廣東紫珠莖和葉乙醇水提取物的乙酸乙酯溶性部位化學(xué)成分研究(Ⅱ) △

陳岡，付輝政，戴冕，馮童童，王棟

(1.江西省人民醫(yī)院，江西 南昌 330006；2.江西省藥品檢驗檢測研究院 江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330046)

·基礎(chǔ)研究·

廣東紫珠莖和葉乙醇水提取物的乙酸乙酯溶性部位化學(xué)成分研究(Ⅱ)△

陳岡1，付輝政2*，戴冕2，馮童童2，王棟2*

(1.江西省人民醫(yī)院，江西 南昌 330006；2.江西省藥品檢驗檢測研究院 江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330046)

目的：研究廣東紫珠CallicarpakwangtungensisChun莖和葉的70%乙醇水提取物的乙酸乙酯萃取部位的化學(xué)成分。方法：利用硅膠、ODS、Sephadex LH-20、MPLC等柱色譜方法進(jìn)行化合物的分離純化，根據(jù)化合物的薄層色譜和波譜分析方法及文獻(xiàn)資料查詢來進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：從廣東紫珠乙酸乙酯溶性部位分離得到8個化合物，分別為：烏藥倍半萜內(nèi)酯D(1)，丁香酸(2)，黑麥草內(nèi)酯(3)，荊芥內(nèi)酯(4)，4-羥基苯甲酸(5)，4-羥基苯甲醛(6)，日本金粟蘭內(nèi)酯A(7)，1R，8-二羥基薄荷醇(8)。結(jié)論：化合物1、3～8為首次從該植物中分離得到。

廣東紫珠；馬鞭草科；化學(xué)成分

廣東紫珠CallicarpakwangtungensisChun為馬鞭草科(Verbenaceae)紫珠屬(CallicarpaL.)植物，別名萬年青、珍珠風(fēng)、臭常山、老鴉飯等。灌木，高約2 m，主要分布于浙江、江西、福建、湖北、湖南、貴州、福建、廣東等地，生于海拔300～1600 m的山坡林中或灌木叢中[1]。廣東紫珠在民間習(xí)稱“紫珠草”，在江西萍鄉(xiāng)地區(qū)民間沿用已久，是20世紀(jì)70 年代中草藥運動發(fā)掘出來的藥物[2]。廣東紫珠具有清熱解毒、涼血止血、消炎生肌等功效，主治偏頭風(fēng)痛、吐血、跌打腫痛、外傷出血等[3]。該植物在民間主要用于止血療傷，多數(shù)以莖葉水煎內(nèi)服或研末外敷。目前，國內(nèi)外學(xué)者報道了廣東紫珠主要含有黃酮苷[2，4-6]、苯丙素糖苷[2]、三萜[2，5-7]、酚酸[2，4-5]等類化合物。在前期研究基礎(chǔ)上，繼續(xù)對其化學(xué)成分進(jìn)行研究。利用各種色譜技術(shù)從廣東紫珠莖和葉的70%乙醇水提物的乙酸乙酯溶性部位分離鑒定了8個單體化合物，分別為：烏藥倍半萜內(nèi)酯D(1)，丁香酸(2)，黑麥草內(nèi)酯(3)，荊芥內(nèi)酯(4)，4-羥基苯甲酸(5)，4-羥基苯甲醛(6)，日本金粟蘭內(nèi)酯A(7)，1R，8-二羥基薄荷醇(8)?；衔?、3～8均為首次從該植物中分離得到。

1 儀器與材料

Varian UNITY INOVA 600超導(dǎo)核磁共振儀(美國Varian公司)；MicromassZabSpec質(zhì)譜儀(美國Micromass公司)；島津2010系列高效液相色譜儀(日本島津公司)；Buchi中壓液相制備色譜儀(瑞士步琪公司)；島津20-AD型制備高效液相色譜儀；C18反相填料為日本YMC產(chǎn)品；Sephadex LH-20(瑞典Amersham Biosciences 公司)；Sartorius BP211D型電子天平(德國賽托利斯集團(tuán))；UV-260分光光度計(日本島津公司)；柱色譜硅膠(200～300目)、薄層色譜硅膠(青島海洋化工廠)；水為娃哈哈純凈水，氘代試劑DMSO-d6(美國劍橋公司CIL)；其他試劑均為分析純。

廣東紫珠原藥材采自江西萍鄉(xiāng)，經(jīng)江西省藥品檢驗檢測研究院周國平主任中藥師鑒定為馬鞭草科植物廣東紫珠CallicarpakwangtungensisChun的干燥枝及葉。標(biāo)本保存在江西省藥品檢驗檢測研究院中藥標(biāo)本室。

2 提取與分離

廣東紫珠的莖和葉干藥材150 kg，粉碎，用6倍量70%乙醇水浸泡4 h，加熱回流提取3次，每次2 h，濃縮至浸膏40 L，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。萃取液分別減壓濃縮至干，得石油醚溶性部分(23.2 g)、乙酸乙酯溶性部分(312 g)和正丁醇溶性部分(521 g)。將乙酸乙酯溶性部分用適量甲醇溶解后，用1∶1.5的硅膠拌樣，經(jīng)正相硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯(8∶1)為洗脫劑，依次接下14份500 mL洗脫液及8份切得干柱組分Fr.1～Fr.22。Fr.8(7.2 g)以三氯甲烷-甲醇(30∶1～2∶1)為洗脫劑進(jìn)行正相硅膠柱色譜，經(jīng)薄層色譜檢視，合并相近的組分，得6個組分(Fr.8-1～Fr.8-6)。Fr.8-5(2.1 g)經(jīng)中壓制備液相色譜，以甲醇-水(20∶80～80∶20)梯度洗脫，經(jīng)高效液相色譜檢測后，合并為7個部分(Fr.8-5-1～Fr.8-5-7)，F(xiàn)r.8-5-3(15.1 mg)經(jīng)反相高效制備液相色譜，以甲醇-水(30∶70)(7 mL·min-1)為流動相，得到化合物1(7.4 mg)。Fr.8-5-4(120 mg)經(jīng)反相高效制備液相色譜，以乙腈-0.1%三氟乙酸(21∶79)(7 mL·min-1)為流動相，得到化合物2(12.5 mg)、3(10.6 mg)和4(6.3 mg)。Fr.14 (7.6 g)以三氯甲烷-甲醇(25∶1～2∶1)為流動相進(jìn)行正相硅膠柱色譜，經(jīng)薄層色譜檢視，合并相近的組分，得8個組分(Fr.14-1～14-8)。Fr.14-6(2.5g)經(jīng)中壓制備液相色譜，以甲醇-水(20∶80～80∶20)梯度洗脫，經(jīng)高效液相色譜檢測后，合并為7個部分(Fr.14-6-1～14-6-7)，F(xiàn)r.14-6-4(10.3 mg)經(jīng)反相高效制備液相色譜，以甲醇-水(26∶74)(7 mL·min-1)為流動相，得到化合物5(6.6 mg)，F(xiàn)r.14-6-5 (121 mg)經(jīng)反相高效制備液相色譜，以乙腈-0.1%三氟乙酸(19∶81)(7 mL·min-1)為流動相，得到化合物6(9.2 mg)和7(15.6 mg)。Fr.14-6-6 (221mg)經(jīng)SephadexLH-20柱色譜，以95%的甲醇水洗脫，得到5個部分(Fr.14-6-6-1～14-6-6-5)，F(xiàn)r.14-6-6-3(70.8 mg)經(jīng)反相高效制備液相色譜，以乙腈-0.1%三氟乙酸(17∶83)(7 mL·min-1)為流動相，得到化合物8(12.2 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色無定形粉末(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：285.11[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：1.31(3H，s，CH3-14)，1.77(3H，s，CH3-13)，1.94(3H，d，J=6.0 Hz，CH3-15)，2.17 (1H，d，J=12.0 Hz，Hα-9)，2.56(2H，m，H-2)，3.19(1H，d，J=12.0 Hz，Hβ-9)，3.89(1H，m，H-1)，5.82(1H，brs，H-3)，6.63(1H，s，H-6)，9.14(1H，s，8-OH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：74.7(C-1)，33.6(C-2)，130.7(C-3)，132.1(C-4)，153.0(C-5)，113.2(C-6)，156.1(C-7)，103.1(C-8)，44.3(C-9)，43.1(C-10)，118.6(C-11)，173.6(C-12)，8.6(C-13)，17.4(C-14)，20.0(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)基本一致[8]，故鑒定化合物1為烏藥倍半萜內(nèi)酯D，為首次從該植物中分離得到。

化合物2：白色無定形粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：199[M+H]+，221[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：3.80(6H，s，7-OCH3，8-OCH3)，7.20(2H，s，H-2，6)，9.16(1H，s，4-OH)，12.55(1H，s，9-COOH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：167.2(C-7)，147.4(C-3，5)，140.2(C-4)，120.4(C-1)，106.9(C-2，6)，56(7，8-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)基本一致[9]，故鑒定化合物2為丁香酸。

化合物3：白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：219[M+Na]+，195[M-H]-；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：1.19(3H，s，CH3-12)，1.38(3H，s，CH3-11)，1.63(1H，dd，J=13.3，4.0 Hz，Hα-2)，1.42(1H，dd，J=14.1，3.7 Hz，Hβ-2)，1.67(3H，s，9-CH3)，2.29(1H，dt，J=13.3，2.6 Hz，Hα-4)，1.87(1H，dt，J=14.1，2.6 Hz，Hβ-4)，4.08(1H，m，H-3)，4.98(1H，s，3-OH)，5.78(1H，s，H-6)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：183.5(C-8)，171.5(C-6)，112.6(C-7)，87.0(C-5)，65.3(C-3)，47.1(C-2)，45.8(C-4)，36.1(C-1)，30.9(C-11)，27.3(C-9)，26.7(C-12)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)基本一致[10]，故鑒定化合物3為黑麥草內(nèi)酯，為首次從該植物中分離得到。

化合物4：淺黃色油狀物，ESI-MSm/z：205[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：0.90(3H，d，J=6.6 Hz，10-CH3)，0.94 (1H，dd，J=12.7，4.0 Hz，Hα-5)，1.10(1H，m，H-6)，1.70(3H，s，9-CH3)，1.85(2H，m，H-1)，2.21(2H，m，H-2)，2.67(1H，dd，J=13.6，2.2 Hz，Hβ-5)，3.34(s，11-OH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：35.1(C-1)，24.4(C-2)，161.5(C-3)，104.1(C-4)，46.3(C-5)，29.3(C-6)，120.1(C-7)，172.3(C-8)，8.4(C-9)，21.4(C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)基本一致[11]，故鑒定化合物4為荊芥內(nèi)酯，為首次從該植物中分離得到。

化合物5：白色無定形粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：139[M+H]+，161[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：6.82(2H，d，J=8.6 Hz，H-3，5)，7.78(2H，d，J=8.6 Hz，H-2，6)，10.25(1H，brs，4-OH)，12.41(1H，brs，7-COOH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：170.0(C-7)，163.2(C-4)132.9(C-2，6)，122.6(C-1)，115.6(C-3，5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)基本一致[9]，故鑒定化合物5為4-對羥基苯甲酸，為首次從該植物中分離得到。

化合物6：白色無定形粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：123[M+H]+，121[M-H]-；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：6.93(2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5)，7.76(2H，d，J=8.6 Hz，H-2，6)，9.79(1H，brs，7-CHO)，10.61(1H，brs，4-OH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：191.5(C-7)，163.8(C-4)，132.6(C-2，6)，128.9(C-1)，116.3(C-3，5)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)基本一致[9]，故鑒定化合物6為4-對羥基苯甲醛，為首次從該植物中分離得到。

化合物7：白色無定形粉末(甲醇)，ESI-MSm/z：249[M+H]+，271[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：1.08(3H，s，14-CH3)，1.43(1H，d，J=12.1 Hz，Hβ-9)，1.47(3H，s，15-CH3)，1.51(3H，s，13-CH3)，2.24(1H，m，H-2)，2.30(1H，m，H-2)，2.35(1H，brt，J=11.7 Hz，Hβ-6)，2.64 (1H，dd，J=10.5，10.9 Hz，Hα-6)，2.84(1H，d，J=12.5 Hz，Hα-9)，2.86(1H，brd，J=12.1 Hz，H-5)，3.36(1H，dd，J=7.7，7.0 Hz，H-1)，4.70(1H，brs，H-3)，7.9(1H，s，8-OH)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：74.0(C-1)，32.3(C-2)，121.1(C-3)，133.0(C-4)，48.2(C-5)，23.5(C-6)，161.2(C-7)，104.1(C-8)，46.7(C-9)，38.3(C-10)，120.7(C-11)，171.7(C-12)，7.9 (C-13)，9.8(C-14)，20.7(C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)基本一致[12]，故鑒定化合物7為日本金粟蘭內(nèi)酯A，為首次從該植物中分離得到。

化合物8：白色無定形粉末(甲醇)，EI-MSm/z：211[M+Na]+，187[M-H]-；1H-NMR(600 MHz，DMSO-d6)δ：0.82(3H，s，10-CH3)，0.83(3H，s，9-CH3)，1.10(3H，s，7-CH3)，1.26(2H，m，H2-6)，1.39(1H，m，H-4)，1.46(1H，m，H-5)，1.65(1H，dt，J=12.8，3.9 Hz，H-3)，1.77(2H，m， H2-2)；13C-NMR(150 MHz，DMSO-d6)δ：73.6(C-1)，49.1(C-2)，70.3(C-3)，55.8(C-4)，17.3(C-5)，39.5(C-6)，17.4(C-7)，74.3(C-8)，30.1(C-9)，29.7(C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)基本一致[13]，故鑒定化合物8為1R，8-二羥基薄荷醇，為首次從該植物中分離得到。

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ChemicalConstituentsofEthylAcetate-solublePartsinAqueousEthanolicExtractofStemsandLeafofCallicarpakwangtungensisChun(Ⅱ)

CHEN Gang1，F(xiàn)U Huizheng2*，DAI Mian2，F(xiàn)ENG Tongtong2，WANG Dong2*

(1.Jiangxi Provincal People’s Hospital，Nanchang 330006，China；2.Jiangxi Provincial Institute for Drug Control，Jiangxi Provincial Engineering Research Center for Drug and Medical Device Quality，Nanchang 330046，China)

Objective：To study the chemical constituents of ethyl acetate-soluble parts in the 70% aqueous ethanolic extract of the stems and leaf ofCallicarpakwangtungensisChun.Methods：The chemical constituents were isolated and purified by chromatographic column on silica gel，ODS，Sephadex LH-20 and MPLC.Their structures were elucidated by thin layer chromatographic analysis，spectroscopic evidence and compared with those in literatures.Results：Eight compounds were isolated from ethyl acetate soluble part of the 70% aqueous ethanolic extract，whose structures were elucidated as linderagalactone D(1)，syringic acid(2)，loliolide(3)，schizonepetin (4)，4-hydroxybenzoic acid (5)，4-hydroxybenzaldehyde (6)，chlojaponilactone A (7)，1R，8-dihydroxymenthol (8).Conclusion：Compounds1、3-8were isolated from this plant for the first time.

CallicarpakwangtungensisChun；Verbenaceae；chemical constituents

國家自然科學(xué)基金(81460589)

] 付輝政，助理研究員，研究方向：中藥活性成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，E-mail：fhzfhz620@sohu.com；王棟，主任中藥師，研究方向：中藥活性成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，Tel：(0791)86258662，E-mail：jxdcwd@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.8.013

2016-12-05)

*[