肝癌組織中白細胞分化抗原90和趨化因子受體4的表達與術(shù)后早期復發(fā)的關(guān)系

汪 旭 董 科 俞小炯 趙小龍 張 杰 張 浩

(四川省人民醫(yī)院肝膽外二科，四川 成都 610072)

肝癌組織中白細胞分化抗原90和趨化因子受體4的表達與術(shù)后早期復發(fā)的關(guān)系

汪 旭 董 科 俞小炯 趙小龍 張 杰 張 浩

(四川省人民醫(yī)院肝膽外二科，四川 成都 610072)

目的 探討肝癌組織中白細胞分化抗原(CD)90和趨化因子受體(CXCR)4的表達及其與術(shù)后早期復發(fā)的關(guān)系。方法 選取2013年7月至2014年7月在該院行手術(shù)切除的肝癌患者組織標本82例，采用免疫組織化學法檢測CD90和CXCR4的表達情況，并記錄患者術(shù)后1年復發(fā)情況，分析肝癌組織中CD90和CXCR4的表達與臨床病理及術(shù)后早期復發(fā)的關(guān)系。結(jié)果 82例肝癌組織中，CD90陽性表達65例(79.27%)，CXCR4高表達49例(59.76%)。肝癌組織中CD90與CXCR4的表達均與患者是否攜帶乙肝病毒、腫瘤直徑大小、結(jié)節(jié)數(shù)、血管侵犯情況、腫瘤分化情況及TNM分期有關(guān)，且CXCR4表達與包膜情況有關(guān)(均P<0.05)。肝癌組織中CD90、CXCR4的表達與患者術(shù)后1年復發(fā)有關(guān)(均P<0.05)。結(jié)論 CD90與CXCR4在肝癌組織中均呈高表達，且臨床檢測CD90和CXCR4有助于及時了解肝癌患者術(shù)后早期復發(fā)情況，為改善患者預后提供參考。

肝癌；組織；白細胞分化抗原90；趨化因子受體4；早期復發(fā)

研究證實，白細胞分化抗原(CD)90、趨化因子受體(CXCR)4與肝癌生長及轉(zhuǎn)移有關(guān)〔1〕，而目前關(guān)于二者與肝癌患者的預后關(guān)系研究尚少。本研究旨在探討CD90、CXCR4在肝癌組織中的表達情況及其與患者術(shù)后早期復發(fā)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2013年7月至2014年7月在我院行手術(shù)切除的肝癌患者組織標本82例。其中男52例，女30例，年齡46～75〔平均(56.2±6.6)〕歲。納入標準：①經(jīng)病理、影像學等方法檢查符合肝癌診斷標準〔2〕，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期，且患者均符合手術(shù)指征；②術(shù)后有完整的隨訪資料，手術(shù)成功實施，并完整切除病灶者；③出現(xiàn)轉(zhuǎn)移后未經(jīng)任何抗腫瘤藥物治療者。排除標準：①并發(fā)其他惡性腫瘤者；②術(shù)前服用過抗腫瘤藥物者；③術(shù)前經(jīng)證實已經(jīng)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移者。

1.2 CD90與CXCR4檢測方法 兔抗人CD90及CXCR4抗體均購自ProteinTech Group公司。二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒、免疫組織染色試劑盒均購自上海欣裕生物科技有限公司。參照試劑盒說明書，具體染色步驟：①標本脫蠟。所有組織標本行4 μm連續(xù)切片，在恒溫箱中烤30 min，使用脫二甲苯梯度溶液進行脫蠟處理，之后放入蒸餾水中做水化處理；②抗原修復。將切片放入過氧化氫溶液中進行抗原修復；③加入對應的抗體試劑。每例標本隨機選取5個高倍視野(×400)，觀察細胞染色情況。CD90陽性判定標準：顯微鏡下行二次計分法〔3〕，根據(jù)著色強度及著色范圍積分之和進行評價。著色范圍：無色為0分，0～5%為1分，6%～11%為2分，12%及以上為3分。②著色強度：棕黃色為3分，黃色為2分，淡黃色為1分。若積分和<3分為陰性，≥3分為陽性。CXCR4以細胞質(zhì)膜出現(xiàn)黃色及棕黃色為陽性，且陽性表達細胞數(shù)<腫瘤細胞總數(shù)20%為低表達，≥20%為高表達〔4〕。

1.3 觀察指標 收集并統(tǒng)計所有患者的臨床資料，術(shù)后囑咐患者每隔2～3個月到醫(yī)院進行體檢，并記錄其1年復發(fā)情況，分析不同病理特征患者組織中CD90和CXCR4的表達情況及其與術(shù)后復發(fā)的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS18.0軟件行χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 肝癌組織中CD90與CXCR4的表達與臨床病理因素的關(guān)系 82例肝癌組織中，CD90陽性表達65例(79.27%)，CXCR4高表達49例(59.76%)。肝癌組織中CD90與CXCR4的表達均與患者是否攜帶乙肝病毒、腫瘤直徑大小、結(jié)節(jié)數(shù)、血管侵犯情況、腫瘤分化情況及TNM分期有關(guān)，且CXCR4表達與包膜情況有關(guān)(均P<0.05)，而兩者均與患者性別、年齡、甲胎蛋白(AFP)、肝硬化情況無關(guān)(均P>0.05)。見表1。

表1 肝癌組織中CD90與CXCR4的表達與臨床病理因素的關(guān)系〔n(%)〕

2.2 肝癌組織中CD90、CXCR4的表達與術(shù)后1年復發(fā)的關(guān)系 1年隨訪調(diào)查發(fā)現(xiàn)有26例(31.71%)復發(fā)。CD90陽性表達及CXCR4高表達的患者1年內(nèi)復發(fā)率〔35.38%(23/65);40.82%(20/49)〕分別高于CD90陰性表達〔17.65%(3/17)〕及CXCR4低表達〔18.18%(6/23)〕者(χ2=8.077,12.323;P=0.004,0.000)。

3 結(jié) 論

我國肝癌患者預后較差，這與肝癌細胞具有較強的侵襲轉(zhuǎn)移特性密切相關(guān)。腫瘤干細胞理論的提出為治愈惡性腫瘤提供了理論基礎。CD90是一種免疫球蛋白，其主要功能是參與細胞與基質(zhì)之間的物質(zhì)交換。在胸腺細胞、T細胞、神經(jīng)細胞等多種細胞中均有表達。近期研究顯示，CD90為腫瘤標志物之一，在食管癌、肺癌、胃癌中均有表達〔5〕。CXCR4在人體多種細胞和組織中均有表達，對人體的炎癥修復、心臟系統(tǒng)的發(fā)育、神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、免疫體統(tǒng)的穩(wěn)定均具有重要作用。同時也有研究證實，CXCR4對腫瘤細胞的生長、轉(zhuǎn)移及惡化具有重要影響〔6〕。因此腫瘤轉(zhuǎn)移可能與原發(fā)灶器官及靶器官的中趨化因子有關(guān)。

本研究說明CD90與CXCR4在肝癌組織中均有較高表達。此外，本研究結(jié)果提示，CD90及CXCR4可能在腫瘤的生長、分化及轉(zhuǎn)移中均有促進作用。其中CD90標記細胞具有較高的轉(zhuǎn)移能力，同時對血管的生成具有促進作用，而腫瘤血管的生成是形成腫瘤的必要因素〔7〕。經(jīng)過1年隨訪調(diào)查提示CD90及CXCR4對肝癌復發(fā)具有促進作用。相關(guān)報道發(fā)現(xiàn)〔8〕，肝癌組織中分選的CD90+亞群比CD90-亞群具有更強的成瘤能力，可促進細胞增殖并抑制細胞凋亡，但其具體致癌機制尚不清楚，需進一步研究。研究顯示〔9〕，CXCR4可誘導腫瘤細胞進入骨髓細胞龕，有利于腫瘤細胞躲避機體免疫系統(tǒng)的攻擊，并且CXCR4能作用于內(nèi)皮細胞進而促進腫瘤血管的生成。說明CXCR4是肝癌組織浸潤及轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因子，這為研究肝癌細胞的轉(zhuǎn)移提供了新的思路。

綜上所述，CD90與CXCR4在肝癌組織中均呈高表達，與肝癌細胞的生長、分化及病情的嚴重程度有關(guān)，而且臨床檢測CD90和CXCR4有助于及時了解肝癌患者術(shù)后早期復發(fā)情況，為改善患者預后提供參考。

1 Shah AD，Bouchard MJ，Shieh AC.Interstitial fluid flow increases hepatocellular carcinoma cell invasion through CXCR4/CXCL12 and MEK/ERK signaling〔J〕.PLoS One，2015；10(11)：e0142337.

2 中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會.原發(fā)性肝癌診斷標準〔J〕.中華肝臟病雜志，2000；8(3)：135.

3 Thakolwiboon S，Zhu J，Liang Q，etal.Heterogeneity of the CD90+population in different stages of hepatocarcinogenesis〔J〕.J Proteomics Bioinform，2014；7(10)：296-302.

4 Meuris F，Gaudin F，Aknin ML，etal.Symptomatic improvement in human papillomavirus-induced epithelial neoplasia by specific targeting of the CXCR4 chemokine receptor〔J〕.J Invest Dermatol，2016；136(2)：473-80.

5 Bahnassy AA，F(xiàn)awzy M，El-Wakil M，etal.Aberrant expression of cancer stem cell markers(CD44，CD90，and CD133)contributes to disease progression and reduced survival in hepatoblastoma patients：4-year survival data〔J〕.Transl Res，2015；165(3)：396-406.

6 Fontanella R，Pelagalli A，Nardelli A，etal.A novel antagonist of CXCR4 prevents bone marrow-derived mesenchymal stem cell-mediated osteosarcoma and hepatocellular carcinoma cell migration and invasion〔J〕.Cancer Lett，2016；370(1)：100-7.

7 Zhu L，Zhang W，Wang J，etal.Evidence of CD90+CXCR4+ cells as circulating tumor stem cells in hepatocellular carcinoma〔J〕.Tumour Biol，2015；36(7)：5353-60.

8 Zhu CP，Wang AQ，Zhang HH，etal.Research progress and prospects of markers for liver cancer stem cells〔J〕.World J Gastroenterol，2015；21(42)：12190-6.

9 Yu C，Wang Z，Xu X，etal.Circulating hepatocellular carcinoma cells are characterized by CXCR4 and MMP26〔J〕.Cell Physiol Biochem，2015；36(6)：2393-402.

〔2016-10-22修回〕

(編輯 袁左鳴/滕欣航)

張 浩(1976-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事肝臟及胰腺腫瘤研究。

汪 旭(1978-)，男，主治醫(yī)師，主要從事肝臟及膽道腫瘤研究。

R735.7

A

1005-9202(2017)02-0399-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.02.062