干擾素α治療慢性乙型肝炎患者外周血穿孔素-顆粒酶B關(guān)聯(lián)性的研究

王琳 丁楠 趙亮 張書杰 杜景華 金德龍

慢性乙型肝炎作為一種難治性疾病, 細(xì)胞凋亡在其發(fā)病機(jī)制中的作用受到關(guān)注, 而細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)和自然殺傷細(xì)胞(NK)在肝細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要作用［1］。由于干擾素α具有抗病毒和免疫功能雙重機(jī)制, 目前, 其已經(jīng)廣泛用于肝病治療［2］。本課題通過動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)應(yīng)用干擾素α治療的慢性乙型肝炎患者在治療前、治療中和治療后外周血淋巴細(xì)胞穿孔素-顆粒酶B基因和蛋白水平的變化, 結(jié)合臨床,動(dòng)態(tài)分析觀察其與不同免疫應(yīng)答的關(guān)聯(lián)性, 以期闡明與之相關(guān)的免疫學(xué)及抗病毒活性的機(jī)理?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院在2015年12月～2016年5月間收治的20 例HBeAg陽(yáng)性慢性乙型肝炎患者為A組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《慢性乙型肝炎防治指南》［3］的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②治療前6個(gè)月內(nèi)未接受免疫調(diào)節(jié)劑和抗病毒治療；③治療前谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)≥2×ULN。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并丙型肝炎病毒(HCV)、人類免疫缺陷病毒(HIV)重疊感染；②藥物性肝病、酒精性肝病、自身免疫性肝??；③自身免疫性疾病、精神疾病、惡性腫瘤；④妊娠或哺乳期婦女。同時(shí)選取同期來院進(jìn)行健康體檢的正常健康者20例為C組, 20例非活動(dòng)期HBsAg攜帶者為B組。其中A組女10 例, 男10 例, 年齡30～70歲,平均年齡(48.5±7.2)歲；B組女11例, 男9例, 年齡31～69歲,平均年齡(49.5±6.6)歲；C組女9例, 男11例, 年齡30～69歲,平均年齡(49.1±6.7)歲。三組研究對(duì)象性別、年齡等一般資料比較, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 治療方法 A組患者給予PEG-IFNα-2b［商品名：佩樂能, SP (Brinny) Company, 注冊(cè)證號(hào)S20120064］治療, 劑量1.0 μg/kg, 1次/周, 皮下注射 , 療程為48周。

1.3 觀察指標(biāo) 采用real-time PCR和Western-blot方法動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)三組研究對(duì)象的外周血淋巴細(xì)胞穿孔素-顆粒酶B基因和蛋白的表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組研究對(duì)象治療前外周血淋巴細(xì)胞穿孔素-顆粒酶B基因和蛋白表達(dá)水平比較 A組外周血淋巴細(xì)胞穿孔素基因表達(dá)水平為(31.54±12.43)、 顆粒酶B基因表達(dá)水平為(59.74±21.57), 穿孔素蛋白表達(dá)水平為(19.53±8.53)、顆粒酶B蛋白表達(dá)水平為(20.58±9.43)；B組外周血淋巴細(xì)胞穿孔素基因表達(dá)水平為(48.74±16.53)、顆粒酶B基因表達(dá)水平為(77.56±25.96), 穿孔素蛋白表達(dá)水平為(27.45±9.36)、顆粒酶B蛋白表達(dá)水平為(30.36±10.81)；C組外周血淋巴細(xì)胞穿孔素基因表達(dá)水平為(61.54±19.39)、顆粒酶B基因表達(dá)水平為(83.47±28.64), 穿孔素蛋白表達(dá)水平為(33.56±13.62)、顆粒酶B蛋白表達(dá)水平為(36.84±10.73)。A組外周血淋巴細(xì)胞穿孔素-顆粒酶B基因及蛋白的表達(dá)水平均顯著低于B組、C組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；B組外周血淋巴細(xì)胞穿孔素-顆粒酶B基因及蛋白的表達(dá)水平均顯著低于C組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 A組治療前后外周血淋巴細(xì)胞穿孔素-顆粒酶B基因和蛋白表達(dá)水平比較 A組治療前、治療后24周、治療后48周穿孔素基因表達(dá)水平分別為(31.54±12.43)、(37.26±13.63)、(45.64±16.86), 顆粒酶B基因表達(dá)水平分別為(59.74±21.57)、(63.65±23.44)、(75.74±23.75), 穿孔素蛋白表達(dá)水平分別為 (19.53±8.53)、(23.65±9.25)、(27.35±10.21), 顆粒酶B蛋白表達(dá)水平分別為 (20.58±9.43)、(24.84±10.77)、(29.65±11.23)。與治療前比較, 治療后24周及48周A組外周血淋巴細(xì)胞穿孔素-顆粒酶B基因和蛋白的表達(dá)水平均顯著升高,且治療后48周顯著高于治療后24周, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

慢性乙型肝炎是一種難治性疾病, CTL和NK在肝細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要作用。而穿孔素和顆粒酶B是CTL和NK的重要效應(yīng)物質(zhì), 外周血淋巴細(xì)胞穿孔素-顆粒酶B的表達(dá),實(shí)質(zhì)上反映了CTL和NK細(xì)胞對(duì)乙型肝炎病毒-脫氧核糖核酸(HBV DNA)的清除能力, 外周血淋巴細(xì)胞穿孔素-顆粒酶B的表達(dá)增強(qiáng), 有助于機(jī)體清除HBV DNA［4］。近年來, 臨床研究通過動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)HBV DNA、HBeAg、HBsAg等指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化治療, 以期取得更好的療效并盡量減少病毒變異及其他不良反應(yīng)。同時(shí), 尋找預(yù)測(cè)抗病毒治療療效指標(biāo)的探索也在不斷深入, 本研究結(jié)果顯示, A組外周血淋巴細(xì)胞穿孔素-顆粒酶B基因及蛋白的表達(dá)水平均顯著低于B組、C組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；B組外周血淋巴細(xì)胞穿孔素和顆粒酶B基因及蛋白的表達(dá)水平均顯著低于C組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。且給予干擾素α治療后, 與治療前比較, 治療后24周及48周A組外周血淋巴細(xì)胞穿孔素-顆粒酶B基因和蛋白的表達(dá)水平均顯著升高, 且治療后48周顯著高于治療后24周, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。研究發(fā)現(xiàn)慢性乙型肝炎患者的HBV特異性CTL在體外給予抗原肽刺激后不能增殖或增殖能力下降［5］。推測(cè)由于干擾素α具有抗病毒和免疫功能雙重機(jī)制, 在清除HBV 的過程中, CTL和NK細(xì)胞是起主要作用的免疫效應(yīng)細(xì)胞。激活的CTL可釋放一系列毒素, 包括穿孔素、蛋白酶等細(xì)胞毒素。穿孔素和顆粒酶B相互間可起協(xié)調(diào)作用, 啟動(dòng)靶細(xì)胞凋亡過程［6-8］。

綜上所述, 干擾素α治療慢性乙型肝炎的機(jī)制是通過上調(diào)穿孔素-顆粒酶B介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡通路而發(fā)揮抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用, 因此, 穿孔素-顆粒酶B可以作為評(píng)價(jià)抗病毒治療療效的預(yù)測(cè)指標(biāo), 為臨床醫(yī)生提供治療指導(dǎo)。

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