新生仔豬腹瀉的體外抑菌治療的研究

和驛明

（云南省怒江州蘭坪縣中排鄉(xiāng)農業(yè)綜合服務中心，云南蘭坪 671404）

新生仔豬腹瀉的體外抑菌治療的研究

和驛明

（云南省怒江州蘭坪縣中排鄉(xiāng)農業(yè)綜合服務中心，云南蘭坪 671404）

文章以“新生仔豬腹瀉的體外抑菌治療”為主要研究對象，在對其進行概述的基礎上，通過實驗的方式進行深入、細致的研究與分析，希望能夠就其抑制作用得出有效結論。

新生仔豬 腹瀉 體外抑菌治療

1 前言

大腸桿菌的致病原因就是致病性大腸埃細菌所引起的，一旦患病，往往會有腹瀉以及敗血癥等相關癥狀，如果患病的是仔豬的話，往往會導致嚴重的經濟損失。另外，在治療和預防的方面，由于在預防和治療方面，由于致病性血清型有比較大的差異，而如果一直使用抗生素進行治療的話，就很容易產生耐藥性，最終導致疫苗和抗生素的使用效果受到限制。為了盡快解決上述問題，在臨床上開始嘗試使用一些重要和具有特異性的抗體進行治療，效果還是比較理想的。這也正是文章的研究所在，希望能夠從體外抑制大腸桿菌的吸附出發(fā)，針對其對于致病性大腸桿菌導致仔豬患病的治療作用展開研究與分析。

2 新生仔豬腹瀉體外抑菌治療的實驗研究

2.1 關于實驗的材料

該實驗主要用到的是豬大腸桿菌的標準菌種三種，分別是K88、K99和987P，實驗過程中所用到的仔豬就是某豬場的新生仔豬，實驗中所用到的藥物就是復方中藥免疫球蛋白生物制劑。

2.2 關于實驗的方法

首先就是體外的黏附性實驗

第一步就是要對小腸上皮細胞實施分離，具體的方法就是對仔豬進行屠宰，取下整個小腸，并選擇20cm左右的額十二指腸和回腸，需要注意的是，對仔豬進行屠宰的時候，仔豬一定是要禁食初乳的；緊接著就是用PBS液進行反復沖洗，主要目的是為了將腸道的糞便沖洗干凈；接下來就是要對小腸進行縫線處理，具體方法就是用縫線把小腸的遠端記住，等到加入了pH值是6.8的EDTA之后，再把小腸的遠端系住；然后把小腸進行浸泡處理，具體 是浸泡在PBS液中，在37℃的溫度條件下進行孵育，時間大約是15～25min，同時不斷振動；使用離心管將小腸的內容物收集起來；之后縱向把小腸切開，將小腸上皮的黏膜細胞用載玻片刮除，將其放置到已經裝有小腸內容物的離心管中；通過吸管，對小腸的內容物進行反復的吹吸，主要目的就是為了把原本成團的細胞分離成單個的；然后就是在4℃的條件下，按照4000轉/min的轉速進行離心處理，時間大約是10min；把上清液倒掉，剩下的沉淀物用HBSS液進行洗滌處理之后，再進行離心處理；對小腸的上皮細胞進行收集，通過顯微鏡進行計數。

其次就是小腸上皮細胞黏附實驗

這個實驗的具體方法就是使用1ml的復方中藥免疫球蛋白生物制劑，然后將其與大腸桿菌溶液1ml進行混合，在37℃的條件下進行0.5h的培養(yǎng)；然后在1ml的黏膜細胞中加入復方中藥免疫球蛋白生物制劑大腸桿菌混合培養(yǎng)液中，劑量大約是1ml，同樣是在37℃的條件下進行振蕩培養(yǎng)，時間大概是120min，然后把上述三者混合得來的液體在4℃的條件下按照4000轉/min的速度進行離心處理，時間大約是20min，再對其進行洗滌；接下來將1ml的大腸桿菌加入1ml的黏膜細胞溶液中，在37℃的條件下進行120min的培養(yǎng)，然后通過第二步驟的方法進行離心處理；離心完成之后，黏膜細胞會在緩沖液中懸浮；把懸浮的黏膜細胞在冰乙醇中進行固定，時間大概是15min，然后進行染色處理，時間大約0.5h，之后通過光學顯微鏡進行觀察；最后就是用白細胞稀釋管吸取混合液到計數板中，進行計數與計算。

第三就是復方中藥免疫球蛋白生物制劑的體外抑菌試驗

在大腸桿菌溶液中，分別加入復方中藥免疫球蛋白生物制劑，添加劑量是0.05g，效價分別是0.1：160/1：640/1：2560，在合適的溫度條件下進行培育，時間分別是60min、180min和300min，進行計數和菌數的檢查。

2.3 關于實驗的結果

首先關于體外黏附實驗

三種菌種都能夠在分離的新生仔豬十二指腸和回腸的小腸上皮細胞上進行吸附，只是黏附的數量有所差異，其中以K88的黏附個數最多，是18.5個。1：2560效價的復方中藥免疫球蛋白生物制劑祖輩中，黏附度是基本相同的，這就可以說明上皮細胞的受體也是相同的。

其次關于復方中藥免疫球蛋白生物制劑的體外抑菌實驗

分別在三種菌種中加入復方中藥免疫球蛋白生物制劑，在最初的60min到180min的時間里，抑菌作用是最強的，但是等到過了三個小時，抑菌作用不僅僅開始減弱，而且減弱是非常急劇的，等到了五個小時的時候，抑菌作用完全消失。從實驗的結果可以看出來，復方中藥免疫球蛋白生物制劑對于三種菌種的抑菌效果是相同的。

3 結論

從實驗可以得出如下結論，如果時間在60～180min這個范圍，那么1：160、1：640和1：2560效價的復方中藥免疫球蛋白生物制劑的抑菌作用是最為顯著的，等到過了180min以后，抑菌作用的減弱極為迅速，等到300min的時候作用完全消失，這就說明復方中藥免疫球蛋白生物制劑的確是有抑菌作用的，主要原因很有可能是生物制劑中的免疫球蛋白直接黏附在病原菌的細胞壁上，從而導致細胞的完整性得以改變，對細菌的生長起到了抑制性作用，卻并不能將細菌完全殺死。也就是說，這些作用在一定程度上抑制了大腸桿菌的繁殖，仔豬發(fā)病的時間也因此而推遲，當新生仔豬逐漸長大的時候，抵抗力逐漸增強，這就導致發(fā)病率大大降低，實現對仔豬腹瀉的預防作用。

[1] 陳瑞芳，杜禎，孟日增.新生仔豬腹瀉體外抑菌治療的研究[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2008，（6）：82-83.

[2] 周然，張和平.抗仔豬腹瀉乳抗體的分離制備及體外抑菌特性的研究[J].內蒙古科技與經濟，2004，（24）：49-51.

[3] 張平.復方中藥免疫球蛋白生物制劑治療新生仔豬腹瀉的藥物作用機制的研究[D].內蒙古大學，2015.