“瘦肉精”沙丁胺醇常見檢測(cè)方法

宋瑞

（河北省石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心河北石家莊050041）

“瘦肉精”沙丁胺醇常見檢測(cè)方法

宋瑞

（河北省石家莊市畜產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)中心河北石家莊050041）

飼喂畜禽沙丁胺醇可以促進(jìn)其骨骼肌生長(zhǎng)，同時(shí)減少脂肪沉積，因此有不法分子在養(yǎng)殖場(chǎng)非法使用本類藥物。本文從酶聯(lián)免疫法、液相色譜法等闡述檢測(cè)沙丁胺醇的方法。

沙丁胺醇；酶聯(lián)免疫；液相色譜；氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜

沙丁胺醇（Salbutamol），是一種具有選擇性的β受體激動(dòng)劑，能夠選擇性激動(dòng)支氣管平滑肌的β受體，擴(kuò)張支氣管。臨床上常用于預(yù)防治療支氣管哮喘。飼喂畜禽沙丁胺醇可以促進(jìn)其骨骼肌生長(zhǎng)，同時(shí)減少脂肪沉積，因此有不法分子在養(yǎng)殖場(chǎng)非法使用本類藥物。尤其是在我國(guó)對(duì)鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺的非法使用進(jìn)行了嚴(yán)格限制后，作為新的替代品沙丁胺醇常被不法分子使用。如果在促生長(zhǎng)飼料中添加沙丁胺醇，且添加量超過正常的治療量，就會(huì)造成動(dòng)物體內(nèi)沙丁胺醇的殘留，老百姓誤食含有沙丁胺醇的動(dòng)物產(chǎn)品會(huì)引發(fā)中毒。目前沙丁胺醇的殘留檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法（GC－MS）和液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法（LC－MS）等。

1 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

近年來應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法越來越廣泛,其具有操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)較短、檢測(cè)結(jié)果較為準(zhǔn)確的特點(diǎn)。國(guó)外相關(guān)學(xué)者使用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)豬肝中沙丁胺醇，分別使用0.2 μg/kg、1 μg/kg以及2 μg/kg3個(gè)不同濃度給豬靜注，1 h后屠宰，取肝臟，用蛋白酶消化并純化樣品后，用ELISA檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。毛麗莎等[1]用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)豬、羊肉、豬肝等動(dòng)物源性食品后，對(duì)陽(yáng)性樣品采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行驗(yàn)證。用酶聯(lián)免疫法測(cè)定沙丁胺醇的線性范圍為0.06～410 μg/kg，標(biāo)準(zhǔn)曲線系數(shù)為0.996～0.999，回收結(jié)果為71.2%～87.2%。楊正濤等學(xué)者[2]采用ELISA法對(duì)兔肉中萊克多巴胺、沙丁胺醇、鹽酸克倫特羅3種β受體激動(dòng)劑進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)測(cè)定沙丁胺醇抗血清除對(duì)沙丁胺醇具有100%的反應(yīng)外，還對(duì)克倫特羅具有128%的交叉反應(yīng)性。王建平等學(xué)者[3]建立了能夠同時(shí)檢測(cè)沙丁胺醇和克倫特羅的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法，此方法明確了沙丁胺醇和鹽酸克倫特羅的檢測(cè)范圍為0.48～8.0 mg/kg和0.43～7.3 mg/kg，沙丁胺醇和克倫特羅的檢測(cè)靈敏度分別為0.48 mg/g和0.43 mg/g。同時(shí)該學(xué)者還檢測(cè)了回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，在豬肝、豬尿中添加1～50 ng/g的沙丁胺醇和克倫特羅，測(cè)得回收率分別為72.2%～84.8%和84.3%～103.4%，樣品間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.2%～28.3%和0.3%～35.5%。

2 高效液相色譜法（HPLC）

由于沙丁胺醇含有苯環(huán)屬于共軛結(jié)構(gòu)，因此可采用紫外、熒光進(jìn)行檢測(cè)，近來使用高效液相色譜法定量檢測(cè)沙丁胺醇的報(bào)道較多。金雁等學(xué)者[4]使用高效液相色譜法（紫外檢測(cè)器）能夠同時(shí)測(cè)定禽肉中克倫特羅和沙丁胺醇的殘留，檢出限分別為3 μg/kg和1 μg/kg，樣品回收率在61.5%～90.6%，樣品的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均低于10%。尚紅霞等研究員[5]用高效液相色譜法（二極管陣列檢測(cè)）測(cè)定了飼料中克倫特羅和沙丁胺醇，檢出限分別為0.31 μg/kg和0.24μg/kg，樣品加標(biāo)回收率范圍為91.2%～92.0%和91.9%～93.0%。王煉等學(xué)者[6]建立了奧西那林、克倫特羅、沙丁胺醇和非諾特羅的高效液相色譜法（二極管陣列檢測(cè)器），樣品的最低檢出限分別為0.07 mg/kg、0.04 mg/kg、0.10 mg/kg和0.08mg/kg，樣品加標(biāo)回收率在60.1%～88.0%之間。李偉紅等學(xué)者[7]建立了高效液相色譜法（熒光檢測(cè)器）檢測(cè)畜禽肉中的沙丁胺醇，此方法的最低檢出限為0.01 mg/kg，回收率不低于60%，樣品間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差低于10.7%。安洪澤等學(xué)者[8]建立了飼料中沙丁胺醇、萊克多巴胺和非諾特羅的高效液相檢測(cè)方法（熒光檢測(cè)器），最低檢出限為17 ng/g，定量限50 ng/g，回收率范圍為88.6%～107.1%，樣品間最低相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.5%。林奕芝等學(xué)者[9]建立了肉與肉制品中沙丁胺醇高效液相色譜的測(cè)定方法，其檢出限為6 ng/g，回收率為99.8%。高效液相色譜法具有靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，但是具有樣品前處理較復(fù)雜、特異性較差缺點(diǎn)。

3 氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

沙丁胺醇含有羥基、氨基等極性基團(tuán)，在采用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定時(shí)，需要衍生化，再用質(zhì)譜或二級(jí)質(zhì)譜進(jìn)行檢測(cè)。Ramos等學(xué)者[10]優(yōu)化了沙丁胺醇檢測(cè)中的衍生化條件，得到的最佳衍生化溫度為55℃，時(shí)間為1 h。Spisso等[11]優(yōu)化了沙丁胺醇的提取凈化條件，用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，可得最低檢測(cè)限為0.5 ng/g，樣品的回收率在88%以上。孟娟等[12]采用內(nèi)標(biāo)法，使用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)動(dòng)物組織樣品中的沙丁胺醇、克倫特羅等的殘留量，沙丁胺醇的檢出限為0.5 μg/kg。朱堅(jiān)等[13]測(cè)定了動(dòng)物組織中的沙丁胺醇、費(fèi)諾特等，測(cè)得最低檢出限為0.5～2 μg/kg，樣品的平均回收率為71%～94%，樣品間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.6%～18.7%。

4 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法

液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜是近年來分析沙丁胺醇最有效的方法之一，此方法不需要進(jìn)行衍生化步驟，其中液相色譜能夠分離一些熱不穩(wěn)定的小分子極性物質(zhì)，質(zhì)譜對(duì)化合物的定性較準(zhǔn)確。Fesser等使用了液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定了動(dòng)物肝臟中的沙丁胺醇，測(cè)得樣品的平均回收率為76%，樣品間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為6%。孫雷等[14]建立了動(dòng)物源性食品中沙丁胺醇的殘留檢測(cè)方法，獲得沙丁胺醇的檢出限為0.1 μg/kg。蔡欣欣等學(xué)者[15]使用內(nèi)標(biāo)法測(cè)定動(dòng)物源食品中沙丁胺醇、鹽酸克倫特羅等的三重四極桿質(zhì)譜確證檢測(cè)方法，測(cè)得最低定量限為0.2 μg/kg。液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法具有樣品用量少、分析時(shí)間短、靈敏度高、分離能力強(qiáng)、選擇性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，是目前確證沙丁胺醇的最佳方法。但液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜價(jià)格較貴，儀器結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜、重現(xiàn)性較差、樣品易受污染等問題。

5 展望

目前測(cè)定沙丁胺醇的方法有很多種，但是在我國(guó)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中只使用氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，這兩種方法的靈敏度都較高，但樣品前處理過程較為復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)，尤其是氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜還需要衍生化。酶聯(lián)免疫法測(cè)定樣品操作簡(jiǎn)便，可同時(shí)檢測(cè)40個(gè)樣品，分析時(shí)間較短，非常適用于快速篩選。此外簡(jiǎn)化液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法和氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的前處理過程也是一個(gè)非常重要的研究方向?！?/p>

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［2］楊正濤,張乃生,史利軍,等.β－激動(dòng)劑多組分殘留的酶免疫分析方法［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào),2008,24(8):23-27.

［3］王建平,沈建忠.豬肝和豬尿中沙丁胺醇和克倫特羅殘留的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法研究［J］.畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2005, 36(4):397-401.

［4］金雁,姚家彪,姜莉,等.高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定禽肉中的克倫特羅和沙丁胺醇［J］.現(xiàn)代儀器,2005(5):34-36.

［5］尚紅霞,盧業(yè)玉,黃寶華,等.固相萃?。咝б合嗌V法同時(shí)測(cè)定克倫特羅和沙丁胺醇［J］.分析科學(xué)學(xué)報(bào), 2003,19(2):123-125.

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［15］蔡欣欣,張秀堯.超高效液相色譜三重四極桿質(zhì)譜法同時(shí)快速測(cè)定動(dòng)物源食品中6種β-受體興奮劑殘留［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2008,18(7):1252-1255.

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.03.012