液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀同時(shí)測(cè)定白酒中的甜味劑

□ 李 劍 梁 俊 羅平縣市場(chǎng)監(jiān)督管理綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀同時(shí)測(cè)定白酒中的甜味劑

□ 李 劍 梁 俊 羅平縣市場(chǎng)監(jiān)督管理綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心

液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法可以對(duì)白酒中的甜味劑合理高效檢測(cè)。當(dāng)處于負(fù)離子狀態(tài)過(guò)程中，液相色譜-質(zhì)譜可以對(duì)離子篩選。當(dāng)甜味劑的質(zhì)量濃度處于0.06～1.8 mg/L時(shí)，可以發(fā)現(xiàn)良好的線性關(guān)系，系數(shù)為0.98，平均定限量處于0.06 mg/L，通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，加標(biāo)回收率為一般處于70%以上，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于10%。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)檢測(cè)方式簡(jiǎn)單高效，各項(xiàng)技術(shù)的指標(biāo)符合國(guó)際的要求，可以對(duì)白酒中的甜味劑良好檢測(cè)。

白酒、甜味劑、測(cè)定

1 研究現(xiàn)狀

隨著時(shí)代的快速發(fā)展，人工合成甜味劑的使用和研究速度在不斷加快，但是目前食品安全問(wèn)題已被人們廣為關(guān)注。GB2760—2011《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)白酒中的添加劑以及種類(lèi)和濃度都有明確規(guī)定，白酒中的添加劑嚴(yán)格限制。白酒中甜味劑添加必須是食品安全檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)和重點(diǎn)工作，尤其是國(guó)內(nèi)白酒種類(lèi)較多，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)也較多，主要檢測(cè)的物質(zhì)包括甜蜜素、阿斯巴甜、糖精鈉、三氯蔗糖、山梨酸、阿力甜，目前檢測(cè)的方式和手段已經(jīng)比較成熟了。但是甜味劑的檢測(cè)往往比較單一，使用方式是氣相或者是液相中的一種，檢測(cè)結(jié)果往往會(huì)產(chǎn)生偏差，假陽(yáng)性情況比較多見(jiàn)。最近幾年所發(fā)布的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)量也較少，不超過(guò)六條，也不利于檢測(cè)結(jié)果的確立。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 材料與試劑

從普通市場(chǎng)采購(gòu)；木糖醇標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.9%）、安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.9%）、甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.9%）（美國(guó)專(zhuān)業(yè)藥品公司進(jìn)口采購(gòu)）；阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)品等樣品的純度均達(dá)到98%。生產(chǎn)公司均為Dr. Ehrenstorfer GmnH公司；糖精鈉的標(biāo)注濃度1.00 mg/mL，存在1%的實(shí)際誤差。由中國(guó)科學(xué)研究所測(cè)定；新橙皮苷二氫查爾酮標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.0%）；紐甜標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.0%，原料均產(chǎn)自美國(guó)）；乙腈、甲醇（均為色譜純，產(chǎn)自FISS公司）；乙酸銨（色譜純，產(chǎn)自FULAK公司）；18.2 MΩ超純水（國(guó)內(nèi)水利資源局）。

2.2 儀器與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用2017液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀；專(zhuān)業(yè)檢測(cè)色譜柱（2.0 mm× 150 mm）；LC質(zhì)譜工作站（日本Shimadzu公司）。

2.3 方法

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

將已知的甜味劑標(biāo)準(zhǔn)品，利用水溶解之后，調(diào)配，保證混合物的實(shí)際濃度可以達(dá)到100 mg/L，在4 ℃的溫度之下，在陰涼的環(huán)境下保存。在配制完成后取標(biāo)準(zhǔn)溶液體積為1.0 mL，將乙醇與水加入其中稀釋?zhuān)ＷC兩者體積比為容至10 mL，此時(shí)的質(zhì)量濃度大致維持在20.0 μg/mL左右，采用同樣的配比方式，將其質(zhì)量濃度分別稀釋至0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.16、0.18、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.40、1.60、1.80、2.00 μg/L，在此過(guò)程中，采用測(cè)定的主要設(shè)備為液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀[1]。

2.3.2 樣品的制備

在選取白酒的樣品之后，采用直徑為0.22 μm的過(guò)濾網(wǎng)之后，后期主要采用測(cè)定的主要設(shè)備為液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。

2.3.3 液相色譜-質(zhì)譜條件

使用色譜實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，條件為以下幾點(diǎn)：將質(zhì)量濃度為0.1%的乙酸溶液作為流動(dòng)相A，將乙腈作為流動(dòng)相B，流動(dòng)梯度可以得出以下幾點(diǎn)，速度一般會(huì)達(dá)到0.4 mL/min；并且保持溫度為40 ℃。

3 結(jié)果與討論

3.1 色譜條件的優(yōu)化

優(yōu)化內(nèi)容包括比較常見(jiàn)的流動(dòng)相水-甲醇、水-乙腈試劑，通過(guò)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，在使用水-甲醇體系作流動(dòng)相時(shí)，溶液的靈敏度要遠(yuǎn)高于水-乙腈體系，所以可見(jiàn)分離的效果。

3.2 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，使用負(fù)離子運(yùn)作模式，聯(lián)動(dòng)MRM的模式，使用不同能量可以將被檢測(cè)物質(zhì)的分子和離子打碎，從而確定所需要的碰撞能量以及電壓強(qiáng)度[2]。

3.3 色譜與質(zhì)譜行為

當(dāng)色譜—質(zhì)譜已經(jīng)確定之后，將色譜圖繪制出來(lái),從圖中峰值的高低以及保存時(shí)間可以對(duì)物質(zhì)種類(lèi)準(zhǔn)確判定。

3.4 線性關(guān)系及檢出限

選取各標(biāo)準(zhǔn)品液體，采用混合方式準(zhǔn)確配制出合適的混合標(biāo)準(zhǔn)液，優(yōu)化后，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)液檢測(cè)三次，以各物質(zhì)特征碎片離子（定量離子）峰面積的平均值(Y)對(duì)被測(cè)組分的質(zhì)量濃度（X，μg/L）線性回歸，求出具體的回歸方程，同時(shí)將線性的關(guān)系明確表示出來(lái)；以信噪比（S/N）作為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)每次的檢測(cè)結(jié)果合理化分析。

3.5 樣品稀釋溶液的優(yōu)化

在白酒的樣品中，乙醇是主要存在物質(zhì)，當(dāng)采用液相色譜分離過(guò)程中，對(duì)甜味劑的保留時(shí)間以及方式可能會(huì)產(chǎn)生一定程度的影響。所以在實(shí)際的使用過(guò)程中，采取體積分?jǐn)?shù)30%～80%乙醇溶液，對(duì)其中的甜味劑合理化檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)對(duì)甜味劑的保留時(shí)間以及方式產(chǎn)生的影響可以忽略不計(jì)。而且如果白酒樣品中含有大量的甜味劑，會(huì)超出曲線的范圍，直接用水對(duì)其稀釋也可以直接測(cè)量。

3.6 方法線性范圍和定量限

酒精體積分?jǐn)?shù)為45%時(shí)，以空白白酒為基質(zhì)，配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，同時(shí)將甜味劑配制成所對(duì)應(yīng)濃度的溶液，再將甜味劑的峰面積設(shè)立為縱坐標(biāo)數(shù)值，甜味劑實(shí)際的質(zhì)量濃度設(shè)立為橫坐標(biāo)的值，以此為基礎(chǔ)實(shí)際對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)當(dāng)甜味劑的濃度處于0.06～1.8 mg/L時(shí)，呈正相關(guān)，且相關(guān)性比較優(yōu)異。根據(jù)3倍信噪比得出檢出限的數(shù)值為1.8 μg/L，10倍信噪比可以得出定量限為0.06 mg/L。

4 結(jié)語(yǔ)

白酒是目前國(guó)內(nèi)引用較多的飲品，其中人工合成甜味劑的使用和研究速度在不斷加快，但是目前食品安全問(wèn)題已經(jīng)被人們廣為關(guān)注，急需專(zhuān)業(yè)科研人員對(duì)其中的物質(zhì)含量定量分析。

[1]吳世嘉,王洪新,陶冠軍.超高壓液相色譜——質(zhì)譜同時(shí)測(cè)定白酒中6種微量甜味劑的方法研究[J].食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào),2010,29(5):670-675.

[2]梁桂娟,馮永渝,田志強(qiáng),等.超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(UPLC-MS/ MS)同時(shí)測(cè)定白酒中的微量甜味劑[J].釀酒科技,2012(8):109-111.