五虎湯對病毒誘發(fā)幼年哮喘大鼠炎性細胞因子表達影響

帥云飛,李鑫,王孟清,荀春錚,曾慶佳,李雪冰

(湖南中醫(yī)藥大學 1. 第一附屬醫(yī)院兒科，2.中醫(yī)診斷學湖南省重點實驗室，湖南 長沙 410007 )

五虎湯對病毒誘發(fā)幼年哮喘大鼠炎性細胞因子表達影響

帥云飛1,李鑫2,王孟清1,荀春錚1,曾慶佳1,李雪冰1

(湖南中醫(yī)藥大學 1. 第一附屬醫(yī)院兒科，2.中醫(yī)診斷學湖南省重點實驗室，湖南 長沙 410007 )

RSV(respiratory syncytial virus, 呼吸道合胞病毒)感染介導的Th1/Th2、Th17/Treg失衡誘導兒童支氣管哮喘的發(fā)生發(fā)展[1-2]。五虎湯是由麻黃、杏仁、石膏、甘草、細茶葉組成的治療小兒哮喘的經(jīng)典名方。前期研究表明，五虎湯抑制哮喘患兒CD80、CD86及IL-4、IL-5表達，促進IL-2表達[4]。因此，本文擬采用RSV誘導聯(lián)合OVA(ovalbumin, 卵清白蛋白)致敏復制幼年大鼠哮喘模型，研究五虎湯對Th1/Th2、Th17/Treg 介導IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17炎性細胞因子影響，明確其治療病毒誘發(fā)哮喘的作用機制。

1 材料與方法

1.1 受試藥物 五虎湯由本院藥劑科提供。制備方法：6倍水先煎麻黃30 min ，去上沫，納杏仁、石膏、甘草，細茶葉煎1 h，連續(xù)提取2次，分別濃縮至含4.752、2.376、1.188 g生藥·kg-1。

1.2 儀器、試劑及病毒 酶標儀，318C+型，上海沛歐分析儀器有限公司；低溫臺式高速離心機，HR/T 16M型，赫西儀器裝備有限公司。IL-10、IL-12、IFN-γ及IL-17ELISA試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司提供，批號：EK0418、EK0520、EK0978、EK1527)。RSV，武漢大學醫(yī)學部病毒研究所提供。1.3 動物分組及給藥 SPF級SD大鼠60只，♂/♀，體質(zhì)量(60±10)g，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司[許可證號：SCXK(湘)2013-0004]。參照文獻[5]，制備RSV誘導OVA致敏大鼠哮喘模型。造模成功后，分層隨機分為五虎湯高、中、低劑量組、哮喘模型組及陽性對照組，每組10只。五虎湯高、中及低劑量組po給予4.752、2.376、1.188 g·(kg·d)-1藥液，空白對照組、哮喘模型組分別po等容積雙蒸水，陽性對照組po地塞米松片2.4 mg·(kg·d)-1，2次/d，持續(xù)14 d。

1.4 檢測指標 末次給藥后，禁食12 h，處死動物，采集支氣管肺泡灌洗液(BALF)，檢測細胞計數(shù)及分類計數(shù)；取肺組織，行組織病理學檢查；腹主動脈采血， 3 000 r·min-1離心10 min，取血清，ELISA法檢測血清IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17表達情況。

2 結(jié)果

2.1 對肺組織病理影響 模型組可見支氣管壁大量炎性浸潤，平滑肌層增厚，杯狀細胞增生，上皮細胞大量脫落。五虎湯治療后呈劑量依賴性明顯抑制支氣管壁炎性浸潤，平滑肌層恢復正常，少量杯狀細胞分布，上皮細胞少量脫落。

2.2 對BALF細胞計數(shù)及分類計數(shù)影響 模型組白細胞總數(shù)、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞比例均較空白組明顯升高(P<0.01)。五虎湯高、中劑量白細胞總數(shù)、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞均明顯下降(P<0.01，P<0.05)。

2.3 對IFN-γ、IL-12、IL-10、IL-17表達影響 模型組較空白組IFN-γ、IL-12降低，IL-10、IL-17升高(P<0.05)。五虎湯治療后高、中劑量較模型組IFN-γ、IL-12升高，IL-10、IL-17降低(P<0.01，P<0.05)。

3 討論

五虎湯是治療小兒哮喘的經(jīng)典名方，前期研究表明其能抑制呼吸道合胞病毒復制，調(diào)控IL-2、IL-4 、IL-5等炎性因子表達[3，6]。RSV感染介導的Th1/Th2、Th17/Treg失衡是引起兒童支氣管哮喘的始動因素[1-2]，IL-12誘導Th 1細胞產(chǎn)生IFN-γ[7]，而失衡的Th2細胞誘生IL-10，Th17細胞失衡則促進IL-17的大量生成][8]。研究顯示，五虎湯能促進IFN-γ、IL-12表達，抑制IL-10、IL-17表達，并劑量依賴性明顯抑制支氣管壁炎性浸潤，平滑肌層恢復正常。結(jié)果提示，五虎湯能顯著抑制病毒誘發(fā)的幼年大鼠哮喘氣道炎癥，其作用機制可能與其調(diào)節(jié)IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17等表達，使失衡的Th1/Th2、Th1/Treg恢復平衡有關。

(致謝：本實驗在湖南中醫(yī)藥大學中醫(yī)診斷學湖南省重點實驗室進行，感謝實驗室及課題組所有老師的幫助。)

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Effect of Wu-Hu Soup on serum inflammatory cytokines in young rats with virus induced asthma

SHUAI Yun-fei1, LI Xin2, WANG Meng-qing1, XUN Chun-zheng1, ZENG Qing-jia1, LI Xue-bing1

(1.DeptofPaediatrics,TheFirstHospitalofHunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410007,China; 2.HunanProvincialKeyLaboratoryofDiagnosticsinChineseMedicine,HunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410007,China)

五虎湯；呼吸道合胞病毒；幼年哮喘大鼠；IFN-γ；IL-10；IL-12；IL-17

Wu-Hu Soup; respiratory tract virus; young rats with virus induced asthma; IFN-γ;IL-10;IL-12;IL-17

時間：2016-12-27 16:13

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20161227.1613.052.html

2016-09-03,

2016-12-06

湖南省自然科學基金資助項目(No 13JJ3105)；湖南省科技計劃項目(No 2015JC3076)

帥云飛(1980-)，男，主治醫(yī)師，研究方向：中醫(yī)藥診治小兒呼吸疾病的基礎與臨床，E-mail:yuanshuai20063048@163.com; 王孟清(1963-)，男，教授，博士生導師，研究方向：小兒呼吸疾病的中醫(yī)藥防治，通訊作者,E-mail:wmqwmq2009@sina.com; 李 鑫(1986-)，男，助理研究員，研究方向：中藥及復方作用機制，通訊作者,E-mail:lixin20082005@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.01.026

A

1001-1978(2017)01-0145-02

R-332；R289.5；R373.1；R392.12；R725.622.505