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    亞麻籽功能成分的綜合提取工藝研究

    2017-01-17 06:35:20楊雪艷聶開立
    中國(guó)油脂 2017年1期
    關(guān)鍵詞:亞麻路線乙醇

    楊雪艷,聶開立,2,林 風(fēng),王 芳,鄧 利,2

    (1.北京化工大學(xué) 生物加工過程北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京100029; 2.廈門北化生物產(chǎn)業(yè)研究院有限公司,福建 廈門 361026; 3.北京化工大學(xué) 理學(xué)院,北京100029)

    綜合利用

    亞麻籽功能成分的綜合提取工藝研究

    楊雪艷1,聶開立1,2,林 風(fēng)3,王 芳1,鄧 利1,2

    (1.北京化工大學(xué) 生物加工過程北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,北京100029; 2.廈門北化生物產(chǎn)業(yè)研究院有限公司,福建 廈門 361026; 3.北京化工大學(xué) 理學(xué)院,北京100029)

    亞麻籽中含有亞麻膠、亞麻籽油、亞麻蛋白以及木酚素4種主要功能成分,研究了對(duì)亞麻籽功能成分的綜合提取工藝路線的篩選和對(duì)比,重點(diǎn)通過單因素實(shí)驗(yàn)與正交實(shí)驗(yàn)對(duì)一步法提取亞麻蛋白和木酚素的工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明:在 40%乙醇溶液為提取溶劑、料液比1∶20、堿含量0.07 mol、提取溫度50℃、提取時(shí)間2 h、提取2次、酸沉pH 4.4的一步法最優(yōu)提取條件及最佳綜合提取工藝條件下,亞麻膠得率9.67%、亞麻籽油得率39.46%、亞麻蛋白得率15.27%、木酚素得率11.03%,其中木酚素純度為28%,提取率達(dá)到83.83%。該綜合工藝路線步驟簡(jiǎn)單,合理可行,降低了能耗,提高了產(chǎn)品附加值,實(shí)現(xiàn)了亞麻籽的綜合利用。

    亞麻籽;功能成分;提取工藝;綜合利用

    亞麻是世界上最古老的纖維作物,也是目前重要的經(jīng)濟(jì)油料作物之一,在我國(guó)主要產(chǎn)于西北和華北地區(qū)[1]。亞麻籽外殼堅(jiān)硬,表面平滑有光澤,多為金黃色或棕褐色,富含多種生物活性成分。亞麻籽中含有豐富的蛋白質(zhì)(20%左右)和富含α-亞麻酸的油脂(40%左右),其表皮部分最外層含有亞麻膠(8%~14%)、亞麻木酚素(1%~5%)與膳食纖維(27%左右)[2-3],這些成分均具有一定的藥理活性和保健作用[4]。

    亞麻籽油中含有45%~60%的人體必需脂肪酸α-亞麻酸,具有降血脂和預(yù)防心血管疾病、動(dòng)脈粥樣硬化等功效[2,5]。亞麻膠為可溶性膳食纖維,是一種天然雜多糖,持水能力極強(qiáng),作為一種新型天然食品添加劑被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥等行業(yè)[6]。亞麻蛋白可以保護(hù)心臟健康、增強(qiáng)人體免疫系統(tǒng),亞麻籽分離蛋白可抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶活性。木酚素是一種植物類雌激素,在亞麻籽中的含量最高,具有抗癌、抗心血管疾病、預(yù)防骨質(zhì)疏松、緩解女性更年期癥狀以及輔助治療糖尿病等作用[1-2,4-5]。因此,亞麻籽是一種具有綜合開發(fā)利用價(jià)值的天然功能食品原料[7-8]。

    目前我國(guó)對(duì)亞麻籽的利用主要是榨油,剩余餅粕作為動(dòng)物飼料進(jìn)行出售。為提高亞麻籽利用率,一種方法是利用榨油后的餅粕提取木酚素或蛋白質(zhì),但是目標(biāo)產(chǎn)品比較單一,附加值不高;另一種方法是根據(jù)各組分在亞麻籽中分布特點(diǎn),將亞麻籽殼與仁分離,富殼部分作為提取亞麻膠、木酚素的原料,富仁部分作為亞麻籽油、亞麻蛋白的原料,這也是目前提高亞麻籽利用價(jià)值的主導(dǎo)思路,但殼仁分離需要特定的裝置[2,9]。黃慶德[10]公開了一種亞麻籽綜合加工的方法,經(jīng)干法或濕法提膠,微波加熱,再經(jīng)榨油,剩余餅粕過網(wǎng)篩,得到低脂亞麻籽蛋白粉和較粗的亞麻籽皮粉,以期實(shí)現(xiàn)亞麻籽油、亞麻膠、亞麻蛋白與木酚素4種成分的有效利用,但其僅是對(duì)餅粕的簡(jiǎn)單過篩處理,并未將亞麻蛋白與木酚素有效提取出來。總體來說,我國(guó)對(duì)亞麻籽中功能成分的綜合開發(fā)利用尚且不夠,存在產(chǎn)品單一、加工成本高、附加值低等問題[9]。

    本研究旨在以亞麻籽為原料,確定一條關(guān)于亞麻籽油、亞麻膠、木酚素、亞麻蛋白4種功能成分提取的整體綜合工藝路線,使亞麻籽中功能成分得到充分利用并有效提高亞麻籽的經(jīng)濟(jì)附加值。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    亞麻籽(粗脂肪43.34%、粗蛋白質(zhì)20.37%、木酚素4.64%、亞麻膠11.83%),內(nèi)蒙古產(chǎn)區(qū);木酚素標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98%),上海源葉生物科技有限公司;乙醇、石油醚、氫氧化鈉、鹽酸為分析純,西隴化工股份有限公司;乙腈為色譜純,美國(guó)天地有限公司。

    LC-20高效液相色譜儀(日本島津公司),HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋,KQ-50DE數(shù)控超聲波清洗器,PH-10 pH計(jì),LGT-18真空冷凍干燥箱,電熱鼓風(fēng)干燥箱,TD25-WS多管架自動(dòng)平衡離心機(jī),RE52-99 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器,UV-2000紫外分光光度計(jì)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 亞麻籽功能成分的提取

    1.2.1.1 亞麻膠提取

    [3]中亞麻膠提取方法,采用水浸醇沉法。取一定量的亞麻籽,以水為提取溶劑,在一定溫度下加熱提取,提取液經(jīng)離心得到上清液,上清液中加入一定量乙醇進(jìn)行沉淀,沉淀物經(jīng)真空干燥得到亞麻膠。脫膠后的亞麻籽作為下一個(gè)目標(biāo)物的提取原料。

    1.2.1.2 亞麻籽油提取

    溶劑浸提法。取適量亞麻籽,粉碎,過20目篩,加入一定比例的石油醚為提取溶劑,在一定溫度下水浴加熱,快速攪拌回流提取,提取液過濾,濾液旋蒸去除溶劑得到亞麻籽油,濾餅烘干,作為提取其他成分的原料。

    1.2.1.3 亞麻蛋白提取

    取一定量脫脂后的亞麻籽粕或脫膠脫脂亞麻籽粕作為提取原料加入250 mL三口燒瓶中,水作為提取溶劑并利用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至9.0,在一定溫度下水浴加熱,快速攪拌回流提取,提取液離心。液體部分調(diào)節(jié)pH至4.4得到沉淀,沉淀經(jīng)水洗中和得到亞麻蛋白粗提物,固體殘?jiān)鳛橄乱粋€(gè)目標(biāo)物的提取原料。

    1.2.1.4 木酚素提取

    取一定量脫脂后的亞麻籽粕或脫膠脫脂亞麻籽粕作為提取原料加入250 mL三口燒瓶中,利用一定堿含量的堿性乙醇溶液作為提取溶劑,在一定溫度下水浴加熱,快速攪拌回流提取,提取液離心去除固體殘?jiān)?,上清液?jīng)濃縮干燥得到木酚素粗提物。

    1.2.1.5 一步法提取木酚素與亞麻蛋白

    取一定量脫膠脫脂亞麻籽粕作為提取原料加入250 mL三口燒瓶中,利用一定堿含量的堿性乙醇溶液作為提取溶劑,在一定溫度下水浴加熱,快速攪拌回流提取,提取液離心去除固體殘?jiān)L崛∫航?jīng)調(diào)酸(pH 4.4)得沉淀物為亞麻蛋白粗提物,液體部分經(jīng)濃縮干燥得到木酚素粗提物。

    1.2.2 功能成分含量測(cè)定

    粗脂肪含量測(cè)定:GB/T 14772—2008;蛋白質(zhì)含量測(cè)定:考馬斯亮藍(lán)G-250染色比色法;亞麻膠含量測(cè)定:參考文獻(xiàn)[6]。

    木酚素含量測(cè)定:采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。色譜柱為ODS-SP C18(4.6 mm×250 mm,5 μm);流動(dòng)相為0.12%磷酸水溶液-乙腈梯度洗脫;紫外檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm;進(jìn)樣量10 μL;柱溫30℃。

    1.2.3 得率、提取率與提取量的計(jì)算

    得率A1=B1/C1×100%

    (1)

    提取率A2=B2/C2×100%

    (2)

    提取量A3=B2/C1

    (3)

    式中:B1為粗提物產(chǎn)品的質(zhì)量,g;C1為原料的質(zhì)量,g;B2為粗提物產(chǎn)品中目標(biāo)物的質(zhì)量,g;C2為原料中目標(biāo)物的質(zhì)量,g。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同工藝路線對(duì)亞麻籽功能成分綜合提取的影響

    設(shè)計(jì)以下4種功能成分的提取工藝路線:

    工藝A:亞麻籽→提油→提膠→提蛋白質(zhì)→提木酚素。工藝B:亞麻籽→提油→提蛋白質(zhì)→提木酚素。工藝C:亞麻籽→提油→提木酚素→提蛋白質(zhì)。工藝D:亞麻籽→提膠→提油→一步法提取木酚素和蛋白質(zhì)。

    對(duì)這4種提取工藝進(jìn)行了對(duì)比,結(jié)果見圖1。

    圖1 不同工藝路線對(duì)亞麻籽油、亞麻蛋白得率 與木酚素提取量的影響

    由圖1可知,不同工藝路線中亞麻籽油得率相同,其區(qū)別在于亞麻蛋白得率與木酚素提取量的不同。對(duì)比A、B與C工藝路線,B工藝路線中蛋白得率最高,C工藝路線中木酚素提取量最高。這是由于木酚素在亞麻籽中與其他物質(zhì)形成低聚物而存在,且極性較大,是采用堿性的乙醇溶液進(jìn)行提取的,而多糖采用乙醇溶液提取、蛋白質(zhì)采用堿性水溶液提取,3種物質(zhì)的提取溶劑與條件相近,因此亞麻膠與亞麻蛋白的優(yōu)先提取會(huì)使木酚素提取量降低,而木酚素的經(jīng)濟(jì)價(jià)值與食用價(jià)值均高于前兩者,因此考慮將木酚素的提取提前,即C工藝路線。然而C工藝路線的木酚素提取液中雖然木酚素含量較A、B路線稍有提高,但由于含有大量的亞麻膠與蛋白質(zhì),特別是蛋白質(zhì)的存在使其黏度特別大,從而不能進(jìn)一步地濃縮、純化。

    D工藝路線是采用堿性的乙醇溶液將木酚素與蛋白質(zhì)同時(shí)提取出來,提取液經(jīng)調(diào)節(jié)pH至酸性等電點(diǎn)使蛋白質(zhì)沉降,上清液為木酚素粗提液。D工藝路線中木酚素提取量明顯提高,達(dá)到31.7 mg/g,而蛋白質(zhì)得率相對(duì)其他工藝路線略低。D工藝路線將木酚素與蛋白質(zhì)提取合并,可以明顯降低能耗。另外考慮到亞麻膠主要存在于亞麻籽表皮的最外層,將亞麻膠的提取調(diào)整至粉碎亞麻籽之前,減少膠對(duì)蛋白質(zhì)與木酚素提取的影響。因此,亞麻籽中功能成分的綜合提取工藝路線確定為D工藝路線。

    2.2 木酚素和蛋白質(zhì)一步法提取條件的單因素實(shí)驗(yàn)

    采用D工藝路線,對(duì)一步法提取木酚素和蛋白質(zhì)的工藝條件進(jìn)行了探究,考察了乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、堿含量、提取溫度、提取時(shí)間、提取次數(shù)對(duì)木酚素提取量的影響。經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),酸沉前后木酚素提取量的差值越大,越多的木酚素隨蛋白質(zhì)沉淀,且得到的蛋白質(zhì)越多。

    2.2.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)木酚素提取量的影響

    在堿含量0.037 5 mol、提取溫度50℃、提取時(shí)間4 h、提取2次、料液比1∶10條件下,考察了乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)木酚素提取量的影響,結(jié)果見圖2。

    圖2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)木酚素提取量的影響

    由圖2可知,酸沉前乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%時(shí),木酚素的提取量最高,而乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%時(shí)經(jīng)酸沉得到的木酚素提取量最高,這是由于乙醇體積分?jǐn)?shù)超過60%時(shí),蛋白質(zhì)不能被提取出來,隨酸沉過程進(jìn)入蛋白質(zhì)的木酚素的量就很少,乙醇體積分?jǐn)?shù)超過60%時(shí),木酚素的提取量降低。綜合考慮,50%乙醇體積分?jǐn)?shù)為木酚素的最佳提取條件。

    2.2.2 料液比對(duì)木酚素提取量的影響

    在堿含量0.037 5 mol、提取溫度50℃、提取時(shí)間4 h、提取2次、乙醇積體分?jǐn)?shù)50%條件下,考察了料液比對(duì)木酚素提取量的影響,結(jié)果見圖3。

    由圖3可知,酸沉前后木酚素提取量均隨料液比的增加而增加,當(dāng)料液比為1∶20時(shí),木酚素提取量最高,其提取率可達(dá)82%。當(dāng)料液比超過1∶20時(shí),成本過高且得到蛋白質(zhì)的量降低,因此最佳料液比為1∶20。

    圖3 料液比對(duì)木酚素提取量的影響

    2.2.3 堿含量對(duì)木酚素提取量的影響

    在料液比1∶10、乙醇體積分?jǐn)?shù)40%、提取溫度50℃、提取時(shí)間4 h、提取2次條件下,考察了堿含量對(duì)木酚素提取量的影響,結(jié)果見圖4。

    圖4 堿含量對(duì)木酚素提取量的影響

    由圖4可知,酸沉前后木酚素提取量隨堿含量的增加而增加,當(dāng)堿含量增加至0.05 mol時(shí),提取量基本保持不變。堿含量過低時(shí),提取得到的蛋白質(zhì)的量較少。綜合考慮木酚素與蛋白質(zhì)的提取量,堿含量0.05 mol為最佳提取條件。

    2.2.4 提取溫度對(duì)木酚素提取量的影響

    在料液比1∶20、乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、堿含量0.037 5 mol、提取時(shí)間4 h、提取2次條件下,考察了提取溫度對(duì)木酚素提取量的影響,結(jié)果見圖5。

    圖5 提取溫度對(duì)木酚素提取量的影響

    由圖5可知,提取溫度50℃時(shí),酸沉前木酚素的提取量最高。在提取溫度40~70℃之間時(shí),酸沉前后木酚素提取量隨提取溫度的變化并不明顯。同時(shí)高溫會(huì)導(dǎo)致木酚素結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定以及乙醇的易揮發(fā)性。綜合考慮,提取溫度為50℃是最優(yōu)條件。

    2.2.5 提取次數(shù)對(duì)木酚素提取量的影響

    在料液比1∶20,乙醇體積分?jǐn)?shù)50%,堿含量0.037 5 mol、提取溫度50℃、提取時(shí)間2 h條件下,考察了提取次數(shù)對(duì)木酚素提取量的影響,結(jié)果見圖6。

    圖6 提取次數(shù)對(duì)木酚素提取量的影響

    由圖6可知,木酚素的提取量隨提取次數(shù)的增加而增加,在該提取條件下,木酚素的總提取量達(dá)到42.73 mg/g,而其中前2次的提取率達(dá)到81.10%。提取2次之后,木酚素提取量增加緩慢,為縮短提取時(shí)間、減少溶劑用量,選擇提取2次。

    2.2.6 提取時(shí)間對(duì)木酚素提取量的影響

    在料液比1∶20、乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、提取溫度50℃、堿含量0.037 5 mol、提取2次條件下,考察了提取時(shí)間對(duì)木酚素提取量的影響,結(jié)果見圖7。

    圖7 提取時(shí)間對(duì)木酚素提取量的影響

    由圖7可知,隨提取時(shí)間的延長(zhǎng),提取液中木酚素提取量逐漸增加,1 h內(nèi)木酚素提取量迅速上升,在提取2 h之后基本達(dá)到平衡,為節(jié)約時(shí)間降低能耗,選擇2 h為最佳提取時(shí)間。

    2.3 木酚素和蛋白質(zhì)一步法提取條件的正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)化

    通過單因素分析,為研究各因素的相互交叉影響,按2.1中確定的最佳提取工藝路線D,在提取次數(shù)2次的條件下,根據(jù)表1中正交實(shí)驗(yàn)因素水平對(duì)木酚素和蛋白質(zhì)一步法提取條件進(jìn)行五因素四水平L16(45)的正交實(shí)驗(yàn),以木酚素提取量和蛋白質(zhì)得率作為指標(biāo),確定最佳工藝參數(shù),結(jié)果見表2、表3。

    表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平

    表2 正交實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果

    表3 以木酚素提取量(蛋白質(zhì)得率)為指標(biāo)的方差分析

    由表2可知,在提取過程中各因素對(duì)木酚素提取量的影響順序?yàn)榱弦罕?堿含量>乙醇體積分?jǐn)?shù)>提取溫度>提取時(shí)間,其最優(yōu)水平組合為A4B1C4D4E1。各因素對(duì)蛋白質(zhì)得率的影響順序?yàn)橐掖俭w積分?jǐn)?shù)>料液比>提取溫度>提取時(shí)間>堿含量,其最優(yōu)水平為A3B1C4D4E1。從表3的方差分析結(jié)果看,料液比對(duì)木酚素提取量具有極顯著性影響、對(duì)蛋白質(zhì)得率具有顯著性影響,堿含量對(duì)木酚素提取量具有顯著性影響,是由于木酚素在亞麻籽中以二糖苷的形式化存在,而糖苷分子又進(jìn)一步與3-羥基-3-甲基戊二酸鏈接形成低聚物,因此木酚素的提取需要一定的堿將其從低聚物中水解下來。另外,乙醇的體積分?jǐn)?shù)對(duì)蛋白質(zhì)得率具有極顯著性影響,乙醇體積分?jǐn)?shù)高時(shí)會(huì)明顯降低蛋白質(zhì)的得率,這是由于蛋白質(zhì)在不同體積分?jǐn)?shù)乙醇溶液中的溶解性不同。提取溫度對(duì)蛋白質(zhì)的得率也有顯著性影響。綜合考慮木酚素與蛋白質(zhì)的經(jīng)濟(jì)價(jià)值,以及高溫可能破壞功能成分結(jié)構(gòu),選擇最優(yōu)水平為A4B1C4D2E1,即料液比為1∶20,乙醇體積分?jǐn)?shù)為40%,堿含量為0.07 mol,提取溫度為50℃,提取時(shí)間為2 h。以A4B1C4D2E1為提取條件進(jìn)行了驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),各物質(zhì)得率分別為:亞麻膠9.67%,亞麻籽油39.46%,木酚素11.03%(純度28%),蛋白質(zhì)15.27%(其中含有5%左右木酚素)。亞麻籽經(jīng)提取多種功能成分剩余的殘?jiān)饕獮椴蝗苄陨攀忱w維和部分蛋白質(zhì),得率約為22.18%。

    3 結(jié) 論

    (1)本研究通過改變亞麻膠、亞麻籽油、亞麻蛋白和木酚素的提取在綜合工藝路線中的先后順序,通過對(duì)比分析得到最佳工藝路線為:亞麻籽除雜→水浸醇沉提取亞麻膠→烘干、粉碎→溶劑浸提法提取亞麻籽油→脫膠脫脂亞麻籽粕→一步法提取木酚素和蛋白質(zhì)→殘?jiān)?/p>

    (2)一步法提取木酚素和蛋白質(zhì)的最優(yōu)提取條件為料液比1∶20,40%乙醇溶液為提取溶劑,堿含量0.07 mol,提取溫度50℃,提取時(shí)間2 h,提取次數(shù)2次。在最佳工藝路線和最優(yōu)提取條件下,各物質(zhì)得率分別為:亞麻膠9.67%,亞麻籽油39.46%,木酚素11.03%(純度為28%),蛋白質(zhì)15.27%(其中含有5%左右木酚素)。亞麻籽經(jīng)提取多種功能成分剩余的殘?jiān)饕獮椴蝗苄陨攀忱w維和部分蛋白質(zhì),得率約為22.18%。該工藝合理可行、步驟簡(jiǎn)單,可同時(shí)獲得多種亞麻籽加工產(chǎn)品,使亞麻籽中功能成分得到了充分利用,并有效提高了亞麻籽的經(jīng)濟(jì)附加值。

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    Multible-extraction of functional components from flaxseed

    YANG Xueyan1,NIE Kaili1,2,LIN Feng3,WANG Fang1,DENG Li1,2

    (1. Beijing Key Laboratory of Bioprocess,Beijing University of Chemical Technology,Beijing 100029,China;2. Amoy-buct Industrial Bio-technovation Institute,Xiamen 361026,F(xiàn)ujian,China;3.Faculty of Science,Beijing University of Chemical Technology,Beijing 100029,China)

    Flaxseed contained four kinds of functional components,such as flaxseed gum,flaxseed oil,flaxseed protein and lignan. The screening and comparison of multible-extraction process of functional components from flaxseed were studied. The process conditions of extracting flaxseed protein and lignan by one-step method were optimized by single factor experiment and orthogonal experiment. The results showed that the optimal conditions of one-step method and multible-extraction process were obtained as follows:with 40% ethanol solution as extraction solvent,ratio of material to liquid 1∶20,alkaline content 0.07 mol,extraction temperature 50℃,extraction time 2 h,extraction times twice and acid precipitation pH 4.4. Under these conditions,the yields of flaxseed gum,flaxseed oil,flaxseed protein and lignan were 9.67%,39.46%,15.27% and 11.03%,respectively. The purity and extraction rate of lignan were 28% and 83.83% respectively. The mutible- extraction process was simple,reasonable and feasible,which reduced the energy consumption and improved the additional value of products. The comprehensive utilization of flaxseed was realized.

    flaxseed;functional component;extraction process;comprehensive utilization

    2016-04-27;

    2016-11-10

    楊雪艷(1986),女,碩士研究生,研究方向?yàn)樯锛庸?E-mail)xueyan12121021@126.com。

    鄧 利,教授(E-mail)dengli@mail.buct.edu.cn。

    TS222;TS209

    A

    1003-7969(2017)01-0116-06

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