山東地區(qū)淋病奈瑟菌臨床菌株常用抗生素的耐藥性分析*

趙立紅

(泰山醫(yī)學院附屬泰山醫(yī)院檢驗科，山東 泰安 271000)

山東地區(qū)淋病奈瑟菌臨床菌株常用抗生素的耐藥性分析*

趙立紅

(泰山醫(yī)學院附屬泰山醫(yī)院檢驗科，山東 泰安 271000)

目的 對2014年6月—2016年6月從山東濟南、青島、泰安地區(qū)分離的189株淋病奈瑟菌(neisseria gonorrhoeae,NG)臨床菌株，對環(huán)丙沙星、青霉素、四環(huán)素、頭孢曲松、阿奇霉素，以及大觀霉素等6種常用抗生素的耐藥性進行分析，為臨床淋病的治療提供依據(jù)。方法 采用瓊脂稀釋法測定189株臨床分離菌株對6種抗生素的最小抑菌濃度(MIC)值。采用產(chǎn)色頭孢硝噻吩紙片法檢測產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶NG菌株(PPNG)。結(jié)果 NG對頭孢曲松、阿奇霉素、和大觀霉素的敏感率分別為98.41%、97.88%、98.94%；對環(huán)丙沙星、青霉素、四環(huán)素等幾種傳統(tǒng)抗生素的耐藥率分別為95.77%、96.3%、96.83%。檢出PPNG 75 株(39.7%)，TRNG77 株(40.7%)。結(jié)論 青霉素、環(huán)丙沙星及四環(huán)素等藥物已不適用于本地區(qū)淋病的治療，頭孢曲松可作為治療的首選藥物，可同時用阿奇霉素進行聯(lián)合治療，三代頭孢類藥物過敏時可用大觀霉素。

淋病奈瑟菌； 耐藥性； 最小抑菌濃度

近年來，中國淋病發(fā)病率在性傳播疾病中僅次于梅毒，居于第二位，是國家重點防治的性傳播疾病之一[1]。淋病奈瑟菌是引起淋病(gonorrhea)的病原體，人類是淋病奈瑟菌的唯一天然宿主。隨著抗生素的廣泛應用及細菌染色體基因突變和耐藥質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移，應對淋病奈瑟菌的耐藥性已成為全球化的難題[2-4]。本研究報告山東地區(qū)2014年6月—2016年6月分離的189株淋病奈瑟菌臨床菌株，對環(huán)丙沙星、青霉素、四環(huán)素、頭孢曲松、阿奇霉素、大觀霉素等6種常用抗生素的耐藥情況進行分析，給臨床淋病治療提供及時準確的依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 菌株來源 189株淋病奈瑟菌菌株分離自山東濟南、青島、泰安地區(qū)2014年6月—2016年6月確診的淋病患者的尿道或?qū)m頸分泌物。將取得的分泌物接種于TM培養(yǎng)基上，立即置36 ℃、85%濕度，5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24～48 h，然后根據(jù)菌落的形態(tài)、氧化酶實驗、革蘭染色及糖發(fā)酵試驗證實為NG后，再在NG營養(yǎng)培養(yǎng)基中純培養(yǎng)，于液氮中凍存?zhèn)溆?。標準質(zhì)控菌株WHO A、B、C、D、E均由中國醫(yī)學科學院皮膚病研究所提供。

1.2 抗生素及平板 青霉素、四環(huán)素、阿奇霉素、頭孢曲松、大觀霉素以及TM和巧克力平板均購自英國OXOID公司，環(huán)丙沙星購自德國拜耳公司?？股叵♂屓芤河芍袊t(yī)學科學院皮膚病研究所提供。

1.3 抗生素敏感性試驗 采用瓊脂稀釋法測定最小抑菌濃度(MIC)，并統(tǒng)計MIC 50和MIC 90。藥敏試驗操作及藥敏結(jié)果解釋嚴格按照指南(CLSI M100-S21)進行[5]。各抗生素耐藥的具體判斷標準如下：青霉素MIC≤0.06mg/L為敏感，0.12 mg/L

1.4 產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶NG(PPNG)測定 采用產(chǎn)色頭孢硝噻吩法，將頭孢硝噻吩紙片置于干凈的平皿內(nèi)，用無菌接種環(huán)挑取細菌涂抹于紙片上，1 min后觀察紙片有無顏色變化，顏色由黃色變?yōu)榧t色為陽性，不變色為陰性。每次檢測均以β-內(nèi)酰胺酶陽性的WHO 標準菌株做對照。

1.5 質(zhì)粒介導的四環(huán)素高度耐藥NG(TRNG)測定 采用瓊脂稀釋法，當四環(huán)素MIC≥16 mg/L，判為TRNG株。

2 結(jié) 果

2.1 抗生素敏感性試驗測定結(jié)果 189株淋病奈瑟菌臨床菌株對環(huán)丙沙星、青霉素及四環(huán)素耐藥率分別為95.77%、 96.3%和96.83%，均未發(fā)現(xiàn)敏感菌株；對阿奇霉素、頭孢曲松及大觀霉素的敏感率分別97.88%、98.41%、98.94%，均未發(fā)現(xiàn)耐藥菌株。見表1。

表1 189株中國山東地區(qū)淋病奈瑟菌對6種抗生素的敏感性

注:環(huán)丙沙星：CIP；青霉素：PEN；頭孢曲松：CRO；四環(huán)素：TET；大觀霉素:SPT。敏感：S,sensitive；中介：I, intermediate；耐藥：R, resistant。

2.2 PPNG 及TRNG 測定結(jié)果 189 株NG 共檢出PPNG 75 株(39.7%)，TRNG77 株(40.7%)。

3 討 論

青霉素和四環(huán)素是治療淋病的經(jīng)典藥物，由于20世紀80年代淋病奈瑟菌對青霉素和四環(huán)素普遍耐藥，WHO于當時提出將第三代頭孢菌素及氟喹諾酮類藥物推薦為治療淋病的一線藥物[6]。但淋病奈瑟菌對氟喹諾酮類藥物的敏感性下降于1992年在西太平洋地區(qū)首次發(fā)現(xiàn)，很快蔓延至世界各地[2-4，7]。在中國，淋病奈瑟菌對氟喹諾酮類藥物的耐藥率因不同的地區(qū)而有所不同。本研究顯示對環(huán)丙沙星、青霉素及四環(huán)素耐藥率分別為95.77%， 96.3%和96.83%，均未發(fā)現(xiàn)敏感株。四環(huán)素耐藥率基本與廣州地區(qū)2010高達98.8%的耐藥率一致[8]，而明顯高于湖北武漢地區(qū)2010年80.75%的耐藥率[9]。所以氟喹諾酮類藥物以及青霉素和四環(huán)素均不能作為本地區(qū)治療淋病的一線藥物。目前WHO推薦第三代頭孢菌素仍作為淋病奈瑟菌感染的一線治療藥物，單獨用藥或者同時使用阿奇霉素聯(lián)合用藥治療淋病奈瑟菌感染。因本地區(qū)流行NG株對頭孢曲松未發(fā)現(xiàn)耐藥菌株，所以頭孢曲松仍可作為本地區(qū)治療淋病奈瑟菌感染的首選藥物使用，可以單獨用藥或者同時使用阿奇霉素聯(lián)合用藥，但應持續(xù)監(jiān)測NG對第三代頭孢菌素的敏感性。目前大觀霉素因在中國供應緊缺而長時間未在該地區(qū)使用，因而大觀霉素在本地區(qū)對淋病奈瑟菌的敏感率高達98.94 %，對包括 PPNG和 TRNG在內(nèi)的淋病奈瑟菌菌株均具有很強的活性，因此，在第三代頭孢菌素過敏的情況下，可以使用大觀霉素治療本地區(qū)淋病奈瑟菌感染。

[1] 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會規(guī)劃與信息司：2012年我國衛(wèi)生和計劃生育事業(yè)發(fā)展統(tǒng)計公報.

[2] Allen VG, Farrell DJ, Rebbapragada A, Tan J, et al. Molecular analysis of antimicrobial resistance mechanisms in Neisseria gonorrhoeae isolates from Ontario[J]. Antimicrob Agents Chemother,2011,55:703-712.

[3] Ison CA, Town K, Obi C, et al.GRASP Collaborative group: Decreased susceptibility to cephalosporins among gonococci: data from the Gonococcal Resistance to Antimicrobials Surveillance Programme (GRASP) in England and Wales, 2007 2011[J]. Lancet Infect Dis,2013, 13:762-768.

[4] Zhao LH, Zhao SP. Molecular basis of high-level ciprofloxacin resistance in Neisseria gonorrhoeae strains from Shandong Province, China[J]. Braz J Microbiol,2013,44:273-276.

[5] Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Twenty-First Informational Supplement[M].Wayne, 2011.

[6] Campos-Outcalt D.CDC update: guidelines for treating STDs[J].J Fam Pract， 2011, 60( 3) : 143-146.

[7] Allen VG, Farrell DJ, Rebbapragada A, et al. Molecular Analysis of Antimicrobial Resistance Mechanisms in Neisseria gonorrhoeae Isolates from Ontario, Canada[J]. Antimicrob Agents Chemother,2011,55(2): 703-712.

[8] 黎小東，曹文苓，宋衛(wèi)忠，等.2010年廣州地區(qū)淋球菌耐藥監(jiān)測結(jié)果分析[J].中國微生態(tài)學雜志, 2012, 24(6): 554-560.

[9] 代淑蘭.綜合醫(yī)院婦產(chǎn)科醫(yī)院感染病原菌及耐藥情況分析[J].中國病原生物學雜志, 2013, 8(5): 462-464.

Analysis of antimicrobial resistance in Neisseria gonorrhoeaeisolated from Shandong against six antimicrobial agents

ZHAO Li-hong

(Department of Laboratory, Tai'an Central Hospital, Taian 271000, China)

Objective: To analyze the antimicrobial susceptibility tests of the 189 N. gonorrhoeae isolates for clinical determination of optimal treatment regimens. Methods: 189 N. gonorrhoeae isolates were randomly selected from the hospitals in Tai'an, Qingdao and Jinan of Shandong Province during June, 2014-June, 2016. Antimicrobial susceptibility testing was performed using the agar dilution method. All the isolates were tested against penicillin (PEN), ceftriaxone (CRO), tetracycline (TET), azithromycin (AZM), ciprofloxacin (CIP), and spectinomycin (SPT) .The beta-lactamase producing of PPNG isolates were determined using the nitrocefin test (Oxoid). Results: The resistance rate of N. gonorrhoeae against CIP, PEN, and TET were 95.77%, 96.3%, and 96.83%, respectively. At the same time, the susceptibility rate of N. gonorrhoeae against CRO, AZM, and SPE were 98.41%, 97.88% and 98.94%, respectively. The PPNG and TRNG accounted for 39.7% and 40.7% of the N. gonorrhoeae isolates, respectively. Conclusion: Ceftriaxone only or combined with azithromycin remain to be the first line therapy for N. gonorrhoeae infections in this district in China. When available, spectinomycin is an effective alternative for the treatment of N. gonorrhoeae infections in the presence of cephalosporin allergy.

Neisseria gonorrhoeae; resistance; MIC

趙立紅(1970—)，女，山東泰安人，副主任技師，博士，主要從事臨床檢驗工作。

R446.5

A

1004-7115(2017)01-0030-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.01.009

2016-09-12)