農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻抗瘟性研究

胡能+楊帥+雷志火+涂曉嶸+涂國全+黃林

摘要：為探討農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻抗瘟性，分別采用稻瘟病易感水稻品種陸兩優(yōu)996和農(nóng)抗702為試驗(yàn)材料，首先在水稻3葉1心時(shí)，將不同濃度的供試農(nóng)抗702分別進(jìn)行噴施，進(jìn)行誘導(dǎo)水稻抗瘟性作用最佳濃度的篩選；然后在水稻7個(gè)不同生長發(fā)育期進(jìn)行噴施藥液，進(jìn)行誘導(dǎo)抗瘟性的水稻最佳生長期和抗瘟性持續(xù)時(shí)間的測定。各試驗(yàn)處理噴施藥液后4 d后分別接種稻瘟病菌孢子液，7 d后分別調(diào)查不同試驗(yàn)處理的病情指數(shù)和發(fā)病率及誘抗效果。結(jié)果表明：供試6種不同濃度的農(nóng)抗702均能誘導(dǎo)水稻產(chǎn)生抗瘟性，且抗瘟性作用的較佳濃度為15 μg/mL；在水稻7個(gè)不同生長發(fā)育期分別噴施濃度為15 μg/mL的農(nóng)抗702，均能誘導(dǎo)水稻抗瘟性，誘導(dǎo)抗瘟性較佳生長期為水稻3葉1心期，其誘抗效果達(dá)到56.56%；且水稻抗瘟性作用最佳時(shí)期為噴施后48～96 h，其誘導(dǎo)水稻抗瘟性的持續(xù)時(shí)間超過144 h。研究為農(nóng)抗702進(jìn)一步研發(fā)和防治水稻稻瘟病方法的應(yīng)用提供有益的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞：農(nóng)抗702；水稻；稻瘟??；誘導(dǎo)抗瘟性

中圖分類號(hào)： S432.2+6文獻(xiàn)標(biāo)志碼：

文章編號(hào)：1002-1302（2016）08-0158-04

水稻稻瘟病（Magnaporthe oryzae）是威脅全球水稻種植區(qū)域的三大病害之一。目前，稻瘟病的防治措施主要包括化學(xué)防治、抗病品種選育和栽培管理；化學(xué)藥劑長期大量使用造成環(huán)境、食品安全以及病菌產(chǎn)生耐藥性或抗藥性等問題；選育抗病品種雖然不會(huì)造成環(huán)境污染，但是容易喪失抗病性，大面積栽培時(shí)抗病性的喪失將會(huì)造成農(nóng)作物的巨大損失[1-2]。誘導(dǎo)抗性（induced resistance）是指利用物理、化學(xué)或生物因子預(yù)先處理植物，激活植物對(duì)病蟲害和逆境的反應(yīng)而產(chǎn)生的局部抗性（過敏性抗性）或系統(tǒng)抗性[3]。植物誘抗劑又稱激發(fā)子（elicitor），是一類能誘導(dǎo)寄主植物產(chǎn)生防衛(wèi)反應(yīng)的特殊化合物的總稱，且具有使用劑量小、易降解、廣譜性和系統(tǒng)性等優(yōu)勢(shì)，可利用激發(fā)子誘導(dǎo)水稻抗瘟性防治水稻稻瘟病，引起國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注；陳桂華等利用前胡作為激發(fā)子[5]，Ueno等利用吲哚衍生物作為激發(fā)子對(duì)水稻進(jìn)行誘導(dǎo)[6]，均可有效增強(qiáng)水稻抗瘟性，從而達(dá)到防治水稻稻瘟病的目的。農(nóng)抗702是由江西農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)與工程學(xué)院應(yīng)用微生物研究室從土壤中分離篩選到的鏈霉菌702所產(chǎn)生的新型多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素[7]。杜亞楠等研究表明，農(nóng)抗702能夠誘導(dǎo)水稻激活水稻防御酶系統(tǒng)，進(jìn)而增強(qiáng)水稻抗病能力[8]。本研究以農(nóng)抗702作為激發(fā)子，對(duì)水稻誘導(dǎo)抗瘟性作用的最佳誘導(dǎo)濃度、最佳生長發(fā)育時(shí)期及誘導(dǎo)水稻抗瘟性的持續(xù)作用時(shí)間進(jìn)行研究。

1材料與方法

1.1供試材料

1.1.1供試藥劑（1）農(nóng)抗702：90%農(nóng)抗702為筆者研究室自行制備；（2）井岡霉素：60%井岡霉素可濕性粉劑，購自江蘇擎宇化工科技有限公司。

1.1.2供試水稻陸兩優(yōu)996，由北京金色農(nóng)華種業(yè)技術(shù)股份有限公司提供。

1.1.3供試菌水稻稻瘟病病菌（Magnaporthe grisea），由江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所提供。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1不同濃度農(nóng)抗702的配制準(zhǔn)確稱取702 111.11 mg 90%農(nóng)抗 置于100 mL容量瓶中并用100 mL無水乙醇定容，即成濃度為1 mg/mL的農(nóng)抗702母液，4 ℃冰箱避光保存。試驗(yàn)時(shí)用無菌蒸餾水稀釋成試驗(yàn)所需濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.2不同濃度井岡霉素的配制方法準(zhǔn)確稱取60%井岡霉素可濕性粉劑166.67 mg，加無菌蒸餾水定容至100 mL容量瓶配制成1 mg/mL母液，4 ℃冰箱避光保存。試驗(yàn)時(shí)用無菌蒸餾水稀釋成所需濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2.3水稻稻瘟病菌培養(yǎng)與孢子懸浮液的制備參照文獻(xiàn)[9-10]。

1.2.4供試水稻培育方法將水稻種子浸于75%乙醇 3 min，用無菌蒸餾水沖洗3次，28 ℃培養(yǎng)箱浸種24 h，催芽48 h。待露白后播種于水稻盆并放于水稻房，水稻生長期間適當(dāng)施肥。水稻3葉1心期及之前時(shí)期播種于小水稻盆，每盆12株，間隔2 cm×2 cm，每個(gè)處理4盆；3葉1心期之后移栽于大水稻盆，每穴3株，每盆4穴，穴間隔10 cm×20 cm，每個(gè)處理4盆。

1.2.5農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻抗瘟試驗(yàn)試驗(yàn)在控溫控濕的光照玻璃栽培實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，均采用單因素的對(duì)比試驗(yàn)設(shè)計(jì)。各試驗(yàn)處理噴施藥液4 d后分別接種稻瘟病菌孢子液。7 d后分別調(diào)查不同試驗(yàn)處理的病情指數(shù)、發(fā)病率及誘抗效果。同時(shí)，分別以15 μg/mL井岡霉素為陽性對(duì)照和蒸餾水為陰性對(duì)照作同樣處理。

1.2.5.1農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻抗瘟性作用濃度的篩選為了篩選農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻抗瘟性較佳噴施濃度，在水稻幼苗長至3葉1心期，分別用5、10、15、20、30、40 μg/mL農(nóng)抗702進(jìn)行秧苗噴霧處理。

1.2.5.2農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻抗瘟性較佳作用時(shí)期研究為了研究農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻抗瘟性較佳作用時(shí)期。試驗(yàn)采用篩選出的農(nóng)抗702誘導(dǎo)抗瘟性的較佳作用濃度，分別在種子幼芽期、幼苗期（3葉期）、成苗期（4葉期）、返青期、分孽期、孕穗期和結(jié)實(shí)期等7個(gè)不同生長發(fā)育期進(jìn)行噴藥處理。

1.2.5.3農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻抗瘟性持續(xù)作用時(shí)間研究為了研究農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻抗瘟性持續(xù)作用時(shí)間，采用 15 μg/mL 農(nóng)抗702藥液在水稻幼苗期（3葉期）進(jìn)行噴施后，分別在24、48、72、96、120、144 h時(shí)接種稻瘟病菌孢子液。

1.2.6稻瘟病菌接種方法將稻瘟病菌孢子懸浮液加入噴霧器中，對(duì)水稻葉片噴霧接種稻瘟病菌孢子懸浮液，直到葉面有小水珠，葉面邊緣有液滴滴下為止；水稻孕穗期用注射器注射稻瘟孢子懸浮液至水稻孕穗或半抽穗的苞內(nèi)，每穗注射 1 mL；水稻結(jié)實(shí)期使用噴霧器將稻瘟孢子懸浮液均勻噴灑于水稻穗，直到水稻穗上有水霧但不形成水滴[11]。接種后水稻葉片保持濕潤遮光24 h，水稻房保持28 ℃，濕度不低于95%，7 d后分別調(diào)查各處理的病情指數(shù)、發(fā)病率及誘抗相對(duì)效果。

2結(jié)果與分析

2.1農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻的抗瘟性作用濃度的篩選

2.2農(nóng)抗702對(duì)水稻不同生長發(fā)育時(shí)期的誘導(dǎo)抗瘟作用

采用15 μg/mL農(nóng)抗702分別對(duì)種子幼芽期、3葉期、成苗期、返青期、分孽期、孕穗期和結(jié)實(shí)期等7個(gè)不同生長發(fā)育期水稻進(jìn)行噴藥試驗(yàn)，結(jié)果見表2、圖1。

由表2、圖1可知，在陸兩優(yōu)996水稻7個(gè)不同生長發(fā)育期分別采用15 μg/mL農(nóng)抗702和井岡霉素進(jìn)行噴施，均能誘導(dǎo)水稻抗瘟性，且農(nóng)抗702誘導(dǎo)抗瘟性的效果優(yōu)于井岡霉素；農(nóng)抗702誘導(dǎo)抗瘟性較佳生長期為水稻成苗期，其誘抗效果達(dá)到56.56%。

2.3農(nóng)抗702對(duì)水稻誘導(dǎo)抗瘟性持續(xù)作用時(shí)間試驗(yàn)結(jié)果

采用15 μg/mL農(nóng)抗702在陸兩優(yōu)996水稻3葉1心期噴施并分別在24、48、72、96、120、144 h時(shí)分別接種稻瘟病菌孢子液。7 d后分別調(diào)查不同試驗(yàn)處理的病情指數(shù)、發(fā)病率及誘抗相對(duì)效果，詳見表3、圖2。

性均能持續(xù)6 d（144 h）以上，且15 μg/mL農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻抗瘟性的誘抗相對(duì)效果從24～144 h均強(qiáng)于相同濃度的井岡霉素；15 μg/mL農(nóng)抗702誘導(dǎo)水稻抗瘟性作用最佳時(shí)期為噴施藥液后48～96 h，96 h后抗瘟性逐漸遞減。

3討論與小結(jié)

魏賽金等研究表明，新型多烯大環(huán)內(nèi)酯抗生素農(nóng)抗702在防治水稻紋枯病、稻瘟病和稻曲病試驗(yàn)中，農(nóng)抗702對(duì)水稻防御紋枯病、稻瘟病和稻曲病的保護(hù)效果大于其防治效果，農(nóng)抗702對(duì)水稻具有誘導(dǎo)抗病性[14-15]。本試驗(yàn)分別采用稻瘟病[CM（25]易感品種陸兩優(yōu)996水稻和農(nóng)抗702為試驗(yàn)材料，在水稻[CM）]

3葉1心期，首先采用6種不同濃度的農(nóng)抗702分別噴施，進(jìn)行誘導(dǎo)水稻抗瘟性作用最佳濃度的篩選；然后在水稻7個(gè)不同生長發(fā)育期進(jìn)行噴施，進(jìn)行誘導(dǎo)抗瘟性的水稻最佳生長期和抗瘟性持續(xù)時(shí)間的測定。各試驗(yàn)處理噴施藥液4 d后分別接種稻瘟病菌孢子液，7 d后分別調(diào)查不同試驗(yàn)處理的病情指數(shù)、發(fā)病率及誘抗相對(duì)效果。結(jié)果表明：供試6種不同濃度的農(nóng)抗702均能誘導(dǎo)水稻產(chǎn)生抗瘟性，且抗瘟性作用的較佳濃度為15 μg/mL；在水稻7個(gè)不同生長發(fā)育期分別噴施濃度為15 μg/mL的農(nóng)抗702，均能誘導(dǎo)水稻抗瘟性，誘導(dǎo)抗瘟性較佳生長期為水稻3葉1心期，其誘抗效果達(dá)到56.56%；且水稻抗瘟性作用最佳時(shí)期為噴施后48～96 h，其誘導(dǎo)水稻抗瘟性的持續(xù)時(shí)間超過144 h。農(nóng)抗702誘導(dǎo)抗瘟性較佳生長期為水稻三葉一心期，本試驗(yàn)為農(nóng)抗702進(jìn)一步研發(fā)和在防治水稻稻瘟病的應(yīng)用方面提供有益的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

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