正交試驗優(yōu)選紅杏貝止咳口服液的提取工藝

郝旭

江西省萍鄉(xiāng)市中醫(yī)院制劑室，江西萍鄉(xiāng) 337000

紅杏貝止咳口服液由滿山紅、苦杏仁、浙貝母三味藥組成，具有鎮(zhèn)咳、化痰、平喘的功效。臨床用于急慢性支氣管炎、咽喉部疾病引起的咳嗽等癥。滿山紅即杜鵑花，該品為杜黯花科植物興安杜的干燥葉。具有鎮(zhèn)咳、平喘祛痰、抗炎抑菌、降壓、利尿、鎮(zhèn)痛等作用；歸肺、脾經(jīng)。苦杏仁，該品為東北杏、山杏、西伯利亞杏等蓄薇科的植物種子。功能主治有降氣止咳平喘，潤腸通便。用于咳嗽氣喘，胸滿痰多，血虛津枯，腸燥便秘。浙貝母，該品為百合科植物浙貝母的干燥鱗莖。治風熱咳嗽，肺癰喉痹，瘰疬，瘡瘍腫毒。該實驗采用單因素水平試驗,采用正交試驗法,以出膏率和總黃酮得率為指標,考察水提取量、提取次數(shù)和提取時間對該品的影響，含量測定采用分光光度法以蘆丁為對照品測定總黃酮含量，優(yōu)選最佳的提取工藝條件[1-3]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

U-3010分光光度計；XA205DU電子天平，752型紫外光柵分光光度計；ZK82B真空干燥箱。

1.2 試藥

蘆丁對照品購買來源是中國藥品生物制品檢定所，（批號：0080-9905），實驗中其余的試劑均為分析純。

2 方法

2.1 樣品制備

選用L9(34)正交表，按表1內容進行實驗。將自制樣品在40℃烘干,粉碎成粗粉,精密稱取各樣品約1 g共9份。趁熱將殘渣過濾出來,用60%乙醇洗滌后，裝入50 mL的容量瓶中定容至刻度,均勻搖晃。用移液管量取2 mL樣品溶液,放入10 mL的容量瓶里，再加入60%乙醇溶液到容量瓶刻度，最后得到9份樣品溶液。

表1 提取條件實驗因素水平

2.2 總黃酮的測定

2.2.1 標準曲線的制備 將減壓干燥器中放置五氧化二磷后，把蘆丁對照品置于減壓干燥中干燥到恒重，配制終濃度為58 μg/mL的蘆丁對照品溶液。得到回歸曲線是:A=5.378C+0.1055,r=0.999 4，吸收度和濃度的線性關系比較好。

2.2.2 樣品測定 樣品溶液照“標準曲線制備”項下的方法,用移液管吸取樣品溶液1.0 mL，分別放入10 mL的容量瓶里,按照2.2.1方法中從“加入0.1 mol/L三氯化鋁溶液”起,置吸收度測定選擇的波長為340 nm,測定，并按回歸方程計算樣品溶液中總黃酮含量。

2.3 固形物的測定

將藥材按照上述設計的正交實驗表煎煮，藥渣過濾后，將藥液濃縮到較粘稠后，取一定重量放到已經(jīng)干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，放置在水浴上將其蒸干，快速稱定重量，直到2次稱定的重量差相差不超過0.000 4 g即為恒重，計算固形物重量。記錄結果。

3 實驗結果

各樣品總黃酮含量級出膏率見表2。

實驗結果的計算和分析見表3。從實驗結果中能夠看出來每個因素對實驗提取結果的影響程度依次為C（提取次數(shù)）＞A（加水量）＞B（提取時間）,C 因素具有顯著性差異,所以得到最佳的組合水平是A1B3C3。

表2 正交試驗結果（L934）

續(xù)表2

表3 方差分析

4 討論

①紅杏貝止咳口服液由滿山紅、苦杏仁、浙貝母三味藥組成。其中滿山紅中含有的杜鵑素對鎮(zhèn)咳、平喘祛痰有明顯作用，愈創(chuàng)木奧類和梫木毒素的抗炎抑菌和鎮(zhèn)痛作用明顯；苦杏仁中含有苦杏仁苷在體內能被腸道微生物酶或苦杏仁本身所含甜杏仁的苦杏仁酶水解，產(chǎn)生微量的氫氰酸與苯甲醛，對呼吸中樞有抑制作用，達到鎮(zhèn)咳、平喘作用。浙貝母含有貝母堿（貝母素甲）、去氫貝母堿（貝母素乙）、浙貝寧等成分，其中貝母堿與去氫貝母堿有鎮(zhèn)咳作用，貝母生物堿具有阿托品樣作用，低濃度可使氣管平滑肌松弛,高濃度可使氣管平滑肌輕微收縮起到解痙攣的作用，貝母堿與去氫貝母堿有鎮(zhèn)靜及鎮(zhèn)痛作用[4]。滿山紅、苦杏仁、浙貝母三味藥物聯(lián)合相互影響能夠起到協(xié)同增效的作用。

②絕大多數(shù)植物體內都含有黃酮類化合物，它在植物的生長、發(fā)育、開花、結果以及抗菌防病等方面起著重要的作用。滿山紅中的杜鵑素等均屬于黃酮類物質，由于含有多個黃酮類成分，所以測定總黃酮的含量。該實驗采用分光光度法以蘆丁為對照品測定總黃酮含量。波長的選擇時，對蘆丁對照品溶液進行200～800 nm波長掃描發(fā)現(xiàn)，蘆丁對照品在340 nm和510 nm兩處分別有吸收峰出現(xiàn)，綜合比較峰形，選擇340 nm進行測定。測定方法選取好后，先進行了標準曲線的實驗，實驗結果顯示蘆丁在5.8～14.5 μg/mL范圍內,吸收度和濃度的線性關系比較好，證明次試驗方法可行，接著按照次試驗方法進行了自制9個樣品的總黃酮含量測定，通過含量測定結果，選擇最佳的提取方法。

③固形物測定時，放入烘箱內干燥4 h稱重時若沒有恒重，需要繼續(xù)烘干直置恒重，不限定于時間必須為4 h。

④實驗通過L9(34)正交試驗的結果，以出膏率和總黃酮含量為考察指標,研究水提取的時間、次數(shù)和加水量的最佳工藝。結果說明,最佳的實驗方案是A1B3C3,即加入8倍量的水，每次提取提2 h，一共提取3次。為了驗證所選的這個最佳方案的可行性,又進行了3次驗證性實驗,驗證試驗結果顯示此方法穩(wěn)定，相對偏差較小，證明此測定方法誤差較小，提取工藝可行。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：化學工業(yè)出版社，2015：361.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：化學工業(yè)出版社，2015：201.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：化學工業(yè)出版社，2015：292.

[4]羅永會,張翠香,徐春萍,等.正交試驗優(yōu)選大理野生橄欖總多酚的提取工藝[J].食品科技，2013,5(11):112.