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    酶免分析儀校準(zhǔn)方法的探討

    2017-01-20 17:20劉瑜
    中國新技術(shù)新產(chǎn)品 2017年1期
    關(guān)鍵詞:校準(zhǔn)方法

    劉瑜

    摘 要:酶免分析儀廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、生物、衛(wèi)生等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)、檢測和分析過程,但目前并沒有相應(yīng)的規(guī)程或規(guī)范作為酶免分析儀的校準(zhǔn)依據(jù)。本文對(duì)酶免分析儀的組成部分和工作原理進(jìn)行了歸納和分析,依據(jù)現(xiàn)有的量值溯源方法和體系對(duì)酶免分析儀的校準(zhǔn)和量值溯源進(jìn)行了探討。

    關(guān)鍵詞:酶免分析儀;校準(zhǔn)方法;量值溯源

    中圖分類號(hào):R446 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

    1.酶免分析儀組成結(jié)構(gòu)和工作原理

    全自動(dòng)酶免分析儀又稱全自動(dòng)酶免分析系統(tǒng)和全自動(dòng)酶免工作站,可以全自動(dòng)完成酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試驗(yàn),包括稀釋、樣本分配、試劑分配、溫育、洗板、酶標(biāo)判讀、結(jié)果打印等全步驟。該儀器廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、生物、衛(wèi)生等領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)、檢測和分析過程,尤其是在醫(yī)療衛(wèi)生檢測行業(yè)中酶免分析儀更是必不可少的檢測儀器,在各種傳染病檢測、優(yōu)生優(yōu)育初篩檢測、糖尿病、腫瘤檢測等都有著廣泛的應(yīng)用。

    酶免分析儀主要由酶標(biāo)系統(tǒng)、溫育系統(tǒng)、移液系統(tǒng)和洗板系統(tǒng)組成。其中:移液系統(tǒng)負(fù)責(zé)定量向酶標(biāo)板樣品杯中加入樣品、酶結(jié)合物或反應(yīng)底物;溫育系統(tǒng)負(fù)責(zé)控制反應(yīng)溫度,使抗原與抗體有效結(jié)合;酶標(biāo)系統(tǒng)是酶免分析儀的核心部分,其原理是依據(jù)酶標(biāo)記的免疫復(fù)合物與酶的相應(yīng)底物能夠產(chǎn)生顯色反應(yīng),顯色程度與被檢測樣品中待測抗體或抗原的含量相關(guān),根據(jù)顯色物吸光度值確定待測物質(zhì)含量,不同待測顯色物質(zhì)有其各自的特征吸收譜線,并遵守朗伯-比爾定律;洗板系統(tǒng)是酶免分析儀中的一個(gè)重要部件,用以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)及雜質(zhì),樣品杯是否清洗干凈,是決定酶免分析儀檢定結(jié)果是否正確的關(guān)鍵因素之一。

    2.酶免分析儀主要校準(zhǔn)項(xiàng)目

    根據(jù)酶免分析儀的工作原理和組成結(jié)構(gòu),可以分別對(duì)酶標(biāo)系統(tǒng)、溫育系統(tǒng)、移液系統(tǒng)和洗板系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)和量值溯源以達(dá)到對(duì)整機(jī)校準(zhǔn)的目的。因此本規(guī)范參考了JJG 861-2007《酶標(biāo)分析儀檢定規(guī)程》的技術(shù)指標(biāo)來作為酶免分析儀酶標(biāo)系統(tǒng)部分的技術(shù)指標(biāo)。酶免分析儀的孵育系統(tǒng)與培養(yǎng)箱的功能相似,且酶免分析儀廣泛地應(yīng)用于各種傳染病檢測、優(yōu)生優(yōu)育初篩檢測、糖尿病、腫瘤檢測等方面,因此本規(guī)范選取了比較常用的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS/T 223-2002《乙型肝炎表面抗原酶免分析儀檢驗(yàn)方法》和JJF 1101-2003《環(huán)境試驗(yàn)設(shè)備溫度、濕度校準(zhǔn)規(guī)范》作為孵育系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)的參考。酶免分析儀移液系統(tǒng)無論在使用的量程范圍上還是使用的精度上都符合JJG 646-2006《移液器檢定規(guī)程》的適用范圍,所以本規(guī)范參考JJG 646-2006《移液器檢定規(guī)程》來制定移液系統(tǒng)的技術(shù)指標(biāo)。因此酶免分析儀的計(jì)量特性和技術(shù)指標(biāo)見表1。

    3.酶免分析儀的主要校準(zhǔn)設(shè)備

    分光光度計(jì)(波長示值誤差優(yōu)于1nm);光譜中性濾光片:吸光度標(biāo)稱值分別:0.2Abs、0.5Abs、1.0Abs、1.5Abs(不確定度≤0.01Abs);分析天平(精度十萬分之一);數(shù)字溫度計(jì)(最小分度不低于0.1℃);蒸餾水。

    4.酶免分析儀校準(zhǔn)方法

    4.1 波長示值誤差和波長重復(fù)性

    將儀器特征波長濾光片放在分光光度計(jì)的樣品槽里,利用分光光度計(jì)的掃描功能,測出峰值,測量3次取平均值與理論值之差為儀器波長示值誤差△λ,取3次測量的極差為波長重復(fù)性δλ。

    4.2 吸光度示值誤差

    依次選用405nm、450nm、490nm、630nm或儀器特有的波長,對(duì)吸光度分別為0.2、0.5、1.0、1.5的標(biāo)準(zhǔn)濾光片以空氣為參比進(jìn)行測量,連續(xù)測量3次,記錄儀器示值并計(jì)算其平均值。吸光度示值誤差△A按公式(3)計(jì)算:

    4.3 吸光度通道差異

    在450nm波長下,將吸光度為1.0的標(biāo)準(zhǔn)濾光片放在不同通道下以空氣為參比進(jìn)行測量,并記錄吸光度示值。通道差異δA 按公式(4)計(jì)算:

    4.5 孵育系統(tǒng)溫度波動(dòng)和溫場均勻性

    對(duì)中部測溫點(diǎn)連續(xù)測量30分鐘,記錄溫度示值最大值T中部max和最小值T中部min,孵育系統(tǒng)溫度波動(dòng)σT按公式(6)進(jìn)行計(jì)算:

    4.6 移液容量相對(duì)誤差和重復(fù)性

    保證室內(nèi)環(huán)境有良好的控溫條件,將酶免分析儀和純水在恒溫條件下放置一段時(shí)間,使其溫度與室溫相同。取干凈的樣品杯放在電子天平上,待天平示值穩(wěn)定后,按下歸零鍵使天平復(fù)零。設(shè)定好移液器移液的體積,用酶免分析儀的移液器將純水移入樣品杯中。記錄純水的溫度,將樣品杯放在電子天平上,記錄此時(shí)天平顯示的數(shù)值,重復(fù)測量6次,記錄每一次的重量值mi。按照公式(8)算出20度時(shí)的實(shí)際移液容量V20:

    4.7 洗板系統(tǒng)最大殘留量

    將洗滌液全部換為純水,將溫度計(jì)插入純水中,待溫度計(jì)示值穩(wěn)定5min后測定純水的溫度。選1個(gè)干凈的樣品杯放入天平中稱量,得到空杯質(zhì)量M0。把該樣品杯放入空的酶標(biāo)板中,開啟洗板系統(tǒng)用純水對(duì)樣品杯進(jìn)行清洗。清洗完后,將樣品杯放入電子天平中進(jìn)行稱量,得到清洗后的樣品杯質(zhì)量M1,則清洗后每杯的殘留量△M按

    結(jié)語

    本文所述的校準(zhǔn)方法通過對(duì)酶免分析儀各個(gè)組成部分分別進(jìn)行校準(zhǔn)和量值溯源,能夠比較全面地對(duì)儀器的整體性能進(jìn)行評(píng)估和分析,更能比較好地完成酶免分析儀量值的溯源,使酶免分析儀測得的數(shù)據(jù)更加準(zhǔn)確可靠。

    參考文獻(xiàn)

    [1] JJG 861-2007,酶標(biāo)分析儀檢定規(guī)程[S].

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