缺氧誘導(dǎo)因子-1α在前置胎盤組織中的表達(dá)及臨床意義

胥 數(shù)

（朝陽市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，遼寧 朝陽122000）

缺氧誘導(dǎo)因子-1α在前置胎盤組織中的表達(dá)及臨床意義

胥 數(shù)

（朝陽市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，遼寧 朝陽122000）

目的 檢測缺氧誘導(dǎo)因子 -1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）在前置胎盤組織的表達(dá)水平，分析其臨床意義。方法選取我院產(chǎn)科診治的 121 例前置胎盤患者作為觀察組對象，選舉同期 120 例正常孕婦胎盤組織作為對照組，應(yīng)用免疫組化法和 RT-PCR 法檢測胎盤組織中 HIF-1α 陽性表達(dá)水平，對比分析兩組間 HIF-1α 陽性表達(dá)率和表達(dá)量的差異性。結(jié)果觀察組患者 HIF-1α 陽性表達(dá)率、IOD 均值以及 HIF-1α mRNA/β-actin 比值均顯著高于對照組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，P＜0.05，差異具有顯著性。結(jié)論HIF-1α 在前置胎盤孕婦的胎盤組織中陽性表達(dá)率顯著升高，其可作為早期診斷前置胎盤的指標(biāo)之一。

缺氧誘導(dǎo)因子 -1α；前置胎盤組織；妊娠

HIF-1α作為體內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄激活因子，主要由細(xì)胞應(yīng)激缺氧形成，其能夠通過調(diào)節(jié)種靶基因表達(dá)水平，對血管生成、疾病發(fā)生發(fā)展過程產(chǎn)生重要影響。目前相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)[1-2]胎盤組織中HIF-1α陽性表達(dá)水平與妊娠期疾病具有密切關(guān)聯(lián)。本文通過對比正常胎盤組織和前置胎盤組織中HIF-1α表達(dá)水平的不同，旨在為臨床早期診斷前置胎盤提供新思路，現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象：選取我院產(chǎn)科在2013年11月至2015年10月期間收治的121例前置胎盤孕婦作為觀察組對象，年齡22～41歲，平均年齡（30.41±4.15）歲，孕周35～41周，平均孕周（37.9±2.2）周，選取同期在我院產(chǎn)科進(jìn)行生產(chǎn)的120例正常孕婦作為對照組對象，年齡20～42歲，平均年齡（31.43±4.21）歲，孕周36～42周，平均孕周（38.1±2.4）周，病例選擇標(biāo)準(zhǔn)：①均為初產(chǎn)婦，且選擇剖宮產(chǎn)進(jìn)行生產(chǎn)；②均為單活胎，且孕周超過32周；③觀察組病例產(chǎn)前經(jīng)影像學(xué)檢查確診為前置胎盤；④對照組孕婦經(jīng)全面檢查證實為健康人群；⑤排除合并糖尿病、高血壓、心臟病等基礎(chǔ)疾病的孕婦；⑥排除合并盆腔炎、宮頸炎等婦科疾病者；⑦患方在知情同意的基礎(chǔ)上，自愿參與并配合完成。

1.2 實驗方法

1.2.1 采集標(biāo)本：所有孕婦在驚濤公產(chǎn)將胎盤組織完全娩出后，在胎盤母體面的中央?yún)^(qū)域立即切除1塊組織（大小為10 mm×10 mm×10 mm），應(yīng)用DECP溶液沖洗干凈后放置到-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?，此組織用作檢測RNA水平；在胎盤母體面再另取1塊組織（大小為10 mm×10 mm ×10 mm），應(yīng)用4 ℃生理鹽水將組織沖洗干凈后，應(yīng)用10%中性甲醛溶液浸泡24 h完成固定，常規(guī)進(jìn)行石蠟包埋處理后，連續(xù)切片（切片厚度為5 μm），此塊組織用作免疫組化法檢測。

1.2.2 免疫組化檢測法：采用SP法（即過氧化物酶-抗生物素蛋白鏈菌素）對胎盤組織中HIF-1α表達(dá)水平進(jìn)行檢測，將組織切片進(jìn)行潑辣和脫水處理之后，利用微波修復(fù)抗原，將組織切片放置到0.3%H2O2溶液中浸泡10 min，取出后用PBS（即磷酸鹽緩沖液）反復(fù)沖洗3次，添加兔抗人多克隆抗體（即一抗，福建邁新生物科技公司），將PBS緩沖液作對照，在4 ℃恒溫下靜置一夜。次日取出復(fù)溫至30 ℃，滴加羊抗小鼠IgG抗體二抗（即二抗，福建邁新生物科技公司），靜置15 min，PBS緩沖液沖洗，添加DAB顯色劑（武漢博士德生物科技公司）、復(fù)染、脫水、封片后，放置在顯微鏡下觀察，每張切片選取5個高倍視野，利用ImageS000分析儀采集分析圖像后，測定積分光密度（即IOD值）代表表達(dá)量。

1.2.3 RT-PCR法：RT-PCR法對胎盤組織中的HIF-1α mRNA進(jìn)行檢測，mRNA引物為上海生工生物工程有限公司完成，擴(kuò)增產(chǎn)物片段長度205 bp，擴(kuò)增反應(yīng)條件為：94 ℃下預(yù)變30 min→94 ℃下變性30 s→59 ℃下退火30 s→72 ℃下延伸1 min，在完成35個循環(huán)后在72 ℃下延伸5 min，獲得的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，以HIF-1α和內(nèi)參照條帶之間的灰度值比作為HIF-1α mRNA表達(dá)量。

1.3 陽性評價標(biāo)準(zhǔn)[3]：選取5個高倍鏡頭視野進(jìn)行陽性標(biāo)準(zhǔn)評價，細(xì)胞核著黃色作為陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)著色深度和陽性細(xì)胞比例進(jìn)行評分，無色計0分，淡黃色計1分。棕黃色計2分，棕褐色計3分，陽性比例＜5%計0分，5%～25%計1分，26%～50%計2分，51%～75%計3分，＞75%計4分，兩項評分相加后≤2分為陰性，≥3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理：數(shù)據(jù)分析用SPSS15.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計量資料采用t檢驗分析，計數(shù)資料采用卡方檢驗分析，α=0.05作為數(shù)據(jù)的檢驗水準(zhǔn)，P＜0.05，具有顯著性差異。

2 結(jié) 果

免疫組化結(jié)果顯示，觀察組中共有85例組織為HIF-1α陽性表達(dá)，陽性率為70.83%，IOD值為（204.9±24.5），對照組中共有22例組織為HIF-1α陽性表達(dá)，陽性率為21.67%，IOD值為（113.4± 15.6），RT-PCR檢測結(jié)果顯示觀察組HIF-1α mRNA/β-actin比值為（1.24±0.27），對照組HIF-1α mRNA/β-actin比值為（0.55± 0.12），兩組HIF-1α陽性表達(dá)水平相比經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，P＜0.05，具有顯著性差異。

3 討 論

胎盤前置主要是指在妊娠28周之后胎盤低于胎先露部，其作為妊娠晚期常見疾病之一，是引起妊娠晚期陰道流血的首要原因，如處理不當(dāng)，能夠?qū)δ柑ド踩斐蓢?yán)重負(fù)面影響[4]。在現(xiàn)今醫(yī)學(xué)研究水平中，對于前置胎盤發(fā)生的原因和發(fā)病機(jī)制尚未十分清楚，因此，就前置胎盤進(jìn)行深入研究具有重要的臨床意義。在妊娠期，氧分壓對于滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤、子宮動脈重鑄以及新生血管發(fā)育等具有重要作用，HIF-1α作為HIF-1的重要亞基之一，是人體重要的氧感受和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子，其能夠通過改變把基因表達(dá)水平來調(diào)節(jié)氧張力，從而影響滋養(yǎng)細(xì)胞分化、胎盤血管發(fā)育等過程。正常情況下，在孕早期，由于胚胎滋養(yǎng)細(xì)胞種植等原因?qū)m腔內(nèi)多表現(xiàn)為缺血缺氧狀態(tài)，HIF-1α處于較高水平以提高，胚胎在店環(huán)境中的耐受能力，為滋養(yǎng)細(xì)胞正常發(fā)育提供有利環(huán)境，而隨著滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育成熟，宮腔內(nèi)氧濃度不斷提高，HIF-1α隨著不斷降低。但是HIF-1α過度表達(dá)，則能夠引發(fā)內(nèi)皮素活性增強(qiáng)、胎盤血管重鑄障礙，從而參與前置胎盤、子癇等妊娠期疾病形成過程[5-7]。本實驗結(jié)果顯示前置胎盤孕婦的胎盤組織中HIF-1α陽性表達(dá)水平顯著高于正常孕婦的胎盤組織，表明HIF-1α異常升高與前置胎盤具有重要關(guān)聯(lián)，其可能參與了前置胎盤形成過程?？偠灾琀IF-1α在前置胎盤組織呈異常高表達(dá)，可以將其作為前置胎盤診斷的參考指標(biāo)。

[1]李翠麗,萬俐. HIF-1α及其 靶 基因VEGF在雙 胎輸血綜合征患者胎盤組織中的表達(dá)[J].中國婦幼保健,2015,30(7):1112-1114.

[2]楊曉菊,孫 玲 玲,張萌,等.糖尿病患者妊娠后胎盤組織缺氧誘導(dǎo)因子-1α及內(nèi)皮素-1的表達(dá)及與妊娠結(jié)局關(guān)系[J].中華實用診斷與治療雜志,2014,28(1):15-17.

[3]嚴(yán)小麗,陳誠,常青,等.兇險性前置胎盤20例臨床分析[J].實用婦產(chǎn)科雜志,2013,29(9):704-707.

[4]Jang WK,Lim SY,Park JC,et al.Surgical impact on serum anti-Mullerian hormone in women with benign ovarian cyst: A prospective study[J].Obstet Gynecol Sci,2014,57(2):121-127.

[5]謝家濱.缺氧誘導(dǎo)因子-1α在 前置胎盤患者胎盤組織中的表達(dá)及意義[J].海南醫(yī)學(xué),2012,23(13):37-38.

[6]La MA,Sunkara SK.Individualization of controlled ovarian stimulation in IVF using ovarian reserve markers: from theory to practice[J].Hum Reprod Update,2014,20(1):124-140.

[7]呂艷關(guān),臧 曉 娟,范廣來,等.胎 盤組織缺氧誘導(dǎo)因子-1α的 表 達(dá)和血管內(nèi)皮生長因子及其受體-1水平在子癇前期的作用研究[J].中華臨床醫(yī)師雜志(電子版),2013,7(11):116-117.

R714.56

B

1671-8194（2017）02-0130-02