外燥實驗動物模型的研究進展

王靜平 魏寧頤 唐 朝 陳楚珺 周梓鑫 楊 梅

云南中醫(yī)學院，云南 昆明 650500

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外燥實驗動物模型的研究進展

王靜平 魏寧頤 唐 朝 陳楚珺 周梓鑫 楊 梅*

云南中醫(yī)學院，云南 昆明 650500

對當前外燥動物模型的復制及相關機制的研究進行綜述。目前外燥動物模型主要包括溫燥動物模型和涼燥動物模型。其動物模型相關機制研究已從整體水平、器官水平、組織水平、細胞水平深入到分子水平，并引入現(xiàn)代免疫學方法。研究內容緊扣中醫(yī)理論，選擇與燥證病因病機相關的檢測指標進行研究。對今后開展中醫(yī)藥防治與燥證相關的疾病提供參考。

燥證；涼燥；溫燥；動物實驗；造模方法

燥證(Dryness Syndrome)，是一類以津液的減少,甚至枯涸為主要病理機制,以干燥性癥狀為主要表現(xiàn)的一組中醫(yī)證候。既可單獨成病，亦可出現(xiàn)在溫熱病、消渴、血證等多種疾病的不同階段，并與現(xiàn)代多種疾病密切相關[1-3]。燥證有內燥及外燥之別，外燥證多由外感燥邪所引起，分為溫燥和涼燥兩種。由于環(huán)境的惡化和生活方式的變化，導致全球氣候變暖、水資源短缺逐年加劇。近年來外燥的發(fā)病率逐年增高，但目前外燥的發(fā)病機制尚未完全明了，為了更好地預防和診治外燥，研究并明確外燥的發(fā)生發(fā)展機制至關重要，而合理穩(wěn)定的外燥動物模型則是實驗研究的重要保證。本文將從外燥動物模型的復制和相關機制研究兩個方面進行綜訴，以期為今后燥證的實驗究提供參考。

1 外燥動物模型造模方法

1.1 外燥動物模型造模思路 中醫(yī)動物模型是根據(jù)中醫(yī)理論，利用特定的致病因素，在動物身上復制出與人類疾病癥狀和病理改變相同或相似的證候[4-5]。由于外燥證是以人體感受外界燥邪，津液損傷為主要病機，其發(fā)病與地域環(huán)境、季節(jié)氣候的關系十分密切。因此，外燥動物模型必須在中醫(yī)理論指導下，根據(jù)中醫(yī)病因病機理論，從造成外燥證的病因入手，遵循證候演變規(guī)律復制，才能保持與臨床一致性。目前，外燥模型均以病因病機特點為基礎，并結合地域氣候因素進行綜合考慮進行造模。

1.2 涼燥、溫燥動物模型造模 主要以氣候因素為切入點進行造模，即依據(jù)醫(yī)學氣象學相關知識，建立“溫度-相對濕度”空間量化指標，模擬中醫(yī)外燥證中涼燥、溫燥致病氣候環(huán)境特點進行模型復制。丁建中等[6-8]依據(jù)外燥的自然屬性，選取昆明種小鼠，利用人工智能氣候箱設常溫常濕組、常溫組、溫燥組和涼燥組，并采取常規(guī)飼養(yǎng)進行造模。結果顯示，溫燥組小鼠氣管上皮鱗狀化生，皮膚表皮褶皺，足墊表皮增厚，汗腺減少。涼燥組小鼠氣管上皮鱗狀化生，肺部瘀血、水腫明顯，皮下結締組織增生。兩組均出現(xiàn)了與燥證相關的病理改變。

2 外燥證宏觀表征的觀察

模型的生物體表特征即是癥，癥是識別具體病證的主要依據(jù)。實驗動物的生物表征主要是觀察實驗動物的一般狀態(tài)，如王明明等[9]利用人工智能氣候箱模擬早秋、中秋、晚秋氣候特點，建立外燥小鼠動物模型，通過觀察統(tǒng)計實驗動物的皮膚毛發(fā)、行為狀態(tài)、情緒反應、飲水以及大便情況等生物表征對模型進行評價。此法符合中醫(yī)“有諸內者，必形諸外”的中醫(yī)理論，具有中醫(yī)的特色。

3 外燥證相關機制的實驗研究

目前關于外燥相關機制的研究，主要是在中醫(yī)理論指導下，借鑒了現(xiàn)代生命科學研究方法，采用組織病理學、現(xiàn)代免疫學、分子生物學、血液流變學等理論與技術，分別從器官、組織、細胞、分子等層面，對外燥證的內在機制進行了深入研究。

3.1 燥傷皮毛機制研究 正常組織結構是機體發(fā)揮生理功能的重要物質基礎，觀察與模型相關的病理改變是從器官組織層次判斷模型的一個重要的依據(jù)。丁建中等[10-11]根據(jù)“肺主皮毛”的中醫(yī)理論，利用人工智能氣候箱模擬溫燥和涼燥的氣候特征進行造模。在此基礎上，觀察模型小鼠的氣管、肺組織及足墊皮膚組織，研究燥邪對模型小鼠組織結構方面的影響。結果顯示，兩組均出現(xiàn)氣管上皮鱗狀化生，皮膚毛乳頭數(shù)減少，足墊真皮乳頭與汗腺結構紊亂、結締組織增生等病理改變，為燥證多有皮膚“枯、涸、皴、揭”等病機的研究提供組織病理學基礎。

3.2 燥傷正氣機制研究 中醫(yī)認為“邪之所湊，其氣必虛”，燥邪犯肺人體正氣必然會受到影響。近年來，部分學者根據(jù)人體“正氣”與“免疫”的相關性，通過觀察動物模型免疫器官組織、檢測免疫細胞及免疫分子來探討動物模型與免疫功能的相關性，從而揭示燥邪犯肺，肺氣失宣，衛(wèi)外功能失職的病機實質。如丁建中等[12-13]利用人工智能氣候箱子，設涼燥組、溫燥組、常溫常濕組、常溫組，第7天和第14天檢測各組小鼠的血清中IgG-S、呼吸道中IgG-R，并對胸腺和脾臟重量。結果顯示，溫燥組和涼燥組中血清中IgG-S高于常溫常濕組，溫燥組第14天脾臟平均重量均高于其他三組；張六通等[14]、胡利群等[15]建立溫燥和涼燥模型，分別在第6天、12天、18天檢測各組小鼠氣道液中分泌型IgA (SIgA) 、IgG和腫瘤壞死因子(TNF-α)。結果顯示，溫燥組、涼燥組、常溫燥組小鼠第6天至18天IgA (SIgA)、IgG、TNF-α均為下降。常溫燥組第18天減少明顯(P<0.05)，溫燥組第12、18天持續(xù)下降(P<0.01)。倪圣等[16]依據(jù)“溫度-相對濕度-風”綜合條件刺激建立模型，設常溫常濕組，溫燥組，涼燥組，第6天和12天，用ELISA檢測各組小鼠氣道中NE、IL-10 、αI-AT含量的變化，結果顯示，溫燥組、涼燥組NE均升高(P<0.05)，аI-AT、IL-10下降(P<0.05)，在一定范圍內揭示了小鼠氣道免疫功能低下。上述實驗，均從微觀層面闡釋了燥邪損傷“正氣”的病機實質。

3.3 燥傷津液機制研究 中醫(yī)認為“燥性干澀，易傷津液”，燥邪對津夜的影響主要體現(xiàn)在津液的生成、輸布和代謝等方面。張六通等[17]、丁建中等[18-20]認為水通道蛋白(AQP)1、4、5 與肺泡內外水液轉運及肺部病變分子機制有關，且利用人工氣候箱建立實驗小鼠動物模型，通過觀察常溫常濕組、常溫組、溫燥組和涼燥組各組小鼠肺內AQP1、4、5變化，探究燥邪傷肺、耗津的機制。與常溫常濕組比較，溫燥組、涼燥組第6天、12天、18天AQP1、5表達陽性率持續(xù)下降(P<0.01)。并提出AQP1、5可以作為研究外燥傷肺、耗津病機的特異性指標之一。胡利群[21]、丁建中[22-23]在建立涼燥、溫燥、常溫燥小鼠模型的基礎上，采用咔唑比色法，分別對小鼠氣道和大腸的粘多糖進行測定，探究燥邪傷津液的病機實質。溫燥組呼吸道液黏多糖(RS)持續(xù)下降，涼燥組第12天最為減少，而常溫燥組第12天、第18天RS持續(xù)升高；溫燥組、涼燥組腸液黏多糖(CS)先升高、后持續(xù)降低；溫燥組RS與CS呈平行減少。為“燥勝則干”中醫(yī)理論，提供了量化檢測指標。王明明等[24]依據(jù)muc5ac與氣道粘液的相關性，采用實時定量熒光PCR法和免疫組化法，分別檢測正常對照組、溫燥Ⅰ組、溫燥Ⅱ組、桑杏湯治療組小鼠氣道m(xù)uc5ac mRNA和蛋白的表達，研究溫燥對BALB/c小鼠氣道m(xù)uc5ac表達的影響，進而探究溫燥影響小鼠氣道粘液分泌的規(guī)律。結果顯示，溫燥Ⅰ組小鼠氣道m(xù)uc5ac mRNA及其蛋白表達明顯高于正常對照組(P<0.01)，溫燥Ⅱ組比溫燥Ⅰ組顯著增多(P<0.01)，提示溫燥可導致氣道粘液分泌增多，為溫燥對小鼠氣道粘液分泌功能的影響提供了實驗依據(jù)。

3.4 燥邪傷津血機制研究 中醫(yī)認為 “精血同源”，燥邪傷津，血液也會受到影響。實驗研究也證明燥證動物模型的血粘度、血液流變學有明顯的改變。丁建中等[25-27]利用人工智能氣候箱，選取昆明種小鼠，依據(jù)“溫度-相對濕度-風”綜合指標，建立涼燥、溫燥小鼠模型并設常溫常濕組、常溫組。分別在第7天和第14天采用血液流變學檢測方法，探究外燥對小鼠紅細胞流變學的影響。與常溫常濕組相比，溫燥組和涼燥組全血粘度增高(P<0.01)。為 “燥勝則干”病機提供實驗依據(jù)。

4 經典方藥反證治療的研究

方藥治療是檢驗中醫(yī)證候的可靠方法，以方測證則是證候模型驗證的一個重要的環(huán)節(jié)。丁建中等[28-30]利用人工智能氣候箱制備小鼠溫燥、涼燥模型，在建立模型的第7天后給予桑杏湯、杏蘇散治療，并設空白組和對照組，在用藥后第5天檢測各組小鼠氣管纖毛運動、呼吸道液以及腸液中的黏多糖、血清以及呼吸道液的抗體、糞便含水率。結果顯示治療組氣道中的黏多糖明顯高于對照組，纖毛運動減慢，氣道和血液中抗體有所增加。用治療燥證經典方藥反治驗證模型，并進一步探求外燥證的機理，也是目前實驗研究的一個途徑。

5 小結

綜上所述，目前外燥動物模型以中醫(yī)病因學說為指導，遵循證候演變規(guī)律從溫燥、涼燥兩個方面進行復制。其動物模型相關機制研究已從整體水平、器官水平、組織水平、細胞水平深入到分子水平，并引入現(xiàn)代免疫學方法。研究內容從中醫(yī)辨證思維出發(fā)，緊扣中醫(yī)理論，圍繞著“燥邪傷人，首先犯肺”、“燥勝則干”、“肺主衛(wèi)氣”、“肺輸布津夜”、“肺外合皮毛”等理論，選擇與燥證病因、病位及病機相關的檢測指標進行研究。對今后開展中醫(yī)藥防治與燥證相關的疾病具有重要意義。

[1]李克成.燥證之研究[D].南京：南京中醫(yī)藥大學,2009:1-45.

[2]楊梅,王雪梅.基于數(shù)據(jù)挖掘的云南燥證證候規(guī)律研究[J].中華中醫(yī)藥學刊物,2013,31(10):2162-2165.

[3]何寬其.類燥證探討[J].中醫(yī)雜志,2009,50(6):569-570.

[4]王彩霞,李德新.論中醫(yī)動物模型研究的思路[J].中國醫(yī)學學報，1997,12(3):45-47.

[5]孫健,鄭瀟瀟,張浩,等.中醫(yī)動物模型研制方法研究進展[J].中獸醫(yī)學雜志,2010(4):54-55.

[6]丁建中.外燥致病機制的實驗研究[D].武漢：湖北中醫(yī)藥大學，2006.

[7]殷濤.外燥傷肺的分子機制研究[D].武漢：湖北中醫(yī)藥大學，2011.

[8]倪圣.細胞因子網絡失衡與外燥傷肺病機的實驗研究[D].荊州：長江大學，2015.

[9] 王明明.外燥小鼠模型的建立與評價[D].武漢：湖北中醫(yī)藥大學,2011.

[10]丁建中,胡利群,杜壓明，等.溫燥對“肺主皮毛”功能影響的實驗研究[J].長江大學學報，2008,5(3):1-2.

[11] 丁建中,龔權,李侃,等.外燥對小鼠氣管、肺與皮膚影響的病理學研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2007,18(3):527-528.

[12]丁建中,龔權,朱慧玲.外燥對小鼠血清與呼吸道液體抗體的影響[J].湖北中醫(yī)學院學報，2005,12,7(4):18-19.

[13]丁建中,龔權,等外燥對小鼠呼吸道分泌功能與抗體的影響[J].長江大學學報(自然版)，2005,2(12):341-351.

[14]張六通,丁建中,王明明,等.外燥對小鼠氣道免疫分子影響的實驗研究[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2011,9(11)：159-160.

[15]胡利群,丁建中,劉國平.外燥對小鼠氣道免疫及分泌功能的影響研究[J].中外醫(yī)療，2015,(21):19-21.

[16]倪圣,丁建中,張六通，等.外燥對氣道中性粒細胞彈性蛋白酶與IL-10的影響[J].北京中醫(yī)藥大學學報，2014,37(2).

[17]張六通,丁建中,李軍川,等.外燥對小鼠肺組織水通道蛋白5表達的影響及意義[J].湖北中醫(yī)學院學報，2010,12(1):3-5.

[18] 丁建中,李軍川,胡利群,等.外燥對小鼠肺組織水通道蛋白1表達的影響[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2010,21(10):2699-2670.

[19] 丁健中,賀尚榮,張燕翔,等.水通道蛋白4在外燥小鼠肺組織表達的實驗研究[J]. 長江大學學報(自然科學版)，2012,7(3):1-28.

[20]丁健中,張六通,李軍川,等.水通道蛋白1、4、5在外燥小鼠肺表達的意義[J]. 時珍國醫(yī)國藥，2012,23(3):764-765.

[21]胡利群,丁建中,王明明,等.外燥對小鼠氣道與大腸功能影響的實驗研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2010,21(5):1233-1234.

[22]丁建中,張六通,黃江榮,等.外燥對兩種品系小鼠氣管纖毛運動影響的意義評價[J]. 時針國醫(yī)國藥,2012,23(7):1958-1959.

[23]丁建中,胡利群,張六通,等.外燥對小鼠氣道“纖毛-黏液毯”御邪屏障影響的實驗研究[J].北京中醫(yī)藥大學學報，2010,33(1):20-40.

[24]王明明,張六通,丁建中,等.外感溫燥對BCLB/C小鼠氣道m(xù)uc5ac表達的影響[J].時針國醫(yī)國藥,2011,20(3):1751-1753.

[25]丁健中,張六通,馬青,等.外燥對小鼠紅細胞流變學的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2006,17(8):1386-1387.

[26]丁建中,龔權,張六通,等.溫燥致病機制的實驗研究[J].中醫(yī)雜志，2007,48(11):1024-1032.

[27]丁建中，張六通,龔權,等.涼燥致病機制的實驗研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2007,18(11)：2636-2637.

[28] 丁建中,張六通,邱幸凡,等.桑杏湯對溫燥小鼠氣管纖毛運動與呼吸道液及免疫功能的影響[J].中藥藥理與臨床，2006,22(5):4-5.

[29]丁建中,龔權,張六通,等. 桑杏湯對溫燥小鼠血清與呼吸道抗體的影響[J].時珍國醫(yī)國藥，2006,17(6):905-906.

[30]丁建中,龔權,張六通,等.杏蘇散對涼燥小鼠肺與大腸功能的影響[J].中藥藥理與臨床，2006,22ZI：20-21.

(編輯：梁志慶)

2016-11-23

云南省應用基礎研究計劃項目(2016FD051)。

王靜平(1990-)，女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向為證侯規(guī)范化。E-mail:1213633873@qq.com

楊梅(1964-)，女，漢族，教授,研究方向為常見疾病的證治規(guī)律研究、民族醫(yī)藥理論研究。E-mail:yangmei1828@126.com

R-332

A

1007-8517(2017)01-0035-03