脫氧土大黃苷溶解度及油水分配系數(shù)測定

馬珍瓊 龔云麒 屈云蓮 張 恒 普俊學(xué)*

1.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650000；2.昆藥集團股份有限公司，云南 昆明 650100

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脫氧土大黃苷溶解度及油水分配系數(shù)測定

馬珍瓊1龔云麒2屈云蓮2張 恒1普俊學(xué)2*

1.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650000；2.昆藥集團股份有限公司，云南 昆明 650100

目的：測定脫氧土大黃苷的平衡溶解度及表觀油水分配系數(shù)。方法：采用紫外分光光度-搖瓶法測定脫氧土大黃苷在有機溶劑、水及不同pH磷酸鹽緩沖鹽中的平衡溶解度和其在正辛醇-水/磷酸鹽緩沖鹽溶鹽中的表觀油水分配系數(shù)。結(jié)果：在溫度37℃時，脫氧土大黃苷在水中的溶解度為0.1217mg/mL，乙醇和正辛醇對脫氧土大黃苷的溶解性較好，其溶解度分別為12.1146mg/mL和7.2867mg/mL，在不同pH的磷酸鹽緩沖溶液中隨著pH的升高其溶解度變化無規(guī)律；脫氧土大黃苷在正辛醇-水中的表觀油水分配系數(shù)Papp為138.52(lgP=2.14)；當(dāng)pH在1～8的磷酸鹽緩沖溶液中時，受pH影響幾乎無變化，表現(xiàn)為親脂性。結(jié)論：脫氧土大黃苷在水中的平衡溶解度差，受介質(zhì)的pH影響，且油水分配系數(shù)高。因此，在制劑過程中，可通過改變pH增加藥物的溶解性和穩(wěn)定性。其測定結(jié)果為進一步研究脫氧土大黃苷的制備、制劑及其在生物體內(nèi)外的吸收、分布和代謝過程提供重要的參考和依據(jù)。

脫氧土大黃苷；平衡溶解度；紫外分光光度法；表觀油水分配系數(shù)

脫氧土大黃苷為拉薩大黃中的主要成分之一，屬脂溶性茋苷類化合物。研究顯示：脫氧土大黃苷具有多種藥理活性，如清除自由基、抗氧化、抗菌、抗炎、改善和治療缺血性心腦血管疾病等[1-3]。藥物吸收進入血液需要合適的溶解度和油水分配系數(shù)，以便能透過生物膜的脂質(zhì)雙分子層[4]。藥物的溶解度與油水分配系數(shù)可預(yù)測藥物在體內(nèi)吸收、分布、代謝等，也可為制劑給藥途徑選擇、劑型選擇、處方篩選、工藝設(shè)計及生物藥劑學(xué)等研究提供依據(jù)。

目前，脫氧土大黃苷的研究主要集中制備及藥理方面，而理化性質(zhì)研究報道尚少。研究采用紫外分光光度-搖瓶法測定脫氧土大黃苷在水及不同pH緩沖液中、溫度在37℃下的平衡溶解度和油水分配系數(shù)[5-6]，為脫氧土大黃苷體內(nèi)外吸收、制劑開發(fā)及其他相關(guān)藥學(xué)研究提供數(shù)據(jù)支持和參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-2450紫外分光光度計(日本島津公司)；SW22恒溫震蕩儀(德國Julabo公司)；FE20實驗室pH計(梅特勒-托利多公司)。

1.2 試劑試藥 脫氧土大黃苷對照品(昆藥集團股份有限公司藥物研發(fā)平臺自制，20160421)；乙醇(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20141002)、甲醇(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20141201)、磷酸(廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心，20141002)、氫氧化鈉(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20131108)、磷酸二氫鈉(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20140202)、磷酸二氫鉀(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20130625)、磷酸氫二鉀(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20130722)、正辛醇(天津市津東天正精細化學(xué)試劑廠，20150112)等均為分析純，水為自制重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 脫氧土大黃UV檢測方法的建立

2.1.1 樣品儲備溶液的配制 稱量脫氧土大黃苷對照品適量，精密稱定10.3mg于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度作脫氧土大黃苷對照儲備液。

2.1.2 最大吸收波長的確定 取脫氧土大黃苷對照儲備液適量，用甲醇不斷稀釋，在波長190～800nm的波長范圍內(nèi)掃描，其吸光度值在0.3～0.7之間，其最大吸收波長為319nm。見圖1。

2.1.3 脫氧土大黃苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密移取脫氧土大黃苷對照儲備液1、1、5、6、2、5mL分別于50、25、100、100、25、50mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度制得濃度分別為2.06、4.12、5.13、6.18、8.24、10.3μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，照紫外分光光度法，在波長319nm處，用紫外分光光度計分別測定其吸收度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程為：Y=0.076x-0.00875，R2=0.99997，表明脫氧土大黃苷在濃度2.06～10.3μg/mL范圍內(nèi)吸光度與濃度呈良好線性關(guān)系。

2.1.4 精密度考察 按“標(biāo)準(zhǔn)曲線”法，配制濃度為5.13、6.18、8.24μg/mL的脫氧土大黃苷溶液，在319nm處測定各溶液的吸光度，每個濃度平行測定6次，計算其精密度，結(jié)果分別為：0.1856%、0.1983%、0.1792%，均小于1.0%，結(jié)果表明該測定方法精密度良好。

2.1.5 加樣回收率考察 按“標(biāo)準(zhǔn)曲線”法，分別量取脫氧土大黃苷對照儲備液和樣品儲備液適量配制成濃度為80%、100%、120%的脫氧土大黃苷溶液，每個濃度配制3份，和3份樣品溶液在319nm處測定各溶液的吸光度，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到對應(yīng)的質(zhì)量濃度，按公式：準(zhǔn)確度=測定質(zhì)量濃度值/真實質(zhì)量濃度值×100%，計算各濃度下的平均回收率，結(jié)果分別為：101.3%、99.8%、98.7%，結(jié)果表明該測定方法準(zhǔn)確度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性實驗 精密量取脫氧土大黃苷對照品溶液3mL于50mL容量瓶中，分別加水和pH為1.2的磷酸溶液超聲溶解并定容至刻度50mL，分別精密取2mL于50mL容量瓶中，分別用水和pH為1.18的磷酸溶液定容至刻度50mL，制得濃度為6.18μg/mL的對照品溶液，放于室溫，分別于0、2、8、12、24、36、48h取樣照紫外分光光度法測定其吸光度，測定結(jié)果的RSD分別為：1.01%、1.32%，均小于2.0%，結(jié)果表明，在48h內(nèi)，脫氧土大黃苷在水中和pH為1.18的磷酸溶液中穩(wěn)定。結(jié)果見表1。

表1 脫氧土大黃苷在不同溶劑中的穩(wěn)定性結(jié)果

2.2 平衡溶解度測定

2.2.1 不同pH磷酸緩沖液的配制 按《中華人民共和國藥典》2015年版第四部配制pH 1.2的磷酸溶液及pH 2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的磷酸鹽緩沖液，并用磷酸和磷酸氫二鈉調(diào)節(jié)pH,最終用pH計驗證其pH為1.18、2.03、3.05、4.06、5.03、6.05、7.05、8.02。

2.2.2 脫氧土大黃苷在水及不同pH緩沖液中的平衡溶解度測定 稱取脫氧土大黃苷300mg數(shù)份，置于50mL具塞三角瓶中，分別加入水，不同pH值的磷酸緩沖液20mL，每種溶劑平行操作3份，置于(37±0.5)℃的恒溫水浴中，以150r/min勻速震振搖48h至藥物不再溶解。將飽和脫氧土大黃苷溶液用0.45μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液做適當(dāng)稀釋后，按照紫外分光光度法進行測定，記錄其數(shù)據(jù)，并計算其平衡溶解度，結(jié)果如表2。于24h時脫氧土大黃苷的濃度為平衡溶解度，做出其在不同緩沖液中的平衡溶解度曲線，如圖2。

表2 脫氧土大黃苷在不同條件下的溶解情況

由圖2可知，溶劑的pH對脫氧土大黃苷的平衡溶解度影響較大，隨著pH的不斷增加，其平衡溶解度先降低后增加的趨勢。

于不同時間點取樣測定脫氧土大黃苷的濃度為平衡溶解度，做出其在水中不同時間的平衡溶解度曲線，如圖3。

由圖3可知，脫氧土大黃苷的平衡溶解度隨著時間增加逐漸增加，其平衡溶解度于2h趨于平衡。

2.3 表觀油水分配系數(shù)測定

2.3.1 水飽和正辛醇溶液及正辛醇飽和水溶液的配制量 取200mL正辛醇和250mL蒸餾水于具塞三角瓶中。恒溫振蕩24h，使其混合均勻，相互飽和后，于分液漏斗中，靜置過夜分層，分離兩相，將兩相界面附近的溶液棄去，并將上層的水飽和正辛醇溶液和下層的正辛醇飽和水溶液保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3.2 脫氧土大黃苷在正辛醇-水及不同pH緩沖液中的表觀油水分配系數(shù)測定 稱取脫氧土大黃苷100mg，精密稱定為0.1058mg于50mL容量瓶中，用水飽和正辛醇溶解并定容，配成濃度為2.116mg/mL的溶液，分別量取該溶液20mL于具塞三角瓶中，再分別加入被正辛醇飽和的水和pH2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0的磷酸鹽緩沖液20mL，放入(37±0.5)℃恒溫水浴振蕩儀中振搖24h后取出，以4000r/min離心30min分別取上、下層溶液，照紫外分光光度法在319nm波長處測定其吸光度，根據(jù)公式Papp=Co/Cw計算其油水分配系數(shù)。公式中Papp為各介質(zhì)下的表觀油水分配系數(shù)、Co為脫氧土大黃苷在正辛醇中分配平衡時測得的濃度，Cw為脫氧土大黃苷在水相中分配平衡時測得的濃度。脫氧土大黃苷在水和不同pH緩沖液飽和的正辛醇/正辛醇飽和的水和不同pH緩沖液中表觀分配系數(shù)如表3。

表3 不同條件下的表觀分配系數(shù)

由圖4可知，脫氧土大黃苷的油水分配系數(shù)受溶劑的pH無影響。

3 討論

目前，平衡溶解度和油水分配系數(shù)測定的方法很多，如搖瓶法、HPLC法和產(chǎn)生柱法，其中以搖瓶法最為簡便。本研究采用紫外分光光光度-搖瓶法測定脫氧土大黃苷的平衡溶解度和油水分配系數(shù)[7-9]，此方法操作簡便、省時、經(jīng)濟，且得到的線性、精密度和回收率均符合《中國藥典》要求，表明該方法測定脫氧土大黃苷的平衡溶解度和油水分配系數(shù)可行。

人體的生理環(huán)境大致在pH2.0～8.0，參照中國藥典及相關(guān)文獻中緩沖液的pH范圍，并設(shè)計考察脫氧土大黃苷在pH 1.18、2.03、3.05、4.06、5.03、6.05、7.05、8.02下的磷酸緩沖鹽中的平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)，模擬藥物在生物體內(nèi)(水相)和生物相(油相)間的分配情況。在研究中大多采用有機溶劑來模擬生物相(油相)，如：正辛醇、橄欖油和氯仿等。正辛醇是被公認為更接近生物相的有機溶劑，其原因主要是因為其溶解度為21.07MPa，接近于生物膜的溶解度參數(shù)[10]，其可作為模擬生物相的有機溶劑。因此，本實驗研究采用正辛醇-水為模擬系統(tǒng)測定油水分配系數(shù)。

研究表明，溫度在37℃下，脫氧土大黃苷的油水分配系數(shù)P為138.52(lgP=2.14)，表現(xiàn)為疏水性，容易透過生物體細胞膜而進入體內(nèi)被吸收，這不是限制脫氧土大黃苷在體內(nèi)外吸收的重要原因。而其在水中的平衡溶解度僅為0.1217mg/mL，藥物的水溶性差導(dǎo)致其在體內(nèi)的溶出速度慢。因此，其溶解度是體內(nèi)外吸收轉(zhuǎn)運的限速因素，是制劑過程中應(yīng)該解決的首要問題。本文對脫氧土大黃苷進行平衡溶解度及表觀油水分配系數(shù)的測定，不僅可為脫氧土大黃苷的體內(nèi)、體外吸收代謝及分離制備等研究提供參考，為脫氧土大黃苷進一步制劑處方工藝研究提供數(shù)據(jù)支持和指導(dǎo)。

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(編輯：梁志慶)

Determination of Equilibrium Solubility and Apparent Oil/Water Partition Coefficient of Deoxyrhaponticin

MA Zhenqiong1GONG Yunqi2QU Yunlian2ZHANG Heng1PU Junxue2*

1.Yunnan University of TCM，Kunming 650000,China；2.Pharmaceutical Lnc.(KPC group)，Kunming 650100，China

Objective To determine the equilibrium solubility and apparent oil/water partition coefficient of deoxyrhaponticin.Methods Combining shaking flask method and Ultraviolet spectrophotometer (UV) to detect the oil/water partition coefficients of deoxyrhaponticin,the equilibrium solubility of deoxyrhaponticin in the commonly used organic solvents and water and different pH buffer solution were determined by UV analysis.Results In the temperature of 37, solubility of deoxyrhaponticin in water is 0.1217mg/mL,Commonly used organic solvents such as ethanol and n-octyl alcohol are good solvents for deoxyrhaponticin,its solubility are 7.2867mg/mL and 12.1146mg/mL respectively,in different pH phosphate buffer solution,with pH increasing,the solubility of deoxyrhaponticin is irregular;in n-octyl alcohol/water,the oil/water partition coefficients of deoxyrhaponticin(Papp) is 138.52(lgP=2.14);when the pH of buffer solution is in 1～8, the oil/water partition coefficients of deoxyrhaponticin almost has no changement,and tend to be lipophilic.Conclusion the equilibrium solubility of deoxyrhaponticin in water is poor and is affected by it's pH,and it's oil/water partition coefficients is high.In the preparation, the solubility and stability of the drug can be increased by changing its pH.The results provide important reference and basis for further research on the preparation,preparation and the absorption,distribution and metabolism in vivo of deoxyrhaponticin.

Deoxyrhaponticin；Equilibrium Solubility；UV；Apparent Oil/Water Partition Coefficient

2010-10-25

國家自然基金資助項目云南省科技廳重點新產(chǎn)品開發(fā)專項資助(No.2013BC001)。

馬珍瓊(1990-)，女，漢族，研究生在讀，主要從事制劑及工藝研究。E-mail：1475446819@qq.com

普俊學(xué)(1971-)，男，彝族，本科，主要從事制劑工藝與生產(chǎn)研究。E-mail：pujunxue@sina.cn

R

A

1007-8517(2016)23-0039-04