抗血管緊張素II 1型受體自身抗體與原發(fā)性高血壓患者合并急性冠狀動脈綜合征發(fā)病風(fēng)險的分析

孫艷香，陶軍，馮力，袁勇，黃炫生，張勵庭

冠心病研究

抗血管緊張素II 1型受體自身抗體與原發(fā)性高血壓患者合并急性冠狀動脈綜合征發(fā)病風(fēng)險的分析

孫艷香，陶軍，馮力，袁勇，黃炫生，張勵庭

目的：探討抗血管緊張素II 1型（AT1）受體自身抗體（AT1-AAs）與原發(fā)性高血壓患者合并急性冠狀動脈綜合征（ACS）的發(fā)病風(fēng)險。

急性冠狀動脈綜合征; 高血壓; C反應(yīng)蛋白質(zhì)；自身抗體

(Chinese Circulation Journal, 2017,32:149.)

抗血管緊張素Ⅱ1型（AT1）受體自身抗體（AT1-AAs）具有擬血管緊張素Ⅱ （AngⅡ） 的效應(yīng)，參與血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)激酶的激活，并引起細(xì)胞增殖、血管重構(gòu)等一系列反應(yīng)[1，2]。近來，李大強等[3]表明AT1-AAs陽性組狹窄病變例數(shù)顯著高于陰性組，認(rèn)為AT1-AAs陽性是冠心病的危險因素之一，從而提示AT1-AAs對冠心病有一定的預(yù)測價值。Perrone-Filardi等[4]研究則表明AT1受體和β受體阻斷劑合用可以改善高危險性高血壓患者的血管內(nèi)膜功能。上述結(jié)果顯示AT1-AAs在高血壓以及冠狀動脈疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。而急性冠狀動脈綜合征（ACS）中，冠狀動脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定與斑塊內(nèi)炎癥因子的激活、所處血管管壁張力的變化以及環(huán)境因素等相關(guān)[5，6]。結(jié)合前述已有研究，我們分析在高血壓合并ACS患者中，該自身抗體是否通過其擬AngⅡ效應(yīng)如促進(jìn)炎癥因子的表達(dá)而進(jìn)一步促進(jìn)ACS患者斑塊的不穩(wěn)定及ACS的發(fā)生發(fā)展？本試驗提出并旨在闡明AT1-AAs與高血壓患者合并ACS的患病風(fēng)險之間的關(guān)系。

1 資料與方法

研究對象選擇：2009-06至2009-12期間收住本院心內(nèi)科患者共83例，其中高血壓合并ACS （高血壓＋ACS組）28例、單純ACS（ACS組）29例、單純高血壓（高血壓組）26例；另選門診體檢中心健康者為正常對照組23例。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：（1）ACS診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)美國心臟病協(xié)會（AHA）標(biāo)準(zhǔn)[7]定義為出現(xiàn)靜止性心絞痛、新發(fā)心絞痛或進(jìn)行加重的心絞痛，心電圖出現(xiàn)ST段壓低或T波倒置，心肌壞死標(biāo)志物如肌鈣蛋白T或I（TnT或TnI）或肌酸激酶同工酶（CK-MB）升高，ST段抬高則可能發(fā)展至Q波性心肌梗死。（2）高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)按2005年中國高血壓防治指南定義為: 靜坐休息5 min以上，重復(fù)測2次以上上臂血壓，收縮壓≥140 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa）和（或）舒張壓≥90 mmHg， 或在服降壓藥情況下血壓正常；（3）糖尿病的定義為糖尿病的癥狀加隨機血糖≥11.1 mmol/L，或空腹血糖≥7.0 mmol/ L，或口服葡萄糖耐量試驗中2 h血糖≥11.1 mmol/L（至少測量2次以上） 。

資料采集：患者的一般資料包括性別、年齡、高血壓、糖尿病病史、吸煙史、血糖、血脂及血清超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）水平等。所有患者經(jīng)病史、體檢、超聲心動圖及實驗室檢查，排除各種心肌病、心臟瓣膜病及繼發(fā)性高血壓病和伴有嚴(yán)重威脅生命疾病的病例。

研究方法：（1）多肽抗原的制備及AT1-AAs 的檢測：采用固相多肽合成法，用PSSM28 型多肽自動合成儀（日本SHIMADZU 公司） ，合成具有抗原決定簇AT1受體胞外第二環(huán)肽肽段[2]，AT1 受體肽段氨基酸序列為: His-Trp-Ile-His-Arg-Asn-Val-Phe-Phe-Ile-Glu-Asn-Ile-Thr-Val-Cys-Ala-Phe-His-Tyr-Glu-Ser-Gln-Asn-Ser-Thr-Leu（AT1受 體165-191位氨基酸殘基） ，高壓液相色譜分析合成肽的純度> 95 %。酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測血清中AT1-AAs，受體抗原的包被濃度為100 mg/ml，血清稀釋液度為1∶40，辣根過氧化物酶標(biāo)抗體（海泰生物制藥公司） 稀釋濃度為1∶2000 ，抗體定性判斷以P/ N ≥2.1為陽性[ P/N=（標(biāo)本吸光度值-空白對照吸光度值） / （陰性對照吸光度值- 空白對照吸光度值） ]。（2）其它血生化指標(biāo)的檢測：包括空腹血糖、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、hs-CRP等。

2 結(jié)果

各組一般臨床資料比較（表1）：四組比較吸煙史、AT1-AA、hs-CRP、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、空腹血糖差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.05）。

不同組間一般臨床資料兩兩比較（表1）：（1）AT1-AAs：高血壓+ACS組及高血壓組其血清AT1-AAs水平則顯著高于正常對照組，同時高血壓+ACS組也明顯高于高血壓組；（2）血清hs-CRP：正常對照組明顯低于高血壓+ACS組及ACS組；（3）TC: 正常對照組及高血壓組明顯低于高血壓+ACS組及ACS組；（4）LDL-C:正常對照組及高血壓組明顯低于高血壓+ACS組及ACS組；（5）HDL-C: 正常對照組高于高血壓+ACS組及ACS組；（6）空腹血糖: 正常對照組明顯低于高血壓+ACS組及ACS組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0.05）。

表1 各組一般臨床資料比較（）

表1 各組一般臨床資料比較（）

注：ACS：急性冠狀動脈綜合征；AT1-AA：抗血管緊張素ⅡI型受體自身抗體；hs-CRP：超敏C反應(yīng)蛋白；TC：膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；TG：甘油三酯。*：光密度值。與正常對照組比較aP≤ 0.05;bP< 0.01;與高血壓組比較cP< 0.05

項目 正常對照組(n=23)高血壓+ACS組(n=28) ACS組(n=29)高血壓組(n=26) P值男性[例 (%)] 15 (65.22) 21 (75.00) 25 (86.21) 16 (62.50) 0.211年齡[歲] 48.22±9.18 62.36±10.73 58.09±10.42 61.13±11.96 0.082糖尿病[例 (%)] 1 (4.35) 5 (17.86) 4 (13.79) 3 (11.54) 0.156吸煙史[例 (%)] 5 (21.74) 20 (71.43)b 20 (68.97)b 7 (26.92) 0.000 AT1-AAs* 0.21±0.06 0.40±0.05bc 0.26±0.09 0.33±0.10a 0.001血清hs-CRP (mg/L) 1.18±1.08 4.89±1.93b 4.72±1.37a 3.03±1.76 0.018 TC (mmol/L) 4.60±0.68 5.57±0.98ac 5.61±1.01ac 4.87±1.04 0.035 LDL-C (mmol/L) 2.43±0.53 3.70±0.84ac 3.97±0.70ac 2.59±0.83 0.024 HDL-C (mmol/L) 1.59±0.33 1.21±0.30a 1.22±0.32a 1.49±0.28 0.046 TG (mmol/L) 1.22±0.48 1.88±1.52 1.52±1.18 1.52±0.57 0.249空腹血糖 (mmol/L) 5.13±0.96 7.05±2.83b 7.15±1.82b 5.98±1.16 0.002

多元線性回歸分析（表2）：AT1-AA與血清hs-CRP、血糖、血脂的多元線性回歸分析表明僅血清hs-CRP與AT1-AAs呈正相關(guān)（r=0.406， P<0.01）。

不同組間AT1-AA與血清hs-CRP的線性相關(guān)性分析（表3）：進(jìn)一步對各組間AT1-AAs水平與血清hs-CRP表達(dá)進(jìn)行分析，提示在高血壓＋ACS組、ACS組及高血壓組中，其AT1-AA水平與血清hs-CRP表達(dá)呈明顯正相關(guān)（r分別為0. 589、0.503、0.273，P均<0.01）。

表2 抗血管緊張素ⅡI型受體自身抗體與血清超敏C反應(yīng)蛋白、血糖、血脂的多元線性回歸分析

表3 不同組間抗血管緊張素ⅡI型受體自身抗體與血清超敏C反應(yīng)蛋白的線性相關(guān)性分析

3 討論

AT1-AAs在原發(fā)性高血壓患者血清中檢出率明顯高于正常血壓者，且該自身抗體具有明顯的激動樣生物學(xué)效應(yīng)，如促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)信號分子和原癌基因的表達(dá)致細(xì)胞增殖、致胞內(nèi)鈣增加及血管壁的重構(gòu)、炎癥因子表達(dá)等[1，2，8-12]。另外，長時間AT1-AAs免疫大鼠后可觀察到其致主動脈內(nèi)膜功能失調(diào)，血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌內(nèi)皮素（ET）-1及細(xì)胞間黏附分子（ICAM）-1水平顯著增高[13]。關(guān)于該自身抗體其產(chǎn)生機制，最近有研究表明妊娠高血壓患者AT1-AAs的產(chǎn)生可能與胎盤灌注不足、缺血缺氧所致血管內(nèi)皮功能受損、局部炎癥有關(guān)，且產(chǎn)生的AT1-AAs激活A(yù)T1受體而介導(dǎo)妊娠高血壓的發(fā)生發(fā)展，該研究還表明AT1-AAs水平與疾病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[14]。同時既往資料顯示，高血壓病程及家族史與AT1-AAs陽性率呈明顯正相關(guān)[15]，提示長時間血壓升高可能導(dǎo)致血管內(nèi)膜受損，自身抗原暴露，導(dǎo)致自身T細(xì)胞免疫功能的失調(diào)導(dǎo)致抑制性T細(xì)胞減少而自身反應(yīng)性T細(xì)胞激活等最終至自身抗體產(chǎn)生[16]。本研究結(jié)果也表明，高血壓組及高血壓+ACS組AT1-AAs水平明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義； ACS組其AT1-AAs表達(dá)也高于正常對照組，但差異未達(dá)統(tǒng)計學(xué)意義。因此，本研究結(jié)果表明AT1-AAs與單純ACS的發(fā)生可能無明顯相關(guān)性，同時也不排除收集樣本少所致統(tǒng)計學(xué)差異不顯著；但在合并高血壓情況下，AT1-AAs與ACS發(fā)病呈明顯正相關(guān)，考慮可能與長期血壓升高所致的血管內(nèi)膜受損基礎(chǔ)上，同時伴有AT1-AAs明顯升高的狀態(tài)下，該自身抗體促進(jìn)受損血管內(nèi)膜炎癥因子釋放、局部血小板聚集及血管收縮等，從而局部斑塊形成、破裂而致ACS。結(jié)果表明AT1-AAs可能是高血壓患者ACS發(fā)生的獨立危險因素。

研究表明，多種炎癥因子及免疫機制參與冠狀動脈粥樣硬化及其斑塊形成[6，17，18]， 胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄因子（NF）-κB及活化蛋白-1（AP-1）核轉(zhuǎn)錄因子活化并介導(dǎo)促炎因子腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等分泌，IL-6繼而通過炎癥因子的級聯(lián)放大效應(yīng)促進(jìn)多種炎癥因子，其中包括C反應(yīng)蛋白（CRP）水平的顯著增加。同時已有資料顯示CRP是冠心病及ACS的發(fā)病風(fēng)險的獨立危險因素[19，20]。而既往研究也闡明AT1-AAs通過活化細(xì)胞內(nèi)NF-κB及AP-1兩個重要的核轉(zhuǎn)錄因子而介導(dǎo)血管炎癥反應(yīng)[4]。因此，本研究進(jìn)一步闡明了AT1-AAs與高血壓合并ACS患者血清hs-CRP之間的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果表明，高水平的AT1-AAs與血清hs-CRP表達(dá)呈明顯正相關(guān)，在正常血壓人群中兩者無明顯關(guān)聯(lián)性。而AT1-AAs是否也通過該信號通路即活化細(xì)胞內(nèi)NF-κB及AP-1，繼而介導(dǎo)IL-6分泌，最終促進(jìn)肝臟合成和分泌CRP，而致CRP升高則有待于進(jìn)一步研究證實。

因此，本研究闡明了AT1-AAs與高血壓合并ACS患者的發(fā)生呈明顯正相關(guān)，即該自身抗體是高血壓患者ACS發(fā)生的獨立危險因素之一，且AT1-AAs水平與炎癥因子血清hs-CRP表達(dá)也明顯正性關(guān)聯(lián)。本文的不足在于樣本量較少，但結(jié)果已表明各組存在明顯差異。所以，通過聯(lián)合AT1-AAs和血清hs-CRP的檢測可對臨床上高血壓合并ACS患者斑塊穩(wěn)定性的預(yù)測及疾病的發(fā)展起到一定的指導(dǎo)作用。

[1] Dechend R, Homuth V, Wallukat G, et al. Agonistic Antibodies Directed at the Angiotensin II, AT1 Receptor in Preeclampsia. J Soc GynecolInvestig, 2006, 13: 79-86.

[2] Sun YX, Zhang HY, Wei YM, et al. The mechanism of signal transduction during vascular smooth muscle cell proliferation induced by autoantibodies against angiotensin AT1 receptor from hypertension. Chin Med J, 2008, 121: 43-48.

[3] 李大強, 張惠琴, 林愛玲, 等. 抗血管緊張素Ⅱ1型受體抗體與冠狀動脈粥樣硬化性心臟病關(guān)系研究. 河北醫(yī)學(xué) , 2007, 13 : 883-885.

[4] Perrone-Filaroli P, Corrado L, Brevetti G, et al. Effects of AT1 receptor antagonism with candesartan on endothelial function in patients with hypertension and coronary artery disease. J Clini Hypertens, 2009, 11: 260-265.

[5] Libby P. Inflammation in atherosclerosis. Nature, 2002, 420: 868-874.

[6] Hansson GK. Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease. N Engl J Med, 2005, 352: 1685-1695.

[7] Anderson JL, Adams CD, Antman EM, et a1．ACC/AHA2007 guidelines for the management of patients with unstable angina/ Non-ST-Elevation myocardial infarction: a mpon of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines(Writing Committee to Revise the 2002 Guidelines for the Management of Patients Witll Unstable Angina/Non-STElevation Myocardial Infarction) developed in collaboration with the Americ∞ College of Emergency Physicians, the Society for Cardiovascular Angiography and Interventions, and the Society of Thoracic Surgeons endorsed by the American Asseciafion of Cardiovascular and Pulmonary Rehabilitation and the Society for Academic Emergency Medicine．J Am Coll Cardio1, 2007, 50: e1-e157．

[8] Wang B, Liao YH, Zhou ZH, et al. Arterial structure changes in rats immunized by AT1-receptor peptide. Heart Vessels, 2005, 20: 153-158.

[9] Fu ML, Herlitz H, Schulze W, et al. Autoantibodies against the angiotensin receptor (AT1) in patients with hypertension. J Hypertens, 2000, 18: 945-953.

[10] Dechend R, Homuth V, Wallukat G, et al. AT1 receptor agonistic antibodies from preeclamptic patients cause vascular cells to express tissue factor. Circulation, 2000, 101: 2382-2393.

[11] Theingi MT, Sergiy GS, Mary-Clare D, et al. Antibodies from preeclamptic patients stimulate increased intracellular Ca2+mobilization through angiotensin receptor activation. Circulation, 2004, 110: 1612-1619.

[12] Zhu F, Sun YX, Liao YH, et al. Agonistic AT1 receptor autoantibody increases in serum of patients with refractory hypertension and Improves Ca2+mobilization in cultured rat vascular smooth muscle cells. Cell Mol Immunol, 2008, 5: 209-217.

[13] Zhang SL, Du YH, Wang J, et al. Endothelial dysfunction induced by antibodies against angiotensin AT1 receptor in immunized rats. Acta Pharmacol Sin, 2010, 31: 1381-1388.

[14] Zhou CC, Zhang YJ, Irani RA, et al. Angiotensin receptor agonistic autoantibodies inducepre-eclampsia in pregnant mice. Nat Med, 2008, 14: 855-862.

[15] 孫艷香, 朱峰, 王敏, 等. 原發(fā)性高血壓患者血清抗a1受體和血管緊張素ATl受體自身抗體的臨床觀察. 中華心血管病雜志, 2008, 36: 16-19.

[16] 武恒. 大鼠腎性高血壓與心臟受體自身抗體產(chǎn)生的關(guān)系. 山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2001, 32（增刊）: 100-102.

[17] Hansson GK, A Hermansson. The immune system in atherosclerosis. Nat Immunol, 2011, 12: 204-212.

[18] 毛節(jié)明, 王廣. 動脈粥樣硬化與炎癥. 中國循環(huán)雜志, 2006, 21: 405-406.

[19] Danes HJ, Wheeler JG, Hirschfield GM, et al. C-reactive protein and other circulating markers of inflammation in the prediction of coronary heart disease. N Engl J Med, 2004, 350: 1387-1397.

[20] 劉梅林, 梁文奕. 高敏 C-反應(yīng)蛋白在冠心病患者診治中的臨床意義.中國循環(huán)雜志, 2012, 27: 165-167.

Correlation Study Between Angiotensin II Type1 Receptor Autoantibodies and the Onset Risk in Patients With Essential Hypertension Combining Acute Coronary Syndrome

SUN Yan-xiang, TAO Jun, FENG Li, YUAN Yong, HUANG Xuan-sheng, ZHANG Li-ting.
Department of Cardiology, Zhongshan City People’s Hospital, Zhongshan (528400), Guangdong, China

SUN Yan-xiang, Email: syx1298509@163.com

Objective: To study the correlation between angiotensin II type1 receptor autoantibodies (AT1-AAs) and the onset risk in patients with essential hypertension (EH) combiningacute coronary syndrome (ACS).Methods: Our research included in 4 groups: EH+ACS group, n=28, ACS group, n=29, EH group, n=26 and Control group, n=23 normal subjects. Serum levels of AT1-AAs were examined by ELISA; high sensitivity C-reactive protein (hs-CRP), blood levels of lipids and glucose were also measured and compared among different groups. The correlations between AT1-AAs and blood lipids, glucose, hs-CRP were studied by multiple linear regression analysis.Results: Compared with Control group, ACS group had similar level of AT1-AAs (0.26±0.09) vs (0.21±0.06), P=0.105; while EH+ACS group and HE group had increased AT1-AAs level as (0.40±0.005) and (0.33±0.10), P=0.001 and P=0.02 respectively; AT1-AAs level was higher in EH+ACS group than HE group, P=0.044. In addition, serum AT1-AAs level was positively related to hs-CRP in EH+ACS group, ACS group and EH group (r=0.589, r=0.503 and r=0.273, all P<0.01).Conclusion: Serum AT1-AAs level was positively related to the onset risk in patients with EH combining ACS; AT1-AAs was also related to hs-CRP at certain degree.

Acute coronary syndrome; Hypertension; C-reactive protein; Autoantibody

2016-02-26）

（編輯：梅平）

中國博士后科學(xué)基金(20100470982)；廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)基金(B2010342)

528400 廣東省，中山市人民醫(yī)院 心血管內(nèi)科（孫艷香、馮力、袁勇、黃炫生、張勵庭）；中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院高血壓血管病科（陶軍）

孫艷香 副主任醫(yī)師 博士 主要從事心血管免疫相關(guān)研究 Email: syx1298509@163.com 通訊作者：孫艷香

R541.4

A

1000-3614（2017）02-0149-04

10.3969/j.issn.1000-3614.2017.02.009

方法：收集高血壓合并ACS患者（高血壓+ACS組）28例、單純ACS患者（ACS組）29例、單純高血壓患者（高血壓組）26例及正常對照組23例，采用酶聯(lián)免疫吸附法對標(biāo)本血清進(jìn)行抗AT1受體抗體檢測，分析并比較各組間AT1-AAs及血清超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、血脂、血糖等水平，進(jìn)一步通過多元線性回歸分析各組間AT1-AAs與血脂、血糖及炎癥因子血清hs-CRP表達(dá)的相關(guān)性。

結(jié)果：ACS組患者血清AT1-AAs水平較正常對照組升高（分別為0.26±0.09，0.21±0.06，P=0.105），但差異未達(dá)統(tǒng)計學(xué)意義；而高血壓+ACS組(0.40±0.05)及高血壓組(0.33±0.10)其血清AT1-AAs水平則顯著高于正常對照組（ P=0.01和0.02）同時高血壓+ACS組也明顯高于高血壓組（P=0.044）。另外，在除正常對照組外高血壓＋ACS組、ACS組及高血壓組中AT1-AAs水平與血清hs-CRP的表達(dá)呈正相關(guān)（r分別為0. 589、0.503、0.273，P均<0.01）。

結(jié)論：AT1-AAs與高血壓合并ACS患者的發(fā)病風(fēng)險呈正相關(guān)，尤其與炎癥因子血清hs-CRP水平呈一定相關(guān)性。