• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    焦化廢水活性污泥PAH雙加氧酶基因多樣性分析

    2017-02-22 07:24:09蒙小俊李海波盛宇星曹宏斌安康學院旅游與資源環(huán)境學院陜西安康75000中國科學院過程工程研究所綠色過程與工程重點實驗室北京100190
    中國環(huán)境科學 2017年1期
    關鍵詞:加氧酶焦化活性污泥

    蒙小俊,李海波,盛宇星,曹宏斌*(1.安康學院旅游與資源環(huán)境學院,陜西 安康 75000;.中國科學院過程工程研究所綠色過程與工程重點實驗室,北京 100190)

    焦化廢水活性污泥PAH雙加氧酶基因多樣性分析

    蒙小俊1,2,李海波2,盛宇星2,曹宏斌2*(1.安康學院旅游與資源環(huán)境學院,陜西 安康 725000;2.中國科學院過程工程研究所綠色過程與工程重點實驗室,北京 100190)

    為分析焦化廢水活性污泥中降解PAH雙加氧酶的多樣性,利用16Sr DNA-PCR-DGGE方法,以實際焦化廢水好氧單元活性污泥總DNA為模板,通過引物對污泥中的雙加氧酶基因進行了克隆表達和多樣性分析.結果表明,以活性污泥總 DNA為模板,利用引物RHD-GN-610F和RHD-GN-916R擴增后有明顯的產物,產物大小約為300bp;DGGE指紋圖譜顯示PCR產物有8條分離條帶,豐度分別為2.99%、8.16%、20.75%、28.50%、8.62%、7.26%、10.62%和13.10%;條帶經切膠回收PCR擴增后出現(xiàn)明顯的擴增產物,TA克隆后成功測試出4條序列,長度分別為305bp,298bp,334bp和294bp,表明焦化廢水活性污泥中存在不同降解PAH的RHD酶.這些結果為焦化廢水中PAHs的風險評估及其潛在生物降解提供理論基礎.

    焦化廢水;PAHs;活性污泥;雙加氧酶基因

    PAHs是一類由稠合芳環(huán),不含取代基或雜原子組成的有毒有害化合物,這類物質常以混合的形式存在,廣泛分布于不同性質的水環(huán)境介質中,如生活廢水和工業(yè)廢水中.在廢水的處理過程中PAHs會大量積存于初沉池污泥、活性污泥、消化污泥、脫水污泥和外排污泥中,對微生物活性有負效應,因致突、致畸和致癌使該類物質成為最危險的有機污染物之一.因與固體顆粒有很強的親和性,在廢水處理過程中 PAHs很容易被吸附在固體顆粒表面,吸附作用是 PAHs在廢水處理過程中去除的主要途徑[1-3].焦化廠是環(huán)境中PAHs的主要來源之一,焦化排放的PAHs占我國多環(huán)芳烴年排放總量的17.9%,尤其如萘、菲、芘、苯并[a]芘是焦化廢水中PAHs的典型代表[4-6].焦化廢水生化處理過程中PAHs的遷移轉化主要是依賴生物反應器中生物污泥-微生物群落的吸附降解耦合作用來去除,在生物反應器中多環(huán)芳烴遷移轉化的可能途徑主要是生物污泥的吸附,其次是緩慢的生物降解,多環(huán)芳烴的水溶解度隨著分子量的增大而降低,水相遷移能力也隨之變差,多環(huán)芳烴會更容易被懸浮物和沉積物吸附[7-10].焦化廢水中PAHs的最終去除依靠微生物的降解作用,已從焦化廢水活性污泥、土壤或者其他場所鑒定出多株具有降解多環(huán)芳烴能力的菌株,如芘降解菌Pseudomonas sp.[11], Burkholderia sp.[11]和Diaphorobacter sp.[12]等,萘降解菌如 Streptomyces sp.[13]和 Geobacillus sp.[14]等,菲降解菌如Pseudomonas sp.[15]和Sphingomonas sp.[16]等.

    PAHs的生物降解需要多種酶系的參與,酶系的生成和不同活性都是由相關基因進行編碼控制,其中重要的關鍵啟動酶為環(huán)羥基雙加氧酶(RHD),它決定和控制后續(xù)的生物降解步驟和速率.RHD由β和α終端雙加氧酶,鐵氧化還原蛋白和鐵氧化還原蛋白酶組成,在 PAH環(huán)裂解過程中另外還需雌二醇雙加氧酶的參與,在不同的染色體或質粒位點上,不同的 PAH降解菌具有不同的 RHD編碼基因[17-18].已從紅杉沉淀物中發(fā)現(xiàn)nidA和ndo (nahAc and phnAc)終端雙加氧酶基因[19-20],利用實時定量 PCR從土壤和沉積物樣品中成功克隆和鑒定出降解 PAHs的環(huán)羥化雙加氧酶基因RHD[21-22].降解PAHs的雙加氧酶基因具有相似性和多樣性,如高效降解芘的放線菌 Mycobacterium sp.雙加氧酶大亞基和小亞基的基因片段與已知降解芘的分枝桿菌的雙加氧酶基因具有高度同源性[23],而降解蒽嗜鹽菌AD-3 的雙加氧酶基因與 Marinobacter sp.NCE312菌株萘雙加氧酶大亞基的部分氨基酸序列同源性相似[24],嗜鹽菌群萘雙加氧酶(ndo)基因有6種基因型[25].實際焦化廢水處理工藝好氧單元多以活性污泥法為主,然而好氧單元活性污泥PAHs雙加氧酶基因多樣性未見報道.對編碼降解PAH啟動基因RHD進行克隆表達和多樣性分析有利于降解PAHs功能微生物的監(jiān)測,風險評估及其PAHs的潛在生物降解.本研究利用16Sr DNA- DGGE技術對采自實際焦化廢水處理廠好氧單元的活性污泥分析其RHD基因的多樣性.

    1 材料與方法

    1.1 實驗試劑

    D5625-01E.Z.N.A.Soil DNA Kit(OMEGA)、Q10212Qubit2.0DNA 檢測試 劑 盒(Life)、Ep0406Taq DNA Polymerase(Thermo) 、SK8192SanPrep柱式DNA膠回收試劑盒(上海生工).

    1.2 實驗主要儀器

    Pico-2臺式離心機(Thermo Fisher)、GL-88B漩渦混合器(海門市其林貝爾儀器制造有限公司)、 TND03-H-H干式恒溫器(深圳拓能達科技有限公司)、DYY-6C電泳儀電源(北京市六一儀器廠)、DYCZ-21電泳槽(北京市六一儀器廠)、GelDoc-It310凝膠成像系統(tǒng)(美國 UVP)、Qubit?2.0Q32866熒光計(Invitrogen)、T100TMThermal Cyeler PCR儀(BIO-RAD)、DGGE儀(Bio-Rad).

    1.3 采樣

    活性污泥采自遼寧某焦化廠好氧單元,該焦化廢水生物處理系統(tǒng)采用A-A-O工藝,表1為主要水質指標和好氧單元工藝參數(shù),SRT為15~18d,活性污泥中16種EPA優(yōu)控PAHs單體濃度為18.95~68.50μg/g.

    表1 焦化廢水主要水質指標和好氧單元工藝參數(shù)Table 1 Major indices of coking wastewater and operational parameters of aerobic basin

    1.4 樣品總DNA提取和PCR擴增

    活性污泥基因組 DNA 通過 E.Z.N.A. Soil DNA Kit 提取,Qubit2.0檢測DNA濃度,瓊脂糖凝膠檢測DNA完整性.

    所用引物為PAH-RHD,如表2所示[21-22].反應體系50μL:10×Buffer(含2.0mmol/L MgCl2)5μL, dNTP(10mmol/L)1μL,GC(10μmol/L)1μL,NS1(10 μmol/L)1μL,Taq酶(5U/μL)0.25μL,母板 DNA 2μL,ddH2O補至50μL.PCR擴增程序:94℃ 5min預變性;94℃變性 30s,54℃退火 45s,72℃延伸1min,35個循環(huán);延伸7min,4℃保存.取PCR產物各2μL,1.5%瓊脂糖,1×TAE緩沖液,120V穩(wěn)壓電泳 15min,利用凝膠成像系統(tǒng)拍攝電泳圖譜查看PCR的擴增效果.

    表2 PCR擴增引物Table 2 PCR amplification primers

    1.5 變性梯度凝膠電泳DGGE和條帶回收

    利用D-Code突變檢測系統(tǒng)對上述PCR產物(取PCR產物400ng)進行DGGE分析,8%的聚丙烯酰胺凝膠濃度,變性劑濃度梯度 15%~40%,電壓條件為70V,60℃恒溫,1×TAE中電泳13h.電泳結束后,利用超純水將膠沖洗干凈放入含 TE的染液中染色 30min,然后置于凝膠成像系統(tǒng)上拍攝圖譜.待凝膠成像系統(tǒng)拍攝電泳圖譜結束后,用潔凈的手術刀片將預先挑選的代表性目標DGGE條帶完整地切下裝入1.5mL離心管中,按上海生工公司試劑盒方法進行回收,備用.

    1.6 PCR擴增、產物回收和目標片段測序

    PCR反應體系與程序同上.PCR產物按上海生工測序公司 SK8131試劑盒方法切膠回收.依次經過連接、感受態(tài)細胞制備、連接產物轉化、藍白斑篩選和質粒提取過程后對目標片段進行測序,測序由上海生工完成.

    2 結果與討論

    2.1 PCR擴增產物和DGGE指紋圖譜分析

    提取活性污泥樣品總DNA后,利用表2中的引物以總DNA為模板進行PCR擴增,發(fā)現(xiàn)引物RHD-GN-610F和RHD-GN-916R有明顯的擴增產物,如圖1所示,產物大小為300bp,這與相關研究報道結果一致[21,24],說明 A-A-O處理工藝好氧單元活性污泥中存在降解PAHs的RHD基因酶.

    圖1 PCR擴增產物Fig.1 PCR amplification product

    圖2 RHD基因DGGE 指紋圖譜分析Fig.2 DGGE analysis of RHD genes

    對樣品PCR產物進行DGGE分析,發(fā)現(xiàn)有明顯的分離條帶(圖2),分別編號1、2、3、4、5、6、7、8(圖2),說明焦化廢水活性污泥中RHD基因存在多樣性.RHD基因酶由β和α終端雙加氧酶,鐵氧化還原蛋白和鐵氧化還原蛋白酶組成,在不同的染色體或質粒位點上,不同的PAH降解菌具有不同的 RHD編碼基因[17-18].焦化廢水活性污泥是一個復雜的微生物群落,存在不同的 PAHs降解菌株,如 Burkholderia sp.和 Pseudomonas sp.、Comamonas sp.和Diaphorobacter sp.等[26-28]. 8條條帶的亮度如圖2所示,亮度的大小可反映該條帶的豐富度,表3所示8條帶所占的豐度分別為2.99、8.16、20.75、28.50、8.62、7.26、10.62和13.10%,主要條帶為3和4號條帶,推測3和4號條帶的RHD基因酶是焦化廢水中降解PAHs的主要酶.用潔凈的手術刀片將1~8號目標DGGE條帶完整的切下利用引物 RHD-GN-610F和RHD-GN-916R PCR擴增后進行電泳檢測.

    表3 RHD基因的多樣性和豐度Table 3 Diversities and richness of RHD genes

    2.2 DGGE條帶PCR產物電泳分析

    圖3 DGGE條帶PCR產物電泳圖Fig.3 Electrophoresis of DGGE band PCR products

    如圖3所示,對DGGE指紋圖譜中的8條條帶進行回收經PCR擴增后發(fā)現(xiàn)有明顯的擴增產物,進一步證實了活性污泥中存在不同的 RHD基因酶,不同的PAH降解菌具有不同的RHD編碼基因[18],說明焦化廢水活性污泥中存在不同的PAHs降解菌株,萘、菲、芘的代謝過程分別說明

    [18],RHD 加氧酶是 PAHs好氧代謝過程中最重要的關鍵酶和啟動酶,決定和控制后續(xù)的生物代謝過程.

    2.3 DGGE條帶PCR產物序列分析

    為了分析 DGGE條帶 PCR產物的序列,回收產物依次經過連接、感受態(tài)細胞制備、連接產物轉化、藍白斑篩選和質粒提取過程后對目標片段進行測序,成功測試出條帶編號分別為4、5、6和7的序列,序列長度分別為305bp、298bp、334bp、294bp,結果如下所示:

    條帶4:305bp

    GAGATGCATACCACGTTGGTTGGACGC ACGCATCGTCTTTGCGCTCGGGGCAGTCGA TATTTACTCCTCTTGCGGGCAACGCGATGCT TCCACCCGAAGGCGCGGGCTTGCAAATGAC CAGCAAGTATGGCAGTGGAATGGGCGTATT GTGGGACGCCTACTCCGGTGTCCACAGCGC TGATCTGGTTCCCGAAATGATGGCATTCGGC GGCGCAAAACAGGAAAAGCTCGCCAAAGA AATCGGCGATGTCCGGGCGCGGATTTACCG CAGCCATCTGAACAGCACTATCTTCCCGAA CAACAGC

    條帶5:298bp

    GAGATGCATACCACGTTGGTTGGACGC ACGCATCGTCTTTGCGCACAGGGCAGTCGA TATTTACCCCTCTTGCGGGCAACGCTATGCC TCCACCCGAAGGCGCGGGCTTACAAGTGA CCAGCAAGTATGGCAGTGGAATGGGCGTAT TGTGGGACGCCTACTCCGGTGTCCACAGCG CAGACCTGGTTCCCGAAATGATGGCATTCG GCGGCGCAAAACAGGAAAAGCTCGCCAAG AAATCGGCGATGTCCGGGCGCGGATTTACC GCAGCCATCGTCGACCTGCAGGCATGCAAG CT

    條帶6:334bp

    GAGATGCATACCACGTTGGTTGGACGC ACGCATCGTCTTTGCGCTCAGGGCAGTCGA TATTTACCCCTCTTGCGGGCAACGCTATGCC TCCACCCGAAGGCGCGGGCTTACAAGTGA CCAGCAAGTATGGCAGTGGAATGGGCGTAT TGTGGGACGCCTACTCCGGTGTCCACAGCG CTGATCTGGTTGCCGAACTGATGGCATTCG GCGCCGCAAGACAGGAAAAACTCGCCAAG GAAATCGGCGTTGTCCGGGCACAGATTTAC CGCAGCCATCTAAACAGCACTATCTTCCCG AACAACAGCTAACCGCACTATCTTCCCGAA CAACAGCT

    條帶7:294bp

    AGATGCATACCACGTTGGTTGGACGCA CGCATCGTCTTTGCGCACAGGGCAGTCGAT ATTTACTCCTCTTGCGGGCAACGCTACGCTT CCACCCGAAGGCGCGGGCTTGCAAATGAC CAGCAAGTATGGCAGTGGAATGGGCGTATT GTGGGACGCATACCACGTAGGTTGGACGCA CGCATCGTCTTTGCGCTCAGGGCAGTCGAT ATTTACTCCTCTTGCGGGCAACGCGATGCTT CCACCCGAAGGCGCGGGCTTGCAAATGAC CAGCAAGTATGGCAGTGGAATGGGCGT

    利用BLAST在NCBI數(shù)據(jù)庫(http://blast.stva.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)中進行同源性檢索BLAST比對分析顯示:條帶4,條帶5,條帶6和條帶 7分別與 PAH雙加氧酶基因(Accession AM743143.1), (Accession JX297666.1), (Accession AM743159.1),和(Accession AM743143.1)相似,相似度分別為98%,97%,96%和98%,說明克隆表達成功測序的4條的序列基因均為PAH雙加氧酶基因.

    3 結論

    3.1 提取焦化廢水活性污泥樣品總 DNA,利用引物以總 DNA為模板 PCR擴增,發(fā)現(xiàn)引物RHD-GN-610F和RHD-GN-916R擴增后有明顯產物,對PCR擴增產物進行DGGE分析,發(fā)現(xiàn)有8條條帶,豐度分別為2.99%、8.16%、20.75%、28.50%、8.62%、7.26%、10.62%和13.10%.

    3.2 8條條帶經切膠回收PCR擴增后有明顯產物,進一步證實了活性污泥中存在不同的 RHD基因酶.TA克隆后.成功測試出4條序列.長度分別為305bp、298bp、334bp和294bp.

    [1] Qiao M, Qi W X, Liu H J, et al. Occurrence, behavior and removal of typical substituted and parent polycyclic aromatic hydrocarbons in a biological wastewater treatment plant [J]. Water Research., 2014,52:11-19.

    [2] Yao M, Zhang X W, Lei L C. Polycyclic aromatic hydrocarbons in the centralized wastewater treatment plant of a chemical industry zone: removal, mass balance and source analysis [J]. Science China Chemistry, 2012,55(3):416-425.

    [3] Tian W J, Bai J, Liu K K, et al. Occurrence and removal of polycyclic aromatic hydrocarbons in the wastewater treatment process [J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 2012,82: 1-7.

    [4] Zhang Y X, Tao S. Global atmospheric emission inventory of polycyclic aromatic hydrocarbons for 2004 [J]. Atmospheric Environment, 2009,43:812-819.

    [5] Mu L, Peng L, Cao J J, et al. Emissions of polycyclic aromatic hydrocarbons from coking industries in China [J]. Particuology, 2013,11:86-93.

    [6] Ma W, Li Y, Qi H, et al. Seasonal variations of sources of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) to a northeastern urban city, China [J]. Chemosphere, 2010,79(4):441-447.

    [7] Pavlovich L B, Zhuravleva N V, Bal’tser D V. Polycyclic aromatic hydrocarbons in coke plant wastewater [J].Coke and Chemistry, 2010,53(10):390-395.

    [8] Zhang W H, Wei C H, Chai X S, et al. The behaviors and fate of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) in a coking wastewater treatment plant [J]. Chemosphere, 2012,88(2):174-182.

    [9] Vaessen H A M G, Jekel A A, Wilbers A A M M. Dietary intake of polycyclic aromatic hydrocarbons [J]. Toxicologiacl and Environmental Chemistry, 1988,16:281-287.

    [10] 葛晨軍,俞花美.多環(huán)芳烴在土壤中的環(huán)境化學行為 [J]. 中國生態(tài)農業(yè)學報, 2006,14(1):162-165.

    [11] Deng L J, Ren Y, Wei C H. Pyrene degradation by Pseudomonas sp. and Burkholderia sp. enriched from coking wastewater sludge [J]. Journal of Environmental Science and Health, part A, 2012, 47:1984-1991.

    [12] Klankeo P, Nopcharoenkul W, Pinyakong O, et al. Two novel pyrene-degrading Diaphorobacter sp. and Pseudoxanthomonas sp. isolated from soil [J]. Journal of Bioscience and Bioengineering, 2009,108(6):488-495.

    [13] Balachandran C, Duraipandiyan V, Balakrishna K,et al.Petroleum and polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) degradation and naphthalene metabolism in Streptomyces sp. (ERI-CPDA-1) isolated from oil contaminated soil [J]. Bioresource Technology, 2012,112:83-89.

    [14] Zhang J, Zhang X, Liu J, et al. Isolation of a thermophilic bacterium, Geobacillus sp. SH-1, capable of degrading aliphatic hydrocarbons and naphthalene simultaneously and identification of its naphthalene degrading pathway [J]. Bioresource Technology, 2012,124:83-89.

    [15] Lin M, Hu X K, Chen W W, et al. Biodegradation of phenanthrene by Pseudomonas sp. BZ-3, isolated, from crude oil contaminated soil [J]. International Biodeterioration & Biodegradation, 2014,94:176-181.

    [16] Tao X Q, Lu G N, Dang Z, et al. A phenanthrene-degrading strain Sphingomonas sp. GY2B isolated from contaminated soils [J]. Process Biochemistry, 2007,42:401-408.

    [17] Wongwongsee W, Chareanpat P, Pinyakong O. Abilities and genes for PAH biodegradation of bacteria isolated from mangrove sediments from the central of Thailand [J]. Marine Pollution bulletin, 2013,74:95-104.

    [18] Peng R H, Xiong A S, Xue Y, et al. Microbial biodegradation of polyaromatic hydrocarbons [J]. FEMS Microbiology Reviews, 2008,32:927-955.

    [19] Zhou H W, Guo C L, Wong, Y S, et al. Genetic diversity of dioxygenase genes in polycyclic aromatic hydrocarbon-degrading bacteria isolated from mangrove sediments [J]. FEMS Microbiology Letters, 2006,262:148-157.

    [20] Gomes N C M, Borges L R, Paranhos R, et al. Diversity of nod genes in mangrove sediments exposed to different sources of polycyclic aromatic hydrocarbon pollution [J]. Applied Environmental Microbiology, 2007,73:7392-7399.

    [21] Cébron A, Norini M P, Beguiristain T, et al. Real-Time PCR quantification of PAH-ring hydroxylating dioxygenase (PAHRHDα) genes from Gram positive and Gram negative bacteria in soil and sediment samples [J]. Journal of Microbiological Methods, 2008,73:148-159.

    [22] Ding G C, Heuer H, Zuhlke S, et al. Soil type-dependent responses to phenanthrene as revealed by determining the diversity and abundance of polycyclic aromatic hydrocarbon ring-hydroxylating dioxygenase genes by using a novel PCR detection system [J]. Applied and Environmental Microbiology, 2010,76(14):4765-4771.

    [23] 李全霞,范丙全,龔明波,等.降解芘的分枝桿菌M11的分離鑒定和降解特性 [J]. 環(huán)境科學, 2008,29(3):763-766.

    [24] 崔長征,馮天才,于亞琦,等.降解蒽嗜鹽菌AD-3的篩選、降解特性及加氧酶基因的研究 [J]. 環(huán)境科學, 2012,33(11):4062-4068.

    [25] 何 芬,王立華,寧大亮,等.嗜鹽菌群對菲的降解及萘雙加氧酶基因的表達規(guī)律 [J]. 中國環(huán)境科學, 2012,32(9):1662-1669.

    [26] Deng L J, Ren Y, Wei C H. Pyrene degradation by Pseudomonas sp. and Burkholderia sp. enriched from coking wastewater sludge [J]. Journal of Environmental Science and Health, part A, 2012,47: 1984-1991.

    [27] Ma Q, Qu Y Y, Shen W L, et al. Bacterial community compositions of coking wastewater treatment plants in steel industry revealed by Illumina high-throughput sequencing [J]. Bioresource Technology, 2015,179:436-443.

    [28] Klankeo P, Nopcharoenkul W, Pinyakong O. Two novel pyrene-degrading Diaphorobacter sp. and Pseudoxanthomonas sp. isolated from soil [J]. Journal of Bioscience and Bioengineering, 2009,108:488-495.

    Diversity of PAH dioxygenase genes of activated sludge from coking wastewater.

    MENG Xiao-jun1,2, LI Hai-bo2, SHENG Yu-xing2, CAO Hong-bin2*
    (1.School of Tourism and Environment, Ankang University, Ankang 725000, China;2.Key Laboratory of Green Process and Engineering, Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100190, China). China Environmental Science, 2017,37(1):367~372

    In order to analyze the biodiversity of PAH dioxygenase in activated sludge from a full-scale coking wastewater, primers were used for dioxygenase gene cloning expression and diversity analysis by 16Sr DNA-PCR-DGGE method using total DNA of aerobic activated sludge as the template. The results showed that significant amplification product was found using primers RHD-GN-610F and RHD-GN-916R, and the product size was 300bp. PCR product was conducted by DGGE analysis and eight separate bands were found, the abundance was 2.99%, 8.16%, 20.75%, 28.50%, 8.62%, 7.26%, 10.62% and 13.10%, respectively. Obvious amplification products further appeared after strips by gel extraction and PCR amplification, and 4sequences were tested successfully by TA cloning, the length of the sequences was 305bp, 298bp, 334bp and 294bp, respectively, indicating the presence of different PAH RHD enzymes in coking activated sludge. These results provide a theoretical basis for the risk assessment and potential biodegradation of PAHs.

    coking wastewater;PAHs;activated sludge;dioxygenase gene

    X703

    A

    1000-6923(2017)01-0367-06

    蒙小俊(1981-),男,陜西漢中人,博士,主要從事生物法處理工業(yè)廢水研究.發(fā)表論文16篇.

    2016-05-10

    安康學院高層次人才科研專項經費(2016AYQDZR09);國家自然科學基金項目(31370281);化學工業(yè)廢水處理污泥污染特征與污染風險控制研究(201509053)

    * 責任作者, 研究員, hbcao@home.ipe.ac.cn

    猜你喜歡
    加氧酶焦化活性污泥
    一種O-A-A-O工藝在焦化廢水處理中的應用
    昆鋼科技(2020年6期)2020-03-29 06:39:44
    “綠豆軍團”成長記
    高爐噴吹焦化除塵灰生產實踐
    山東冶金(2019年1期)2019-03-30 01:35:18
    吲哚胺2,3-雙加氧酶在結核病診斷和治療中的作用
    焦化HPF脫硫液提鹽系統(tǒng)介紹
    山東冶金(2018年5期)2018-11-22 05:12:26
    活性污泥系統(tǒng)ASM2d模型的自適應模糊PID控制
    活性污泥系統(tǒng)ASM2d模型的自適應模糊PID控制
    污水活性污泥處理過程的溶解氧增益調度控制
    血紅素加氧酶-1對TNF-α引起內皮細胞炎癥損傷的保護作用
    活性污泥對管式多孔α-Al2O3陶瓷膜支撐體性能影響的初步研究
    應用化工(2014年1期)2014-08-16 13:34:08
    男人舔奶头视频| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲成人久久爱视频| 一级二级三级毛片免费看| 亚洲国产欧美在线一区| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 国产一级毛片七仙女欲春2| 日本-黄色视频高清免费观看| 少妇高潮的动态图| 黄色一级大片看看| 国产免费男女视频| 免费看光身美女| 女人久久www免费人成看片 | 嫩草影院新地址| 99久国产av精品国产电影| 国产久久久一区二区三区| 欧美激情国产日韩精品一区| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲自偷自拍三级| 一边摸一边抽搐一进一小说| 99久久成人亚洲精品观看| 一个人看视频在线观看www免费| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产精品三级大全| 人妻少妇偷人精品九色| 99热精品在线国产| 免费观看在线日韩| 亚洲国产欧美在线一区| 国产淫片久久久久久久久| 国产在线一区二区三区精 | 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲国产精品成人综合色| 国产乱来视频区| 国产成人精品一,二区| 免费无遮挡裸体视频| 中文欧美无线码| 成年女人永久免费观看视频| 在线免费观看不下载黄p国产| 日本一本二区三区精品| 身体一侧抽搐| 少妇的逼好多水| 亚洲va在线va天堂va国产| 久久久久久久国产电影| 成年版毛片免费区| www.色视频.com| av视频在线观看入口| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产精品不卡视频一区二区| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 高清在线视频一区二区三区 | 有码 亚洲区| 日韩欧美精品免费久久| 级片在线观看| 精品熟女少妇av免费看| 久久精品影院6| 亚洲精品国产av成人精品| 国产久久久一区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 中文欧美无线码| 99九九线精品视频在线观看视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 三级经典国产精品| 色噜噜av男人的天堂激情| 嫩草影院新地址| 免费看日本二区| 91狼人影院| 婷婷色麻豆天堂久久 | 精品少妇黑人巨大在线播放 | 别揉我奶头 嗯啊视频| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 国产免费福利视频在线观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产视频内射| 国产毛片a区久久久久| 欧美日韩在线观看h| 18禁在线播放成人免费| 晚上一个人看的免费电影| 内射极品少妇av片p| 国产精品无大码| 一级毛片久久久久久久久女| 成人鲁丝片一二三区免费| 伦精品一区二区三区| 亚洲精品,欧美精品| 久久久久久大精品| 女人被狂操c到高潮| 内射极品少妇av片p| av免费观看日本| 综合色丁香网| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲成人av在线免费| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 大香蕉久久网| 日韩av不卡免费在线播放| 国产私拍福利视频在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 久久久久久久久中文| 国产精品国产三级专区第一集| 日韩强制内射视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 少妇的逼水好多| 日韩人妻高清精品专区| 久久久精品94久久精品| 晚上一个人看的免费电影| www.av在线官网国产| 成人国产麻豆网| 一级二级三级毛片免费看| 日韩欧美精品免费久久| ponron亚洲| 成年女人看的毛片在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| www日本黄色视频网| 成人三级黄色视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久这里只有精品中国| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产综合懂色| 精品久久久久久久久久久久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 久久人妻av系列| 看片在线看免费视频| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 91久久精品国产一区二区三区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 一本一本综合久久| a级毛色黄片| 国产在线一区二区三区精 | 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲av免费在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产午夜福利久久久久久| 国产av不卡久久| 国产在视频线精品| 日韩欧美在线乱码| 日韩精品有码人妻一区| 国产在视频线精品| 成人一区二区视频在线观看| 久久国产乱子免费精品| 大香蕉97超碰在线| 欧美潮喷喷水| 亚洲真实伦在线观看| 观看美女的网站| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 全区人妻精品视频| av在线天堂中文字幕| 亚洲av不卡在线观看| 网址你懂的国产日韩在线| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产老妇伦熟女老妇高清| 赤兔流量卡办理| 日韩欧美精品v在线| 丝袜美腿在线中文| 亚洲在线观看片| 亚洲av中文av极速乱| 国产黄色小视频在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲av日韩在线播放| 久久久精品94久久精品| 亚洲精品一区蜜桃| 波多野结衣高清无吗| 搡老妇女老女人老熟妇| 精品久久久噜噜| 日韩精品青青久久久久久| 一夜夜www| 国产乱人偷精品视频| 国产免费一级a男人的天堂| 国产亚洲最大av| 91精品国产九色| 人体艺术视频欧美日本| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产精品一区二区性色av| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 久久人人爽人人爽人人片va| 晚上一个人看的免费电影| 最近中文字幕2019免费版| 一边亲一边摸免费视频| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲中文字幕日韩| 国产黄色小视频在线观看| 又爽又黄a免费视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 成人午夜高清在线视频| 99热这里只有是精品50| 久久国产乱子免费精品| 久久久久网色| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 色哟哟·www| 极品教师在线视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 成人特级av手机在线观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 日本av手机在线免费观看| 色尼玛亚洲综合影院| 久久热精品热| 69人妻影院| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲精品日韩av片在线观看| 成人av在线播放网站| 欧美+日韩+精品| 亚洲av.av天堂| 熟女人妻精品中文字幕| 最近中文字幕2019免费版| 综合色av麻豆| 老女人水多毛片| 欧美精品一区二区大全| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产免费又黄又爽又色| av国产免费在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 老女人水多毛片| 赤兔流量卡办理| 美女高潮的动态| av线在线观看网站| 国产成人一区二区在线| 搡女人真爽免费视频火全软件| 午夜福利视频1000在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 日本三级黄在线观看| 日韩成人伦理影院| 亚洲欧美精品自产自拍| 国产精品一及| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲精品456在线播放app| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 看片在线看免费视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 长腿黑丝高跟| av女优亚洲男人天堂| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 波野结衣二区三区在线| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 日韩在线高清观看一区二区三区| 欧美区成人在线视频| 亚洲成人精品中文字幕电影| 精品久久久久久久久av| 久久久久网色| 男女那种视频在线观看| 亚洲av二区三区四区| 精品国产三级普通话版| 成人午夜高清在线视频| 免费看日本二区| 伊人久久精品亚洲午夜| 3wmmmm亚洲av在线观看| 日本免费a在线| 成年免费大片在线观看| 内射极品少妇av片p| 日韩欧美精品v在线| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 少妇的逼好多水| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产av在哪里看| 亚洲av免费高清在线观看| 少妇高潮的动态图| 国产午夜精品一二区理论片| 美女高潮的动态| 国产午夜福利久久久久久| 久久6这里有精品| 日韩一区二区视频免费看| 美女国产视频在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日本午夜av视频| 99在线视频只有这里精品首页| 免费看光身美女| 久久精品综合一区二区三区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | 亚洲欧美一区二区三区国产| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久午夜福利片| 91狼人影院| 麻豆国产97在线/欧美| 99久久人妻综合| 少妇人妻一区二区三区视频| 99热这里只有是精品在线观看| 身体一侧抽搐| 国内精品宾馆在线| 亚洲电影在线观看av| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产色婷婷99| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 免费观看人在逋| 日韩视频在线欧美| 精品午夜福利在线看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 久久国产乱子免费精品| 超碰97精品在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲国产精品成人久久小说| 日本黄大片高清| 午夜福利在线观看吧| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 国产白丝娇喘喷水9色精品| 99九九线精品视频在线观看视频| kizo精华| 亚洲欧洲日产国产| 美女被艹到高潮喷水动态| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 欧美zozozo另类| 中文资源天堂在线| 听说在线观看完整版免费高清| 天堂网av新在线| 日日撸夜夜添| 色尼玛亚洲综合影院| www日本黄色视频网| 日本黄色片子视频| 国产三级在线视频| 美女高潮的动态| 午夜日本视频在线| 免费黄色在线免费观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 久99久视频精品免费| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 免费av不卡在线播放| 国产黄片视频在线免费观看| 不卡视频在线观看欧美| 日本av手机在线免费观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 中文字幕熟女人妻在线| 久久亚洲国产成人精品v| 国产成人福利小说| 亚洲丝袜综合中文字幕| 男女边吃奶边做爰视频| 秋霞伦理黄片| 久久精品综合一区二区三区| 中文字幕av在线有码专区| 五月玫瑰六月丁香| 免费观看精品视频网站| 99在线人妻在线中文字幕| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 精华霜和精华液先用哪个| 女人被狂操c到高潮| 国产精品国产三级专区第一集| 国产美女午夜福利| av.在线天堂| 一级毛片电影观看 | 日韩制服骚丝袜av| 成人午夜高清在线视频| 九草在线视频观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 大香蕉久久网| 亚洲高清免费不卡视频| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲欧美精品自产自拍| 毛片女人毛片| 成人毛片a级毛片在线播放| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日本欧美国产在线视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 插阴视频在线观看视频| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲四区av| 免费观看在线日韩| 亚洲国产色片| 欧美精品一区二区大全| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 成人毛片a级毛片在线播放| av女优亚洲男人天堂| 中文天堂在线官网| 久久人人爽人人片av| 日日啪夜夜撸| 午夜爱爱视频在线播放| 在线观看av片永久免费下载| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲精品亚洲一区二区| 啦啦啦啦在线视频资源| 美女大奶头视频| 国产一级毛片在线| 亚洲av成人精品一二三区| 免费黄网站久久成人精品| 久久精品国产自在天天线| 老司机福利观看| 日本午夜av视频| 18禁动态无遮挡网站| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 一级av片app| 日韩中字成人| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲av.av天堂| 真实男女啪啪啪动态图| 九色成人免费人妻av| 亚洲丝袜综合中文字幕| 乱人视频在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产精品久久视频播放| 国产精品久久久久久久电影| 国产真实乱freesex| ponron亚洲| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 亚洲精品aⅴ在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 2021天堂中文幕一二区在线观| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 内地一区二区视频在线| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 日本色播在线视频| 欧美丝袜亚洲另类| 深夜a级毛片| 午夜激情福利司机影院| 亚洲精品日韩av片在线观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 七月丁香在线播放| 欧美一级a爱片免费观看看| 99在线人妻在线中文字幕| 波多野结衣巨乳人妻| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久精品国产亚洲av涩爱| 丝袜美腿在线中文| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 亚洲自拍偷在线| 欧美成人免费av一区二区三区| 热99在线观看视频| 国产高清三级在线| 九九热线精品视视频播放| 在线播放无遮挡| 日韩成人av中文字幕在线观看| 精品酒店卫生间| 日韩欧美精品免费久久| 欧美精品一区二区大全| 美女cb高潮喷水在线观看| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 中文欧美无线码| 午夜福利成人在线免费观看| 在线免费观看的www视频| 青春草视频在线免费观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲性久久影院| 69av精品久久久久久| 九九在线视频观看精品| 亚洲国产色片| 亚洲欧美精品专区久久| 亚洲图色成人| 国产精品人妻久久久影院| 看片在线看免费视频| 偷拍熟女少妇极品色| 久久鲁丝午夜福利片| 丰满少妇做爰视频| 国产精品综合久久久久久久免费| 男人舔奶头视频| 熟女人妻精品中文字幕| 成人三级黄色视频| 国产综合懂色| 亚洲精品国产成人久久av| 国产成人freesex在线| 一区二区三区免费毛片| 午夜福利高清视频| 欧美丝袜亚洲另类| 婷婷六月久久综合丁香| 国产日韩欧美在线精品| 久久久久久大精品| 少妇高潮的动态图| 精品欧美国产一区二区三| 日韩人妻高清精品专区| 老司机福利观看| 美女黄网站色视频| 97超碰精品成人国产| 日本免费a在线| 夫妻性生交免费视频一级片| 在线免费十八禁| 亚洲自拍偷在线| 亚洲国产精品国产精品| 亚洲欧洲日产国产| 久久久久国产网址| 国产亚洲精品久久久com| 波多野结衣高清无吗| 午夜福利成人在线免费观看| 精品午夜福利在线看| 亚洲成av人片在线播放无| 日韩av在线大香蕉| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 免费黄网站久久成人精品| 五月玫瑰六月丁香| 国产伦一二天堂av在线观看| 性色avwww在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久久久久久久久成人| 国产在视频线精品| 国产精品国产三级专区第一集| 99热这里只有精品一区| 国产成人精品婷婷| 国产伦一二天堂av在线观看| 插阴视频在线观看视频| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 高清毛片免费看| 一边亲一边摸免费视频| 看免费成人av毛片| 男人和女人高潮做爰伦理| 日本与韩国留学比较| 久久久久久久久久久丰满| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 内射极品少妇av片p| 男插女下体视频免费在线播放| 日韩精品青青久久久久久| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 一个人看视频在线观看www免费| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 日本色播在线视频| 亚洲在线自拍视频| 一个人免费在线观看电影| 中文亚洲av片在线观看爽| 99热6这里只有精品| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲av熟女| 国产免费一级a男人的天堂| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲在久久综合| 插阴视频在线观看视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产在视频线在精品| 男女国产视频网站| 亚洲成色77777| 热99re8久久精品国产| 看非洲黑人一级黄片| 国产高清三级在线| 久久综合国产亚洲精品| 九九在线视频观看精品| 久久99热6这里只有精品| 免费电影在线观看免费观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 一级毛片我不卡| 免费看a级黄色片| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 日韩欧美精品免费久久| 只有这里有精品99| 男女那种视频在线观看| 一夜夜www| 三级国产精品欧美在线观看| 中文字幕制服av| 高清av免费在线| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲国产色片| 亚洲av成人精品一二三区| 少妇的逼水好多| 一边摸一边抽搐一进一小说| 只有这里有精品99| 亚洲人成网站高清观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产精品一区二区性色av| 18禁动态无遮挡网站| 有码 亚洲区| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 一级av片app| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产成人aa在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美不卡视频在线免费观看| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲综合色惰| 特级一级黄色大片| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲美女视频黄频| 中文资源天堂在线| 男人和女人高潮做爰伦理| 男人舔女人下体高潮全视频| 看黄色毛片网站| 97热精品久久久久久| 村上凉子中文字幕在线| 国产探花在线观看一区二区| 欧美成人a在线观看| 久久99精品国语久久久| 天堂网av新在线| 免费搜索国产男女视频| 欧美又色又爽又黄视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久99热这里只频精品6学生 | 免费观看的影片在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| av专区在线播放| 好男人视频免费观看在线| 久久99蜜桃精品久久| 青春草视频在线免费观看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲真实伦在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 99久久无色码亚洲精品果冻| 欧美又色又爽又黄视频| 久久久精品大字幕| 欧美zozozo另类| 2022亚洲国产成人精品| 久久久精品大字幕| 欧美成人a在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产黄色小视频在线观看| 日韩人妻高清精品专区| 久久人妻av系列| 日韩av在线大香蕉| 人人妻人人澡欧美一区二区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 美女内射精品一级片tv| 中文欧美无线码| 99久久精品一区二区三区| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站|