明黨參根皮中異歐前胡素的體內(nèi)抗腫瘤活性研究

王萌

摘要：目的：研究明黨參根皮中異歐前胡素的體內(nèi)抗腫瘤作用。方法：異歐前胡素設三個劑量組，低劑量組（0.2mg·kg-1）、中劑量組（0.4mg·kg-1）、高劑量組（0.8mg·kg-1），陽性藥物組（環(huán)磷酰胺30mg·kg-1），采用移植性腫瘤模型的方法，觀察實體瘤生長情況，并計算各組抑瘤率。結果：異歐前胡素低、中、高劑量組的抑瘤率分別為28.67%、59.29%、66.38%，陽性藥物組的抑瘤率為66.93%，但對小鼠免疫器官有損傷。結論：異歐前胡素對小鼠肝癌移植瘤有明顯的抗腫瘤作用，并對機體免疫器官有保護作用。

Abstract： Objective： To study anti-tumor activity of isoimperatorin in the root bark of Changium smyrnioides Wolff in vivo. Methods： There are three dose groups of isoimperatorin， low dose group （0.2mg·kg-1）， middle dose group （0.4mg·kg-1）， high dose group （0.8mg·kg-1）； Positive drug group （cyclophosphamide 30mg·kg-1）. This research uses the method of transplanted tumor model， to observe the growth of solid tumor， and calculate the anti-tumor rate of each group. Results： The anti-tumor rates of isoimperatorin in low， middle， high dose group are 28.67%， 59.29%， 66.38%； anti-tumor rate of the positive drug group is 66.93%， but the immune organs of mice are damaged. Conclusion： Isoimperatorin has obvious anti-tumor effect on liver cancer transplanted tumor in mice， and has a protective effect on immune organs.

關鍵詞：異歐前胡素；體內(nèi)抗腫瘤；免疫器官

Key words： isoimperatorin；anti-tumor in vivo；immune organ

中圖分類號：R284 文獻標識碼：A 文章編號：1006-4311（2016）36-0213-03

0 引言

明黨參Changium smyrnioides Wolff 是我國著名的特產(chǎn)藥用植物之一，其刮去外皮的根為名貴藥材，收載于《中國藥典》，具有補氣生津、潤肺化痰、平肝和胃、消腫解毒的功效[1]。由于其野生資源逐年減少，1984年被列為國家珍稀瀕危保護植物[2]。目前國內(nèi)外對明黨參根、莖葉、果實的研究已有文獻報道[3-5]，但對其加工廢棄的根皮的研究尚未見報道。前期本課題組從明黨參根皮中分離得到五種呋喃香豆素類成分，并對其進行體外抗腫瘤活性研究，得出異歐前胡素的效果最顯著。為進一步探討異歐前胡素在體內(nèi)的抗腫瘤活性，本研究采用移植性腫瘤模型，通過抽取腹水瘤小鼠體內(nèi)腫瘤細胞接種至小鼠腋下的方式，連續(xù)腹腔注射給藥10d后處死小鼠，剝離腫瘤組織，觀察實體瘤生長情況，初步探索異歐前胡素的體內(nèi)抗腫瘤作用。

1 材料、儀器與試劑

1.1 實驗材料

異歐前胡素由本實驗室從明黨參根皮中分離得到，它的結構通過1H-NMR，13C-NMR和MS確定，并且通過液相色譜分析其純度均大于98%。

實驗動物：昆明種小鼠70只，雌雄各半，體重20±2g，由上海市實驗動物中心提供（動物合格證號：SCXK滬2007-0005）。

腫瘤瘤株：小鼠移植性肝癌細胞株H22，為本校保存細胞株。

陽性藥：環(huán)磷酰胺，天津金世制藥有限公司，國藥準字H12021006。

1.2 主要儀器和試劑

電子天平：YP601N，上海精密科學儀器有限公司；

電子分析天平：AY220，SHIMADZU CORPORATION公司；

臺式離心機：TGL-16B，上海安亭科學儀器廠；

全自動生化儀：Dimension Xpand，美國杜邦公司；

全自動血液分析儀：ADVIA 120，Bayer公司；

無菌生理鹽水：安徽豐原藥業(yè)股份有限公司，批號110126M5；

解剖剪、鑷子、無菌注射器、灌胃針及離心管等均為市售可得。

2 實驗方法

參照《抗腫瘤藥物藥效學指導原則》和《藥理實驗方法學》所述方法[6，7]，進行以下設計。

2.1 供試樣品的配制

稱取異歐前胡素0.00811g溶于100ml無菌生理鹽水，得到高劑量組濃度為80μg·ml-1，分別依次2倍稀釋成中劑量組濃度為40μg·ml-1，低劑量組濃度為20μg·ml-1。

陽性藥環(huán)磷酰胺適量溶于無菌生理鹽水，得到濃度為3mg·mL-1的溶液。

2.2 接種

無菌條件下，取生長7d的肝癌H22腹水型小鼠頸椎脫臼處死，置超凈工作臺，用無菌空針吸取乳白色腹水，用無菌生理鹽水稀釋，混合均勻制備瘤細胞懸液，調(diào)整腫瘤細胞濃度為1×107個/ml備用。取昆明種小鼠70只，右前肢腋窩下常規(guī)消毒，每只小鼠皮下注射瘤細胞懸液0.2ml。

2.3 分組及給藥

接種24h后將小鼠按體重隨機分為5組，每組14只，分別為：陰性對照組、異歐前胡素低、中、高三個劑量組和陽性藥物組。異歐前胡素三個劑量組給藥劑量分別為：0.2mg·kg-1、0.4mg·kg-1、0.8mg·kg-1，陽性藥物組給藥劑量為30mg·kg-1，陰性對照組給與同等體積的生理鹽水，以上各組均采取腹腔注射，給藥容積為0.1ml/10g，每天1次，連續(xù)給藥10d，并記錄小鼠每天體重。

2.4 指標測定

末次給藥后24h，頸椎脫臼處死小鼠，立即進行解剖，觀察主要臟器，剝離瘤體、脾臟、胸腺，用濾紙吸干組織液后，分別稱重，并計算各組抑瘤率和各器官指數(shù)。

抑瘤率=（對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重）/對照組平均瘤重×100%

脾指數(shù)測定：脾臟切取后濾紙吸干表面水分后稱其濕重，計算脾指數(shù)：脾指數(shù)（spleen index）=脾臟重量（g）/體重（g）×100%。

胸腺指數(shù)測定：胸腺切取后濾紙吸干表面水分后稱其濕重，計算胸腺指數(shù)：胸腺指數(shù)（thymus index）=胸腺重量（g）/體重（g）×100%。

2.5 數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)應用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計學處理，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差（x±s）表示，各組率的比較采用t檢驗；P<0.05時，有統(tǒng)計學意義，差異顯著；P<0.01時，差異非常顯著。

3 結果與討論

3.1 給藥期間各實驗組對小鼠體重的影響

給藥期間，陽性藥環(huán)磷酞胺組小鼠的體重于第五天開始出現(xiàn)下降趨勢，并于之后幾天持續(xù)明顯低于其它各組，說明30mg·kg-1環(huán)磷酞胺對小鼠的正常生理功能具有毒副作用，導致實驗小鼠體重明顯下降；異歐前胡素的各劑量組小鼠的體重逐日上升，表明異歐前胡素在給藥劑量范圍內(nèi)對機體的正常生長無明顯毒副作用。結果見表1和圖1。

3.2 異歐前胡素對小鼠移植性肝癌（H22）的抑制作用

實驗結果顯示，異歐前胡素低、中、高劑量組對移植性肝癌（H22）均有明顯的抑制作用，抑瘤率分別為28.67%、59.29%、66.38%，異歐前胡素低劑量組與陰性對照組比較有顯著性差異（P<0.05）；異歐前胡素中、高劑量組與陰性對照組比較有極顯著性差異（P<0.01）；陽性組抑瘤率為66.93%，與陰性對照組比較有極顯著性差異（P<0.01）。結果見表2、圖2和圖3。

3.3 異歐前胡素對移植性H22肝瘤小鼠免疫器官的影響

與陰性對照組比較，陽性藥環(huán)磷酞胺顯著降低了小鼠胸腺和脾臟的免疫器官指數(shù)，且具有極顯著性差異（P<0.01），這表明該藥毒副作用非常強，對機體胸腺和脾臟造成了極大傷害。與環(huán)磷酞胺相比，異歐前胡素的各劑量組均顯著提高了胸腺指數(shù)和脾指數(shù)，差異均達到極顯著性水平（P<0.01）。與陰性對照組比較，異歐前胡素的各劑量組的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)相差不大，沒有統(tǒng)計學差異，表明異歐前胡素對小鼠免疫器官具有保護作用。結果見表3、圖4和圖5。

4 小結

近年來，隨著中藥現(xiàn)代化研究的不斷深入，從天然植物中尋找抗腫瘤藥物已經(jīng)成為新藥研究開發(fā)的一個新領域，呋喃香豆素類成分是其中一個方向。Kim YK等[8]在體外抗腫瘤實驗中發(fā)現(xiàn)異歐前胡素對人肺癌細胞A549、人卵巢癌細胞SK-OV-3等均具有不同程度的抑制作用，并呈劑量依賴性，但對其體內(nèi)抗腫瘤活性研究尚未見報道。

本研究在前期體外實驗研究的基礎上，首次采用移植性腫瘤模型，初步探索了異歐前胡素在體內(nèi)抗腫瘤中的作用。實驗結果表明不同劑量小組異歐前胡素對小鼠肝癌H22實體瘤均表現(xiàn)出良好的抑制生長作用，并呈一定的劑量依賴性，低、中、高劑量組對H22的抑瘤率分別為28.67%、59.29%、66.38%。陽性藥環(huán)磷酰胺對小鼠胸腺和脾臟造成了極大傷害，異歐前胡素則對小鼠免疫器官有保護作用。本研究結果為充分利用明黨參加工廢棄的根皮提供了科學依據(jù)。此外，尚需從分子水平探索異歐前胡素的抗腫瘤作用機制，找出作用的靶分子，從而為充分開發(fā)利用這一重要的中藥資源奠定理論基礎。

參考文獻：

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[8]Kim YK， Kim YS， Ryu SY， et al. Antiproliferative effect of furanocoumarins from the root ofAngelica dahurica on cultured human tumor cell lines [J]. Phytotherapy Res， 2007， 21（3）： 288-290.