三黃糖腎康對(duì)2型糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥大鼠瘦素表達(dá)的影響研究

王靜怡，奚 悅

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·中醫(yī)·中西醫(yī)結(jié)合研究·

三黃糖腎康對(duì)2型糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥大鼠瘦素表達(dá)的影響研究

王靜怡，奚 悅

目的 探討三黃糖腎康對(duì)2型糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥大鼠瘦素表達(dá)的影響。方法 2013年6月—2014年11月取雌性Wistar大鼠，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組10只，骨質(zhì)疏松癥模型組10只和糖尿病模型組50只。糖尿病模型組大鼠進(jìn)一步按血糖水平隨機(jī)分為糖尿病模型對(duì)照組、中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和西藥組(每組10只)。7組大鼠分別給予相應(yīng)干預(yù)，喂養(yǎng)20周后取材檢測(cè)大鼠空腹血糖、血清瘦素、骨密度、骨組織瘦素mRNA和瘦素表達(dá)水平、下丘腦瘦素長(zhǎng)型受體(LRb)、磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(p-STAT3)和磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子5(p-STAT5)的表達(dá)水平。結(jié)果 中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和西藥組大鼠空腹血糖水平、骨組織瘦素mRNA和瘦素表達(dá)水平、下丘腦LRb表達(dá)水平較正常對(duì)照組和骨質(zhì)疏松癥模型組升高，較糖尿病模型對(duì)照組下降(P<0.05)；血清瘦素水平、下丘腦p-STAT3和p-STAT5表達(dá)水平較正常對(duì)照組升高，較骨質(zhì)疏松癥模型組和糖尿病模型對(duì)照組下降(P<0.05)；骨密度較骨質(zhì)疏松癥模型組升高(P<0.05)。結(jié)論 三黃糖腎康可能通過(guò)改善瘦素抵抗，直接或間接調(diào)節(jié)瘦素對(duì)骨代謝的影響，從而對(duì)2型糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥起到治療作用。

糖尿??；骨質(zhì)疏松癥；瘦素；大鼠；三黃糖腎康

王靜怡，奚悅.三黃糖腎康對(duì)2型糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥大鼠瘦素表達(dá)的影響研究[J].中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2015，18(24)：2966-2970，2975.[www.chinagp.net]

Wang JY，Xi Y.Effects of Sanhuangtangshenkang on the expression of leptin in rats with type 2 diabetes mellitus complicated with osteoporosis[J].Chinese General Practice，2015，18(24)：2966-2970，2975.

骨質(zhì)疏松癥是糖尿病慢性并發(fā)癥之一，流行病學(xué)調(diào)查資料顯示，糖尿病患者骨質(zhì)疏松癥發(fā)病率為40%～66%[1]。骨質(zhì)疏松癥易導(dǎo)致骨折，致殘率較高，嚴(yán)重影響糖尿病患者的生活質(zhì)量。2型糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制尚未明確，臨床上也缺乏有效藥物治療，因此迫切需要尋找高效低毒的藥物用于骨質(zhì)疏松癥的防治。2型糖尿病患者常合并肥胖，瘦素的高表達(dá)與肥胖和2型糖尿病有高度相關(guān)性[2]。眾多研究表明，瘦素參與能量代謝和骨代謝的調(diào)節(jié)[3-5]。由此推測(cè)，瘦素在糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥中可能發(fā)揮一定作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，中藥三黃糖腎康具有良好的防治糖尿病腎病發(fā)生與發(fā)展的作用[6]，但其對(duì)糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥的影響尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥大鼠血清、骨組織瘦素及下丘腦中瘦素長(zhǎng)型受體(LRb)表達(dá)水平,并觀察三黃糖腎康對(duì)瘦素及其受體后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2013年6月—2014年11月，3月齡健康雌性Wistar大鼠90只購(gòu)于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司，SPF級(jí)，體質(zhì)量(280±20)g，動(dòng)物合格證號(hào)：SCDK2010-0001。自由進(jìn)食飲水，室溫21～24 ℃。

1.2 藥品及試劑 三黃糖腎康方劑組成：黃精40 g，黃芪40 g，黃連6 g，虎杖30 g，澤蘭20 g，水蛭粉6 g。以上諸藥為成人1 d服用量，常規(guī)水沖煮。免煎顆粒為江蘇省江陰制藥廠生產(chǎn)。鈣爾奇D3片(產(chǎn)品編號(hào)：C1320203236)購(gòu)自惠氏制藥有限公司。普通飼料、高糖高脂飼料(沈陽(yáng)市前民飼料加工廠)，鏈脲佐菌素(STZ)(Sigma公司)，血清瘦素試劑盒(中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院科技開(kāi)發(fā)中心),免疫組化染色試劑盒(武漢博士德生物技術(shù)有限公司)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 造模 90只Wistar大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組10只，骨質(zhì)疏松癥模型組15只，糖尿病模型組65只。骨質(zhì)疏松癥模型組大鼠于正常飼料喂養(yǎng)1周時(shí)行雙側(cè)卵巢切除術(shù)，5周時(shí)處死3只取股骨測(cè)骨密度確定骨質(zhì)疏松癥大鼠模型成功。糖尿病造模組大鼠于高糖高脂飼料喂養(yǎng)5周時(shí)，按35 mg/kg一次性尾靜脈注射溶于枸櫞酸鹽緩沖液(pH值4.2)的STZ，3 d后取尾血測(cè)定空腹血糖≥16.7 mmol/L為糖尿病造模成功，9只未成功造模及死亡大鼠淘汰出組。該造模方法以參考文獻(xiàn)[7]為依據(jù)。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)分組與給藥 骨質(zhì)疏松癥模型組和糖尿病模型組大鼠造模成功后，從12只骨質(zhì)疏松癥模型大鼠中隨機(jī)選取10只入骨質(zhì)疏松癥模型組，從56只糖尿病模型大鼠中隨機(jī)選取50只，按血糖水平隨機(jī)分為：糖尿病模型對(duì)照組10只、中藥預(yù)防組10只、中藥高劑量組10只、中藥低劑量組10只、西藥組10只。中藥預(yù)防組大鼠自造模成功日起即開(kāi)始給藥，連續(xù)給藥20周；其余各組造模成功2周后，分別給予相應(yīng)藥物灌胃，連續(xù)給藥18周。每100 g三黃糖腎康顆粒溶于384 ml蒸餾水，混勻成濃度為3.84 g/ml的藥液，供中藥高劑量組使用，給藥量為1 ml，將其稀釋3倍至1.28 g/ml，供中藥預(yù)防組和中藥低劑量組使用，給藥量為1 ml。鈣爾奇D3片制成粉末18 mg溶于100 ml蒸餾水中，混勻成濃度為0.18 mg/ml的藥液，供西藥組使用，給藥量為1 ml。正常對(duì)照組、骨質(zhì)疏松癥模型組和糖尿病模型對(duì)照組均給予1 ml·100 g-1·d-1蒸餾水灌胃。

1.4 取材 實(shí)驗(yàn)完全結(jié)束,禁食 12 h后，處死各組大鼠。1%氯胺酮麻醉后，心尖取血約5 ml，3 000 r/min離心10 min(離心半徑12.5 cm)，取上層血清液，-20 ℃保存。取血后用0.9%氯化鈉溶液對(duì)大鼠進(jìn)行心臟灌注，取下丘腦，將所取標(biāo)本迅速放入多聚甲醛固定液中固定。然后完整離斷腰椎(L3～L6)、左側(cè)股骨，仔細(xì)剝離軟組織，用0.9%氯化鈉溶液浸濕的紗布包裹，-20 ℃保存。右側(cè)脛骨近端置于70%乙醇溶液中，4 ℃保存。1.5 觀察指標(biāo)和測(cè)定方法 空腹血糖采用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)，血清瘦素采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒檢測(cè)，骨密度采用雙能X線骨密度儀(DXA)測(cè)定。骨組織瘦素mRNA表達(dá)水平采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法測(cè)定，瘦素上游引物:5′-CCTGTGGCTTTGGTCCTATCTG-3′，下游引物:5′-CTGCTCAGAGCCACCACCTCTG-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度420 bp；β-actin上游引物:5′-CCAAGGCCAACCGCGAGAAGATGAC-3′，下游引物:5′-AGGGTACATGGTGGTGGCGCCAGAC-3′，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度577 bp。結(jié)果用擴(kuò)增靶基因產(chǎn)物的表達(dá)水平與內(nèi)參β-actin表達(dá)水平積分吸光度的比值表示。骨組織瘦素表達(dá)水平采用Western blotting 法檢測(cè)，蛋白條帶的灰度值與相應(yīng)內(nèi)參β-actin條帶灰度值比值即為相對(duì)蛋白表達(dá)水平。下丘腦LRb、磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(p-STAT3)和磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子5(p-STAT5)表達(dá)水平采用免疫組化染色試劑盒檢測(cè)，操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，顯微鏡觀察并拍照，利用真彩色CMIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)測(cè)定陽(yáng)性染色區(qū)域。每只大鼠下丘腦核團(tuán)區(qū)各取5個(gè)高倍視野(×40)，測(cè)定單位面積陽(yáng)性染色區(qū)域的平均吸光度作為下丘腦LRb、p-STAT3和p-STAT5表達(dá)情況。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠空腹血糖、血清瘦素和骨密度比較 與正常對(duì)照組和骨質(zhì)疏松癥模型組比較，糖尿病模型對(duì)照組、中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量和西藥組大鼠空腹血糖水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與糖尿病模型對(duì)照組比較，中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和西藥組大鼠空腹血糖水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與中藥預(yù)防組比較，中藥高劑量組、中藥低劑量組大鼠空腹血糖水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與正常對(duì)照組比較，其余各組大鼠血清瘦素水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與骨質(zhì)疏松癥模型組和糖尿病模型對(duì)照組比較，中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和西藥組大鼠血清瘦素水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與正常對(duì)照組比較，骨質(zhì)疏松癥模型組、糖尿病模型對(duì)照組、中藥高劑量組和西藥組大鼠骨密度降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與骨質(zhì)疏松癥模型組比較，糖尿病模型對(duì)照組、中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和西藥組大鼠骨密度升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與糖尿病模型對(duì)照組比較，中藥低劑量組大鼠骨密度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表1)。

2.2 各組大鼠骨組織瘦素mRNA、瘦素表達(dá)水平及下丘腦LRb、p-STAT3、p-STAT5表達(dá)水平比較 與正常對(duì)照組比較，骨質(zhì)疏松癥模型組骨組織瘦素mRNA、瘦素表達(dá)水平降低，糖尿病模型對(duì)照組、中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和西藥組骨組織瘦素mRNA、瘦素表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與骨質(zhì)疏松癥模型組比較，糖尿病模型對(duì)照組、中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和西藥組骨組織瘦素mRNA、瘦素表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與糖尿病模型對(duì)照組比較，中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和西藥組骨組織瘦素mRNA、瘦素表達(dá)水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與中藥預(yù)防組比較，西藥組骨組織瘦素mRNA表達(dá)水平下降，中藥低劑量組和西藥組骨組織瘦素表達(dá)水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

下丘腦LRb陽(yáng)性細(xì)胞位于弓狀核、視上核等核團(tuán)區(qū),細(xì)胞膜著色黃褐色。p-STAT3和p-STAT5陽(yáng)性細(xì)胞，細(xì)胞核著色棕黃色(見(jiàn)圖1～3)。與正常對(duì)照組比較，骨質(zhì)疏松癥模型組下丘腦LRb表達(dá)水平下降，糖尿病模型對(duì)照組、中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組下丘腦LRb表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與骨質(zhì)疏松癥模型組比較，糖尿病模型對(duì)照組、中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組下丘腦LRb表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與糖尿病模型對(duì)照組比較，中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組和西藥組下丘腦LRb表達(dá)水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與中藥預(yù)防組比較，中藥高劑量組和西藥組下丘腦LRb表達(dá)水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與正常對(duì)照組比較，骨質(zhì)疏松癥模型組、糖尿病模型對(duì)照組、中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組下丘腦p-STAT3、p-STAT5表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與骨質(zhì)疏松癥模型組比較，糖尿病模型對(duì)照組、中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組下丘腦p-STAT3表達(dá)水平下降，糖尿病模型對(duì)照組下丘腦p-STAT5表達(dá)水平升高，中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組下丘腦p-STAT5表達(dá)水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與糖尿病模型對(duì)照組比較，中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組下丘腦p-STAT3、p-STAT5表達(dá)水平下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與中藥預(yù)防組比較，中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組下丘腦p-STAT3、p-STAT5表達(dá)水平升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表2)。

Table 1 Comparison of fasting blood glucose,serum leptin and bone density among different groups of rats

組別只數(shù)空腹血糖(mmol/L)血清瘦素(ng/ml)骨密度(g/cm2)正常對(duì)照組106.75±0.971.132±0.2150.217±0.010骨質(zhì)疏松癥模型組107.06±1.192.013±0.221a0.180±0.012a糖尿病模型對(duì)照組1029.92±1.66ab2.322±0.292a0.198±0.010ab中藥預(yù)防組1020.43±1.63abc1.455±0.343abc0.208±0.011b中藥高劑量組1022.12±1.53abcd1.705±0.302abc0.203±0.012ab中藥低劑量組1023.59±1.70abcd1.684±0.337abc0.210±0.010bc西藥組1021.21±1.76abc1.817±0.259abc0.205±0.013abF值324.29917.90610.588P值<0.001<0.001<0.001

注：與正常對(duì)照組比較，aP<0.05；與骨質(zhì)疏松癥模型組比較，bP<0.05；與糖尿病模型對(duì)照組比較，cP<0.05；與中藥預(yù)防組比較，dP<0.05

Table 2 Comparison of the expression levels of mRNA and bone tissue leptin and the expression levels of LRb,p-STAT3 and p-STAT5 in hypothalamus among different groups of rats

組別只數(shù)瘦素mRNA瘦素(ng/ml)LRbp-STAT3p-STAT5正常對(duì)照組100.488±0.0410.225±0.0160.220±0.0150.118±0.0120.118±0.012骨質(zhì)疏松癥模型組100.428±0.038a0.198±0.015a0.180±0.012a0.261±0.020a0.225±0.015a糖尿病模型對(duì)照組100.770±0.044ab0.357±0.017ab0.314±0.021ab0.230±0.018ab0.257±0.021ab中藥預(yù)防組100.644±0.066abc0.299±0.026abc0.264±0.015abc0.155±0.016abc0.152±0.016abc中藥高劑量組100.613±0.054abc0.285±0.022abc0.251±0.009abcd0.184±0.025abcd0.189±0.022abcd中藥低劑量組100.605±0.031abc0.278±0.017abcd0.256±0.012abc0.194±0.018abcd0.193±0.017abcd西藥組100.577±0.021abcd0.266±0.010abcd0.247±0.013abcd0.190±0.022abcd0.189±0.046abcdF值62.23479.11884.61059.87670.798P值<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

注：LRb=瘦素長(zhǎng)型受體，p-STAT3=磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3，p-STAT5=磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子5；與正常對(duì)照組比較，aP<0.05；與骨質(zhì)疏松癥模型組比較，bP<0.05；與糖尿病模型對(duì)照組比較，cP<0.05；與中藥預(yù)防組比較，dP<0.05

3 討論

目前，2型糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，研究表明，與肥胖、高血糖、胰島素缺乏、各種血管神經(jīng)病變引起的氧化應(yīng)激、炎性因子和激素水平變化相關(guān)[8]，其中瘦素表達(dá)水平升高引起人們的關(guān)注。瘦素是由脂肪細(xì)胞分泌的肽類激素，主要在白色脂肪組織中表達(dá)，而瘦素受體幾乎在所有組織中有表達(dá)。LRb主要位于下丘腦多個(gè)核團(tuán)區(qū)表達(dá)神經(jīng)肽Y的細(xì)胞膜上。瘦素與下丘腦的LRb結(jié)合后可激活酪氨酸蛋白激酶(JAK)活性，使瘦素受體上的酪氨酸磷酸化，從而激活下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)3和STAT5，STAT3、STAT5 被磷酸化后形成同源或異源二聚體后轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，調(diào)控靶基因如c-fos等的表達(dá)，最終導(dǎo)致骨細(xì)胞功能的改變，抑制骨形成[3，9]。成骨細(xì)胞、破骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞均表達(dá)瘦素受體，瘦素可作用于骨骼局部刺激骨髓基質(zhì)細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化，而抑制其向破骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞分化[10]。由此可知，瘦素與其受體結(jié)合在中樞與外周均可發(fā)揮其對(duì)骨代謝的調(diào)節(jié)作用。而且瘦素可使神經(jīng)肽Y 產(chǎn)生減少而抑制食欲，從而減少食物攝入，增加能量消耗，抑制脂肪合成。研究證實(shí)了“脂肪-胰島”內(nèi)分泌軸的存在[11],通過(guò)這一內(nèi)分泌軸，瘦素和胰島素之間存在負(fù)反饋調(diào)節(jié)?？梢?jiàn)瘦素在糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥中發(fā)揮一定的作用。

本研究結(jié)果顯示，糖尿病模型對(duì)照組大鼠伴隨血糖水平的升高出現(xiàn)血清瘦素水平升高，骨密度下降，骨組織瘦素mRNA和瘦素表達(dá)水平升高，下丘腦LRb上調(diào)，p-STAT3和p-STAT5表達(dá)水平升高，表明2型糖尿病大鼠并發(fā)骨質(zhì)疏松癥同時(shí)發(fā)生瘦素抵抗，機(jī)體內(nèi)源性瘦素不能有效地發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。Ritchie 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)4周高脂膳食，雌性SD大鼠骨骼肌瘦素水平上升，瘦素敏感性下降，本研究結(jié)果與其一致。本研究中，骨質(zhì)疏松癥模型組大鼠與正常對(duì)照組相比，血糖水平無(wú)明顯變化，骨密度下降，而血清瘦素水平上升，骨組織瘦素mRNA和瘦素表達(dá)水平下降，下丘腦LRb下調(diào)，p-STAT3和p-STAT5表達(dá)水平升高，提示雌激素對(duì)于維持骨代謝穩(wěn)定是必需的，也進(jìn)一步說(shuō)明瘦素參與骨代謝的調(diào)節(jié)。

糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥屬于祖國(guó)醫(yī)學(xué)中“消渴”合并“骨痿”，消渴日久，腎精虧虛，發(fā)為骨痿。中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)糖尿病分會(huì)在《糖尿病合并骨質(zhì)疏松癥中醫(yī)診療標(biāo)準(zhǔn)》[13]中將其分為肝腎虧損證、陰陽(yáng)兩虛證、氣滯血瘀證3型。三黃糖腎康是由多味中藥構(gòu)成的驗(yàn)方，具有補(bǔ)腎通絡(luò)，活血化瘀，益氣養(yǎng)陰等功效。經(jīng)三黃糖腎康治療后的大鼠(中藥預(yù)防組、中藥高劑量組、中藥低劑量組)血糖和血清瘦素水平下降。由此推測(cè)三黃糖腎康可發(fā)揮中藥降糖作用，減輕瘦素抵抗，提高瘦素敏感性，負(fù)反饋地促進(jìn)胰島素的分泌。與糖尿病模型對(duì)照組大鼠比較，中藥高劑量組、中藥低劑量組大鼠骨組織瘦素mRNA和瘦素表達(dá)水平下降，而下丘腦LRb、p-STAT3和p-STAT5表達(dá)水平亦下降。據(jù)此推測(cè)，在骨組織，三黃糖腎康提高瘦素敏感性，從而促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化，延緩骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生。在下丘腦，三黃糖腎康通過(guò)下調(diào)下丘腦瘦素受體的表達(dá)，抑制瘦素與其受體結(jié)合，從而減少信號(hào)通路下游p-STAT3和p-STAT5表達(dá)水平。與中藥高劑量組和中藥低劑量組比較，中藥預(yù)防組大鼠血糖水平下降，下丘腦p-STAT3和p-STAT5表達(dá)水平下降，說(shuō)明早期進(jìn)行三黃糖腎康干預(yù)，可對(duì)2型糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥發(fā)揮防治作用。

綜上所述，糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，可能與瘦素抵抗相關(guān)。本研究在瘦素及其受體介導(dǎo)的信號(hào)通路中所測(cè)定的蛋白及相關(guān)細(xì)胞因子較少，故瘦素在糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥發(fā)生發(fā)展中具體的分子作用機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。三黃糖腎康可能通過(guò)改善外周瘦素抵抗，提高瘦素敏感性，同時(shí)抑制瘦素通過(guò)JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路發(fā)揮的對(duì)骨代謝的負(fù)性中樞影響，從而對(duì)2型糖尿病并發(fā)骨質(zhì)疏松癥發(fā)揮防治作用。

利益沖突聲明：本課題未涉及任何廠家及相關(guān)雇主或其他經(jīng)濟(jì)組織直接或間接的經(jīng)濟(jì)或利益的贊助。無(wú)利益沖突。

倫理要求：實(shí)驗(yàn)大鼠符合動(dòng)物福利和倫理，實(shí)驗(yàn)方案獲醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

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(本文編輯：陳素芳)

Effects of Sanhuangtangshenkang on the Expression of Leptin in Rats With Type 2 Diabetes Mellitus Complicated With Osteoporosis

WANGJing-yi，XIYue.

TheThirdAffiliatedHospitalofLiaoningMedicalUniversity，Jinzhou121000,China

Objective To explore the effects of Sanhuangtangshenkang on the expression of leptin in rats with type 2 diabetes mellitus complicated with osteoporosis.Methods Female Wistar rats were taken as the study subjects from June 2013 to November 2014.Assigned 10 rats into normal control group,10 rats into osteoporosis model group and 50 rats into diabetes model group.The diabetes model group was further divided into diabetes model control group,TCM prevention group,high-dose TCM group,low-dose TCM group and western medicine group,with 10 rats each group.After the corresponding intervention for 20 weeks,samples were taken and tested to determine fasting blood glucose (FBG),the expression of serum leptin，bone density，the mRNA and expression of bone tissue leptin，the expression of leptin receptor(LRb),p-STAT3 and p-STAT5 in hypothalamus.Results TCM prevention group,high-dose TCM group,low-dose TCM group and western medicine group were higher (P<0.05) than normal control group and osteoporosis model group and were lower (P<0.05) than diabetes model control group in FBG,the mRNA and expression of bone tissue leptin and the expression of LRb in hypothalamus; TCM prevention group,high-dose TCM group,low-dose TCM group and western medicine group were higher (P<0.05) than normal control group and were lower (P<0.05) than osteoporosis model group and diabetes model control group in the expression level of serum leptin and the expression levels of p-STAT3 and p-STAT5 in hypothalamus; TCM prevention group,high-dose TCM group,low-dose TCM group and western medicine group were higher (P<0.05) than osteoporosis model group in bone density.Conclusion Sanhuangtangshenkang can probably directly or indirectly regulate the effect of leptin on bone metabolism by improving leptin resistance,thus being effective in the treatment of type 2 diabetes mellitus complicated with osteoporosis rats.

Diabetes mellitus；Osteoporosis；Leptin；Rats；Sanhuangtangshenkang

遼寧省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(201202147)

121000 遼寧省錦州市，遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院

奚悅，121000 遼寧省錦州市，遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院；E-mail:xiyue-ln@163.com

R 587.1 R 681.4

A

10.3969/j.issn.1007-9572.2015.24.019

2015-02-14；

2015-06-04)