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    正交試驗優(yōu)選白及組培苗生根培養(yǎng)基

    2017-01-03 01:01:37黃志偉
    浙江林業(yè)科技 2016年1期
    關(guān)鍵詞:白及培苗生根

    曹 劍,黃志偉

    (重慶三峽職業(yè)學(xué)院農(nóng)林科技系,重慶 404155)

    正交試驗優(yōu)選白及組培苗生根培養(yǎng)基

    曹 劍,黃志偉

    (重慶三峽職業(yè)學(xué)院農(nóng)林科技系,重慶 404155)

    為優(yōu)化白及(Bletilla striata)組培苗生根技術(shù)體系,試驗以1/2MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基,采用4因素3水平(L9(34))3次重復(fù)正交試驗,研究NAA、GA3、6-BA及香蕉泥4因素不同組合對白及組培苗生根效果的影響。結(jié)果表明,4個試驗因素對白及生根的影響大小程度依次為NAA > 香蕉泥 > GA3> 6-BA,其中NAA、GA3及香蕉泥有促進(jìn)白及根系生長的作用,6-BA則對白及生根有抑制作用;白及生根培養(yǎng)基的最適配方為:1/2MS+ NAA0.2 mg/L + GA30.5mg/L+香蕉泥30g/L;白及根系生長曲線,總體呈慢—快—慢的“S”型增長。

    白及;組培苗;正交試驗;生根培養(yǎng);生長曲線

    白及(Bletilla striata)又名及白芨、連及草、白根、紫蕙等,為蘭科(Orchidaceae)白及屬(Bletilla)植物。白及最早被記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》中,得名是因“其根白色,連及而生”。白及以干燥塊莖入藥,其藥性甘、苦、澀,性寒,歸肺、胃、肝經(jīng),具有收斂止血,消腫生肌之效,主治體內(nèi)外諸出血癥,是具有相當(dāng)發(fā)展前景的藥用原料及生物醫(yī)學(xué)材料,其經(jīng)濟(jì)價值不容忽視[1~2]。但白及種子較小,自然條件下需與真菌共生才能萌發(fā),實生苗的栽培較為困難,而傳統(tǒng)分株等無性繁殖方式的繁殖系數(shù)極低。近年來,由于人為的過度采挖和天然生境的破壞,其野生資源急劇減少,瀕臨滅絕,被國家列為重點保護(hù)的野生藥用植物之一[3~4]。

    目前,隨著國內(nèi)越來越多的企業(yè)及種植戶加入到白及生產(chǎn)行列,白及種苗的需求量迅速增加,組培苗以其高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、整齊劃一等優(yōu)良特性已被廣大種植者爭相采用,逐漸取代了傳統(tǒng)的分株繁殖方式。然而在長期增殖過程中存在一部分弱苗、玻璃化苗,影響正常的繼代擴(kuò)繁,降低了生根率與移栽緩苗成活率,繼而降低種苗品質(zhì),嚴(yán)重影響正常的工廠化生產(chǎn)與效益。因此,提高白及組培苗生根壯苗的比率是保證白及正常工廠化生產(chǎn)與銷售的前提。有關(guān)白及組織培養(yǎng)技術(shù)方面的研究報道已有很多[5~7],但至今未見對白及組培苗生根壯苗培育的詳細(xì)研究。本研究采用正交試驗設(shè)計法,研究了NAA、GA3、6-BA和香蕉泥4個因素對白及組培苗生根壯苗培育的影響,旨在探索不同組合下白及組培苗生根壯苗的生長規(guī)律,建立白及生根壯苗的優(yōu)化生產(chǎn)工藝,為工廠化大規(guī)模生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)白及種苗提供理論依據(jù)與技術(shù)指導(dǎo)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    本試驗材料來自重慶市藥用植物研究所,在其開花授粉后15周以上時采集尚未開裂的成熟蒴果作為白及種子來源。

    1.2 方法

    1.2.1 無菌苗的培育 無菌苗的培育于2014年8月在重慶三峽職業(yè)學(xué)院組培實驗室進(jìn)行。選取白及成熟蒴果在無菌條件下播種,培養(yǎng)基為1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L+10%椰子汁+活性炭0.4 g/L,其中添加30 g/L蔗糖、5 g/L瓊脂粉,pH值調(diào)節(jié)至5.8,培養(yǎng)溫度為(25±1)℃、光照強(qiáng)度2 000 ~ 2 500 lx、光照時間12 h/d。

    1.2.2 試驗設(shè)計 采用L9(34)正交試驗設(shè)計,以NAA(A)、GA3(B)、6-BA(C)、香蕉泥(D)為因素,每個因素設(shè)3個水平,得到L9(34)正交試驗設(shè)計表(表1)。

    1.2.3 實驗步驟及培養(yǎng)條件 選取同一批次、長勢一致的白及組培苗,要求苗高在1.0 ~ 1.5 cm (原球莖頂端至新葉抽生出的垂直高度),仔細(xì)去除下部黃葉及原球莖上已有根系。直接插入表1試驗培養(yǎng)基中(30 g/L蔗糖,5 g/L瓊脂粉,pH 5.8),每處理20瓶,每瓶10株苗。培養(yǎng)溫度為(25±1)℃、光照強(qiáng)度2 000 ~ 2 500 lx、光照時間12 h/d。

    1.2.4 結(jié)果記錄及數(shù)據(jù)處理 記錄白及組培苗生根情況,每隔10 d采集1次數(shù)據(jù),連續(xù)記錄6次。每次每處理隨機(jī)抽取3瓶,采集組培苗生根數(shù)、根長、根粗、有無畸形根及畸形苗等數(shù)據(jù),并綜合評價生根質(zhì)量。

    試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理,采用Min-max標(biāo)準(zhǔn)化法。

    根據(jù)苑玉鳳[8]的多指標(biāo)正交試驗分析方法,采用公式評分法對幾個主要生根指標(biāo)打分后進(jìn)行極差與方差分析,其中平均生根數(shù)最為重要,以5倍計算,即權(quán)數(shù)為5;其次為根系總長,以3倍計算,即權(quán)數(shù)為3;根系直徑以2倍計算,即權(quán)數(shù)為2;故其評分公式為:綜合評分為5倍平均根數(shù)、3倍根系總長與2倍根系直徑之和。

    根系總長為一株組培苗所有根系的總長度,根系直徑為一株組培苗平均根粗,對各處理指標(biāo)采用公式評分法進(jìn)行評價,綜合評分越高的,說明生根效果越好。試驗數(shù)據(jù)用Excel和DPS7.05軟件進(jìn)行分析。

    表1 正交試驗設(shè)計L9(34)Table 1 Orthogonal design

    2 結(jié)果與分析

    2.1 激素種類、濃度及香蕉泥濃度對白及生根的綜合影響

    利用轉(zhuǎn)接培養(yǎng)30 d的數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化處理后進(jìn)行分析,結(jié)果見表2。

    由表2可以看出,在組合條件下,8號處理即1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+GA30.5 mg/L+香蕉泥40 g/L,不添加6-BA,誘導(dǎo)生根情況好,平均根數(shù)達(dá)到4.41條;9號處理1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+GA31.0 mg/L+6-BA 0.2 mg/L,根系直徑最粗,達(dá)1.46 mm;而6號處理1/2 MS+NAA 0.2 mg/L+GA31.0 mg/L+香蕉泥20 g/L,單株根系總長高達(dá)5.10 cm,根生長表現(xiàn)最好。

    利用上述標(biāo)準(zhǔn)化數(shù)據(jù)以及綜合評分公式做極差分析,結(jié)果見表3。由表3可看出,各因素作用的主次順序為A > D > B > C,即NAA對白及組培苗生根起主導(dǎo)作用,其次是香蕉泥濃度,然后是GA3,而6-BA則對白及苗生根有一定抑制作用。

    表2 激素種類、濃度及香蕉泥濃度對白及組培苗生根的影響Table 2 Effect of different hormones and concentration and mashed banana concentration on rooting of tissue culture seedling

    表3 L9(34)正交試驗的極差分析Table 3 Range analysis on orthogonal experiment

    進(jìn)一步作方差分析,以判斷各個因素對白及組培苗生根的影響程度,結(jié)果見表4。由表4可以看出,4個因素對試驗結(jié)果的影響均達(dá)到了極顯著水平。用LSD法進(jìn)行多重比較(表3)。A因素NAA 3個濃度對白及組培苗生根綜合影響達(dá)顯著水平;B因素GA3濃度0.5 mg/L與1.0 mg/L差異不顯著,而前兩者又與不添加GA3差異顯著;C因素6-BA當(dāng)濃度為0時與其余兩濃度差異顯著,而0.2 mg/L與0.5 mg/L差異不顯著;D因素香蕉泥的3個濃度之間達(dá)顯著水平。

    表4 L9(34)白及組培苗生根培養(yǎng)實驗的方差分析Table 4 ANOVA on orthogonal experiment

    通過分析,理論上得出白及組培苗生根培養(yǎng)的最優(yōu)組合為A3B3C1D2,即1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+ GA31.0mg/L +香蕉泥30 g/L,但是,在觀察中我們發(fā)現(xiàn),當(dāng)NAA濃度增加到0.5 mg/L時,白及苗出現(xiàn)叢生芽及畸形根現(xiàn)象,所以NAA的優(yōu)水平應(yīng)為A2,即NAA濃度為0.2 mg/L;而GA3濃度0.5 mg/L與1.0 mg/L差異不顯著,本著節(jié)約成本的角度考慮,其優(yōu)水平可以為B2,那么經(jīng)過修正后的組合為A2B2C1D2,即1/2 MS+NAA0.2 mg/L+GA30.5 mg/L+香蕉泥30g/L。

    2.2 白及組培苗根系生長曲線

    篩選生根綜合評分前三的處理,即8號、6號及9號處理,記錄白及苗總根長數(shù)據(jù)(表5)并繪制根系生長曲線。由表1可以看出,白及組培苗根系生長情況大致分成3個階段,第一階段為從轉(zhuǎn)接開始到轉(zhuǎn)接20 d,白及苗需經(jīng)過適應(yīng)新培養(yǎng)基以及根系萌發(fā)過程,此階段根系伸長生長緩慢;第二階段為轉(zhuǎn)接20 ~ 40 d,由于白及已經(jīng)充分適應(yīng)培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件,根系能夠快速生長,是根系快速伸長生長階段;第三階段為轉(zhuǎn)接40 ~ 60 d,由于前期白及苗的快速生長消耗了較多的營養(yǎng)成分,此時培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也已較少,加之由于白及苗根系的快速生長導(dǎo)致生長空間的競爭,所以此階段根系的伸長生長明顯減慢。

    表5 白及組培苗總根長Table 5 Total root length of tissue culture seedlingcm

    3 結(jié)論與討論

    在白及組培苗的生根培養(yǎng)過程中,NAA、GA3及香蕉泥有促進(jìn)白及根系生長的作用,其中NAA起到主導(dǎo)作用,但NAA濃度達(dá)0.5 mg/L時,7號、8號及9號處理出現(xiàn)畸形根及叢生芽,不利于培育優(yōu)質(zhì)壯苗,而6-BA則相反,對白及根系生長有抑制作用,這與付志惠等[6]、趙漫麗等[9]的研究結(jié)果不盡相同,其原因還有待進(jìn)一步研究。此次試驗得出白及生根培養(yǎng)的最適配方為:1/2 MS+NAA 0.2 mg/L+GA30.5 mg/L+香蕉泥30 g/L。

    觀察中發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)接60 d時,瓶苗之間的根系已經(jīng)糾結(jié)在一起,難以分離開來,或者即便能分離開也會有部分根系在分離過程中受傷或折斷等現(xiàn)象發(fā)生。因此,建議生產(chǎn)上為確保煉苗移植時白及苗根系的完好,應(yīng)隨時觀察根系的生長情況,當(dāng)開始出現(xiàn)根系打結(jié)時,就應(yīng)立即煉苗移栽。在實際生產(chǎn)中,還應(yīng)注意轉(zhuǎn)接苗密度設(shè)置、培養(yǎng)基灌裝量大小對組培苗綜合生長的影響,具體機(jī)理也有待進(jìn)一步研究。

    [1] 國家藥典委員會編. 中華人民共和國藥典(一部)[M]. 北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010,95.

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    [9] 趙漫麗,黃春球,李明靜,等. 添加劑對白及組培的影響[J]. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2011,26(5):821-827.

    Orthogonal Experiment on Medium for Tissue Culture Bletilla striata Seedling Rooting

    CAO Jian,HUANG Zhi-wei

    (School of Agroforestry, Chongqing Three Gorges Vocational College, Chongqing 404155, China)

    Orthogonal experiments were conducted on effect of different concentration and combination of NAA, GA3, 6-BA and mashed banana in 1/2MS on rooting of tissue culture Bletilla striata seedling. The results showed that NAA, mashed banana and GA3could promote growth of root system, while 6-BA had inhibitory effect on rooting. The optimal medium for rooting was 1/2MS + 0.2 mg/L NAA + 0.5mg/L GA3+ 30g/L mashed banana. Root growth curve of tissue culture Bletilla Striata seedling was "S" type.

    Bletilla Striata; tissue culture seedling; orthogonal test; rooting

    S567.23

    A

    1001-3776(2016)01-0047-04

    2015-08-21;

    2015-11-02

    重慶市教委科學(xué)技術(shù)研究項目白及組培育苗技術(shù)條件優(yōu)化研究(KJ1403309)

    曹劍(1978-),女,碩士,從事有害生物防控、特種作物栽培;*通訊作者。

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