• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    斑點叉尾鮰冬季大規(guī)模死亡病原分離與鑒定

    2017-01-03 11:02:41楊移斌劉天強陽濤胥寧董靖楊秋紅劉永濤艾曉輝
    關(guān)鍵詞:耶爾森魯氏氏菌

    楊移斌,劉天強,陽濤,胥寧,董靖,楊秋紅,劉永濤,艾曉輝*

    (1.中國水產(chǎn)科學研究院長江水產(chǎn)研究所,湖北 武漢 430223;2. 淡水水產(chǎn)健康養(yǎng)殖湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心,湖北 武漢 430223;3. 通威股份有限公司動物保健研究所,四川成都 610041)

    斑點叉尾鮰冬季大規(guī)模死亡病原分離與鑒定

    楊移斌1,2,劉天強3,陽濤3,胥寧1,2,董靖1,2,楊秋紅1,2,劉永濤1,2,艾曉輝1,2*

    (1.中國水產(chǎn)科學研究院長江水產(chǎn)研究所,湖北 武漢 430223;2. 淡水水產(chǎn)健康養(yǎng)殖湖北省協(xié)同創(chuàng)新中心,湖北 武漢 430223;3. 通威股份有限公司動物保健研究所,四川成都 610041)

    2016 年1—2月湖南安化地區(qū)網(wǎng)箱養(yǎng)殖的斑點叉尾鮰暴發(fā)大規(guī)模死亡,死亡率接近80%,發(fā)病魚體重為1.5~2.0 kg。本研究從患病瀕死魚肝、脾、腎分離到1 株致病菌,對其進行常規(guī)理化特性、分子生物學、人工感染實驗以及藥敏性檢測。結(jié)果顯示,分離菌株理化特性與魯氏耶爾森氏菌(Yersiniaruckeri)特征相符,與NCBI中登錄的魯氏耶爾森氏菌的16S rDNA基因同源性達99%以上,在系統(tǒng)發(fā)育樹上與魯氏耶爾森氏菌聚為一族。人工感染魚出現(xiàn)與自然發(fā)病相似癥狀,并能夠從發(fā)病魚組織中再次分離到相同病原菌,表明魯氏耶爾森氏菌為斑點叉尾鮰該病病原菌。該分離菌株對氟苯尼考、多西環(huán)素及新霉素等藥物高度敏感,本研究為斑點叉尾鮰暴發(fā)性出血病防控提供了理論依據(jù)。[中國漁業(yè)質(zhì)量與標準,2016,6(6):53-58]

    斑點叉尾鮰;魯氏耶爾森氏菌;16S rDNA;病害防控;鑒定

    斑點叉尾鮰(Ictaluruspunctatus),又稱溝鯰,屬鯰形目(Siluriformes)、鮰科(Ictaluridae),于1984 年由湖北水產(chǎn)研究機構(gòu)引進中國養(yǎng)殖。斑點叉尾鮰具有肉質(zhì)鮮嫩、營養(yǎng)豐富、無肌間刺等優(yōu)點,深受廣大消費者的喜愛。其對中國養(yǎng)殖環(huán)境適應(yīng)性較強,因此受到國內(nèi)養(yǎng)殖者推崇,養(yǎng)殖范圍及規(guī)模不斷擴大,產(chǎn)量不斷提高,目前斑點叉尾鮰養(yǎng)殖已在湖南、湖北、安徽和廣東等全國30 多個省(市)有分布。但近年來由于養(yǎng)殖品種的種質(zhì)退化,養(yǎng)殖環(huán)境日益惡化,斑點叉尾鮰在養(yǎng)殖過程中常遇到各種病害,死亡率通常很高,使斑點叉尾鮰養(yǎng)殖具有較大的風險,阻礙了其養(yǎng)殖業(yè)的進一步發(fā)展。目前報道的斑點叉尾鮰病害病原主要有氣單胞菌屬[1-2]、愛德華氏菌[3]、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌[4]、海豚鏈球菌[5]等。

    2016 年1—2月湖南安化地區(qū)網(wǎng)箱養(yǎng)殖的斑點叉尾鮰暴發(fā)大規(guī)模死亡,發(fā)病涉及同一水域大部分網(wǎng)箱,死亡率接近80%,發(fā)病魚體重為1.5~2.0 kg。由于當時氣溫較低,養(yǎng)殖的斑點叉尾鮰已經(jīng)不進食,給病害防控帶來了極大的難度。本研究從患病的斑點叉尾鮰體內(nèi)分離到一株高致病性的菌株,通過回歸感染、鑒定及藥敏分析等研究,確定了斑點叉尾鮰該病的病原菌及其種類,為斑點叉尾鮰養(yǎng)殖中冬季病害防控提供了參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實驗用魚

    具備典型癥狀的患病斑點叉尾鮰取自湖南安化水庫網(wǎng)箱養(yǎng)殖基地;回歸感染用魚規(guī)格(150±5) g,購自武漢白沙洲水產(chǎn)市場,魚體無傷痕,體格健壯,活力強,暫養(yǎng)7 d后無異常進行實驗。

    1.1.2 實驗試劑

    細菌生化微量鑒定管、藥敏紙片、營養(yǎng)肉湯、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、BHI液體及瓊脂培養(yǎng)基與水解酪蛋白瓊脂均購自杭州微生物試劑有限公司;細菌基因組DNA 提取試劑盒、DNA分子Marker均購自上海生工生物工程有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 臨床診斷

    對發(fā)病水域養(yǎng)殖條件、發(fā)病斑點叉尾鮰規(guī)格及發(fā)病情況進行現(xiàn)場調(diào)查;取瀕死病魚進行臨床診斷,確定該病的典型癥狀,并取病魚鰓、肝、腎及脾等重要組織器官進行光學顯微觀察。

    1.2.2 病原菌分離純化

    取具有典型癥狀患病瀕死斑點叉尾鮰的肝、腎、脾,在無菌條件下,在營養(yǎng)瓊脂及腦心浸出液平板上劃線。將平板置于28 ℃培養(yǎng)箱中24 h,挑取形態(tài)大小一致的優(yōu)勢菌落進一步純化培養(yǎng)。分離純化到的菌株加入濃度為25%的甘油,置于-80 ℃冰箱保存。

    1.2.3 人工回歸感染

    將分離純化后的菌株接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上,28 ℃培養(yǎng)24 h,用無菌生理鹽水洗下菌苔,參照麥氏比濁法調(diào)整菌懸液濃度為5. 9 × 107CFU/mL。

    選取健康斑點叉尾鮰分為實驗組和對照組,每組實驗用斑點叉尾鮰數(shù)量均為10尾,實驗組和對照組都設(shè)置2個重復(fù)。實驗時,水體溶氧保持在6.0~7.5 mg/L,魯氏耶爾森氏菌在20 ℃下能分泌溶血素的能力增強,細菌毒力較大[6],越易導致水生動物致病,故設(shè)定感染水溫為18~20 ℃,實驗過程中保持水質(zhì)良好,不投喂餌料。在實驗組每尾斑點叉尾鮰胸鰭基部注射制備的菌懸液,注射量為0.2 mL/尾,對照組在其胸鰭基部注射同等劑量的無菌生理鹽水。每隔3 h觀察斑點叉尾鮰的活動情況,以及體表是否出現(xiàn)異常癥狀,發(fā)病死亡病例及時進行記錄,并對瀕臨死亡的斑點叉尾鮰進行解剖,觀察器官組織變化情況,同時進行細菌的再分離,實驗周期為7 d。

    1.2.4 病原菌形態(tài)觀察及生理生化特征測定

    將分離純化得到病原菌接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上,置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h,觀察菌落大小及形態(tài)特征,并挑取形態(tài)一致的單個菌落進行革蘭氏染色,其他生理生化指標參照參考文獻[7]及微量生化反應(yīng)管說明書進行測定。

    1.2.5 病原菌16S rDNA基因部分序列測定及系統(tǒng)發(fā)育分析

    提取分離純化得到的菌株總DNA作為模板,利用通用引物27F: 5′-AGAGTTTGATC(C/A)TGGCTCAG-3',反向1492R: 5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′。PCR反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性3 min,94 ℃變性35 s,55 ℃退火35 s,72 ℃延伸1 min,此階段35個循環(huán),72 ℃溫育10 min[7]。PCR產(chǎn)物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司測序。測得的序列與NCBI 中的BLAST 進行相似性分析,用Mega5.1軟件中Neighbor-Joining法構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。

    1.2.6 藥敏特性分析

    分離菌株藥物敏感特性測定采用國際通用的紙片擴散法(K-B法),將分離純化得到的菌株接種于營養(yǎng)肉湯,28 ℃搖床(200 r/min)培養(yǎng)18 h后,稀釋菌液濃度至107CFU/mL,取200 μL均勻涂布于MH瓊脂平板上,貼上不同的藥敏紙片,置于28 ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后測量其抑菌圈直徑(mm),根據(jù)杭州微生物試劑有限公司藥敏紙片抑菌圈標準,確定致病菌株對藥物的敏感程度。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 臨床癥狀

    2016年1—2月湖南安化網(wǎng)箱養(yǎng)殖斑點叉尾鮰出現(xiàn)大規(guī)模暴發(fā)性持續(xù)性死亡,發(fā)病魚體主要集中在體重為1.5~2.0 kg的斑點叉尾鮰,發(fā)病迅速,發(fā)病死亡率很高,發(fā)病水溫在5~15 ℃。經(jīng)調(diào)查,斑點叉尾鮰養(yǎng)殖區(qū)域養(yǎng)殖用水未受到大規(guī)模污染,養(yǎng)殖水質(zhì)狀況符合漁業(yè)用水標準。通過對患病瀕死斑點叉尾鮰臨床診斷,發(fā)現(xiàn)該病的典型癥狀為發(fā)病初期病魚表現(xiàn)為行動遲緩,體質(zhì)瘦弱;體表胸鰭及頭部有明顯的出血癥狀,解剖發(fā)現(xiàn)組織器官有不同病變及充血,尤其是腎及脾嚴重充血等,腹腔有大量腹水;腸道多黏液,腸壁薄而發(fā)紅,有出血癥狀。鏡檢沒有發(fā)現(xiàn)寄生蟲等感染。

    2.2 病原分離純化

    選取具備典型癥狀瀕死斑點叉尾鮰,解剖后對肝、腎和脾進行無菌接種,結(jié)果發(fā)現(xiàn):在肝腎脾上均分離到一株優(yōu)勢菌,菌落在普通營養(yǎng)瓊脂上形態(tài)特征為灰白色、圓形、表面光滑、邊緣整齊,直徑為0.3~0.8 mm;優(yōu)勢菌株在腦心浸出液瓊脂上形成透明白色、圓形、表面光滑、邊緣整齊,直徑為0.4~0.9 mm的菌落。對該菌株挑取單一菌落于營養(yǎng)瓊脂上進一步分離純化,獲得純培養(yǎng)的菌株,暫命名為AH02。

    2.3 回歸感染

    調(diào)節(jié)AH02菌液濃度為5.9×107CFU/mL后,人工攻毒感染斑點叉尾鮰,發(fā)現(xiàn)感染后斑點叉尾鮰在7 d內(nèi)全部死亡。發(fā)病和死亡魚體表現(xiàn)出與自然發(fā)病相似的癥狀,如重要組織器官病變及出血,腹腔有大量腹水等,而對照無異常情況。對人工回歸感染瀕死的病魚體再次分離菌種,得到與菌株AH02形態(tài)特征一致的菌株,再分離菌株經(jīng)后續(xù)鑒定顯示與及菌株AH02為同一種。經(jīng)人工回歸感染實驗,表明分離菌株AH02對斑點叉尾鮰具有很強的致病性。

    2.4 病原菌主要生理生化特征

    分離菌株AH02為革蘭氏陰性桿菌,具有運動性,吲哚實驗為陰性,生理生化特征見表1,菌株AH02生理生化特征與魯氏耶爾森氏菌Yersiniaruckeri基本一致。

    表1 AH02菌株的生理生化特征

    Tab. 1 Physiological and biochemical characteristics of strain AH02

    測定項目TestitemAH02Y.ruckeri吲哚Indoletest--甲基紅Methylred++V-P試驗Voges-Proskauertest--硫化氫H2S--明膠液化Gelatinliquefaction+d運動性Motility++尿素Urea--賴氨酸Lysine-(+)精氨酸Arginine--鳥氨酸Ornithine++檸檬酸鹽Citrate--七葉苷Esculoside--丙二酸Malonicacid--木糖Xylose--麥芽糖Maltose++阿拉伯糖Arabinose--海藻糖Trehalose++果糖Fructose-+蔗糖Sucrose--棉子糖Raffinose--纖維二糖Cellobiose--鼠李糖Rhamnose--肌醇Inositol--山梨醇Sorbitol+-甘露醇Mannitol++D-阿東醇D-adonitol--蜜二糖Melibiose--水楊苷Salicin--乳糖Lactose--D-葡萄糖產(chǎn)氣D-glucoseaerogenesis-(-)D-葡萄糖產(chǎn)酸D-glucoseacidproductionproduction++

    注:“+”示陽性;“-”示陰性;“(+)”示陽性反應(yīng)超過24 h; “(-)”示陰性反應(yīng)超過24 h; “d”示11%~89%菌株為陽性。

    2.5 分離菌株16S rDNA基因部分序列測定及系統(tǒng)發(fā)育樹的建立

    通過提取分離純化得到的菌株DNA,以其為PCR模板擴增16S rDNA基因。經(jīng)測序后在NCBI中進行比對分析,分離菌株AH02的16S rDNA基因與魯氏耶爾森氏菌(Yersiniaruckeri;登錄號:FJ908709.1,HQ222844.1,KJ606914.1,LAB681666.1)同源性為99%。選取GenBank中部分魯氏耶爾森氏菌和常見腸桿菌的16S rDNA基因序列,利用Neighbor-Joining 方法進行系統(tǒng)發(fā)育學分析,結(jié)果顯示分離菌株AH02均與魯氏耶爾森氏菌聚為一簇(圖1)。

    2.6 藥敏實驗

    實驗測定了分離菌株AH02對14種抗生素的敏感性(表2)。結(jié)果顯示,菌株AH02對氟苯尼考、新霉素、多西環(huán)素、左氧氟沙星、鏈霉素、妥布霉素、慶大霉素及丁胺卡那霉素高度敏感;對頭孢拉定、阿奇霉素中度敏感;對苯唑西林、磺胺異噁唑、克林霉素及利福平不敏感。

    3 討論

    魯氏耶爾森氏菌隸屬于腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、耶爾森氏菌屬(Yersinia),該菌主要引起鮭鱒等冷水性魚類暴發(fā)紅嘴病[8-9],隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,魯氏耶爾森氏菌已經(jīng)成為中國淡水魚類突發(fā)性出血病主要病原之一,其主要癥狀表現(xiàn)為魚體表有出血,重要組織器官嚴重充血出血具有腹水,從而常導致大量死亡[10]。國內(nèi)已經(jīng)報道鰱、鳙[11]、鱘[12-13]等感染魯氏耶爾森氏菌發(fā)病。本研究在湖南安化診斷的斑點叉尾鮰病害與此類似,而通過病原鑒定及人工回歸感染也確定了該病的病原菌為魯氏耶爾森氏菌。本研究開展魯氏耶爾森氏菌抗生素敏感性研究,結(jié)果顯示其對氟苯尼考、新霉素、多西環(huán)素、左氧氟沙星、鏈霉素、妥布霉素、慶大霉素及丁胺卡那霉素高度敏感。藥敏實驗與楊移斌等[13]分離的鱘魯氏耶爾森氏菌HD0923對多西環(huán)素、丁胺卡那霉素、氟苯尼考、鏈霉素、左氧氟沙星、慶大霉素等藥物高度敏感的結(jié)果一致,故在斑點叉尾鮰養(yǎng)殖生產(chǎn)上可選擇水產(chǎn)常用抗生素如多西環(huán)素、氟苯尼考等進行治療。但一般魚類病原耐藥性存在嚴重的地區(qū)性,建議采用抗生素治療時先做藥敏實驗,以達到較好的治療效果。本研究中魯氏耶爾森氏菌AH02對一些常用抗生素產(chǎn)生了較強耐藥性,這說明在斑點叉尾鮰養(yǎng)殖過程中病害防控措施需進一步改進。雖然目前藥物治療仍然是防治病害的主要手段,但嘗試新的措施亦未嘗不可,如注射疫苗法或者藥物與生態(tài)防治結(jié)合法等。

    圖1 根據(jù)菌株AH02 16S rDNA基因序列同源性構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹Fig.1 Phylogenetic tree based on 16S rDNA sequence homolog of strain AH02

    藥物Drug菌圈直徑判斷標準/mmJudgmentstandardofinhibitionzonediameter不敏感Resistant中度敏感Mediumsensitivity高度敏感Highlysensitive藥物含量/(μg·片-1)Dose抑菌圈直徑/mmInhibitionzonediameter敏感性Sensitivity苯唑西林Oxacillin≤1011~12≥1310不敏感頭孢拉定Cefadroxil≤1415~17≥183017中度敏感磺胺異噁唑Sulfisoxazole≤1213~16≥173000不敏感氟苯尼考Florfenicol≤1213~17≥187530高度敏感克林霉素Clindamycin≤1415~20≥2120不敏感利福平Rifampicin≤1617~19≥2050不敏感阿奇霉素Azithromycin≤1314~17≥181515中度敏感新霉素Neomycin≤1213~16≥173025高度敏感多西環(huán)素Doxycycline≤1213~15≥163024高度敏感左氧氟沙星Levofloxacin≤1314~16≥17530高度敏感鏈霉素Streptomycin≤1112~14≥151017高度敏感妥布霉素Tobramycin≤1213~14≥151020高度敏感慶大霉素Gentamicin≤1213~14≥151026高度敏感丁胺卡那霉素Amikacin≤1415~16≥173025高度敏感

    本研究中斑點叉尾鮰發(fā)病時期處在冬天,水溫在5~15 ℃,而此時斑點叉尾鮰已經(jīng)停食,體質(zhì)相對較弱,而此時魯氏耶爾森氏菌卻活力較強,并能分泌較多毒素[6],導致病害的大規(guī)模暴發(fā)。而在整個發(fā)病期間由于鮰不吃食,故只能通過外部消毒進行處理,而無法伴餌投喂,導致持續(xù)性死亡,引起較大經(jīng)濟損失。這個病例說明,在高密度養(yǎng)殖模式下,病害頻發(fā)的同時病原特性正在發(fā)生變化,一是病原種類的多樣化,二是病原的致病條件范圍進一步擴大。為確保水產(chǎn)品質(zhì)量安全,建議嚴格控制抗生素類藥物的使用,加強魚類病害預(yù)防措施的研發(fā),探討新的科學養(yǎng)殖模式,實現(xiàn)水產(chǎn)健康養(yǎng)殖,保障水產(chǎn)品質(zhì)量安全。

    [1] 劉韜, 王二龍, 汪開毓, 等. 河南中牟地區(qū)斑點叉尾鮰突發(fā)性敗血癥病原分離及鑒定[J]. 中國預(yù)防獸醫(yī)學報, 2016, 38(1):53-57.

    [2] 劉堂水, 汪成竹, 陳昌福. 斑點叉尾鮰細菌性病原的分離與鑒定[J]. 華中農(nóng)業(yè)大學學報, 2006, 25(5):550-554.

    [3] 梁萬文, 陳明, 余曉麗, 等. 斑點叉尾鮰腸敗血癥病原菌的分離與鑒定[J]. 西南農(nóng)業(yè)學報, 2007, 20(5):1124-1129.

    [4] 耿毅, 汪開毓, 陳德芳, 等. 斑點叉尾鮰嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌的分離鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析[J]. 中國獸醫(yī)學報, 2007, 27(3):330-335.

    [5] 陳德芳. 斑點叉尾鮰海豚鏈球菌病病原學、病理學和診斷方法研究[D]. 雅安: 四川農(nóng)業(yè)大學, 2011.

    [6] 范方玲, 汪開毓, 耿毅, 等. 斑點叉尾(Ictalunespunctatus)源魯氏耶爾森氏菌的分離鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析[J]. 海洋與湖沼, 2010, 41(6): 862-868.

    [7] 東秀珠, 蔡妙英. 常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊[M]. 北京: 科學出版社, 2001.

    [8] Fouz B, Zarza C, Amaro C. First description of non-motileYersiniaruckeriserovar I strains causing disease in rainbowtrout,Oncorhynchusmykiss(Walbaum), cultured in Spain[J]. J Fish Dis, 2006,29: 339-346.

    [9] 張曉君. 魯氏耶爾森氏菌及魚類相應(yīng)感染癥[J]. 河北科技師范學院學報, 2004, 18(3):77-80.

    [10] 滕濤, 梁利國, 謝駿. 大宗淡水魚細菌性疾病研究進展[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學, 2015(11):8-12.

    [11] 徐伯亥, 殷戰(zhàn), 陳燕燊, 等. 鰱、鳙魚一種新的傳染病——Yersiniaruckeri,一種新的鰱、鳙魚病原菌[J]. 科學通報, 1991(8):620-622.

    [12] 李紹戊, 王荻, 馮娟, 等. 養(yǎng)殖鱘魚出血癥病原魯氏耶爾森菌的分離鑒定和致病性研究[J]. 海洋與湖沼, 2014, 45(3):561-567.

    [13] 楊移斌, 夏永濤, 鄭衛(wèi)東, 等. 鱘源魯氏耶爾森氏菌的分離鑒定及藥敏特性研究[J]. 水生生物學報, 2013, 37(2):393-398.

    Isolation and identification of pathogenic bacterium from Ictalurus punctatus

    YANG Yibin1,2, LIU Tianqiang3,YANG Tao3, XU Ning1,2, DONG Jing1,2, YANG Qiuhong1,2, LIU Yongtao1,2, AI Xiaohui1,2*

    (1.Yangtze River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Wuhan 430223, China;2. Hu Bei Freshwater Aquaculture Collaborative Innovation Center, Wuhan 430223, China;3. Animal Health Research Institute,Tongwei Co., LTD, Chengdu 610041, China)

    In January—February 2016, a massive death ofIctaluruspunctatusby cage culture outbroke in Anhua region of Hunan province, and it was caused nearly 80% mortality rate, the body weight of onset fish being 1.5 ~ 2.0 kg. A predominant bacterium was isolated from the liver, spleen, and kidney of the infectedIctaluruspunctatusduring the disease outbreak period. The bacterium was identified by common biochemical tests and molecular biology experiments. And artificial infection tests and antibiotic sensitivity tests were also performed. Results showed that the physiological and biochemical characteristics of the bacterium were coincident well withYersiniaruckeri, and its 16S rDNA gene sequences had more than 99% homology toYersiniaruckeri, indicating that it belonged toYersiniaruckerifamily by phylogenetic analysis in NCBI. In addition, the artificially infectedIctaluruspunctatusexhibited similar clinical signs with the naturally infected cases, and the bacterium was able to be re-isolated from theIctaluruspunctatus. It showed thatYersiniaruckeriwas the pathogen for theIctaluruspunctatusdisease. The isolated bacterium was sensitive to florfenicol, doxycycline, neomycin and some other drugs. This study provided theoretical basis for the prevention and control of the explosive hemorrhagic disease ofIctaluruspunctatus. [Chinese Fishery Quality and Standards, 2016, 6(6):53-58]

    Ictaluruspunctatus;Yersiniaruckeri; 16S rDNA; disease prevention and control;identification

    AI Xiaohui, aixh@yfi.ac.cn

    2016-06-24;接收日期:2016-08-24

    公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201203085);通威合作項目(TWAH20150615)

    楊移斌(1988-),男,實習研究員,研究方向為水生動物病害臨床診斷及其防控技術(shù),yangyb1988@126.com 通信作者:艾曉輝,研究員,研究方向為水產(chǎn)品質(zhì)量安全,aixh@yfi.ac.cn

    S94

    A

    2095-1833(2016)06-0053-06

    猜你喜歡
    耶爾森魯氏氏菌
    我國華東與華南地區(qū)養(yǎng)殖魚類遲緩愛德華氏菌分離株的多樣性分析
    云南省金沙江中下游流域致病性耶爾森菌調(diào)查研究
    《豐乳肥臀》中母親上官魯氏的形象分析
    齊氏姬鼠-大絨鼠鼠疫疫源地內(nèi)鼠疫主要宿主動物和指示動物攜帶非鼠疫耶爾森菌的調(diào)查研究
    豬耶爾森氏菌病的分析、診斷和防控措施
    飼料博覽(2019年1期)2019-02-14 21:44:22
    西寧野生動物園靈長類動物糞便中小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌的檢測
    飼料維生素C含量對半滑舌鰨抵抗遲緩愛德華氏菌感染的影響
    上官魯氏和凱蒂的母親形象比較研究
    豐乳肥臀
    Tn7轉(zhuǎn)座子在大腸桿菌、遲鈍愛德華氏菌及鰻弧菌中的應(yīng)用
    男的添女的下面高潮视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产精品蜜桃在线观看| 国产av一区二区精品久久| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲av.av天堂| 日日摸夜夜添夜夜爱| 99热6这里只有精品| 亚洲国产看品久久| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 最黄视频免费看| 成人影院久久| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲久久久国产精品| 亚洲av电影在线进入| 国产伦理片在线播放av一区| 免费人妻精品一区二区三区视频| 青青草视频在线视频观看| 国产片特级美女逼逼视频| 免费黄频网站在线观看国产| 十八禁网站网址无遮挡| 少妇被粗大猛烈的视频| 日本av手机在线免费观看| 麻豆乱淫一区二区| 午夜视频国产福利| 久久久久久久久久久久大奶| 大码成人一级视频| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲一码二码三码区别大吗| √禁漫天堂资源中文www| 国产老妇伦熟女老妇高清| 午夜福利视频在线观看免费| 永久网站在线| 中国三级夫妇交换| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 纵有疾风起免费观看全集完整版| √禁漫天堂资源中文www| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲欧美色中文字幕在线| 99视频精品全部免费 在线| 一区二区av电影网| 91精品国产国语对白视频| 国产精品久久久久久久久免| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 黄色 视频免费看| 深夜精品福利| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产精品一二三区在线看| 亚洲精品一二三| 在线看a的网站| 欧美日韩精品成人综合77777| 女人精品久久久久毛片| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 最近中文字幕高清免费大全6| 久久韩国三级中文字幕| 国产精品久久久久久av不卡| 色视频在线一区二区三区| 97人妻天天添夜夜摸| 99久久人妻综合| 两个人免费观看高清视频| 岛国毛片在线播放| 亚洲成色77777| 亚洲精品视频女| 美女国产视频在线观看| 天美传媒精品一区二区| av女优亚洲男人天堂| 久久久久网色| 国产又爽黄色视频| 岛国毛片在线播放| 免费观看a级毛片全部| 久久久精品94久久精品| 人妻人人澡人人爽人人| 香蕉精品网在线| 亚洲性久久影院| 日韩成人伦理影院| 国产伦理片在线播放av一区| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 日本黄色日本黄色录像| 波野结衣二区三区在线| 视频在线观看一区二区三区| 午夜久久久在线观看| 又黄又粗又硬又大视频| 如何舔出高潮| 欧美+日韩+精品| 国产精品偷伦视频观看了| 五月玫瑰六月丁香| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美3d第一页| 高清在线视频一区二区三区| 91成人精品电影| 九九爱精品视频在线观看| 午夜免费观看性视频| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 国产成人精品久久久久久| 免费av中文字幕在线| 免费观看无遮挡的男女| 国产精品嫩草影院av在线观看| 成人二区视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲经典国产精华液单| 日韩制服骚丝袜av| a 毛片基地| 亚洲精品一二三| 波多野结衣一区麻豆| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 成人综合一区亚洲| 国产精品偷伦视频观看了| 久久精品久久精品一区二区三区| 午夜福利视频在线观看免费| 男的添女的下面高潮视频| 久久ye,这里只有精品| 久久精品久久久久久久性| 国产在线免费精品| 大片电影免费在线观看免费| 热re99久久精品国产66热6| 免费看光身美女| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 我要看黄色一级片免费的| 国产淫语在线视频| 亚洲天堂av无毛| 91精品国产国语对白视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 午夜日本视频在线| 久久午夜福利片| 天天影视国产精品| 成人黄色视频免费在线看| 美女福利国产在线| 日本91视频免费播放| 国产免费福利视频在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产日韩欧美亚洲二区| 大香蕉久久成人网| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 少妇的逼水好多| 国产精品成人在线| 日韩欧美精品免费久久| 国产色爽女视频免费观看| 国产成人精品无人区| 91久久精品国产一区二区三区| 少妇熟女欧美另类| av有码第一页| 黑人猛操日本美女一级片| 国产一级毛片在线| 国产成人精品无人区| 成人影院久久| 一个人免费看片子| 日本与韩国留学比较| 久久久久久久精品精品| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 22中文网久久字幕| 热re99久久国产66热| 欧美97在线视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 黄片播放在线免费| 精品一区二区三卡| 成人黄色视频免费在线看| 一区二区三区乱码不卡18| 国产xxxxx性猛交| 18在线观看网站| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲三级黄色毛片| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 国产精品久久久久成人av| 精品一品国产午夜福利视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲国产最新在线播放| 亚洲久久久国产精品| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 国产精品不卡视频一区二区| 七月丁香在线播放| 国产精品一二三区在线看| 国产精品.久久久| av又黄又爽大尺度在线免费看| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产欧美亚洲国产| 有码 亚洲区| 黄色 视频免费看| 国产男女超爽视频在线观看| 777米奇影视久久| 国产日韩欧美视频二区| 99国产精品免费福利视频| 26uuu在线亚洲综合色| 午夜福利影视在线免费观看| 捣出白浆h1v1| 国产精品免费大片| 亚洲美女搞黄在线观看| 欧美精品一区二区大全| 午夜福利视频精品| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 各种免费的搞黄视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产欧美亚洲国产| 国产激情久久老熟女| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲第一av免费看| 欧美bdsm另类| 99热6这里只有精品| 五月开心婷婷网| 亚洲国产欧美在线一区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 精品熟女少妇av免费看| 国产1区2区3区精品| 国产色婷婷99| 一区二区av电影网| 一边摸一边做爽爽视频免费| 天堂中文最新版在线下载| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美97在线视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 美女国产高潮福利片在线看| 熟女电影av网| 91在线精品国自产拍蜜月| 久热久热在线精品观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 99久久人妻综合| 日韩av在线免费看完整版不卡| 91精品伊人久久大香线蕉| 日韩电影二区| 少妇人妻久久综合中文| 国产成人欧美| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产片内射在线| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 成人二区视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲高清免费不卡视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲精品自拍成人| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲精品美女久久av网站| 十分钟在线观看高清视频www| 毛片一级片免费看久久久久| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 十八禁网站网址无遮挡| 熟女电影av网| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 老司机亚洲免费影院| 伊人久久国产一区二区| 欧美日韩综合久久久久久| 爱豆传媒免费全集在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| 久热这里只有精品99| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 男男h啪啪无遮挡| 国产乱人偷精品视频| 亚洲在久久综合| 一区在线观看完整版| 久久青草综合色| 久热久热在线精品观看| 国产成人精品福利久久| 五月伊人婷婷丁香| 91精品伊人久久大香线蕉| av线在线观看网站| 成人亚洲欧美一区二区av| 日本wwww免费看| 一级毛片我不卡| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲欧洲日产国产| 三级国产精品片| 熟女电影av网| 美女内射精品一级片tv| 黄色配什么色好看| 午夜免费鲁丝| 国产精品不卡视频一区二区| 男女国产视频网站| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 妹子高潮喷水视频| 久久免费观看电影| 精品一区二区三区视频在线| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久久精品免费免费高清| 草草在线视频免费看| 久久精品久久久久久久性| 母亲3免费完整高清在线观看 | 男人爽女人下面视频在线观看| 久久女婷五月综合色啪小说| 一二三四中文在线观看免费高清| 18禁国产床啪视频网站| av天堂久久9| 日本欧美视频一区| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲精品国产av蜜桃| 只有这里有精品99| 久久久久国产精品人妻一区二区| 精品人妻偷拍中文字幕| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产熟女欧美一区二区| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲精品美女久久av网站| 伦理电影免费视频| 国产午夜精品一二区理论片| 高清av免费在线| 精品亚洲成a人片在线观看| 日韩伦理黄色片| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲,一卡二卡三卡| 蜜桃在线观看..| 大片电影免费在线观看免费| 国产成人精品一,二区| 日本wwww免费看| 久热久热在线精品观看| 午夜av观看不卡| 韩国av在线不卡| 大话2 男鬼变身卡| 男人爽女人下面视频在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲成av片中文字幕在线观看 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 国产成人一区二区在线| 青春草亚洲视频在线观看| 成年女人在线观看亚洲视频| 国产成人精品婷婷| 亚洲三级黄色毛片| 有码 亚洲区| 一级爰片在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 男人添女人高潮全过程视频| 国产成人精品婷婷| 精品国产一区二区三区四区第35| 爱豆传媒免费全集在线观看| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 如何舔出高潮| 国产一区二区在线观看日韩| 香蕉精品网在线| 欧美日韩视频精品一区| 黄色 视频免费看| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 这个男人来自地球电影免费观看 | 老司机影院成人| 色网站视频免费| 大片免费播放器 马上看| 看免费成人av毛片| 最近中文字幕高清免费大全6| 99re6热这里在线精品视频| 在线观看国产h片| 日韩一区二区视频免费看| 欧美精品国产亚洲| 午夜免费观看性视频| 大片电影免费在线观看免费| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 少妇人妻 视频| 18禁观看日本| 久久久久精品久久久久真实原创| 九九爱精品视频在线观看| 日韩中字成人| 久久人人97超碰香蕉20202| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久久久久人妻| 日韩精品有码人妻一区| 自线自在国产av| 26uuu在线亚洲综合色| 午夜精品国产一区二区电影| 搡女人真爽免费视频火全软件| 久久久久久久大尺度免费视频| 香蕉国产在线看| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 黄色视频在线播放观看不卡| 国产永久视频网站| 秋霞在线观看毛片| 超色免费av| a级毛色黄片| 99国产综合亚洲精品| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲性久久影院| 黑人猛操日本美女一级片| 成年av动漫网址| 超色免费av| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 2022亚洲国产成人精品| 欧美3d第一页| 久久精品国产自在天天线| 久久久久久人人人人人| 精品一区二区免费观看| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲av福利一区| 国产又爽黄色视频| √禁漫天堂资源中文www| 少妇的逼水好多| 欧美精品av麻豆av| 十八禁网站网址无遮挡| 久久韩国三级中文字幕| 99国产综合亚洲精品| 国产精品久久久久成人av| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 久久人人爽人人爽人人片va| 国产午夜精品一二区理论片| 在线观看国产h片| 人妻一区二区av| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久久久久久久久久免费av| 久久国内精品自在自线图片| 国产男女超爽视频在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 边亲边吃奶的免费视频| 少妇熟女欧美另类| 一区在线观看完整版| 亚洲国产成人一精品久久久| 成人国产麻豆网| 九九爱精品视频在线观看| 亚洲国产精品专区欧美| 国产高清三级在线| 国产精品三级大全| 午夜福利,免费看| 亚洲精品久久午夜乱码| 欧美日韩综合久久久久久| 最近手机中文字幕大全| 亚洲一码二码三码区别大吗| 99热6这里只有精品| 国产一区二区三区av在线| 国产日韩欧美视频二区| 日韩中字成人| 国产高清三级在线| 亚洲欧洲日产国产| 一本一本久久a久久精品综合妖精 国产伦在线观看视频一区 | √禁漫天堂资源中文www| 久久久欧美国产精品| 中国国产av一级| 看免费成人av毛片| 性色avwww在线观看| 全区人妻精品视频| 成年人午夜在线观看视频| 这个男人来自地球电影免费观看 | 国产精品嫩草影院av在线观看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品一区www在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看 | 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 精品一品国产午夜福利视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产免费现黄频在线看| 国产片特级美女逼逼视频| 精品人妻偷拍中文字幕| 天堂俺去俺来也www色官网| 日本午夜av视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 少妇的丰满在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 久久热在线av| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日韩欧美精品免费久久| 国产福利在线免费观看视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 制服诱惑二区| 乱人伦中国视频| 亚洲av男天堂| h视频一区二区三区| 国产精品女同一区二区软件| 少妇高潮的动态图| 一本大道久久a久久精品| 日韩av不卡免费在线播放| 久久久精品区二区三区| 99热国产这里只有精品6| 乱人伦中国视频| 国产男人的电影天堂91| 欧美人与善性xxx| 亚洲成人手机| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 久久精品夜色国产| 欧美日韩精品成人综合77777| 乱人伦中国视频| 亚洲精品色激情综合| 两个人免费观看高清视频| 免费观看性生交大片5| 亚洲av电影在线进入| 五月天丁香电影| 国产极品天堂在线| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久久久久伊人网av| h视频一区二区三区| 看免费av毛片| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 一本色道久久久久久精品综合| av视频免费观看在线观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 插逼视频在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 成人手机av| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 两个人免费观看高清视频| 免费观看性生交大片5| 成年美女黄网站色视频大全免费| 51国产日韩欧美| 69精品国产乱码久久久| 国产xxxxx性猛交| 国产精品女同一区二区软件| 90打野战视频偷拍视频| 熟女人妻精品中文字幕| 视频区图区小说| 亚洲国产看品久久| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美日韩综合久久久久久| 97人妻天天添夜夜摸| 欧美日韩视频精品一区| videos熟女内射| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 伦理电影大哥的女人| 久久国内精品自在自线图片| 国产精品偷伦视频观看了| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲精品色激情综合| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 丝袜美足系列| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 啦啦啦在线观看免费高清www| 捣出白浆h1v1| 老司机亚洲免费影院| 国产精品无大码| 在线观看人妻少妇| 国产精品欧美亚洲77777| 国产一区二区激情短视频 | 免费人成在线观看视频色| 看免费av毛片| 免费观看在线日韩| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲精品色激情综合| 宅男免费午夜| 午夜91福利影院| 久久99精品国语久久久| 国产乱人偷精品视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 亚洲高清免费不卡视频| 伊人亚洲综合成人网| 韩国精品一区二区三区 | 久久久久国产网址| 在现免费观看毛片| 香蕉国产在线看| 久久久国产欧美日韩av| 在线观看国产h片| 中文字幕人妻丝袜制服| 另类精品久久| 亚洲国产欧美在线一区| 大香蕉久久网| 在现免费观看毛片| 国产精品一国产av| 成年动漫av网址| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| av线在线观看网站| 丰满乱子伦码专区| 久久久久久久久久人人人人人人| 99热全是精品| 美女国产视频在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 一区二区三区乱码不卡18| 日本与韩国留学比较| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 中文字幕免费在线视频6| 欧美国产精品一级二级三级| 国产免费现黄频在线看| 麻豆乱淫一区二区| 女人精品久久久久毛片| 国产在线视频一区二区| 最近2019中文字幕mv第一页| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产高清不卡午夜福利| 青春草国产在线视频| 日韩中文字幕视频在线看片| 不卡视频在线观看欧美| 狂野欧美激情性bbbbbb| 美女国产视频在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 亚洲天堂av无毛| 成年女人在线观看亚洲视频| 99九九在线精品视频| 香蕉国产在线看| 久久精品aⅴ一区二区三区四区 | 亚洲欧美日韩另类电影网站| 桃花免费在线播放| 捣出白浆h1v1| 亚洲欧美一区二区三区国产| 成人国产av品久久久| 老熟女久久久| 久久ye,这里只有精品| 国产成人精品久久久久久| 久久久久久久国产电影| 久久影院123| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 在线亚洲精品国产二区图片欧美|