血清學(xué)檢測在疫病防控中的應(yīng)用

何振伯 王洪娟 張建平 高 瑜

（天津市寶坻區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，天津 301800）

血清學(xué)檢測在疫病防控中的應(yīng)用

何振伯 王洪娟 張建平 高 瑜

（天津市寶坻區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，天津 301800）

血清學(xué)檢測在動物疫病免疫效果評估、疫病診斷、流行病學(xué)調(diào)查以及動物疫情預(yù)警預(yù)報等方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。本文主要介紹了獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢測的目的，實(shí)際生產(chǎn)中血清的采集制備以及常用的血清學(xué)檢測技術(shù)。

血清學(xué)檢測 應(yīng)用

動物疫病是影響?zhàn)B殖業(yè)快速發(fā)展、危害人民健康和社會安定的重要因素之一。動物疫病，是指動物被病毒、致病菌或寄生蟲感染而發(fā)生的傳染病。對人與動物危害嚴(yán)重，需要采取緊急、嚴(yán)厲的強(qiáng)制預(yù)防、控制、撲滅等措施，否則可能造成重大經(jīng)濟(jì)損失。從世界衛(wèi)生組織的資料顯示，75%的動物疫病可以傳染給人，70%人的疫病至少可以傳染給一種動物。

近些年來，隨著國際國內(nèi)動物疫病對畜牧業(yè)生產(chǎn)、人民身體健康和社會衛(wèi)生安全的危害越來越大，動物疫病免疫及監(jiān)測技術(shù)的用于也越來越廣泛。通過疫病檢測，能夠準(zhǔn)確分析出動物疫病的流行態(tài)勢，同時對其可能造成的危害進(jìn)行預(yù)警預(yù)測，從而有針對性的采取措施進(jìn)行疫病控制，避免疫病暴發(fā)造成的傷害。因此，科學(xué)開展疫病檢測，尤其是開展血清學(xué)檢測，可有效地預(yù)防疫病的發(fā)生，進(jìn)一步提高疫病的防控效果。

1 血清學(xué)檢測的目的

1.1 疫病監(jiān)測預(yù)警預(yù)報

血清學(xué)檢測是疫病監(jiān)測預(yù)警預(yù)報的重要手段之一，通過分批、分期、分階段地對養(yǎng)殖場內(nèi)的家禽進(jìn)行血清學(xué)檢測，可以準(zhǔn)確地了解掌握養(yǎng)殖場內(nèi)家禽的免疫效果、健康狀況，從而制定相應(yīng)的疫病防控措施，提高防控效果。

1.2 免疫評估

養(yǎng)殖場飼養(yǎng)家禽過程中，疫苗免疫是必不可少的一部分，而運(yùn)用血清學(xué)檢測技術(shù)開展疫苗免疫效果評估又是重中之重，血清學(xué)檢測可有效評估疫苗免疫是否可靠、免疫方式是否合理有效、免疫程序是否需要調(diào)整等。天津地區(qū)，各級疫病防控機(jī)構(gòu)每年開展春、秋2次集中采樣檢測和日常月檢測，這些檢測都在動物群體的免疫評估中發(fā)揮了重要作用。

今年，我們在定點(diǎn)示范點(diǎn)跟蹤分批分階段采集了家禽的血清學(xué)樣品進(jìn)行雞新城疫和雞傳染性支氣管炎抗體檢測，根據(jù)檢測結(jié)果指導(dǎo)養(yǎng)殖戶及時對免疫抗體偏低的雞群進(jìn)行補(bǔ)免，確保雞群長期處于較高的免疫保護(hù)內(nèi)。寶坻區(qū)內(nèi)有很多規(guī)?；B(yǎng)殖場都在養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中定期開展血清學(xué)疫病檢測，準(zhǔn)確掌握飼養(yǎng)畜禽的疫病流行狀況，以便及時調(diào)整防控措施，進(jìn)行特定的免疫工作，提高免疫效果，已經(jīng)取得了良好的效果。隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，養(yǎng)殖場戶越來越重視抗體監(jiān)測，有的已經(jīng)深刻認(rèn)識到免疫抗體檢測與評估對制定本場的免疫程序和評定疫苗免疫效果的重要性及開展不同疫苗比對檢測在指導(dǎo)畜牧業(yè)生產(chǎn)中的重要作用。

1.3 修訂免疫程序

家禽的一生要接種很多疫苗，由于各種傳染病的易感日齡不一樣，并且有些疫苗之間存在相互干擾，不同的疫苗免疫后其抗體消長規(guī)律又不同，這就要求養(yǎng)殖場要根據(jù)自己的實(shí)際情況制動適合本場的免疫程序。準(zhǔn)確選擇免疫時間是制定免疫程序的關(guān)鍵，因?yàn)橐呙缧枰诿庖邉游矬w內(nèi)進(jìn)行一定的增殖方可激發(fā)良好的免疫效果。

規(guī)?；B(yǎng)殖場在生產(chǎn)中根據(jù)本場疫情制定符合自己實(shí)際生產(chǎn)需要的免疫程序，同時嚴(yán)格執(zhí)行，同時根據(jù)血清抗體檢測結(jié)果及時調(diào)整免疫程序。但是要充分考慮到雛雞階段母源抗體的影響，最好的方法是通過血清學(xué)檢測來評估母源抗體的實(shí)際效價，進(jìn)一步確定最佳的免疫時間。多方研究和實(shí)踐證明，雛雞體內(nèi)母源抗體水平到臨界值時是免疫最佳時間，如果母源抗體水平較高時免疫，會中和掉母源抗體，導(dǎo)致疫苗免疫失敗。而當(dāng)雛雞體內(nèi)母源抗體過低時再免疫，就會形成一個免疫空擋，無形中加大了感染疫病的風(fēng)險。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中，定期開展血清學(xué)檢測對做好疫病防控是非常必要的，選擇合適的免疫程序，就會大大增加免疫成果的概率，提高抗病水平，降低發(fā)病率，提高經(jīng)濟(jì)效益。

1.4 疫病凈化

通過對動物群體進(jìn)行病原特異性抗體檢測，排除掉免疫產(chǎn)生的抗體，檢測后確診為陽性個體的，進(jìn)行撲殺、深埋等無害化處理，這就是凈化疫病。實(shí)際生產(chǎn)中，通過特異性抗體檢測進(jìn)行動物疫病凈化，縮短了對動物疫病的控制時間，達(dá)到消滅動物疫病的目標(biāo)，全面提升動物疫病防控技術(shù)水平。

2 血清樣品的制備

進(jìn)行血清學(xué)檢測時，首先制備血清樣品。通常采用獸用采血器進(jìn)行采血，用于血清學(xué)檢測的樣品不加抗凝劑，采血量少時可在翅靜脈采血，采血量多時家禽可心臟采血。采血后將采血管傾斜30°～45°角放置，室溫靜置2～4h，待血液完全凝固，血清自然析出，冬季需要保溫，夏季需要降溫，切記采血管不能暴曬和冷凍保存，不能立即離心，確保才幾點(diǎn)額血清樣品不溶血、清亮透明。自然析出的清亮血清用吸管吸出放于塑料帶蓋離心管中，做好標(biāo)記，此時的血清可冷凍保存。

3 常用的血清學(xué)檢測技術(shù)

血清學(xué)檢測技術(shù)是建立在抗原抗體發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的基礎(chǔ)上的檢測技術(shù)，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和提高，血清學(xué)檢測方法也是不斷更新，如凝集試驗(yàn)、瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等，這些血清學(xué)檢測方法已被大多是實(shí)驗(yàn)室熟練掌握并投入使用，最常用的血清學(xué)檢測方法是凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等。

3.1 凝集試驗(yàn)

某些微生物顆粒性抗原（如細(xì)菌、紅細(xì)胞等），或吸附在乳膠、白陶土、離子交換樹脂和紅細(xì)胞的抗原與含有相應(yīng)的特異性抗體的血清混合，在有適當(dāng)電解質(zhì)存在下，抗原與抗體結(jié)合。經(jīng)過一定時間，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊，這種現(xiàn)象稱為凝集。凝集試驗(yàn)用于測定血清中抗體含量時，將血清連續(xù)稀釋后，加等量的抗原；測定抗原含量時，將抗原連續(xù)稀釋后加等量的抗體?？乖贵w反應(yīng)時，出現(xiàn)明顯反應(yīng)終點(diǎn)的抗血清或抗原制劑的最高稀釋度稱為效價或滴度。凝集試驗(yàn)根據(jù)抗原性質(zhì)、反應(yīng)方式可分為直接凝集試驗(yàn)、間接凝集試驗(yàn)、血凝與血凝抑制試驗(yàn)等。血凝與血凝抑制試驗(yàn)是農(nóng)業(yè)部指定的禽流感的血清抗體檢測方法。

3.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

ELISA是當(dāng)前應(yīng)用最廣、發(fā)展最快的一項(xiàng)檢測技術(shù)。ELISA基本原理是將抗原或抗體與某種標(biāo)記酶聯(lián)結(jié)成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，讓受檢樣品和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與樣品中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與樣品中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)反應(yīng)顏色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

許多動物疫病的診斷及監(jiān)測都是通過實(shí)驗(yàn)室檢測手段來實(shí)現(xiàn)，而ELISA方法又是實(shí)驗(yàn)室動物疫病檢測的主要方法之一。ELISA具有高度的敏感性和特異性，與常規(guī)的化學(xué)、生物學(xué)的檢測方法相比，具有操作簡便、靈敏度高、干擾性小、安全性高等特點(diǎn)，在防控動物疫病中發(fā)揮著不可缺少的作用。

當(dāng)前國內(nèi)外建立的ELISA反應(yīng)體系或市售的試劑盒大多應(yīng)用于抗體水平的檢測，通過檢測抗體水平來判斷群體感染狀況或疫苗免疫效果，應(yīng)用ELISA檢測新城疫抗體、雞傳染性支氣管炎抗體、禽白血病抗體、減蛋綜合征抗體等檢測方法均已成熟并應(yīng)用于臨床，這些方法不僅具有很高的敏感性和特異性，并以其操作簡單、檢測樣品量大的優(yōu)勢正逐漸在基層單位普及。

利用ELISA方法定期對畜禽群體進(jìn)行常見病和多發(fā)病的普查，及時清除隱形感染個體，可以防患于未然，最大限度地降低動物疫病帶來的損失，為動物疫病的最終消滅打下良好的基礎(chǔ)。例如，對非免疫群體通過定期檢測，逐步淘汰抗體陽性的個體，對免疫群體應(yīng)適時進(jìn)行抗體檢測，及時進(jìn)行防疫或修訂免疫程序，從根本上根除疫病的蔓延。

目前，國內(nèi)畜禽傳染病還沒有從根本上得到控制，如雞的新城疫、馬立克氏病等仍然頻頻發(fā)生，給畜牧業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。為做好疫病的防控，血清學(xué)檢測以其敏感、特異而廣泛地應(yīng)用于各種疫病的快速診斷和抗體水平檢測中，相信隨著酶標(biāo)記技術(shù)和各種單克隆抗體的出現(xiàn)，血清學(xué)檢測尤其是ELISA檢測技術(shù)將會有更廣闊的應(yīng)用前景。

天津市科委資助項(xiàng)目《蛋雞綠色健康養(yǎng)殖關(guān)鍵技術(shù)集成與應(yīng)用》（15ZXBFNC00140）

何振伯（1973-），男，高級獸醫(yī)師，本科，主要從事動物疫病防控、實(shí)驗(yàn)室檢測及畜牧獸醫(yī)技術(shù)推廣等工作。