脾虛證患者唾液淀粉酶活性異常機(jī)制的研究概況

林靜　楊澤民

【摘要】 通過分析影響唾液淀粉酶活性的因素，探討脾虛證患者唾液淀粉酶活性異常的機(jī)制，對脾虛證臨床參考指標(biāo)引入唾液淀粉酶活性比值的研究作出綜合性評價(jià)并進(jìn)行深入的思考與展望。

【關(guān)鍵詞】 脾虛證； 唾液淀粉酶； 活性； 異常； 機(jī)制

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2017.1.088 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A 文章編號 1674-6805（2017）01-0159-04

中醫(yī)在論述脾的生理功能時(shí)，認(rèn)為“脾開竅于口”，“脾在液為涎”和“脾主涎”等，涎即為唾液，脾開竅于口是指飲食味覺感受與脾胃運(yùn)化功能密切相關(guān)。唾液在脾胃調(diào)和時(shí)的分泌是適量的，在受到如食物的刺激時(shí)會分泌增多，而在一般情況下具有保護(hù)口腔環(huán)境的作用?！岸嗔飨选?在論述脾的病理時(shí)是作為重要的證候之一。另外，在臨床辯證、治療等方面，均發(fā)現(xiàn)脾與唾液有著密切的關(guān)系。因此，在生理上脾與唾液之間有密切的關(guān)系。唾液淀粉酶（sAA）是人類唾液蛋白中最為豐富的蛋白[1]，占到唾液蛋白的40%～50%[2]，常被用來考察唾液蛋白分泌的主要指標(biāo)。因此，很多學(xué)者利用sAA的活性變化對“脾主涎”及脾虛證的本質(zhì)進(jìn)行了探索。

廣州中醫(yī)藥大學(xué)脾胃研究所在20世紀(jì)80年代就率先開始對脾虛證患者sAA活性進(jìn)行了探索性研究，發(fā)現(xiàn)脾虛證患者在檸檬酸刺激前后的sAA活性比值（酸刺激后sAA活性/酸刺激前sAA活性）較正常人顯著下降[3]，這一結(jié)果隨后被國內(nèi)多位學(xué)者所證實(shí)[4-8]。然而，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)sAA活性比值作為脾虛證臨床參考指標(biāo)可操作性和重現(xiàn)性及精準(zhǔn)程度不夠高[9-11]，推廣應(yīng)用不理想[5、7]。

鑒于脾虛證sAA活性的研究及sAA活性比值的臨床應(yīng)用中存在的問題，本文試對脾虛證患者的sAA活性改變的機(jī)制多年來的研究概況進(jìn)行了綜合，分析，并探討如下。

1 影響唾液淀粉酶（sAA）活性的因素

sAA主要由糖基化和非糖基化兩種形式的同工酶家族組成，口腔總sAA活性除了受口腔內(nèi)酶反應(yīng)環(huán)境影響外，主要取決于酶的含量和sAA同工酶的種類和比例。酶的含量與酶的合成及分泌密切相關(guān)，而sAA同工酶的種類和比例主要通過酶蛋白翻譯后糖基化修飾形成，因此，有必要從sAA基因水平、翻譯后修飾及分泌過程深入分析影響sAA活性改變的機(jī)制。

sAA活性主要受AMY1基因拷貝數(shù)變異、sAA含量、N-糖基化sAA含量及β-AR介導(dǎo)的分泌調(diào)控所影響，其中，編碼sAA的AMY1基因拷貝數(shù)變異直接影響sAA的含量，sAA含量和sAA的N-糖基化程度直接影響sAA的活性，而且sAA的分泌則主要由β-AR介導(dǎo)調(diào)控，另外β-AR還會影響sAA的N-糖基化進(jìn)而影響其活性。當(dāng)然sAA活性也受其他因素的影響，包括應(yīng)激水平，吸煙、運(yùn)動(dòng)、藥物和飲食習(xí)慣等[12-15]，但AMY1基因拷貝數(shù)變異、sAA含量和N-糖基化sAA含量及β-AR介導(dǎo)的分泌調(diào)控是引起sAA活性變化的“內(nèi)因”，而應(yīng)激、吸煙、運(yùn)動(dòng)、藥物和飲食等則是“外因”，“外因”必須通過“內(nèi)因”起作用。

1.1 AMY1基因拷貝數(shù)變異與sAA活性

AMY1基因位于染色體lp21上，編碼sAA[16]。AMY1基因是人類基因組中拷貝數(shù)變異最大的基因之一[17-18]，其變異范圍達(dá)到2～15倍之多。研究顯示，AMY1基因的拷貝數(shù)與sAA含量和活性正相關(guān)[19-20]，一般來說，AMY1基因拷貝數(shù)越多，sAA含量和活性也越大。但是，如果AMY1基因拷貝數(shù)是決定sAA含量和活性的唯一因素，并不能解釋同一個(gè)人在其不同年齡階段sAA活性存在差異甚至是巨大差異的事實(shí)，因?yàn)閷ν粋€(gè)人來講AMY1基因拷貝數(shù)是不變的，因此，有學(xué)者研究指出AMY1基因的拷貝數(shù)并不是決定sAA含量的唯一因素[16]。然而不可否認(rèn)的是，AMY1基因拷貝數(shù)變異是影響人群中sAA含量和活性存在個(gè)體差異的重要遺傳學(xué)基礎(chǔ)。

1.2 sAA含量和N-糖基化sAA含量與sAA活性

sAA是一種含鈣金屬酶，特異性水解α-1，4糖苷鍵，能夠?qū)⒌矸鬯獬善咸烟呛望溠刻荹21]。作為唾液蛋白中重要的外分泌蛋白，sAA主要由糖基化和非糖基化兩種形式的同工酶家族組成，非糖基化sAA分子量為57kD，糖基化sAA分子量為62kD?？谇籹AA活性主要除了受AMY1基因拷貝數(shù)變異影響外，還取決于sAA的含量和sAA同工酶的種類和比例，而sAA同工酶種類和比例主要通過酶蛋白翻譯后的糖基化修飾而形成。sAA主要以N-聚糖的形式進(jìn)行糖基化，正常人唾液中sAA有25%～30%是糖基化的sAA。研究顯示，α-淀粉酶的糖基化修飾會影響該酶的折疊、分泌、活性及穩(wěn)定性[22-23]，并且在動(dòng)物模型上證實(shí)老年大鼠相對年輕大鼠其腮腺細(xì)胞蛋白N-糖基化顯著降低[24]，另外，有報(bào)道對慢性胃炎脾虛證患者酸刺激后總唾液糖蛋白及sAA的N-聚糖結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，脾虛證患者酸刺激后sAA活性低下與總唾液糖蛋白及sAA的N-糖基化均不完全有關(guān)[25]，并且在分析慢性胃炎脾虛證與脾胃濕熱患者的基因芯片數(shù)據(jù)時(shí)，也證實(shí)了脾虛證患者存在多個(gè)參與N-聚糖合成的糖基轉(zhuǎn)移酶基因表達(dá)異常[26]，可見，sAA活性不僅受sAA含量的影響，并且與sAA糖基化程度密切相關(guān)。

1.3 β-AR介導(dǎo)的分泌調(diào)控與sAA活性

唾液主要由腮腺、下頜下腺和舌下腺三個(gè)唾液腺分泌，sAA在口腔內(nèi)以唾液的形式分泌出來，其中80%的sAA是由腮腺分泌[21，27]。唾液的分泌分為基礎(chǔ)狀態(tài)下和刺激下兩種情況，在基礎(chǔ)狀態(tài)下，20%唾液來源于腮腺，65%來源于下頜下腺，7%～8%來源于舌下腺，其他小腺體貢獻(xiàn)10%左右。但是，在外界條件刺激下，三大唾液腺的分泌功能發(fā)生相應(yīng)改變，其中作為sAA分泌主要來源的腮腺在刺激情況下，對唾液體積的貢獻(xiàn)由20%上升到50%之多[28]，并且，唾液中sAA與其他成分是同時(shí)產(chǎn)生和分泌的[29]，因此，推理及研究均證實(shí)，在基礎(chǔ)狀態(tài)和外界刺激下，唾液中sAA的含量主要由腮腺貢獻(xiàn)，并隨著腮腺分泌的增強(qiáng)而增加[21，27，30-31]。

sAA的分泌受自主神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控，其中，交感神經(jīng)通過神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素與腺泡細(xì)胞膜上的α和β腎上腺素受體（α-AR，β-AR）結(jié)合，α-AR通過升高細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，適量增加唾液中液體的分泌，而β-AR則通過升高細(xì)胞內(nèi)cAMP，進(jìn)而激活一系列蛋白激酶，誘導(dǎo)腺泡細(xì)胞通過胞吐方式分泌唾液蛋白（包括sAA）；副交感神經(jīng)通過乙酰膽堿與腺泡細(xì)胞膜上的膽堿受體M3結(jié)合，刺激產(chǎn)生DAG和IP3，其中DAG通過蛋白激酶級聯(lián)反應(yīng)促進(jìn)少量唾液蛋白的分泌，IP3則通過動(dòng)員內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)Ca2+，引起大量電解質(zhì)和水分的分泌[32-33]。

sAA活性被認(rèn)為是交感神經(jīng)活動(dòng)最為敏感的指標(biāo)[12]，大量研究通過測定sAA活性來反映應(yīng)激相關(guān)的交感神經(jīng)系統(tǒng)活動(dòng)的變化[34-37]，而早期的研究發(fā)現(xiàn)，通過激活β-AR可以促進(jìn)大鼠腮腺細(xì)胞內(nèi)蛋白合成、N-糖基化及分泌[38-39]，這提示交感神經(jīng)可能主要通過β-AR參與介導(dǎo)sAA的分泌及其N-糖基化。進(jìn)一步研究證實(shí)了sAA的分泌主要由β-AR介導(dǎo)，如，研究顯示刺激后sAA明顯增加并伴隨β-AR的激活，同時(shí)利用β-AR激動(dòng)劑能顯著提高sAA的含量和釋放量[40-42]，用β-AR阻斷劑普萘洛爾進(jìn)行反證也支持這個(gè)觀點(diǎn)[35]；sAA的N-糖基化也通過β-AR介導(dǎo)[39，43]。由此可見，β-AR介導(dǎo)的調(diào)控對sAA分泌及其N-糖基化程度具有重要作用。

1.4 唾液的采集方法與sAA活性

sAA活性可能存在節(jié)律性變化，但在短時(shí)間內(nèi)變化不明顯[14]，因此，目前國外報(bào)道的有關(guān)sAA活性研究的唾液采集時(shí)間基本都是設(shè)定在一個(gè)時(shí)間段來進(jìn)行，如16∶00-20∶00 [44]， 14∶00-17∶00 [36]， 14∶00-18∶00 [45]。

根據(jù)唾液的采集方法，可以將采集的唾液樣本分類為：唾液收集管采集的樣本vs.自然流出或吐出的方式采集的唾液樣本，全唾液樣本vs.特定唾液腺中采集的樣本，未刺激唾液樣本vs.刺激后分泌的唾液樣本。

如果唾液收集來自于參與者的正常日常生活（比如每日分時(shí)段收集），唾液收集管的方法較優(yōu)。收集需要注意：（1）吸收劑放的位置固定；（2）固定含吸收劑時(shí)間；（3）收集期間不能咀嚼。

不管何種采集方式，要求參與者在收集前禁食1 h（可適量飲白開水），收集前5 min用清水漱口，清除口腔內(nèi)殘余食物殘?jiān)?，防止味覺上的刺激影響唾液流率和唾液蛋白質(zhì)組分。

1.5 影響sAA活性的其他因素

sAA的聚集是一種急性的應(yīng)激反應(yīng)，因此有許多潛在的因素可以影響刺激或抑制唾液淀粉酶分泌。這些因素有：心理刺激、應(yīng)激水平，吸煙、運(yùn)動(dòng)、藥物和飲食習(xí)慣[46-47]。主要稱之為影響sAA分泌的“外因”。

國外大量研究顯示，測試對象在接受考試，特里爾社會壓力測試等社會心理壓力的刺激后，隨著心理壓力的增強(qiáng)，sAA活性也顯著增加[37，48-49]。煙草會抑制淀粉酶活性，因此有吸煙習(xí)慣的人sAA基本活性偏低。物理運(yùn)動(dòng)提高應(yīng)激水平，有促進(jìn)sAA分泌的作用。身體有疾病的人基本的sAA活性會偏高或偏低，有服用腎上腺素促進(jìn)或阻斷類藥物的將強(qiáng)烈影響體內(nèi)sAA的分泌。飲食作為味覺刺激也將促進(jìn)sAA的分泌。

2 思考和展望

在國內(nèi)，對脾虛證患者在基礎(chǔ)狀態(tài)下和酸刺激后sAA活性異常的研究，大部分學(xué)者認(rèn)為與自主神經(jīng)失調(diào)密切相關(guān)，如與副交感神經(jīng)亢進(jìn)密切相關(guān)[3]，而且，大多研究證實(shí)脾虛證患者和動(dòng)物體內(nèi)存在神經(jīng)遞質(zhì)如乙酰膽堿（Ach）、腎上腺素（E）和去甲腎上腺素（NE）等異常改變的現(xiàn)象[50-52]，但是更為深入、系統(tǒng)的研究自主神經(jīng)調(diào)控sAA分泌機(jī)制的鮮有報(bào)道。

結(jié)合國內(nèi)外同行研究推測：脾虛證患者存在sAA含量及其糖基化程度異常和自主神經(jīng)系統(tǒng)失調(diào)的事實(shí)，然而導(dǎo)致不同疾病間脾虛證患者基礎(chǔ)狀態(tài)下sAA活性異常且研究結(jié)果不一致和酸刺激前后sAA活性比值下降及該比值臨床應(yīng)用重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性不高的原因，與sAA基因表達(dá)和分泌調(diào)控密切相關(guān)，其中，編碼sAA的AMY1基因拷貝數(shù)變異直接影響sAA的含量，sAA含量及sAA的N-糖基化程度直接影響sAA的活性，而且sAA的分泌則主要由β-AR介導(dǎo)調(diào)控，另外β-AR還會影響sAA的N-糖基化進(jìn)而影響其活性。因此，可以通過對脾虛證患者AMY1基因拷貝數(shù)、sAA含量和β-AR表達(dá)調(diào)控的進(jìn)行深入的研究，這將有助于對脾虛證sAA活性改變機(jī)制的認(rèn)識，為回答脾虛證sAA活性研究和臨床應(yīng)用存在的問題提供答案。

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（收稿日期：2016-09-22）