡鎮(zhèn)、平山鎮(zhèn)、黃冕鎮(zhèn)的8家羊場，中渡鎮(zhèn)、平山鎮(zhèn)的羊場位于山腳，天然防疫屏障良好，飼養(yǎng)的是本地山羊，方式為放養(yǎng)，黃冕鎮(zhèn)的羊場為圈養(yǎng)；場主經(jīng)驗(yàn)豐富，注重防疫，管理意識(shí)較強(qiáng)。

1.1.3 檢測試劑。小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測抗體試劑盒（批號(hào)：201513）由青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心生產(chǎn)；小反芻獸疫抗體檢測抗體試劑盒（ID Screen？誖PPR Competition，批號(hào)：923）由法國ID-VET生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 免疫試驗(yàn)。嚴(yán)格按照說明書操作，每只羊皮下注射疫苗1頭份，免疫接種后對(duì)羊只進(jìn)行臨床觀察。2015年采集注射批號(hào)為2015005-1的小反芻獸疫疫苗的羊場5個(gè)，免疫4周后每個(gè)場采集15份血樣，分離血清，冷凍待檢。2016年采集注射批號(hào)2016020的小反芻獸疫疫苗的羊場3個(gè)，免疫4周后每個(gè)場采集22份血樣、分離血清，冷凍待檢。

1.2.2 檢測方法。阻斷ELISA抗體檢測抗體試劑盒，用青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心生產(chǎn)的試劑盒檢測血清中的PPRV抗體（阻斷ELISA法，PB>50為陽性），嚴(yán)格按試劑盒的操作說明及判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行；競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（GB/T 27982—2011）[4]，用法國ID-VET生產(chǎn)的ID Screen？誖PPR Competition小反芻獸疫抗體檢測試劑盒檢測血清中的PPRV抗體（競爭ELISA法，S/N≤50%為陽性），嚴(yán)格按試劑盒的操作說明及判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

臨床應(yīng)用安全性好，免疫后的羊只采食正常，精神狀況良好，沒有免疫反應(yīng)死亡，生長發(fā)育正常。免疫4周后抗體檢測結(jié)果見表1。

2015年隨機(jī)抽取5個(gè)場，其中4個(gè)場的抗體轉(zhuǎn)陽率都超過農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%，而C場的抗體轉(zhuǎn)陽率只有13.33%，可能是操作失誤致使疫苗失效所致。2016年隨機(jī)抽取3個(gè)場，其中2個(gè)場的抗體轉(zhuǎn)陽率都超過農(nóng)業(yè)部規(guī)定的70%，而F場的抗體轉(zhuǎn)陽率為54.17%，原因是當(dāng)年出生的小羊還未進(jìn)行免疫。隨機(jī)抽取的2016年的抗體轉(zhuǎn)陽率比2015年高5.82個(gè)百分點(diǎn)，說明養(yǎng)殖戶的防疫水平有了進(jìn)一步的提升。

通過比較，試劑盒競爭ELISA法與阻斷ELISA法的檢測的結(jié)果一致，只是OD值相差0.070，基本可以忽略，另外，在操作方法上，阻斷ELISA試劑盒比競爭ELISA試劑盒的洗滌次數(shù)多1次，時(shí)間較長，但從經(jīng)濟(jì)效益考慮，青島立見生產(chǎn)的阻斷ELISA試劑盒（平均約12元/份）比法國ID-VET生產(chǎn)的競爭ELISA試劑盒（平均約30元/份）經(jīng)濟(jì)實(shí)惠許多[5-6]。

3 結(jié)論

通過試驗(yàn)，所有免疫動(dòng)物接種后沒有出現(xiàn)明顯的免疫副反應(yīng)，說明該疫苗具有良好的免疫安全性，可以大規(guī)模使用。同時(shí)，試劑盒競爭ELISA法與阻斷ELISA法的檢測結(jié)果一致，僅OD值相差0.070，且阻斷ELISA試劑盒比競爭ELISA試劑盒更經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 薛青紅，印春生，李 寧，等.小反芻獸疫活疫苗效力評(píng)[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，31（9）：1276-1278.

[2] 龍?jiān)气P，劉曉慧，周曉黎，等.小反芻獸疫流行病學(xué)及防控研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33（5）：94-98.

[3] 王昌建，林源，何世成，等.湖南省小反芻獸疫防控措施及評(píng)估[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2015（7）：19-20.

[4] 刁新育，楊林.基層動(dòng)物疫病監(jiān)測指導(dǎo)手冊(cè)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2013：75-76.

[5] 張東東，寧宜寶，劉燦，等.兩種豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒對(duì)疫苗免疫豬血清抗體檢測的比較試驗(yàn)[J].中國獸醫(yī)雜志，2016（7）：28-29.

[6] 李娟，陳震，霍子威，等.殘余牛血清白蛋白含量檢測試劑盒抗干擾性研究[J].微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展，2010（4）：39-41.