HPLC法測定疏表靈顆粒中芍藥苷和白花前胡甲素含量

張 囡，陳雙璐，林 宏

(天津市兒童醫(yī)院，天津 300074)

HPLC法測定疏表靈顆粒中芍藥苷和白花前胡甲素含量

張 囡，陳雙璐，林 宏*

(天津市兒童醫(yī)院，天津 300074)

目的：建立HPLC法測定疏表靈顆粒中芍藥苷和白花前胡甲素含量。方法：色譜柱為Shim-pack VP-ODS(150 mm ×4.6 mm)，流動相為乙腈-0.4 %磷酸水溶液梯度洗脫，流速1.0 ml/min，檢測波長320 nm，進樣量10 μl。結(jié)果：芍藥苷和白花前胡甲素分別在16.8～336.0 μg/ml和2.0～40.0 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系，芍藥苷的平均加樣回收率為100.09%，RSD為1.00%(n=9)，白花前胡甲素的平均加樣回收率為100.08%，RSD為1.22%(n=9)。結(jié)論：本法簡便、結(jié)果準確、重復性好，可用于疏表靈顆粒的質(zhì)量控制。

疏表靈顆粒，芍藥苷，白花前胡甲素，HPLC

疏表靈顆粒為本院常用醫(yī)院制劑(批準文號：津藥制字Z20070313)，由前胡、赤芍、板藍根、玄參、天花粉、淡豆豉等18味中藥制成，具有散風解表、解肌透疹、清熱解毒的功效，主要用于小兒呼吸道感染、流感、麻疹、風疹、幼兒急疹。原質(zhì)量標準[1]無含量測定項，為提高其標準，有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本文采用高效液相色譜法(HPLC)同時測定本品中芍藥苷和白花前胡甲素含量，以此作為該制劑的質(zhì)量控制指標。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-2010A高效液相色譜儀(日本島津)，LC solution色譜工作站；電子天平(梅特勒-托利多AL-104)。

1.2 試藥 芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110736-201438)，白花前胡甲素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號110766-200619)；疏表靈顆粒(天津市兒童醫(yī)院，批號20150401、20150501、20150601)；甲醇、乙腈、磷酸均為色譜純(天津市康科德科技有限公司)；水為娃哈哈純凈水(杭州娃哈哈集團有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Shim-pack VP-ODS(150 mm×4.6 mm)；流動相：0.4%磷酸-乙腈梯度洗脫，如表1；檢測波長320 nm[1]；柱溫20 ℃；流速1 ml/min；進樣量10 μl。理論板數(shù)按芍藥苷和白花前胡甲素峰計算均不低于2 000。

表1 疏表靈顆粒梯度洗脫時間表

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取芍藥苷、白花前胡甲素對照品適量，加甲醇溶解制成濃度為1.52 mg/ml的芍藥苷及濃度為0.40 mg/ml的白花前胡甲素對照品貯備液。精密量取兩種貯備液各1 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為對照品溶液[2-4]。

2.2.2 供試品溶液的制備 取裝量差異下的疏表靈顆粒，研細，精密稱定約2.0 g，置25 ml量瓶中，加入甲醇適量，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，即得[5-8]。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方配比，制備不含赤芍、前胡的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法制得陰性對照溶液。分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μl，按“2.1”項下色譜條件進樣分析，色譜圖見圖1。

2.3 線性關系考查 分別精密量取0.76 mg/ml 的芍藥苷對照品溶液和濃度為0.40 mg/ml白花前胡甲素對照品溶液0.5、1.0、2.5、5.0、7.5和10.0 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，按“2.1”項下色譜條件測定，以峰面積A為縱坐標，進樣濃度C(μg/ml)為橫坐標繪制標準曲線，求得回歸方程：芍藥苷為A=12 145.93C-32 892.27 (r=0.999 9，n=6)；白花前胡甲素為A=12 576.87C+11 448.78 (r=0.999 8，n=6)。結(jié)果表明：芍藥苷在16.8～336.0 μg/ml范圍內(nèi)、白花前胡甲素在2.0～40.0 μg/ml范圍內(nèi)線性關系良好。

1.芍藥苷 2.白花前胡甲素

2.4 重現(xiàn)性試驗 取同一批號(20150401)顆粒適量，精密稱取2.0 g，共6份，分別按“2.2.2”項下方法制備，按“2.1”項下色譜條件測定，分別計算出芍藥苷含量為982.5 μg/g，白花前胡甲素含量為240.0 μg/g，計算RSD分別為0.45%和0.99%。

2.5 精密度試驗 取“2.2.1”項下對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，連續(xù)進樣6次，計算芍藥苷和白花前胡甲素峰面積的RSD分別為0.84%及0.66%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一批號(20150401)顆粒適量，精密稱取2.0 g，按“2.2.2”項下方法制備，按“2.1”項下色譜條件分析，分別在0、2、4、6、8、12和24 h進樣，測得芍藥苷和白花前胡甲素峰面積值的RSD分別為0.50%及0.86%，符合要求。

2.7 回收率試驗 采用加樣回收法，取已知含量的同一批號(20150501)樣品適量，精密稱取2.0 g，9份，按樣品含量的80%、100%和120%加入適量芍藥苷和白花前胡甲素對照品，按 “2.2.2” 項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，計算回收率及RSD。測得樣品中芍藥苷平均回收率為100.09%，RSD為1.00%；白花前胡甲素平均回收率為100.08%，RSD為1.22%。結(jié)果見表2和表3。

表2 芍藥苷加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

表3 白花前胡甲素加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

2.8 樣品測定 取疏表靈顆粒樣品3批(批號 20150401、20150501、20150601)，按 “2.2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，測定樣品中芍藥苷和白花前胡甲素的含量。結(jié)果樣品中芍藥苷的含量分別為953.7、950.3和947.9 μg/g，白花前胡甲素的含量分別為253.8、249.8和248.3 μg/g。

3 討論

3.1 指標成分的選擇 疏表靈顆粒方中赤芍、前胡為主藥，芍藥苷是赤芍中主要的有效成分，藥理實驗表明芍藥苷具有抗氧化、降低血液黏度、抑制血小板聚集、改善微循環(huán)及擴張血管等作用；且芍藥苷能抑制腫瘤細胞膜上ATP活性及升高腺苷酸，環(huán)化酶活性的作用[9]。白花前胡甲素為前胡中提取出的一種角型吡喃香豆素，為前胡中主要活性成分，具有舒張氣管平滑肌、抑制血小板聚集、促鉀通道開放、阻滯鈣內(nèi)流、抗缺血再灌注損傷等作用[10]。因此選擇對芍藥苷和白花前胡甲素進行含量測定，可以有效控制赤芍、前胡的質(zhì)量，進而控制疏表靈顆粒的質(zhì)量。

3.2 檢測波長的考查 分別對芍藥苷與白花前胡甲素進行紫外吸收光譜掃描，可得知二者最大吸收波長分別為230 nm及322 nm。在研究過程中發(fā)現(xiàn)，如設定檢測波長為230 nm，白花前胡甲素吸收值較低，且峰形較差。而檢測波長設定為320 nm，芍藥苷吸收度較好，故選用320 nm作為檢測波長。

3.3 提取方法的考查 本研究在實驗過程中分別采用不同比例的甲醇、乙醇、三氯甲烷進行超聲提取，并對不同超聲提取時間進行考查。最終確定用甲醇超聲提取30 min，提取成分含量較高，且操作簡便。

3.4 流動相梯度洗脫條件的考查 由于芍藥苷與白花前胡甲素極性差別較大，因此本研究選用梯度洗脫的方法同時測定二者含量。經(jīng)反復試驗證實0～7 min，0.4%磷酸溶液-乙腈為83∶17適于芍藥苷的洗脫，而8～22 min，0.4%磷酸溶液-乙腈為30∶70更適于白花前胡甲素的洗脫，故本研究選擇此梯度作為最終的實驗條件。

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2016-03-02

R927.2

A

1006-5687(2016)05-0028-03

*通迅作者：林宏，E-mail：roylinvip@126.com。