• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    離子束介導的小麥變異材料農藝性狀及生理生化指標分析

    2017-01-07 02:10:14谷運紅
    安徽農業(yè)科學 2016年35期
    關鍵詞:水培脯氨酸逆境

    高 飛, 谷運紅, 肖 靖, 張 明

    (1.遵義醫(yī)學院物理教研室, 貴州遵義 563003;2.鄭州大學離子束生物工程省重點實驗室, 河南鄭州 450052)

    離子束介導的小麥變異材料農藝性狀及生理生化指標分析

    高 飛1, 谷運紅2, 肖 靖2, 張 明1

    (1.遵義醫(yī)學院物理教研室, 貴州遵義 563003;2.鄭州大學離子束生物工程省重點實驗室, 河南鄭州 450052)

    [目的]探討離子束誘變和轉基因技術在農作物誘變育種中的應用效果。[方法]利用離子束介導外源基因組DNA轉化選育出一些特殊的小麥變異材料,研究在常溫水培、4 ℃冷脅迫、聚乙二醇(PEG)逆境條件下變異材料2葉期過氧化物酶(POD)活性、過氧化氫酶(CAT)活性、脯氨酸(Pro)含量,以及成熟期株高、千粒重、葉綠素含量、蛋白質含量等指標的變化情況。[結果]經過離子束介導轉化處理后的小麥變異系材料在各種逆境條件下生理生化指標都有變化,并且一些材料相比對照表現出良好的優(yōu)越性;小麥變異系材料各農藝性狀相比對照均有明顯差異。[結論]離子束介導轉基因技術能創(chuàng)造豐富的小麥變異類型。

    離子束;小麥變異材料;抗逆性;農藝性狀

    小麥是我國重要的糧食作物之一[1]。用各種高新技術改良種子或創(chuàng)建新的種質資源,可優(yōu)化生物過程、發(fā)展農業(yè)經濟、提高轉化效率[2]。離子束育種技術已被應用于小麥[3]、水稻[4]、大豆[5]、棉花[6]、煙草[7]等作物及微生物[8]。離子束育種技術在新生物品種改良以及誘變方面有顯著成效[9]。

    目前,采用離子束技術進行外源遺傳物質的轉化主要包括2個方面,即離子束介導目的基因的遺傳轉化和離子束介導總DNA 的遺傳轉化[4]。當植物受到不同環(huán)境因素脅迫時,植物中的脯氨酸(Pro)含量、過氧化氫酶(CAT)活性、過氧化物酶(POD)活性會發(fā)生很大的變化,引起植物中脯氨酸含量、CAT活性、POD活性不同程度的積累,且積累指數與植物的抗逆性有關。筆者以利用離子束介導外源全基因組DNA轉化選育出的一些特殊的小麥變異材料作為研究對象,探討了離子束介導轉化對小麥變異材料農藝性狀及生理生化指標的影響,以期為離子束介導轉化在小麥育種中的應用提供理論依據。

    1 材料與方法

    1.1 材料 試驗材料是2004年通過離子束對小麥干種子以3×1017N+/cm2劑量注入,以200 μg/mL供體基因組DNA溶液浸泡所得,轉化供體為燕麥和六倍體小黑麥全基因組DNA,轉化受體為豫麥49(編號為8101)得到的變異材料。經過多年的選育,得到一批特殊的變異系材料,材料編號及轉化組合的來源見表1。

    表1 變異材料信息

    1.2 抗逆性脅迫模擬試驗 對變異材料各挑選100粒完整、飽滿種子,70%乙醇消毒10 min,用蒸餾水沖洗3次,分成3份,每份30粒左右。用蒸餾水將種子浸泡在培養(yǎng)皿中24 h,用濾紙吸干種子表面水分,然后分為以下3組:常溫水培處理作為對照;4 ℃冷脅迫處理;聚乙二醇(PEG)溶液脅迫處理。取36個150 mm培養(yǎng)皿,鋪上雙層濾紙,高溫滅菌后儲存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.1 水培方法。取出1組萌發(fā)的種子,將萌發(fā)種子的胚朝上,均勻擺放在培養(yǎng)皿中的濾紙上,放入20 ℃光照培養(yǎng)箱中進行水培,每天加入適量蒸餾水,以保持濾紙濕潤。

    1.2.2 脅迫培養(yǎng)方法。

    1.2.2.1 4 ℃冷脅迫培養(yǎng)。取出1組萌發(fā)的種子,將萌發(fā)種子的胚朝上,均勻擺放在培養(yǎng)皿中的濾紙上,放入4 ℃光照培養(yǎng)箱中進行水培,每天加入適量蒸餾水,以保持濾紙濕潤。

    1.2.2.2 PEG脅迫培養(yǎng)。取出1組萌發(fā)的種子將萌發(fā)種子的胚朝上,均勻擺放在培養(yǎng)皿中的濾紙上,向培養(yǎng)皿中加入適量PEG溶液,放入20 ℃光照培養(yǎng)箱中進行水培,每天加入適量蒸餾水,以保持濾紙濕潤。

    1.3 測定指標與方法

    1.3.1 脯氨酸含量的測定。待種子在培養(yǎng)箱生長到2葉期時,稱取一定量葉片,用TU-1901雙光束紫外可見分光光度計進行脯氨酸含量測定。

    將100 μg/mL標準脯氨酸配制成0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 μg/mL的標準溶液,用分光光度計在520 nm波長處測定吸光度,以OD520為橫坐標,脯氨酸含量為縱坐標,繪制標準曲線,得標準曲線:y=17.414x-0.775 4,式中y為脯氨酸含量(μg/g),x為紫外吸光度。

    1.3.2 POD、CAT活性的測定。待種子在培養(yǎng)箱中生長到2葉期時,稱取1 g幼苗,加入5 mL提取緩沖液,在冰浴條件下研磨成勻漿,4 ℃、4 000 r/min離心15 min,收集上清液,4 ℃保存,測量提取液總體積。POD、CAT活性測定方法及藥品配制均根據李玲的《植物生理學》中的實驗方法[10],略做修改。應用TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計測定吸光值。每個樣品3次重復,用Origin 8.0軟件作圖。

    1.3.3 小麥葉片SPAD值的測量。在2012年的4月10日、4月25日(抽穗期)、5月6日、5月12日、5月24日對材料頂1葉中部進行測量,每個材料測3株,觀察不同時期葉綠素變化情況。

    1.3.4 小麥種子蛋白質含量、濕面筋、吸水率的測定。在接近成熟期時,每個材料隨機選取5株,測量株高,成熟收獲后測量每個材料的千粒重,用NIRsystems 5000型近紅外光譜儀測量變異材料籽粒的蛋白質含量、濕面筋和吸水率。在對籽粒進行近紅外光譜掃描前,將所有樣品置于光譜儀室平衡24 h,使樣品環(huán)境條件與儀器的環(huán)境條件一致。采集光譜時,將小麥樣品裝入樣品槽,使用機器內置參比,掃描區(qū)間在1 100~2 498 nm,掃描步長為2 nm,采集反射強度(R),儀器將對每個樣品自動進行全區(qū)間掃描30次,取平均光譜。每個單株樣品設3次重復,掃描完光譜后將采集的光譜反射強度輸入計算機并轉化為log(1/R)存儲。按照遵義醫(yī)學院物理教研室建立的預測方程對樣品的蛋白質含量進行預測。每個材料的20個單株都將獲得2個預測的蛋白質含量值,其平均值為該品種材料的蛋白質含量。

    1.4 數據處理 利用SPSS統計分析軟件對全生育期農藝性狀考察結果進行統計分析及差異顯著性分析。

    2 結果與分析

    2.1 不同逆境條件下小麥變異材料脯氨酸含量分析 由圖1可知,在常溫水培條件下,材料8509、8512的脯氨酸含量均高于8101,材料8160、8505、8507、8508、8510、8511、8513、8340、5647的脯氨酸含量均低于8101;8512是所有材料中脯氨酸含量最高的,比8101脯氨酸含量高出15.00%,8505是所有材料中脯氨酸含量最低的,比8101脯氨酸含量低52.00%。

    圖1 不同逆境條件下小麥變異材料脯氨酸含量Fig.1 Pro content of wheat variation materials under different adversity conditions

    在PEG脅迫條件下,材料8160、8505、8507、8508、8513、8340、5627的脯氨酸含量均高于8101,材料8509、8510、8511、8512的脯氨酸含量均低于8101;8505是所有材料中脯氨酸含量最高的,比8101脯氨酸含量高出69.00%,8512是所有材料中脯氨酸含量最低的,比8101脯氨酸含量低33.00%。

    在4 ℃冷脅迫條件下,材料8160、8505、8508、8509、8510、8511、8512、8513、8340、5647的脯氨酸含量均高于8101,8507脯氨酸含量低于8101;8509是所有材料中脯氨酸含量最高的,比8101脯氨酸含量高出206.00%,而8508是所有材料脯氨酸增長比例最高的,比8101脯氨酸含量高出237.00%,8507是所有材料中脯氨酸含量最低的,比8101脯氨酸含量低13.00%。

    因此,在不同逆境條件下,變異材料8160、8505、8508、8510、8513、8340、5647的脯氨酸含量在PEG和4 ℃冷脅迫條件下均高于自身對照,8509、8512在常溫水培條件下均高于8101,8160、8505、8508、8513、8340、5647在PEG和4 ℃冷脅迫條件下均高于8101,說明在常溫水培條件下與8101對比,8509和8512脯氨酸含量較高,8160、8505、8508、8513、8340、5647在逆境條件下脯氨酸含量不僅比對照高而且比8101高,表明8160、8505、8508、8513、8340、5647可能具有較好的抗逆性。

    2.2 不同逆境條件下小麥變異材料CAT活性分析 由圖2可知,在常溫水培條件下,材料8160、8508、8510、8511、8512的CAT活性均高于8101,材料8505、8507、8509、8513、8340、5647的CAT活性均低于8101;8160是所有材料中CAT活性最高的,比8101的CAT活性高出75.00%,5647是所有材料中CAT活性最低的,比8101的CAT值低46.00%。

    在PEG脅迫條件下,材料8160、8505、8509、8512的CAT活性均高于8101,材料8507、8508、8510、8511、8513、8340、5647的CAT活性均低于8101;8505是所有材料中CAT活性最高的,比8101的CAT活性高出71.00%,8510是所有材料中CAT活性最低的,比8101的CAT活性低79.00%。

    圖2 不同逆境條件下小麥變異材料CAT活性Fig.2 CAT activity of wheat variation materials under different adversity conditions

    在4 ℃冷脅迫條件下,材料8509、8510、8512的CAT活性均高于8101,材料8160、8505、8507、8508、8511、8513、8340、5647的CAT活性均低于8101;8510是所有材料中CAT活性最高的,比8101的CAT活性高出103.00%,8160是所有材料中CAT活性最低的,比8101的CAT活性低12.00%。

    因此,在不同逆境條件下,變異材料8505、8509的CAT活性在PEG和4 ℃冷脅迫下均高于自身對照,在常溫水培條件下8160、8508、8510、8511、8512的CAT活性均高于8101,8509、8512在PEG和4 ℃冷脅迫條件下均高于8101,說明在常溫水培條件下與8101對比,8160、8508、8510、8511、8512的CAT活性較高,8509在逆境條件下的CAT活性不僅比對照高而且比8101高,表明8509可能具有較好的抗逆性。

    2.3 不同逆境條件下小麥變異材料POD活性分析 由圖3可知,在常溫水培條件下,材料8510的POD活性高于8101,材料8512的POD活性接近8101,其他材料的POD活性均低于8101;8510是所有材料中POD活性最高的,比8101的POD活性高出1.74%,8508是所有材料中POD活性最低的,比8101的POD活性低92.17%。

    圖3 不同逆境條件下小麥變異材料POD活性Fig.3 POD activity of wheat variation materials under different adversity conditions

    在PEG脅迫條件下,材料8160、8508、8509、8510、8511、5947的POD活性均高于8101,材料8505、8507、8512、8513、8340的POD活性均低于8101;8160是所有材料中POD活性最高的,比8101的POD活性高出359.00%,8512是所有材料中POD活性最低的,比8101的POD活性低24.11%。

    在4 ℃冷脅迫條件下,材料8160、8505、8509、8510、8511、8512、8513、8340、5647的POD活性均高于8101,材料8507、8508的POD活性均低于8101;5647是所有材料中POD活性最高的,比8101的POD活性高出613.00%,8508是所有材料中POD活性最低的,比8101的POD活性低37.50%。

    因此,材料8160、8505、8509、8511、8340、5647的POD活性在PEG脅迫條件下均高于自身對照。在低溫條件下各材料POD活性都下降,在常溫水培條件下8510、8512的POD活性均高于8101,8610、8505、8509、8510、8511、5647在PEG和4 ℃冷脅迫條件下均高于8101,說明在常溫水培條件下與8101對比,8510、8512的POD活性較高,8610、8505、8509、8511、5647在逆境條件下的POD活性不僅比對照高而且比8101有所提高,表明8610、8505、8509、8511、5647可能具有較好的抗逆性。

    2.4 小麥變異系農藝性狀分析 由表2可知,材料8340的株高與對照8101相比顯著降低,而8505、8507、8508、8509、8511、8512的株高極顯著增加;材料8160、8505、8340的千粒重與對照相比顯著增加,8511的千粒重極顯著增加;材料8508的蛋白質含量與對照相比極顯著降低,而8160、8512、8513的蛋白質含量顯著增加,8340的蛋白質含量極顯著增加;材料8160、8512的濕面筋與對照相比顯著增加,8340的濕面筋極顯著增加;材料8160、8505、8507、8508、8509、8512、8513的吸水率與對照相比極顯著增加。

    2.5 小麥變異系葉綠素農藝性狀分析 SPAD是土壤與作物分析儀器開發(fā) (Soil and Plant Analyzer Development)的英文縮寫,日本基于葉綠素對不同類型光吸收利用差異研制的葉綠素計(SPAD儀)可在田間條件下簡單、無損地預測各類作物葉片單位面積的葉綠素含量。植株葉片SPAD值與葉綠素含量呈顯著正相關。

    由表3可知,4月25日,材料8505、8510、8512的SPAD值與對照8101相比顯著降低,而8511、8340的SPAD值極顯著降低;5月12日,材料8512、8340的SPAD值與對照相比極顯著降低,而8160的SPAD值極顯著增加;5月24日,材料8505、8506、8511的SPAD值與對照相比顯著降低,而8508、8509、8512、8340的SPAD值極顯著降低。

    3 結論與討論

    經過離子束介導轉化處理后的小麥變異系材料不論是農藝性狀還是抗逆性都有顯著變化,所以要從不同的角度分析出每個變異材料的特性,加深對變異材料變異類型的了解,以指導育種實踐。

    首先要分析的是離子束處理后得到的小麥變異系在逆境條件下的生理生化指標,在常溫水培條件下與8101對比,材料8509和8512的脯氨酸含量較高,材料 8160、8508、8510、8511、8512的CAT活性較高,材料 8510、8512的POD活性較高,可知變異材料8512在水培條件下脯氨酸含量、CAT、POD活性相比對照均有所增加;在PEG模擬干旱和4 ℃冷脅迫條件下與8101對比,材料 8160、8505、8508、8513、8340、5647的脯氨酸含量較高并且比對照也高,材料8509、8512 的CAT活性較高,材料 8610、8505、8509、8511、5647的POD活性較高并且僅比對照高,可知變異材料8106、8505、5647 在逆境條件下脯氨酸含量、POD活性相比對照均有所增加,而材料8509、8512 在逆境條件下CAT活性相比對照均有所增加。綜上,經過離子束介導轉化處理后的小麥變異系材料無論在常溫還是逆境條件下生理生化指標都有所變化,并且一些材料相比對照表現出良好的優(yōu)越性。

    表2 小麥變異系農藝性狀

    注:*和**分別表示P<0.05和P<0.01。

    Note:*indicatedP<0.05;**indicatedP<0.01。

    表3 小麥變異系在不同時期葉綠素含量(SPAD)

    注:*和**分別表示P<0.05和P<0.01。

    Note:*indicatedP<0.05;**indicatedP<0.01。

    其次要分析的是離子束處理后得到的小麥變異系農藝性狀,對材料的株高、千粒重、蛋白質含量、濕面筋、吸水率進行差異顯著性分析,得出小麥變異系材料各農藝性狀相比對照均有明顯差異。

    由此可見,離子束介導轉基因技術能創(chuàng)造豐富的小麥變異類型,該研究為以后變異材料的改進和利用提供了理論依據。參考文獻

    [1] HISCHENHUBER C,CREVEL R,JARRY B,et al.Review article:Safe amounts of gluten for patients with wheat allergy or coeliac disease[J].Alimentary pharmacology & therapeutics,2006,23(5):559-575.

    [2] 蘇張磊,戚艷磊,谷運紅,等.離子束介導外源DNA導入小麥后代變異系有關分析[J].核技術,2009,32(10):779-784.

    [3] 蘇明杰,趙傳奇,秦廣雍.離子束介導外源基因群轉移小麥的研究[J].中州大學學報,2003,20(2):119-121.

    [4] 黃群策,李玉峰.離子束生物技術在水稻育種中的應用前景[J].雜交水稻,2002,17(5):5-8.

    [5] 吳麗芳,余增亮.離子注入法獲得大豆-小麥分子遠緣雜種及后代的變異分析[J].核農學報,2000,14(4):206-211.

    [6] 程備久,李展,田秋元,等.離子注入棉花種子M1代細胞學效應研究初報[J].安徽農學院學報,1991,18(4):329-331.

    [7] 阮龍,林國平,唐圣華,等.氮離子注入煙草對當代煙葉含鉀量的影響[J].安徽農業(yè)科學,2000,28(2):238-239.

    [8] 宋道軍,姚建銘,吳麗芳,等.離子注入對微生物細胞的刻蝕與對DNA的損傷及修復[J].遺傳,1999,21(4):37-40.

    [9] BIAN P,YU Z L.The technique of cenetic transformation mediated by keV ion beam[J].Plasma science & technology,2005,7(1):2693-2696.

    [10] 李玲.植物生理學[M].北京:科學出版社,2011:95-102.

    Agronomic Traits and Physiological and Biochemical Index of Ion Beam Mediated Wheat Genome Variation

    GAO Fei1, GU Yun-hong2, XIAO Jing2et al

    (1.Physics Teaching Research Group, Zunyi Medical University, Zunyi, Guizhou 563003; 2.Henan Provincial Key Laboratory of Ion Beam Bioengineering, Zhengzhou University,Zhengzhou,Henan 450052)

    [Objective] The aim was to explore the great application value of ion beam mutagenesis and transgenic technology in crop mutation breeding. [Method] We carried out ion beam mediated whole genome DNA into some special variation of wheat materials,and then in conditions of normal temperature water, 4 ℃ cold stress and PEG stress, studied change of peroxidase (POD) activity,catalase (CAT) activity and proline (Pro) content of two-leaf variation materials, as well as the change of plant height, grain, chlorophyll content and protein content of variation materials at mature period.[Result] After dealing with the ion beam mediated transformation of wheat materials in all sorts of adversity under the condition of physiological and biochemical indexes were changed, and some material compared with contrast highlighted advantages.The agronomic traits of wheat materials compared with controls all had obvious difference.[Conclusion] The ion beam mediated transgenic technology can create rich wheat variation types.

    Ion beam;The variation of wheat materials;Stress resistance;Agronomic trait

    國家自然科學基金項目(11375154);鄭州大學校級教改項目(2014XJGLX101)。

    高飛(1984- ),男,山西霍州人,講師,碩士,從事生物物理學研究。

    2016-10-19

    S 512.1

    A

    0517-6611(2016)35-0001-04

    猜你喜歡
    水培脯氨酸逆境
    國家藥監(jiān)局批準脯氨酸恒格列凈片上市
    中老年保健(2022年3期)2022-11-21 09:40:36
    水培植物霎換水
    超越逆境
    做人與處世(2022年6期)2022-05-26 10:26:35
    How adversity makes you stronger逆境如何讓你更強大
    《環(huán)保水培園藝》教案
    《環(huán)保水培園藝》教案
    植物體內脯氨酸的代謝與調控
    反式-4-羥基-L-脯氨酸的研究進展
    干旱脅迫對馬尾松苗木脯氨酸及游離氨基酸含量的影響
    完形填空Ⅳ
    免费看光身美女| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 亚洲精品色激情综合| 久久久精品免费免费高清| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产高清有码在线观看视频| 69精品国产乱码久久久| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产黄频视频在线观看| 伊人久久精品亚洲午夜| 99久久人妻综合| 一本大道久久a久久精品| 久久韩国三级中文字幕| 国国产精品蜜臀av免费| 日本午夜av视频| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产精品不卡视频一区二区| 精品久久久噜噜| 亚洲国产欧美日韩在线播放 | 久久久久久久精品精品| av又黄又爽大尺度在线免费看| 欧美三级亚洲精品| av专区在线播放| 在线观看www视频免费| 午夜免费鲁丝| a级毛片在线看网站| 免费观看在线日韩| 亚洲国产精品999| 免费人成在线观看视频色| videos熟女内射| 久久精品久久精品一区二区三区| 日韩大片免费观看网站| 久久久亚洲精品成人影院| 久久av网站| 国产淫语在线视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 日韩一区二区三区影片| 免费观看性生交大片5| 精品一区二区免费观看| 亚洲av国产av综合av卡| 三上悠亚av全集在线观看 | 成年美女黄网站色视频大全免费 | 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 国产午夜精品一二区理论片| 高清毛片免费看| 777米奇影视久久| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 老司机影院毛片| 伦精品一区二区三区| 欧美一级a爱片免费观看看| 大片免费播放器 马上看| 一级a做视频免费观看| av免费观看日本| 国产成人freesex在线| 夜夜爽夜夜爽视频| 十八禁高潮呻吟视频 | 国产午夜精品一二区理论片| 国产高清三级在线| 三上悠亚av全集在线观看 | 中文字幕久久专区| 色视频www国产| 亚洲综合精品二区| 在线观看免费高清a一片| 国产亚洲欧美精品永久| 3wmmmm亚洲av在线观看| 大陆偷拍与自拍| 男人狂女人下面高潮的视频| 一本一本综合久久| 青青草视频在线视频观看| 极品人妻少妇av视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 黄色一级大片看看| 国产精品不卡视频一区二区| 成人美女网站在线观看视频| 国产精品蜜桃在线观看| 国产美女午夜福利| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产高清有码在线观看视频| √禁漫天堂资源中文www| 最新中文字幕久久久久| 久久 成人 亚洲| 欧美日韩av久久| 亚洲人成网站在线播| av专区在线播放| 色网站视频免费| 国产精品偷伦视频观看了| 99热网站在线观看| 国产精品一区二区在线不卡| 99久久精品国产国产毛片| 国产精品一二三区在线看| 国产精品不卡视频一区二区| 91aial.com中文字幕在线观看| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 欧美成人精品欧美一级黄| 大香蕉久久网| 极品人妻少妇av视频| 婷婷色综合www| 亚洲av成人精品一区久久| 成人毛片a级毛片在线播放| 精品久久久久久久久av| 另类精品久久| 最近中文字幕2019免费版| 精品午夜福利在线看| 国产片特级美女逼逼视频| av视频免费观看在线观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 少妇人妻一区二区三区视频| √禁漫天堂资源中文www| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美精品亚洲一区二区| 91精品国产九色| av线在线观看网站| 精品少妇黑人巨大在线播放| 亚洲真实伦在线观看| 日韩中文字幕视频在线看片| 男男h啪啪无遮挡| 在线免费观看不下载黄p国产| 亚洲精品一区蜜桃| 成年人免费黄色播放视频 | 国产成人精品一,二区| 大香蕉久久网| 国内揄拍国产精品人妻在线| 久久青草综合色| 色5月婷婷丁香| 波野结衣二区三区在线| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产亚洲欧美精品永久| 国产精品久久久久久精品电影小说| 美女视频免费永久观看网站| 18+在线观看网站| 精品熟女少妇av免费看| 极品人妻少妇av视频| 精品少妇久久久久久888优播| 狂野欧美激情性bbbbbb| tube8黄色片| 黄色一级大片看看| 日韩精品有码人妻一区| 久久 成人 亚洲| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 在线观看免费视频网站a站| 久久这里有精品视频免费| 黄色日韩在线| 亚洲欧美成人综合另类久久久| √禁漫天堂资源中文www| 国产精品熟女久久久久浪| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 韩国av在线不卡| 亚洲中文av在线| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 成人综合一区亚洲| 久久久久久久大尺度免费视频| 99热全是精品| 多毛熟女@视频| 国产成人免费无遮挡视频| 一区二区av电影网| 国产亚洲91精品色在线| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 在线观看三级黄色| 日韩强制内射视频| 免费观看性生交大片5| 91久久精品电影网| freevideosex欧美| 久久久久国产网址| 久久毛片免费看一区二区三区| 国产乱来视频区| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲成人手机| 性色avwww在线观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产免费福利视频在线观看| 中国三级夫妇交换| 国产视频首页在线观看| 国产美女午夜福利| 午夜福利视频精品| 国产成人a∨麻豆精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 高清欧美精品videossex| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲av免费高清在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 能在线免费看毛片的网站| 好男人视频免费观看在线| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精品自拍成人| a级毛片在线看网站| 午夜福利,免费看| 亚洲精品视频女| 欧美另类一区| 水蜜桃什么品种好| 蜜桃在线观看..| 日韩人妻高清精品专区| 日韩强制内射视频| 日本黄色片子视频| 99国产精品免费福利视频| 成人免费观看视频高清| 成人国产麻豆网| 26uuu在线亚洲综合色| 久久久国产一区二区| 久久国内精品自在自线图片| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久人人爽人人片av| 一级毛片aaaaaa免费看小| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产精品免费大片| 精品一区二区三区视频在线| 久久婷婷青草| 不卡视频在线观看欧美| 少妇人妻 视频| 中文字幕av电影在线播放| 欧美成人精品欧美一级黄| 熟女av电影| 熟女电影av网| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲精品一区蜜桃| 一本一本综合久久| 性色avwww在线观看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久久国产精品麻豆| 国产精品免费大片| 欧美精品高潮呻吟av久久| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 国产精品久久久久成人av| 色5月婷婷丁香| 五月玫瑰六月丁香| 新久久久久国产一级毛片| freevideosex欧美| 人妻少妇偷人精品九色| 日本-黄色视频高清免费观看| 天堂8中文在线网| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产精品福利在线免费观看| 51国产日韩欧美| 欧美区成人在线视频| 国产精品女同一区二区软件| 午夜免费男女啪啪视频观看| 777米奇影视久久| 成年av动漫网址| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 一级毛片我不卡| 亚洲在久久综合| 日韩av免费高清视频| 高清毛片免费看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久久久网色| 99精国产麻豆久久婷婷| 一区二区三区四区激情视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 自线自在国产av| 久久久午夜欧美精品| 一本大道久久a久久精品| 久久久久国产网址| 天堂8中文在线网| 一级毛片aaaaaa免费看小| 日本vs欧美在线观看视频 | 国产精品偷伦视频观看了| 在现免费观看毛片| 欧美三级亚洲精品| 午夜老司机福利剧场| 人妻一区二区av| 高清av免费在线| 国产乱人偷精品视频| 亚洲精品,欧美精品| 成年人午夜在线观看视频| av有码第一页| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 男女无遮挡免费网站观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲色图综合在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲精品456在线播放app| www.av在线官网国产| 婷婷色综合大香蕉| 午夜免费鲁丝| 美女视频免费永久观看网站| av有码第一页| 精品国产一区二区久久| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产黄片美女视频| 国产精品成人在线| 天堂8中文在线网| 国产91av在线免费观看| 国产av码专区亚洲av| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 一级毛片我不卡| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 男女边摸边吃奶| xxx大片免费视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 日本午夜av视频| av国产久精品久网站免费入址| 欧美日韩视频精品一区| 桃花免费在线播放| 26uuu在线亚洲综合色| 欧美日韩在线观看h| 一级毛片 在线播放| 日韩伦理黄色片| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产永久视频网站| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 少妇丰满av| 国产精品三级大全| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲图色成人| 亚洲欧美精品专区久久| 一本大道久久a久久精品| 岛国毛片在线播放| 观看美女的网站| 久久久精品免费免费高清| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 最近中文字幕2019免费版| 日日爽夜夜爽网站| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 多毛熟女@视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 日日撸夜夜添| 中文字幕制服av| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 久久国内精品自在自线图片| 大香蕉久久网| 久久97久久精品| 国产精品一二三区在线看| 人人妻人人看人人澡| 久久久久国产网址| av福利片在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲精品久久午夜乱码| 午夜激情福利司机影院| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲伊人久久精品综合| 啦啦啦在线观看免费高清www| 欧美性感艳星| 男男h啪啪无遮挡| 韩国av在线不卡| 少妇的逼水好多| 久久久午夜欧美精品| 精品久久国产蜜桃| 亚洲综合精品二区| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产成人精品一,二区| 在线精品无人区一区二区三| 一区二区三区精品91| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产中年淑女户外野战色| 欧美激情国产日韩精品一区| 美女国产视频在线观看| 下体分泌物呈黄色| 久久av网站| 十分钟在线观看高清视频www | 最新的欧美精品一区二区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 日本免费在线观看一区| 99久久中文字幕三级久久日本| 能在线免费看毛片的网站| av黄色大香蕉| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 观看美女的网站| 中文字幕免费在线视频6| 成人免费观看视频高清| 日本wwww免费看| 午夜老司机福利剧场| 国产色婷婷99| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久亚洲精品成人影院| 嫩草影院新地址| 中文字幕久久专区| 交换朋友夫妻互换小说| 亚洲内射少妇av| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲,欧美,日韩| 精品国产一区二区久久| 国产片特级美女逼逼视频| 不卡视频在线观看欧美| 观看av在线不卡| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | 伊人久久精品亚洲午夜| 在线观看av片永久免费下载| 精品久久久久久久久av| 国产精品久久久久久精品电影小说| 爱豆传媒免费全集在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产一区亚洲一区在线观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 午夜91福利影院| 精品一区二区三区视频在线| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲av二区三区四区| 美女国产视频在线观看| 午夜激情福利司机影院| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲精品,欧美精品| 青春草国产在线视频| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲精品成人av观看孕妇| 最新的欧美精品一区二区| 性色av一级| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久久久久久国产电影| 一级毛片 在线播放| 国产成人精品一,二区| 日韩av免费高清视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 看非洲黑人一级黄片| 内地一区二区视频在线| 久久久久久久久大av| 亚洲国产成人一精品久久久| 美女大奶头黄色视频| 91久久精品国产一区二区成人| 赤兔流量卡办理| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品久久久久久精品古装| 国产免费福利视频在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 熟女av电影| 久久人人爽人人爽人人片va| 日日啪夜夜爽| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久久午夜福利片| 久久国产精品男人的天堂亚洲 | 国产乱来视频区| 精品人妻偷拍中文字幕| 久久国内精品自在自线图片| av天堂中文字幕网| 国产黄片视频在线免费观看| 免费看不卡的av| 久久人妻熟女aⅴ| 三级国产精品欧美在线观看| 丰满乱子伦码专区| 久久狼人影院| 哪个播放器可以免费观看大片| 99九九在线精品视频 | 美女大奶头黄色视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| av国产精品久久久久影院| 九九爱精品视频在线观看| 老司机影院毛片| 精品久久国产蜜桃| av黄色大香蕉| av免费观看日本| 国产 精品1| 亚洲成色77777| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 偷拍熟女少妇极品色| av国产久精品久网站免费入址| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 欧美国产精品一级二级三级 | 黄色日韩在线| 国产av国产精品国产| 成人无遮挡网站| 青春草视频在线免费观看| 视频区图区小说| 免费黄色在线免费观看| 永久网站在线| 亚洲,一卡二卡三卡| 欧美高清成人免费视频www| 日韩大片免费观看网站| 蜜桃久久精品国产亚洲av| av播播在线观看一区| 韩国av在线不卡| 亚洲一区二区三区欧美精品| 国产片特级美女逼逼视频| 制服丝袜香蕉在线| 丰满饥渴人妻一区二区三| 欧美bdsm另类| 国产色婷婷99| 国产综合精华液| 久久久国产精品麻豆| 美女cb高潮喷水在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 性色av一级| 美女国产视频在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产av国产精品国产| 亚洲第一区二区三区不卡| 51国产日韩欧美| 哪个播放器可以免费观看大片| 在线观看人妻少妇| 伦理电影免费视频| av有码第一页| 国产淫片久久久久久久久| 国产亚洲5aaaaa淫片| 欧美成人午夜免费资源| 2018国产大陆天天弄谢| 伊人久久精品亚洲午夜| 国内精品宾馆在线| 国产黄频视频在线观看| 十八禁高潮呻吟视频 | 国产色爽女视频免费观看| 国产精品欧美亚洲77777| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 国模一区二区三区四区视频| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 色吧在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚州av有码| 老熟女久久久| 五月伊人婷婷丁香| 丰满饥渴人妻一区二区三| 国产极品天堂在线| 亚洲精品第二区| 一级,二级,三级黄色视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 天天操日日干夜夜撸| 麻豆成人午夜福利视频| 伊人亚洲综合成人网| 水蜜桃什么品种好| 亚洲精品亚洲一区二区| 日韩一区二区三区影片| 蜜臀久久99精品久久宅男| 免费看av在线观看网站| 各种免费的搞黄视频| 国产伦在线观看视频一区| 伦理电影免费视频| 亚洲成色77777| 97精品久久久久久久久久精品| 少妇人妻 视频| av视频免费观看在线观看| 久久97久久精品| 亚洲欧美精品自产自拍| 人妻系列 视频| 99热网站在线观看| 蜜桃在线观看..| 精品少妇内射三级| 这个男人来自地球电影免费观看 | 在线播放无遮挡| 亚洲va在线va天堂va国产| 国产精品偷伦视频观看了| 精品人妻一区二区三区麻豆| 国产视频首页在线观看| 国产av码专区亚洲av| 青春草国产在线视频| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美人与善性xxx| 一本一本综合久久| 国产 一区精品| 涩涩av久久男人的天堂| 99九九线精品视频在线观看视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久av网站| 国产精品熟女久久久久浪| av免费观看日本| 日韩精品免费视频一区二区三区 | 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 九色成人免费人妻av| 亚洲不卡免费看| 亚洲av二区三区四区| 青春草亚洲视频在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 成人国产av品久久久| 久久久精品94久久精品| 男女无遮挡免费网站观看| 精品久久久久久电影网| 晚上一个人看的免费电影| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 高清在线视频一区二区三区| 一本色道久久久久久精品综合| 日韩视频在线欧美| 亚洲国产精品一区三区| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产av精品麻豆| 在线 av 中文字幕| 久久免费观看电影| 在线观看www视频免费| 亚洲美女视频黄频| 人人妻人人看人人澡| 一本大道久久a久久精品| 最黄视频免费看| 国产伦精品一区二区三区四那| 99九九在线精品视频 | 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲精品国产成人久久av| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品蜜桃在线观看| av一本久久久久| 天堂中文最新版在线下载| 91精品国产九色| 2018国产大陆天天弄谢| 99国产精品免费福利视频| 久久韩国三级中文字幕| 熟女电影av网| 亚洲av免费高清在线观看| 两个人的视频大全免费| 日韩亚洲欧美综合| 日韩av在线免费看完整版不卡| 韩国av在线不卡| av福利片在线| 涩涩av久久男人的天堂| 国产精品欧美亚洲77777| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 插阴视频在线观看视频| 一级,二级,三级黄色视频| 晚上一个人看的免费电影| 97超视频在线观看视频| 亚洲精品一二三| 美女福利国产在线|