• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    銀杏葉中銀杏內(nèi)酯提取工藝研究

    2017-01-03 06:27:49李文東高乾善楊鵬楊丙田王曉
    山東科學(xué) 2016年5期
    關(guān)鍵詞:銀杏葉內(nèi)酯銀杏

    李文東, 高乾善,楊鵬 ,楊丙田,王曉*

    (1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東 泰安 271018; 2.山東省中藥質(zhì)量控制技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東省分析測(cè)試中心,山東 濟(jì)南 250014;3. 濟(jì)南森康三峰生物工程有限公司,山東 濟(jì)南 250014)

    ?

    【中藥與天然活性產(chǎn)物】

    銀杏葉中銀杏內(nèi)酯提取工藝研究

    李文東1,2, 高乾善2,楊鵬3,楊丙田3,王曉2*

    (1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東 泰安 271018; 2.山東省中藥質(zhì)量控制技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,山東省分析測(cè)試中心,山東 濟(jì)南 250014;3. 濟(jì)南森康三峰生物工程有限公司,山東 濟(jì)南 250014)

    以銀杏內(nèi)酯(白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C)的提取率為指標(biāo),確定銀杏葉乙醇提取的最佳提取工藝。采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)的方法,系統(tǒng)考察提取時(shí)間、料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取次數(shù)4個(gè)因素對(duì)銀杏葉提取工藝的影響。以異丙醇為流動(dòng)相,優(yōu)化高效液相色譜法(HPLC-ELSD)測(cè)定銀杏內(nèi)酯的含量,并計(jì)算提取率。實(shí)驗(yàn)得出最佳提取工藝條件為提取時(shí)間1.5 h、料液比1:20、乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、提取次數(shù)3次。本工藝可以提高銀杏內(nèi)酯的提取率,節(jié)約試驗(yàn)成本,適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

    銀杏葉;銀杏內(nèi)酯;正交試驗(yàn);提取率;異丙醇

    銀杏(GinkgobilobaL.)又名白果、公孫樹、鴨腳子或鴨掌樹,是銀杏科銀杏屬中唯一的生存種屬,被譽(yù)為“活化石”。我國自古以來就有銀杏葉入藥和食療的記載,如《本草品匯精要》中提到,銀杏葉“歸肺經(jīng),能斂肺平喘,益心止痛”。20世紀(jì)70年代銀杏葉提取物(extract ofGinkgobiloba, EGb)治療中樞外周血流紊亂和腦血管動(dòng)脈粥樣硬化的報(bào)導(dǎo)出現(xiàn),其藥用價(jià)值受到了更為廣泛的關(guān)注[1-2]。

    銀杏葉的化學(xué)成分復(fù)雜,已有報(bào)導(dǎo)的成分多達(dá)180種[3],其中主要活性成分為萜類內(nèi)酯化合物(ginkgolides and bilobalides)和黃酮類化合物(flavonoid glycosides)[4]。銀杏內(nèi)酯(ginkgolide)是二萜內(nèi)酯,萜類內(nèi)酯類化合物包括銀杏內(nèi)酯 A、B、C、J 和 M等,均為血小板活化因子(platelet activating factor, PAF)拮抗劑[5],可在臨床上用于治療血栓、急性胰腺炎和心血管疾病[6]。白果內(nèi)酯(bilobalide)分子中含有15個(gè)碳原子,屬于倍半萜類化合物,具有保護(hù)神經(jīng)的作用,對(duì)老年癡呆的治療具有良好的效果[7]。目前,從銀杏葉中已分離得到8個(gè)萜類內(nèi)酯化合物:銀杏內(nèi)酯A、B、C、J、M、K、L 和白果內(nèi)酯[8-9]。銀杏內(nèi)酯A、B、C及白果內(nèi)酯化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。銀杏內(nèi)酯的分子立體結(jié)構(gòu)復(fù)雜,化學(xué)合成和植物組織培養(yǎng)均受到技術(shù)難度大、生產(chǎn)成本高等因素制約,所以銀杏內(nèi)酯來源以提取銀杏葉為主[10]。在以往的研究中都考慮到銀杏黃酮的提取率,只把銀杏內(nèi)酯作為附帶產(chǎn)品提取,未對(duì)銀杏內(nèi)酯提取率影響因素做有針對(duì)性的研究[11-13]。在檢測(cè)方法方面銀杏內(nèi)酯目前采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定,所用流動(dòng)相為甲醇-四氫呋喃-水系統(tǒng),其中四氫呋喃在分析過程中存在價(jià)格高、易揮發(fā)和對(duì)人有害等缺點(diǎn)[14-17]。本研究確定了從銀杏葉中提取銀杏內(nèi)酯工藝的最佳參數(shù),提高了銀杏內(nèi)酯的提取效率,同時(shí)優(yōu)化的檢測(cè)方法使銀杏內(nèi)酯測(cè)定更加方便快捷。

    圖1 銀杏內(nèi)酯A、B、C及白果內(nèi)酯化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of ginkgolides and ginkgo lactone

    1 儀器與試劑

    KT-300Y型超聲波藥品處理機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司);Agilent 1260與385-ELSD蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(美國安捷倫科技有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);KDM型可控調(diào)溫電熱套(山東鄄城華魯電熱儀器有限公司)。銀杏葉(山東雙花制藥有限公司)。銀杏內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品(上海生化試劑廠),其中白果內(nèi)酯(純度≥ 98%)生產(chǎn)批號(hào)110865-201507;銀杏內(nèi)酯A(純度≥ 98%)生產(chǎn)批號(hào)為110862-201511;銀杏內(nèi)酯B(純度≥ 98%)生產(chǎn)批號(hào)110863-201507;銀杏內(nèi)酯C(純度≥ 98%)生產(chǎn)批號(hào)110864-201507。95%乙醇、石油醚和酸性氧化鋁為分析純,甲醇、異丙醇為色譜純。

    2 試驗(yàn)方法

    2.1 銀杏內(nèi)酯的分析方法

    所有的樣品都用Agilent 1260串聯(lián)385-ELSD檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè),使用YMC-Pack ODS-A( 4.6 mm×250 mm,5 μm) 的色譜柱進(jìn)行分析,根據(jù)分離度最大(實(shí)際測(cè)得分離度R>7.2)、檢測(cè)時(shí)間適宜的要求選用流動(dòng)相為異丙醇:水(10:90,V/V),流速為1 mL/min,氣體流速為1.60 L/min (氮?dú)?,漂移管穩(wěn)定溫度為 90 °C。

    2.2 銀杏內(nèi)酯含量測(cè)定

    稱取銀杏葉樣品量20.0 g,加熱回流,冷卻到室溫用定性濾紙(型號(hào)為102)進(jìn)行過濾,分別回收不同試驗(yàn)條件下的銀杏內(nèi)酯提取液,濃縮提取液,用甲醇定容到500 mL容量瓶中,室溫超聲30 min,混勻,靜置,取適量樣品用針頭式微孔過濾器濾過0.22 mm有機(jī)濾膜后進(jìn)行高效液相色譜(HPLC-ELSD)檢測(cè),以10%異丙醇為流動(dòng)相檢測(cè)樣品含量(液相色譜圖見圖2),為確保此方法的準(zhǔn)確性,進(jìn)行精密度試驗(yàn)以及線性關(guān)系考察。

    BB為白果內(nèi)酯;A為銀杏內(nèi)酯A; B為銀杏內(nèi)酯B; C為銀杏內(nèi)酯C a 標(biāo)準(zhǔn)樣品 b 提取樣品圖2 銀杏內(nèi)酯高效液相色譜圖Fig.2 High performance liquid chromatography of ginkgolides

    2.3 分析方法的驗(yàn)證

    2.3.1 線性相關(guān)性

    分別精密稱取銀杏內(nèi)酯BB、C、A、B標(biāo)準(zhǔn)樣品17.2、9.3、10.3、8.7 mg,用甲醇分別定容到50 mL,根據(jù)精密稱定樣品的量得到標(biāo)準(zhǔn)品BB、C、A、B溶液濃度分別為0.344 0、0.186 0、0.206 0、0.174 0 mg/mL,通過自動(dòng)進(jìn)樣器控制進(jìn)樣體積得到BB進(jìn)樣量為0.002 0、0.004 0、0.006 0、0.008 0、0.010 0 mg;C、A、B進(jìn)樣量為0.001 0、0.002 0、0.003 0、0.004 0、0.005 0 mg;得到樣品進(jìn)樣量與響應(yīng)值峰面積的對(duì)數(shù)的線性相關(guān)性。其相關(guān)性方程及R2見表1。

    表1 4種銀杏內(nèi)酯線性方程及R2Table 1 Linear equation of the four ginkgolides and R2

    2.3.2 精密度試驗(yàn)

    日間精密度試驗(yàn):取上述配制的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液,連續(xù)6 d每天同一時(shí)間分別取樣測(cè)定4種銀杏內(nèi)酯,得到高效液相色譜響應(yīng)值峰面積,分別計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。

    日內(nèi)精密度試驗(yàn):取上述配制的標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液,在1 d內(nèi)每隔2 h取一次樣,取6次分別測(cè)定樣品,得到高效液相色譜響應(yīng)值峰面積,分別計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果見表2。

    表2 精密度試驗(yàn)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 2 Accuracy experiment RSD

    2.3.3 樣品加樣回收率的測(cè)定

    精密稱定銀杏內(nèi)酯BB、C、A、B標(biāo)準(zhǔn)樣品5.8、2.6、3.0、4.5 mg,加到上述標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液中定容到50 mL容量瓶中,得到0.460 0、0.238 0、0.266 0、0.264 0 mg/mL的溶液,分別取適量樣品進(jìn)高相液相色譜檢測(cè)并重復(fù)3次,得到的回收率平均值為99.2%、98.8%、99.7%、99.6%。以上試驗(yàn)證明,方法是可靠、準(zhǔn)確的。

    2.4 銀杏內(nèi)酯的提取率

    本試驗(yàn)以銀杏內(nèi)酯提取率作為指標(biāo),選取最佳銀杏葉提取工藝。準(zhǔn)確稱取樣品20.0 g,經(jīng)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)處理樣品,過濾殘?jiān)?,濃縮提取液,用甲醇定容到500 mL,進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè),通過2.2中的方法計(jì)算銀杏內(nèi)酯含量,計(jì)算提取率。銀杏內(nèi)酯包括白果內(nèi)酯(BB)、銀杏內(nèi)酯A(A)、銀杏內(nèi)酯B(B)和銀杏內(nèi)酯C(C)的總和。具體的計(jì)算見公式(1):

    (1)

    2.5 單因素試驗(yàn)

    主要考察提取次數(shù)、提取時(shí)間(h)、乙醇的體積分?jǐn)?shù)和料液比(g / mL)對(duì)銀杏內(nèi)酯提取率的影響,按照2.2方法測(cè)定銀杏內(nèi)酯,并計(jì)算提取率。

    2.6 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

    本研究以銀杏內(nèi)酯提取率為指標(biāo),通過加熱回流的方式考察影響含量的主要因素及最佳提取條件,即提取時(shí)間、料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)和提取次數(shù),選取如下水平進(jìn)行正交試驗(yàn)。正交試驗(yàn)的因素水平見表3。

    表3 正交試驗(yàn)因素水平表Table 3 Factor level table of orthogonal experiment design

    3 結(jié)果與分析

    3.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果與分析

    3.1.1 不同提取次數(shù)對(duì)銀杏內(nèi)酯提取率的影響

    當(dāng)選擇提取條件為料液比1:5,提取2 h,乙醇體積分?jǐn)?shù)80%時(shí),選取提取次數(shù)分別為 1~7 次,由圖3a可知增加提取次數(shù)有利于提取率的提高,當(dāng)提取次數(shù)小于3次時(shí)提取率隨提取次數(shù)增加而增加,銀杏內(nèi)酯提取量增加;大于3 時(shí),銀杏內(nèi)酯提取率趨于平穩(wěn),表明銀杏葉中的內(nèi)酯接近提取完全,提取次數(shù)再多提取成本變大。

    圖3 單因素試驗(yàn)中不同條件對(duì)銀杏內(nèi)酯提取率的影響Fig.3 Impact of different conditions in single-factor experiment on extraction rate of ginkgolide

    3.1.2 不同提取時(shí)間對(duì)銀杏內(nèi)酯提取率的影響

    當(dāng)選擇提取條件為料液比 1:5,提取 3 次,乙醇體積分?jǐn)?shù)80%時(shí),分別選擇提取時(shí)間0.5、1、1.5、2、2.5 h,由圖3b可知隨著提取時(shí)間的增加,提取愈發(fā)完全,溶液中銀杏內(nèi)酯含量增加,所以提取率增大。但在 2 h 之后,增加提取時(shí)間,提取率基本穩(wěn)定,為節(jié)約資源和時(shí)間,2 h最佳。

    3.1.3 不同的乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)銀杏內(nèi)酯提取率的影響

    當(dāng)選擇提取條件為料液比 1:5,提取時(shí)間2 h,提取次數(shù)為 3 次,乙醇體積分?jǐn)?shù)選擇0,10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%時(shí),由圖3c可知乙醇體積分?jǐn)?shù)為40%時(shí),銀杏內(nèi)酯的提取率最高。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)大于40%時(shí)銀杏內(nèi)酯的提取率下降,這可能是由于提取溶液極性變化有關(guān)。

    3.1.4 不同料液比對(duì)銀杏內(nèi)酯提取效果的影響

    當(dāng)選擇提取條件為提取 3 次,提取時(shí)間2 h時(shí),在乙醇體積分?jǐn)?shù)為80%的條件下,選取料液比為 1:5、1:10、1:15、1:20、1:25,由圖3d可知料液比(g/mL)大于 1:15時(shí),乙醇溶液對(duì)銀杏內(nèi)酯提取效果不好,提取率較低。隨著料液比的減小,即溶劑量的增加,有利于銀杏內(nèi)酯的充分溶解,所以提取率增加。在料液比小于 1:15時(shí),提取率趨于穩(wěn)定。

    3.2 正交試驗(yàn)結(jié)果

    按L9(34)正交設(shè)計(jì)研究乙醇溶液加熱回流提取銀杏內(nèi)酯,以4種銀杏內(nèi)酯總量為指標(biāo),正交試驗(yàn)結(jié)果見表4。

    表4 銀杏內(nèi)酯提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Orthogonal experiment results of extraction technology of ginkgolides

    通過表5方差分析可知,乙醇濃度和提取次數(shù)對(duì)銀杏內(nèi)酯含量有顯著影響,且影響程度乙醇體積分?jǐn)?shù)大于提取次數(shù),其影響順序?yàn)镃>D>A>B,得出最佳提取工藝為A1B2C3D3,即提取時(shí)間1.5 h,料液比1:20,乙醇體積分?jǐn)?shù)50%,提取次數(shù)3次時(shí),銀杏內(nèi)酯提取率最高。

    表5 銀杏內(nèi)酯正交提取試驗(yàn)方差分析表Table 5 Variance analysis of orthogonal extraction experiment of ginkgolides

    3.3 驗(yàn)證結(jié)果

    為進(jìn)一步驗(yàn)證優(yōu)化工藝的可靠性及穩(wěn)定性,取3份藥材各20 g,按上述最佳提取工藝即提取時(shí)間1.5 h,料液比1:20,乙醇濃度50%,提取次數(shù)3次進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn),操作方法同前。結(jié)果表明,銀杏內(nèi)酯平均提取率為0.6786%,RSD為0.83%,表明此工藝穩(wěn)定可行。

    4 結(jié)論

    本試驗(yàn)以銀杏葉為原料,通過正交試驗(yàn)的方法確定最佳的提取工藝為提取時(shí)間1.5 h、料液比1:20、乙醇體積分?jǐn)?shù)50%、提取次數(shù)3次。此方法可以用于指導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn),提高銀杏內(nèi)酯的提取率,減少生產(chǎn)成本。通過優(yōu)化銀杏內(nèi)酯的檢測(cè)方法,用異丙醇做流動(dòng)相,可以減少雜質(zhì)對(duì)被測(cè)物質(zhì)的干擾,并提高被測(cè)物質(zhì)的分離度(R>7.2),改善峰形,更加快速高效地測(cè)定提取物中銀杏內(nèi)酯的含量。試驗(yàn)結(jié)果表明,本方法準(zhǔn)確、可靠。

    [1]陳西娟,王成章,葉建中.銀杏葉化學(xué)成分及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J].生物質(zhì)化學(xué)工程,2008,42(4):57-62.

    [2]李金生,趙琪,郝勇.國內(nèi)銀杏葉化學(xué)成分及制備工藝的研究進(jìn)展[J].白求恩軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2006,4(4):220-222.

    [3]KRAUS J. Water-soluble polysaccharides fromGinkgobilobaleaves [J]. Phytochemistry,1991, 30 (9): 3017-3020.

    [4]van BEEK T A, SCHEEREN H A,RANTIO T,et al. Determination of ginkgolides and bilobalide inGinkgobilobaleaves and phytopharmaceuticals [J]. J Chromatogr,1991,543: 375-387.

    [5]韓金玉,李海靜,褚巧偉等.天然藥物銀杏內(nèi)酯研究進(jìn)展[J].化工進(jìn)展,2000(2):23-25.

    [6]盧定強(qiáng),陳鈞.銀杏內(nèi)酯的藥理作用[J].江蘇理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2001,22(2):5-9.

    [7]van BEEK T A. Ginkgolides and bilobalide: Theirphysica, chromatographic and spectroscopic properties [J]. Bioorganic & Medicinal Chemistry,2005,13(17):5001-5012.

    [8]樓鳳昌,凌婭,唐于平,等.銀杏萜類內(nèi)酯的分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定[J].中國天然藥物,2004,2(1):11-15.

    [9]呂幫玉,楊新河,毛清黎,等.銀杏葉黃酮提取與測(cè)定研究進(jìn)展[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,11(3):91-95.

    [10]楊榮華,徐斌.銀杏葉中有效成分提取最優(yōu)化生產(chǎn)工藝研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生,2007,45(3):20-21.

    [11]YANG C, XU Y R, YAO W X. Extraction of pharmaceutical components fromGinkgobilobaleaves using supercritical carbon dioxide [J]. J Agric Food Chem,2002,50(4):846-849.

    [12]CHIU K L, CHENG Y C, CHEN J H,et al. Supercritical fluids extraction of Ginkgo ginkgolides and flavonoids [J].The Journal of Supercritical Fluids. 2002, 24(1):77-87.

    [13]ZHU X Y, MANG Y L, XIE J,et al. Response surface optimization of mechanochemical-assisted extraction of flavonoids and terpenetrilactones from Ginkgo leaves [J].Industrial Crops and Products. 2011,34(1):1041-1052.

    [14]黃敏珠,徐春玲,姚丹丹,等.銀杏葉片萜類內(nèi)酯含量測(cè)定方法改進(jìn)[J].醫(yī)學(xué)導(dǎo)報(bào),2010,29(3):377-378.

    [15]LIANG X M, JIN Y, WANG Y P,et al. Qualitative and quantitative analysis in quality control of traditional Chinese medicines [J]. Journal of Chromatography A,2009,1216(11):2033-2044.

    [16]SORA D I, STEFANESCU V, DAVID V,et al.Validation of an LC-MS/MS assay of terpenetrilactones in Ginkgo biloba extracts and pharmaceutical formulations through standard addition method [J].Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2009, 50(3): 459-468.

    [17]REN P, ZHAO X L, ZHANG J,et al.Synthesis of high selectivity polymeric adsorbent andits application on the separation of ginkgo flavonol glycosides and terpene lactones[J].Reactive & Functional Polymers ,2008 ,68(4): 899-909.

    Extraction technology of ginkgolides fromGinkgobilobaleaves

    LI Wen-dong1,2, GAO Qian-shan2,YANG Peng3, YANG Bing-tian3,WANG Xiao2*

    (1.School of Food Science and Engineering, Shandong Agricultural University, Taian 271018, China; 2. Shandong Provincial Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Control Technology, Shandong Analysis and Test Center, Shandong Academy of Sciences, Jinan 250014, China; 3. Jinan Senkang Sanfeng Biological Engineering Co. LTD, Jinan 250014, China)

    ∶We determined optimum extraction condition ofGinkgobilobaleaves with the extraction rate of ginkgolides (ginkgo lactone, ginkgolides A, ginkgolide B and ginkgolide C) as an index. We employed orthogonal experiment to systematically investigate the impact of extraction time, solid-liquid ratio, ethanol concentration, and extraction time on extraction technology ofGinkgobilobaleaves. Ginkgolides content was determined through optimization of high performance liquid chromatography (HPLC-ELSD) and isopropanol of mobile phase. We also calculated extraction rate. Optimum extraction conditions are extraction time of 1.5 h, solid-liquid ratio of 1:20, ethanol concentration of 50% and extraction times of 3. This technology can improve extraction rate of ginkgolides, save testing cost, and is applicable to industrial production.

    ∶Ginkgobilobaleaves; ginkgolides; orthogonal experiment; extraction rate; isopropyl alcohol

    10.3976/j.issn.1002-4026.2016.05.005

    2016-02-22

    山東省科技發(fā)展計(jì)劃(2014GZX219003)

    李文東(1990—),男,碩士研究生,研究方向?yàn)檗r(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程。

    *通信作者,王曉,男,研究員,研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物研究與開發(fā)。Email:wangx@sdas.org

    R284.2; O656.3

    A

    猜你喜歡
    銀杏葉內(nèi)酯銀杏
    會(huì)跳舞的銀杏葉
    活化石——銀杏
    銀杏葉(外一首)
    鴨綠江(2021年35期)2021-11-11 15:25:02
    銀杏
    銀杏葉(外一首)
    鴨綠江(2021年35期)2021-04-19 12:23:46
    穿心蓮內(nèi)酯滴丸
    論銀杏的栽植
    與銀杏葉的約會(huì)
    歲月(2018年2期)2018-02-28 20:51:50
    穿心蓮內(nèi)酯固體分散體的制備
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:27
    蒙藥如達(dá)七味散中木香烴內(nèi)酯和去氫木香內(nèi)酯的含量測(cè)定
    av福利片在线| a级毛片在线看网站| av有码第一页| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 激情在线观看视频在线高清| 久久狼人影院| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 久久性视频一级片| 欧美乱妇无乱码| av福利片在线| 午夜91福利影院| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 日韩三级视频一区二区三区| 99热国产这里只有精品6| 欧美一级毛片孕妇| 不卡av一区二区三区| 午夜免费成人在线视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 99在线视频只有这里精品首页| 操出白浆在线播放| 黄色毛片三级朝国网站| 国产精品综合久久久久久久免费 | 亚洲av电影在线进入| 欧美日韩一级在线毛片| 看免费av毛片| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲av电影在线进入| 国产国语露脸激情在线看| 99精品在免费线老司机午夜| 老汉色∧v一级毛片| 欧美激情 高清一区二区三区| 免费搜索国产男女视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 曰老女人黄片| 少妇被粗大的猛进出69影院| 电影成人av| 成人亚洲精品av一区二区 | 桃红色精品国产亚洲av| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久精品91蜜桃| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲激情在线av| 老鸭窝网址在线观看| 久久久久国内视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 午夜91福利影院| 亚洲中文字幕日韩| 1024香蕉在线观看| 男人的好看免费观看在线视频 | 日韩视频一区二区在线观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 一二三四在线观看免费中文在| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 免费人成视频x8x8入口观看| av天堂久久9| 欧美成人午夜精品| av视频免费观看在线观看| 亚洲国产欧美一区二区综合| svipshipincom国产片| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| a级片在线免费高清观看视频| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产精品久久电影中文字幕| 激情视频va一区二区三区| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美色视频一区免费| 精品国产乱子伦一区二区三区| 妹子高潮喷水视频| 99在线人妻在线中文字幕| 一区在线观看完整版| 怎么达到女性高潮| 精品电影一区二区在线| 淫秽高清视频在线观看| av片东京热男人的天堂| 91九色精品人成在线观看| av中文乱码字幕在线| 大陆偷拍与自拍| 操美女的视频在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 精品久久久久久,| 亚洲七黄色美女视频| 成人亚洲精品av一区二区 | 日韩有码中文字幕| netflix在线观看网站| 涩涩av久久男人的天堂| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产成人欧美在线观看| 国产乱人伦免费视频| 国产免费av片在线观看野外av| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久久久久久久免费视频了| 国产精品影院久久| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 搡老乐熟女国产| 久久久久久免费高清国产稀缺| 99国产精品免费福利视频| 麻豆国产av国片精品| 亚洲精品av麻豆狂野| 日韩精品青青久久久久久| 日韩视频一区二区在线观看| 夫妻午夜视频| 12—13女人毛片做爰片一| 国产亚洲欧美在线一区二区| 91麻豆av在线| 亚洲精品国产区一区二| 91成年电影在线观看| e午夜精品久久久久久久| 欧美人与性动交α欧美软件| 久久中文看片网| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美最黄视频在线播放免费 | 国产精品成人在线| 国产1区2区3区精品| 国产深夜福利视频在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美久久黑人一区二区| 91字幕亚洲| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲精品中文字幕在线视频| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲国产中文字幕在线视频| 激情视频va一区二区三区| 国产一区二区激情短视频| 亚洲欧美激情综合另类| 色老头精品视频在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久香蕉激情| 欧美激情久久久久久爽电影 | 嫁个100分男人电影在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 村上凉子中文字幕在线| 久久精品人人爽人人爽视色| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品二区激情视频| 日本一区二区免费在线视频| 激情在线观看视频在线高清| 长腿黑丝高跟| 亚洲欧美激情综合另类| 亚洲国产精品合色在线| 久久久久久久久久黄片| x7x7x7水蜜桃| 亚洲经典国产精华液单 | 国产av一区在线观看免费| 国产老妇女一区| 九色成人免费人妻av| 免费在线观看亚洲国产| 黄色配什么色好看| 国产精品免费一区二区三区在线| 在线看三级毛片| 亚洲最大成人中文| 日韩欧美三级三区| 国产视频内射| av天堂中文字幕网| 国产三级黄色录像| 如何舔出高潮| 亚洲中文字幕日韩| 18禁在线播放成人免费| 久久久久精品国产欧美久久久| 999久久久精品免费观看国产| 国产精品爽爽va在线观看网站| 老司机福利观看| 九九在线视频观看精品| 综合色av麻豆| 精品久久久久久久久久久久久| 久久久久久九九精品二区国产| 一个人免费在线观看电影| 精品久久久久久久久久久久久| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产色爽女视频免费观看| 欧美+亚洲+日韩+国产| 一夜夜www| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 日韩免费av在线播放| 两个人视频免费观看高清| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲精品日韩av片在线观看| 久9热在线精品视频| 亚洲,欧美,日韩| 欧美午夜高清在线| 麻豆av噜噜一区二区三区| av福利片在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 真实男女啪啪啪动态图| 村上凉子中文字幕在线| 欧美乱妇无乱码| 欧美乱色亚洲激情| 国产高清视频在线观看网站| 内地一区二区视频在线| 久久久久亚洲av毛片大全| 夜夜爽天天搞| 欧美日本视频| 美女黄网站色视频| 久久久国产成人精品二区| 熟女电影av网| 51午夜福利影视在线观看| 观看免费一级毛片| 91av网一区二区| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 哪里可以看免费的av片| 中文字幕免费在线视频6| 国产精品一区二区性色av| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲在线观看片| 午夜影院日韩av| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美高清性xxxxhd video| 日韩欧美 国产精品| 亚洲七黄色美女视频| 免费在线观看日本一区| 久久这里只有精品中国| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产精品一区二区性色av| 日日干狠狠操夜夜爽| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 亚洲精品日韩av片在线观看| 免费在线观看亚洲国产| 日本黄大片高清| 成人午夜高清在线视频| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲片人在线观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 露出奶头的视频| 国产在视频线在精品| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 一区二区三区四区激情视频 | 69av精品久久久久久| 成人欧美大片| 丰满的人妻完整版| 一级av片app| 亚洲精品在线美女| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品野战在线观看| 黄片小视频在线播放| 久久草成人影院| 国产高清视频在线播放一区| 禁无遮挡网站| 久久国产精品影院| av视频在线观看入口| 99久久精品一区二区三区| 久久99热这里只有精品18| 欧美丝袜亚洲另类 | 99在线人妻在线中文字幕| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲精品亚洲一区二区| www.www免费av| 免费看光身美女| 亚洲国产欧美人成| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 婷婷精品国产亚洲av在线| 桃红色精品国产亚洲av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 夜夜夜夜夜久久久久| 一级黄色大片毛片| 91在线精品国自产拍蜜月| 免费一级毛片在线播放高清视频| 一二三四社区在线视频社区8| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产精品一区二区免费欧美| 精品一区二区免费观看| 如何舔出高潮| 日本五十路高清| 欧美乱妇无乱码| 一个人看的www免费观看视频| 99国产综合亚洲精品| 99精品在免费线老司机午夜| 国产主播在线观看一区二区| 禁无遮挡网站| 中文字幕高清在线视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产日本99.免费观看| 午夜视频国产福利| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲av免费在线观看| 国产亚洲欧美98| 精品福利观看| 久久久久久久精品吃奶| 国产69精品久久久久777片| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 观看美女的网站| 99久久成人亚洲精品观看| 12—13女人毛片做爰片一| 乱人视频在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 精品国产亚洲在线| 麻豆国产97在线/欧美| 欧美中文日本在线观看视频| 天天一区二区日本电影三级| 色综合亚洲欧美另类图片| 一级作爱视频免费观看| 欧美乱色亚洲激情| 免费av毛片视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 丰满人妻一区二区三区视频av| 老司机福利观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产中年淑女户外野战色| 国产极品精品免费视频能看的| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产免费av片在线观看野外av| 日本免费a在线| 国产高清视频在线播放一区| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲18禁久久av| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久99久视频精品免费| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 成人av一区二区三区在线看| 九九热线精品视视频播放| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲天堂国产精品一区在线| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 深夜a级毛片| 丝袜美腿在线中文| 国产高清三级在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| 91在线精品国自产拍蜜月| 午夜久久久久精精品| 国产精品综合久久久久久久免费| 嫩草影院精品99| 欧美高清性xxxxhd video| 国产一区二区三区视频了| 黄色视频,在线免费观看| 国产精品久久电影中文字幕| 成年女人看的毛片在线观看| 久久久久久大精品| 精品午夜福利视频在线观看一区| 又粗又爽又猛毛片免费看| 深爱激情五月婷婷| 久久人妻av系列| 高清日韩中文字幕在线| 特大巨黑吊av在线直播| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 最近在线观看免费完整版| 国产一级毛片七仙女欲春2| 嫁个100分男人电影在线观看| 日本成人三级电影网站| 夜夜爽天天搞| 黄色日韩在线| 精品免费久久久久久久清纯| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 男人舔奶头视频| 一进一出抽搐动态| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久久久性生活片| 2021天堂中文幕一二区在线观| 日韩有码中文字幕| 精品人妻1区二区| 三级毛片av免费| 日韩免费av在线播放| 国产人妻一区二区三区在| 欧美一区二区精品小视频在线| av女优亚洲男人天堂| 91狼人影院| 亚洲美女视频黄频| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久久久国内视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| netflix在线观看网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产欧美日韩精品亚洲av| 久久久国产成人精品二区| 久久久久久久久久成人| 久久热精品热| 亚洲av免费在线观看| 青草久久国产| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲自拍偷在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 欧美又色又爽又黄视频| 色视频www国产| 亚洲乱码一区二区免费版| 久久久国产成人精品二区| 精品久久久久久,| 成年免费大片在线观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 如何舔出高潮| 丰满的人妻完整版| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久精品综合一区二区三区| 欧美高清成人免费视频www| 听说在线观看完整版免费高清| 韩国av一区二区三区四区| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 成人无遮挡网站| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲欧美清纯卡通| 精品人妻偷拍中文字幕| 成人鲁丝片一二三区免费| www日本黄色视频网| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产精品,欧美在线| 久久久精品大字幕| 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美潮喷喷水| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 内射极品少妇av片p| 欧美激情在线99| 亚洲av二区三区四区| 国模一区二区三区四区视频| 免费在线观看影片大全网站| 可以在线观看的亚洲视频| 国产精品影院久久| 婷婷丁香在线五月| 国产精品一及| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 成年女人永久免费观看视频| 国产伦在线观看视频一区| 欧美日韩乱码在线| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产淫片久久久久久久久 | 久久九九热精品免费| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲18禁久久av| 免费观看精品视频网站| 舔av片在线| 免费看光身美女| 能在线免费观看的黄片| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产单亲对白刺激| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲最大成人av| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 美女 人体艺术 gogo| 日韩成人在线观看一区二区三区| 日韩欧美在线二视频| 99热只有精品国产| 中文字幕av在线有码专区| 观看美女的网站| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产亚洲av嫩草精品影院| 久久热精品热| 精品午夜福利视频在线观看一区| 免费电影在线观看免费观看| av专区在线播放| 极品教师在线免费播放| 亚洲经典国产精华液单 | 久久精品人妻少妇| 久久99热6这里只有精品| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 熟女电影av网| 午夜激情欧美在线| 男人舔女人下体高潮全视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲无线在线观看| 又黄又爽又免费观看的视频| 午夜精品在线福利| 国产男靠女视频免费网站| 国产精品久久电影中文字幕| 免费高清视频大片| 搡老熟女国产l中国老女人| 免费人成视频x8x8入口观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 欧美色欧美亚洲另类二区| 精品久久久久久久久亚洲 | 国产一级毛片七仙女欲春2| 午夜激情福利司机影院| 精品国产三级普通话版| 99热精品在线国产| 51午夜福利影视在线观看| 国产视频一区二区在线看| 99精品久久久久人妻精品| 国产野战对白在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 有码 亚洲区| 99国产精品一区二区三区| 成人无遮挡网站| 日韩人妻高清精品专区| 校园春色视频在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 国产精品99久久久久久久久| 日韩欧美精品免费久久 | 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 久99久视频精品免费| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 免费观看的影片在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 国产三级黄色录像| 精品久久久久久久久久久久久| 色在线成人网| 精品熟女少妇八av免费久了| 白带黄色成豆腐渣| 性色av乱码一区二区三区2| 免费av观看视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 极品教师在线视频| 精品人妻1区二区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 悠悠久久av| 最近最新免费中文字幕在线| 啦啦啦韩国在线观看视频| 99在线人妻在线中文字幕| 久久久精品大字幕| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产单亲对白刺激| 午夜福利18| 夜夜夜夜夜久久久久| 午夜福利在线在线| 很黄的视频免费| 精品人妻1区二区| 精品人妻熟女av久视频| 日韩免费av在线播放| 日韩有码中文字幕| 婷婷精品国产亚洲av| 俺也久久电影网| 动漫黄色视频在线观看| a在线观看视频网站| 又粗又爽又猛毛片免费看| 亚洲不卡免费看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲av二区三区四区| 国产麻豆成人av免费视频| 国产高清激情床上av| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 啪啪无遮挡十八禁网站| 好男人电影高清在线观看| 亚洲avbb在线观看| 有码 亚洲区| 免费无遮挡裸体视频| 简卡轻食公司| 国产精品av视频在线免费观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 一区二区三区免费毛片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 中文在线观看免费www的网站| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲,欧美精品.| 韩国av一区二区三区四区| 久久久久久久精品吃奶| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 午夜免费激情av| 在线a可以看的网站| 毛片一级片免费看久久久久 | 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 99热6这里只有精品| 国产高潮美女av| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲精品亚洲一区二区| aaaaa片日本免费| 午夜福利18| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 一进一出好大好爽视频| 九色国产91popny在线| 床上黄色一级片| 在线播放无遮挡| а√天堂www在线а√下载| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 青草久久国产| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 黄色丝袜av网址大全| 精品午夜福利在线看| 赤兔流量卡办理| 亚洲av第一区精品v没综合| .国产精品久久| 精品一区二区三区视频在线| 国产三级中文精品| 男人狂女人下面高潮的视频| 草草在线视频免费看| 亚洲av成人精品一区久久| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美3d第一页| 国产一区二区在线av高清观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 女人被狂操c到高潮| 亚洲精品粉嫩美女一区| 久久国产精品影院| 国产成人欧美在线观看| 国产精品三级大全| 午夜两性在线视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 午夜两性在线视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 亚洲av电影在线进入| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 中文字幕免费在线视频6| 我要看日韩黄色一级片| 国产精品一区二区性色av| 直男gayav资源| 性色av乱码一区二区三区2| 日韩人妻高清精品专区| 男女那种视频在线观看| 色播亚洲综合网| 国产野战对白在线观看| 成人欧美大片| 俺也久久电影网| 男女下面进入的视频免费午夜| 韩国av一区二区三区四区| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲av.av天堂| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| aaaaa片日本免费| 国产国拍精品亚洲av在线观看|