結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗在結(jié)核診斷中的價值

孫虎　張瑩　劉暉

【摘要】 目的：評價結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗對結(jié)核診斷的有效性及實用性。方法：回顧性研究2013年5月-2014年12月筆者所在醫(yī)院行結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗患者256例，分為結(jié)核感染組和非結(jié)核感染組，計算結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗的一致百分率、靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值，并繪制ROC曲線，計算曲線下面積。結(jié)果：結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗的一致百分率為93.75%，靈敏度95.88%，特異度53.85%，陽性預(yù)測值97.49%，陰性預(yù)測值41.18%，ROC曲線下面積為0.749，P=0.00。結(jié)論：結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗對結(jié)核感染的診斷有效性較高。

【關(guān)鍵詞】 肺部感染； 肺結(jié)核； 結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗

【Abstract】 Objective：To evaluate the validity and practicability of tuberculous infection T lymphocytes spot test in the tuberculosis diagnosis.Method：256 cases of tuberculous infection T lymphocytes spot tests were retrospectively studied from May 2013 to December 2014 in our hospital.They were divided into tuberculosis infection group and non tuberculosis group.The tuberculosis consistent percentage of tuberculous infection T lymphocyte spot test，the sensitivity，specificity，positive predictive value，negative predictive value were calculated.The ROC curve was drew，the area under the curve was calculated.Result：The tuberculous infection T lymphocytes spot test consistent percentage was 93.75%，the sensitivity 95.88%，the specificity 53.85%，the positive predictive value was 97.49%，the negative predictive value was 41.18%，the area under the ROC curve was 0.749，P=0.00.Conclusion：Tuberculous infection T lymphocytes spot test validity to the diagnosis of tuberculosis infection is higher.

【Key words】 Pulmonary infection； Tuberculosis； Tuberculous infection T lymphocytes spot test

First-authors address：The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China

肺結(jié)核在本世紀仍是嚴重危害人類健康的傳染病，20世紀80年代中期以來結(jié)核病出現(xiàn)全球性惡化趨勢[1-2]。鑒于全球結(jié)核病流行的大回升，對于結(jié)核早期診斷及治療至關(guān)重要。但是傳統(tǒng)的結(jié)核病檢測方法，結(jié)核菌素試驗、血沉、結(jié)核抗體均無特異性[3-4]。結(jié)核菌涂片、結(jié)核菌培養(yǎng)及病理雖然為肺結(jié)核診斷的金標(biāo)準(zhǔn)[5]，但是結(jié)核菌涂片陽性率低，結(jié)核菌培養(yǎng)時間長，病理取材受限等原因，均不利于結(jié)核的早期診斷及治療[6]。因此需要尋找一種簡單、快速、靈敏度和特異度高的檢查方法是早期診斷的關(guān)鍵。結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗（T-SPOT.TB）是一種近年來分支桿菌基因組學(xué)及其細胞免疫研究成果在結(jié)核病診斷領(lǐng)域的成功應(yīng)用[7]。通過回顧性研究2013年5月-2014年12月筆者所在醫(yī)院行T-SPOT.TB的256例患者，評價其對結(jié)核診斷的有效性及實用性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2013年5月-2014年12月筆者所在醫(yī)院256例行T-SPOT.TB的患者。其中女120例，男136例，平均發(fā)病年齡（56.30±18.94）歲。

1.2 入組標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 結(jié)核感染組 菌陽；病理明確干酪樣壞死；實驗性抗結(jié)核治療1個月后隨訪，復(fù)查肺部CT，進行對比，影像學(xué)較前改善者。

1.2.2 非結(jié)核感染組 無結(jié)核密切接觸史；經(jīng)抗結(jié)核治療臨床癥狀及病灶影像學(xué)未明顯改善。

1.3 方法

結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗：肝素抗凝管采集5 ml外周靜脈血送新疆維吾爾自治區(qū)胸科醫(yī)院檢測。陽性結(jié)果為：測量孔斑點數(shù)為陰性對照的2倍以上或較陰性對照增加6個點或以上[8]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以（x±s）表示，分析結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗的一致百分率、靈敏度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值，并繪制ROC曲線，計算曲線下面積，P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)核感染組243例，非結(jié)核感染組組13例，結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗的一致百分率為93.75%（240/256），靈敏度為95.88%（233/243），特異度為53.85%（7/13），陽性預(yù)測值為97.49%（233/239），陰性預(yù)測值為41.18%（7/17）。ROC曲線下面積為0.749，P=0.00，有統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

3 討論

γ-干擾素釋放試驗的原理為，在人體感染結(jié)核桿菌時，結(jié)核分枝桿菌被巨噬細胞吞噬，產(chǎn)生的病原特異度蛋白的片段通過與細胞的主要組織相容性復(fù)合體相結(jié)合表達于巨噬細胞表面，然后提呈給T淋巴細胞。能夠識別結(jié)核分枝桿菌抗原的T淋巴細胞分為兩種，包括效應(yīng)T淋巴細胞和記憶T淋巴細胞。首次感染結(jié)核分枝桿菌后產(chǎn)生的記憶T淋巴細胞將在人體長期存在，當(dāng)再次受到結(jié)核分支桿菌相同抗原刺激后，這些記憶T淋巴細胞迅速增殖成為效應(yīng)T淋巴細胞[9]。這些效應(yīng)T淋巴細胞分泌γ-干擾素和其他一些細胞因子來刺激T淋巴細胞增殖并可以激活巨噬細胞，由于這個過程是針對特異結(jié)核分枝桿菌免疫原得到的反應(yīng)，因此可以通過測定T細胞的γ-干擾素釋放反應(yīng)來檢查患者是否受到結(jié)核分枝桿菌感染[9]。即利用特異蛋白刺激全血或純化的外周血單核細胞，進而通過檢測γ-干擾素的表達來判斷是否有結(jié)核分支桿菌感染[10]。人們通過比較卡介苗與致病性的結(jié)核菌的基因序列后發(fā)現(xiàn)：一些特殊的抗原保守基因（比如RD1）在致病性的結(jié)核分枝桿菌中存在，但在結(jié)核菌進化后，因為毒力的變化，RD1逐漸喪失，故RD1基因并不存在于卡介苗及大部分非致病性的結(jié)核菌中（除堪薩斯分枝桿菌、蘇爾加分枝桿菌、轉(zhuǎn)黃分枝桿菌和海分枝桿菌）[11]，人們對RD1基因進一步研究發(fā)現(xiàn)：早期分泌抗原ESAT-6（early secreted antigen target-6，ESAT-6）和培養(yǎng)的濾過蛋白CFP-10（culture filtrate protein，CFP-10）是兩個特異性抗原成分[12]，隨后有大量研究表明，ESAT-6是結(jié)核病早期感染中的主要抗原，ESAT-6以及CFP-10與其他抗原相比能更強烈地被機體T細胞識別，并產(chǎn)生大量γ-干擾素[13]。目前國際上以此為原理的檢測技術(shù)共有2種：一種是由澳大利亞Cellestis International公司研發(fā)的QuantiFERON-TB（QFT）檢測技術(shù)，該檢測方法通過以酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）為基礎(chǔ)在體外檢測結(jié)核特異性抗原誘導(dǎo)刺激的致敏T淋巴細胞所釋放的γ-干擾素含量。另一種是由英國的Oxford Immunotec公司研發(fā)的T-SPOT.TB技術(shù)，它應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)（enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT）為基礎(chǔ)，檢測結(jié)核特異性抗原刺激能產(chǎn)生γ-干擾素的T淋巴細胞的數(shù)量，實驗設(shè)有無反應(yīng)性對照孔、有反應(yīng)性對照孔以及抗原A和抗原B兩個實驗孔[9]。根據(jù)抗原A或/和抗原B孔的反應(yīng)判斷結(jié)果：（1）無反應(yīng)性對照孔點數(shù)為0～5時，抗原A或抗原B斑點數(shù)減去無反應(yīng)性對照孔斑點數(shù)后大于等于6，判讀結(jié)果為陽性。（2）無反應(yīng)性對照孔點數(shù)為大于等于6時，抗原A或抗原B斑點數(shù)大于等于2倍無反應(yīng)性對照孔斑點數(shù)，判讀結(jié)果為陽性[9]。T-SPOT.TB試驗結(jié)合了ELISPOT技術(shù)與γ-干擾素釋放試驗，通過檢測受結(jié)核分枝桿菌抗原刺激而活化的效應(yīng)T細胞來診斷結(jié)核感染[14]。對活動性結(jié)核分枝桿菌感染具有較高的敏感性[15-16]。因早期分泌抗原靶6和培養(yǎng)濾液蛋白10均由結(jié)核分枝桿菌和牛分枝桿菌有毒菌株基因組中菌種特異性基因片斷序列編碼，而該序列在卡介苗和大多數(shù)非結(jié)核分支桿菌基因組中均不存在，因此，該檢測不受卡介苗接種、環(huán)境分枝桿菌感染的影響，特異性強，是目前早期發(fā)現(xiàn)結(jié)核病最有效的檢測手段[17-18]。

研究結(jié)果顯示，ROC曲線下面積0.749，P=0.00，說明T-SPOT.TB對結(jié)核感染有診斷價值，T-SPOT.TB的一致百分率（93.75%）、敏感度（95.88%）及陽性預(yù)測值（97.49%）均較高，故根據(jù)以上數(shù)據(jù)可見T-SPOT.TB對結(jié)核感染的診斷有效性較高。與以往報道一致[19]。

但是結(jié)核感染T淋巴細胞特異度（53.85%）及陰性預(yù)測值（41.18%）均較低，與以往的報道存在一定的差異[20]，因此使用結(jié)核感染T淋巴細胞斑點試驗對結(jié)核進行排除診斷效果不理想。10例假陰性患者中，其中有8例為老年性患者，年齡均大于60歲，7例為結(jié)核性胸膜炎患者，1例空洞型肺結(jié)核，1例粟粒性肺結(jié)核，1例浸潤性肺結(jié)核?？紤]引起陰性的結(jié)果與疾病的免疫功能減退等相關(guān)[21]。因此T-SPOT.TB對于胸腔積液待查的患者的診斷，還需要結(jié)合患者癥狀、胸水生化常規(guī)及病理進行診斷，T-SPOT.TB陰性不能盲目排除結(jié)核感染。T-SPOT.TB對于老年人群及免疫功能減退人群的診斷價值還有待進一步探究。

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（收稿日期：2016-09-30）