小牛血提取物口腔凝膠的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究

錢 芳，尹登科

(1 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230038；2 兆科藥業(yè)(合肥)有限公司，安徽 合肥 230088)

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小牛血提取物口腔凝膠的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究

錢 芳1,2，尹登科1

(1 安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230038；2 兆科藥業(yè)(合肥)有限公司，安徽 合肥 230088)

制備小牛血去蛋白提取物(Deproteinised Calf Blood Extract，DCBE)口腔凝膠劑，并對(duì)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行初步研究。采用CMC-Na為凝膠基質(zhì)，羥苯乙酯為防腐劑，糖精鈉為矯味劑，DCBE為主藥，制備DCBE口腔凝膠劑，并通過(guò)呼吸實(shí)驗(yàn)建立DCBE含量測(cè)定方法。凝膠劑處方為：CMC-Na用量為1%，防腐劑用量為0.03%，矯味劑的用量為0.01%。呼吸活力應(yīng)大于4.0 μL·O2/mg·h。結(jié)論：DCBE口腔凝膠劑制備工藝簡(jiǎn)單，質(zhì)量控制方法可行。

口腔凝膠；小牛血去蛋白提取物；質(zhì)量評(píng)價(jià)

小牛血去蛋白提取物(DCBE)是從健康而發(fā)育旺盛的小牛血液透析液中提取的不含蛋白的低分子活性物質(zhì)。相關(guān)研究表明，DCBE是一種細(xì)胞呼吸激活劑，主要含有小分子多肽、氨基酸、核苷酸及有機(jī)物。氨基酸、核苷酸的主要作用是增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)氧和葡萄糖的攝取，增強(qiáng)三磷酸腺苷的合成，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)送，促進(jìn)組織的修復(fù)和再生；糖化物可以改善組織營(yíng)養(yǎng)，刺激細(xì)胞再生，加速組織修復(fù)[1]。相關(guān)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)DCBE可促進(jìn)細(xì)胞線粒體的呼吸功能，加速毛細(xì)血管再生，改善微循環(huán)和局部缺血組織的營(yíng)養(yǎng)，促進(jìn)組織再生和修復(fù)[2]，DCBE對(duì)創(chuàng)傷、潰瘍、灼傷等損傷組織也有促進(jìn)愈合的作用。DCBE在臨床上應(yīng)用及其廣泛，主要?jiǎng)┬陀凶⑸鋭┖屯庥媚z劑，其中注射劑主要用于治療急性缺血性腦血管病、老年人腦血管性癡呆、腦梗塞、糖尿病性周圍神經(jīng)病變以及放射所引起的皮膚和黏膜損傷等[3]。

口腔潰瘍是口腔黏膜疾病中發(fā)病率最高的一種疾病，普通感冒、消化不良、精神緊張、郁悶不樂(lè)等情況均能偶然引起該病的發(fā)生，好發(fā)于唇、頰、舌緣等，在黏膜的任何部位均能出現(xiàn)，但在角化完全的附著齦和硬腭則少見(jiàn)，一年四季均能發(fā)生。本文主要對(duì)DCBE口腔凝膠的處方進(jìn)行篩選，確定使用CMC-Na為凝膠成型劑，糖精鈉為矯味劑，羥苯乙酯為防腐劑，制備出DCBE提取物口腔凝膠，并對(duì)其質(zhì)量控制進(jìn)行了初步研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器

S.HH.W21.420S電熱恒溫水浴鍋，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠；MS104S/01電子天平，Mettler Toledo公司；SKW-3微量呼吸壓差儀，上海大學(xué)生產(chǎn)。

1.2 材料

羧甲基纖維素鈉：陶氏化學(xué)太平洋有限公司，批號(hào)F294ECK041；小牛血去蛋白提取物：兆科藥業(yè)(合肥)有限公司，批號(hào)20150201。山梨酸鉀、苯甲酸鈉、苯扎氯銨、羥苯乙酯、卡波姆、糖精鈉和香精均為藥用級(jí)。

2 方法和結(jié)果

2.1 呼吸活性測(cè)定DCBE效價(jià)[4]

本法系用瓦氏呼吸檢壓儀測(cè)定豚鼠肝勻漿的呼吸活力，從測(cè)得的耗氧量計(jì)算出呼吸活力QO2(μL·O2/mg·h)和刺激指數(shù)(SI)。取體重200～300 g的雄性豚鼠(處死前禁食至少24 h)，頸動(dòng)脈放血致死后，快速取出肝臟(注意不要損傷膽囊和膽管)。稱取肝臟5.5 g，切割成小塊，加入50 mL經(jīng)冰水浴的Soerensen緩沖液(按1.1 g肝臟對(duì)應(yīng)10 mL緩沖液)，勻漿。取反應(yīng)小瓶，每一中央小槽中置一大小合適的濾紙，并分別加入10%氫氧化鈉溶液0.2 mL。取供試品5 g，加入Soerensen緩沖液0.5 mL，攪拌均勻，作為供試液。反應(yīng)瓶中先加入Soerensen緩沖液0.2 mL，再加供試液1.1 mL，然后加肝勻漿1.0 mL，搖勻。以Soerensen緩沖液0.2 mL作為空白對(duì)照。將裝好的反應(yīng)瓶按瓶號(hào)與相應(yīng)的毛細(xì)管測(cè)壓計(jì)相連(注意密閉，勿使漏氣)，置于37 ℃的恒溫水浴中。開(kāi)動(dòng)振蕩馬達(dá)(100次/min)，平衡10 min，使反應(yīng)瓶?jī)?nèi)外溫度一致。將測(cè)壓計(jì)右側(cè)毛細(xì)管液面調(diào)至150 mm，記下左側(cè)毛細(xì)管液面初讀數(shù)A，立即關(guān)閉三向活塞，開(kāi)始計(jì)時(shí)，準(zhǔn)確反應(yīng)30 min后，將測(cè)壓計(jì)右側(cè)毛細(xì)管液面再調(diào)至150 mm，記下左側(cè)毛細(xì)管液面讀數(shù)B。打開(kāi)三向活塞，重復(fù)上述過(guò)程，進(jìn)行下一個(gè)30 min的反應(yīng)，并記下左側(cè)液面初讀數(shù)C及30 min后的液面讀數(shù)D。另附加一套供校正用的溫壓計(jì)，在反應(yīng)瓶中加2.5 mL的Soerensen緩沖液，使其在與試驗(yàn)瓶完全相同的條件下試驗(yàn)，觀察其壓力的變化(ΔC)，以消除試驗(yàn)過(guò)程中溫度及大氣壓的影響。同時(shí)取2.0 mL肝勻漿，置恒重的裝有海砂的稱量瓶中，110 ℃干燥至恒重，計(jì)算兩次的重量差ΔW(mg)。 按以下公式計(jì)算QO2和刺激指數(shù)。

QO2(μL·O2/mg·h)=[(A-B+C-D)×K1-ΔC×K2]/G/I

刺激指數(shù)(SI)=供試品QO2/空白QO2

式中： K1——空白或樣品的反應(yīng)瓶常數(shù) K2——溫壓計(jì)的反應(yīng)瓶常數(shù) G——每1 mL肝勻漿的干重，mg G=ΔW/2-9.3，9.3為Soerensen緩沖液的干重，mg I——應(yīng)時(shí)間，h

2.2 不同凝膠基質(zhì)對(duì)DCBE活性的影響

卡波姆[5-6]和羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)[4,9]是常用的凝膠基質(zhì)，本試驗(yàn)初步優(yōu)選卡波姆或CMC-Na作為凝膠成形劑，考察這兩種基質(zhì)對(duì)凝膠成型及DCBE活性的影響。

2.2.1 CMC-Na用量的選擇

制備含CMC-Na分別為1%、2%、3%、4%、5%的DCBE口腔凝膠，小牛血去蛋白提取物按照20%量加入，比較不同處方制備得到的凝膠外觀，采用“呼吸活性檢測(cè)法”檢測(cè)產(chǎn)品的效價(jià)，結(jié)果顯示1%的CMC-Na作為凝膠基質(zhì)，外觀較好，產(chǎn)品的效價(jià)最高(表1)。

表1 含不同濃度CMC-Na的小牛血去蛋白提取物口腔凝膠性狀和效價(jià)比較

結(jié)果顯示：1%CMC-Na組外觀較好，并具有較高的效價(jià)，優(yōu)選1%CMC-Na。

2.2.2 卡波姆用量的選擇

制備含卡波姆940分別為0.3%、0.4%、0.5%的DCBE口腔凝膠，DCBE按照20%量加入，比較不同處方制備得到的凝膠外觀，采用“呼吸活性檢測(cè)法”檢測(cè)產(chǎn)品的效價(jià)，結(jié)果顯示0.3%的卡波姆940作為凝膠基質(zhì)，外觀較好，產(chǎn)品的效價(jià)最高(表2)。

表2 含不同濃度卡波姆的小牛血去蛋白提取物口腔凝膠性狀和效價(jià)比較

結(jié)果顯示：0.3%卡波姆組外觀較好，并具有較高的效價(jià)，優(yōu)選0.3%卡波姆。

2.2.3 不同凝膠基質(zhì)對(duì)DCBE熱穩(wěn)定性的影響

含卡波姆940的基質(zhì)：稱取卡波姆940 3 g，加入注射用水溶解、攪拌，放置過(guò)夜，充分溶脹后加入丙三醇25 g，攪拌均勻，加入DCBE 200 g，補(bǔ)注射用水至1000 g，靜置呈凝膠狀。含羧甲基纖維素鈉基質(zhì)：稱取羧甲基纖維素鈉10 g，加入注射用水溶解、攪拌，放置過(guò)夜，充分溶脹后加入丙三醇25 g，攪拌均勻，加入DCBE 200 g，補(bǔ)注射用水至1000 g，靜置呈凝膠狀。兩種處方經(jīng)60 ℃水浴放置4 h后，取出，放置在室溫環(huán)境下，冷卻至室溫，觀察凝膠的狀態(tài)及效價(jià)檢測(cè)情況。結(jié)果顯示兩種基質(zhì)的凝膠狀態(tài)均較好，CMC-Na組的效價(jià)略高于卡波姆組(表3)。

2.3 附加劑對(duì)凝膠外觀及DCBE效價(jià)的影響

2.3.1 防腐劑篩選

分別制備含山梨酸鉀、苯甲酸鈉、苯扎氯銨、羥苯乙酯的DCBE凝膠。含有苯扎氯銨的凝膠，呈乳白色，不透明。其他三種凝膠均透明，故排除苯扎氯銨。同時(shí)考慮苯甲酸鈉在酸性溶液中抑菌效果很好，溶液pH超過(guò)6以后，抑菌效果減弱，而口腔凝膠的pH為6～7，故將苯甲酸鈉也排除。以下是對(duì)山梨酸鉀和羥苯乙酯兩種防腐劑用量進(jìn)行篩選。

因DCBE在正常環(huán)境下容易腐敗，現(xiàn)將20%的DCBE加入至不同的防腐劑中，觀察腐敗情況，腐敗情況判斷以產(chǎn)品顏色發(fā)生變化為標(biāo)準(zhǔn)，顏色由透明變?yōu)榫植繙啙?，每天觀察2次。產(chǎn)品配制后檢測(cè)各組的呼吸活性，比較各組呼吸活性。山梨酸鉀按照0.3%、0.4%、0.5%，羥苯乙酯按照0.02%、0.03%、0.04%、0.05%的量加入，以不加防腐劑組為對(duì)照比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.5%的山梨酸鉀和0.03%的羥苯乙酯腐敗的速度最慢，從呼吸活性和抑菌狀況上看， 0.03%的羥苯乙酯優(yōu)于0.5%的山梨酸鉀(表4)，因而優(yōu)選0.03%的羥苯乙酯。

表4 含不同濃度防腐劑的小牛血去蛋白提取物口腔凝膠比較

2.3.2 矯味劑篩選

分別制備含有0.01%糖精鈉和1‰香精的口腔凝膠劑，發(fā)現(xiàn)兩者對(duì)凝膠性狀和效價(jià)并無(wú)影響(表5)，初步選用0.01%糖精鈉作為矯味劑。

表5 含不同矯味劑的小牛血去蛋白提取物口腔凝膠性狀及效價(jià)比較

3 小牛血去蛋白提取物口腔凝膠制備

稱取羧甲纖維素鈉10 g，加入25 g甘油、0.1 g糖精鈉、0.3 g羥苯乙酯和500 g注射用水，攪拌均勻，放置過(guò)夜，次日置濕熱滅菌器中滅菌，滅菌溫度121 ℃，滅菌時(shí)間30 min，冷卻后加入已用0.22 μm膜過(guò)濾的小牛血去蛋白提取物200 g，補(bǔ)注射用水至1000 g，攪拌均勻，即得。

4 DCBE提取物口腔凝膠的質(zhì)量控制初步研究

根據(jù)凝膠劑的質(zhì)量控制要求，我們按照優(yōu)選處方制備了三批口腔凝膠制劑，并按藥典規(guī)定[10-12]對(duì)性狀、鑒別、酸堿度、黏度、無(wú)菌及效價(jià)進(jìn)行檢測(cè)，呼吸活力均大于4.0 μL·O2/mg·h，刺激指數(shù)(SI)均大于2.5，三批產(chǎn)品符合規(guī)定，具體表6所示。

表6 三批小牛血去蛋白提取物口腔凝膠質(zhì)量比較

5 結(jié) 論

本品是水性凝膠劑，水溶性凝膠基質(zhì)無(wú)油膩感，易涂布，也能吸收組織滲出液而不妨礙皮膚正常功能。已篩選的處方采用CMC-Na作為凝膠基質(zhì)，選擇2.5%的甘油作為保濕劑進(jìn)行調(diào)節(jié)，在防腐劑的選擇上，選擇了常用的羥苯乙酯作為防腐劑，使得該凝膠劑可以多次使用。為增加本品在使用過(guò)程中的口感，處方中加入了0.01%糖精鈉作為矯味劑。不同的輔料組成不同的制劑，產(chǎn)生的臨床作用有可能不同，因此選擇合適的輔料，制成合適的制劑。在處方篩選中，采用單個(gè)輔料篩選的方式，優(yōu)化處方，并對(duì)每個(gè)處方進(jìn)行評(píng)價(jià)，篩選出最優(yōu)處方。根據(jù)中國(guó)藥典對(duì)局部用凝膠劑的要求，初步評(píng)價(jià)三批口腔凝膠劑的質(zhì)量，內(nèi)容包括性狀、鑒別、檢查項(xiàng)，后續(xù)的穩(wěn)定性研究將會(huì)繼續(xù)評(píng)價(jià)篩選處方的質(zhì)量。

[1] 曾永宜.小牛血去蛋白提取物眼用凝膠對(duì)白內(nèi)障超聲乳化術(shù)后角膜切口修復(fù)的療效觀察[J].現(xiàn)代醫(yī)院,2010,10(3):37-38.

[2] Nejima R, Myata K, Tanabe T, et al. Corneal barrier function, tear film stability, and corneal sensation after photore-fractive keratectomy and laser in situ keratomileusis[J]. Am J Ophtbalmol,2005,139:64-71.

[3] 宋洋.小牛血去蛋白提取物制劑的臨床療效綜述[J].黑龍江醫(yī)藥,2005,18(2):31-32.

[4] 余惟俊.小牛血及血清去蛋白提取物注射液的質(zhì)量控制方法研究[D].東華大學(xué),2008.

[5] 甘春英,杜士明,劉新云,等.鹽酸左氧氟沙星凝膠的制備與質(zhì)量控制[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2006,26(7):878-879.

[6] 金孝靈.復(fù)方替硝唑凝膠的制備和臨床應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2007,4(21):135.

[7] Orniello CM. Quick-dissole strips : form concept to commercialization [J]. Drug Deliv Technol , 2006, 6(2): 68-71.

[8] Vollmer U, Galfetti P. RapidFilm: oral thin films(OTF) as an innovative drug delivery system and dosage form [J]. Drug Delivery Report Spring/Summer, 2006:64-67.

[9] 張廣求,張美祥,鄭錦秀.鹽酸苯海拉明凝膠的制備及質(zhì)量控制[J].中國(guó)藥房,2005,16(14):1065.

[10]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[S] .北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄ⅥH.

[11]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[S] .北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄ⅥG.

[12]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[S] .北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:附錄ⅩC, ⅪH, ⅪJ.

Prescription and Quality Evaluation of Deproteinised Calf Blood Extract Oral Gel

QIANFang1,2,YINDeng-ke1

(1 School of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Anhui Hefei 230038; 2 Zhaoke Pharmaceutical,Anhui Hefei 230088, China)

The oral gel of Deproteinised Calf Blood Extraction (DCBE) was prepared and the standard for its quality control was established. Using CMC-Na as matrix, ethylparaben as preservative and sodium saccharin as a flavoring agent, the oral gel for DCBE was prepared, and the content of DEBC in gel was determined by the method of respiration test. The prescription of DEBC gel was as follows: CMC-Na was 1%, ethylparaben was 0.03% and sodium saccharin was 0.01%. The activity of respiration should be higher than 4.0 μL·O2/mg·h. The preparation process of DCBE is sample and the method of quality control is feasible.

oral gel; Deproteinised Calf Blood Extract; quality evaluation

錢芳(1978-)，女，工程師，主要從事藥物開(kāi)發(fā)和應(yīng)用。

尹登科，博士，教授，研究方向：藥物新劑型與新制劑。

R945

B

1001-9677(2016)024-0065-03