高效液相色譜法分析綠谷隆的含量

摘 要：綠谷隆純品為白色結(jié)晶固體，以甲醇+水為流動相，以Spherisorb C18為填充物的不銹鋼柱對綠谷隆進(jìn)行高效液相色譜分離，采用紫外檢測器的高效液相色譜外標(biāo)法進(jìn)行檢測。該方法的相對平均偏差為0.30%，變異系數(shù)為0.44%，平均回收率99.3-100.4%。結(jié)果表明，綠谷隆的濃度在1.34mg/50mL～8.03mg/50mL之間具有良好的線性范圍，相關(guān)系數(shù)R2=0.9994。該方法簡便、快速，具有較高的精密度和準(zhǔn)確度，是一種較好的優(yōu)化方案可以作為綠谷隆產(chǎn)品的質(zhì)量分析。

關(guān)鍵詞：綠谷??；反相高效液相色譜；外標(biāo)法

1 概述

綠谷隆純品為白色結(jié)晶固體，是一種用于防除禾谷類及玉米田中雜草的除草劑，目前國內(nèi)尚無綠谷隆的國家標(biāo)準(zhǔn)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)綠谷隆的物化性質(zhì)和實(shí)際生產(chǎn)的需要，我們選擇高效液相色譜法進(jìn)行定量分析，該方法具有較高的精密度和準(zhǔn)確度，且快速、準(zhǔn)確，可作為綠谷隆的產(chǎn)品檢驗(yàn)分析方法。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

島津LC-20AT具紫外可變波長檢測器，色譜工作站，綠谷隆標(biāo)準(zhǔn)品≥98%，甲醇HPLC，新蒸二次蒸餾水，色譜柱：150mm×4.6mm×5μm，C18不銹鋼柱，進(jìn)樣針：100μL。

2.2 液相色譜操作條件

流動相：甲醇+水=70+30（V/V），柱溫：（25±5）℃，檢測波長：254nm。流速： 1.0ml/min。保留時(shí)間：綠谷隆約：7.1min，綠谷隆標(biāo)準(zhǔn)品分離見圖1，樣品分離見圖2。

2.3 測定步驟與計(jì)算

2.3.1 測定步驟

（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的的配制。準(zhǔn)確稱取約0.1g（精確到±0.0001g）綠谷隆標(biāo)準(zhǔn)品于50ml容量瓶中，用甲醇在超聲波中溶解，取出冷卻至室溫，用甲醇稀釋到刻度并搖勻。用移液管準(zhǔn)確移取2.00ml該溶液于50ml容量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，搖勻備用。

（2）樣品溶液的配制。準(zhǔn)確稱取約0.1g（精確到±0.0001g）綠谷隆樣品于50ml容量瓶中，用甲醇在超聲波中溶解，取出冷卻至室溫，用甲醇稀釋到刻度并搖勻。用移液管準(zhǔn)確移取2.00ml該溶液于50ml容量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，搖勻備用。

（3）測定。在上述色譜條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入綠谷隆標(biāo)準(zhǔn)溶液于色譜柱內(nèi)，待相鄰兩針的綠谷隆標(biāo)樣峰面積變化小于1.0%時(shí)，按下列順序進(jìn)行色譜分析：標(biāo)樣溶液、樣品溶液、樣品溶液、標(biāo)樣溶液。

2.3.2 計(jì)算

將測得兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標(biāo)樣溶液中綠谷隆的峰面積分別進(jìn)行平均，試樣中綠谷隆質(zhì)量百分含量X按下式計(jì)算：

式中：r1-標(biāo)樣中綠谷隆的峰面積；r2-試樣中綠谷隆的峰面積；m1-標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2-樣品的質(zhì)量，g；P-標(biāo)樣中綠谷隆的質(zhì)量百分含量%；

允許誤差：兩次平行測定結(jié)果之差小于0.5%，取其平均值作為樣品中綠谷隆的百分含量。

2.4 結(jié)果與討論

2.4.1 色譜條件的確定

（1）分離方法及檢測器的選擇。經(jīng)過反復(fù)實(shí)驗(yàn)證明，綠谷隆在HPLC反相C18柱上分離效果和峰形良好，保留時(shí)間短，因此選用反相HPLC法分析。紫外檢測器是高效液相色譜儀中應(yīng)用最廣泛的檢測器，它靈敏度高，噪音低，線性范圍寬，對流速和溫度均不敏感，根據(jù)綠谷隆的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，通過實(shí)驗(yàn)證明，綠谷隆在紫外區(qū)內(nèi)有很大吸收，因此紫外檢測器可以作為分析綠谷隆的首選檢測器。

（2）溶劑的選擇。反相色譜法：固定相（填料）為非極性，流動相為極性。對應(yīng)的色譜柱：烷基硅烷化鍵合硅膠填料，如C18（ODS）C8，C4，C3，苯基等。反相色譜中最常用的流動相及其洗脫強(qiáng)度：水<甲醇<乙腈<乙醇<丙醇。由于綠谷隆在水中的溶解度較小，在以上有機(jī)溶劑中的溶解度會增大，通過實(shí)驗(yàn)：本試驗(yàn)決定，選用甲醇作為溶劑。

（3）流動相配比的選擇。綠谷隆在流動相甲醇+水=80+20（V/V）時(shí)，保留時(shí)間過短，分離效果較差，在流動相甲醇+水=70+30時(shí)，峰形對稱，分離效果良好，保留時(shí)間適中，且綠谷隆在甲醇中都有很好的溶解度，因此確定流動相甲醇+水=70+30為流動相操作條件。

（4）波長的選擇。通過對綠谷隆吸收曲線的測定，綠谷隆在波長254nm和220nm處，都有很強(qiáng)的響應(yīng)；在波長220nm處，吸收太強(qiáng)，峰高太高，超出檢測器線性范圍，若減少稱樣量或進(jìn)樣量，會影響結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度；在254nm處，樣品的稱樣量和峰高的比例適中，所以最后選擇254nm作為綠谷隆的測定最佳波長。

2.4.2 方法的線性范圍

準(zhǔn)確稱取不同質(zhì)量的綠谷隆標(biāo)準(zhǔn)品配成不同濃度的溶液，在2.2色譜操作條件下測定，線性回歸方程為：Y=06X+7E+58477，相關(guān)系數(shù)R2=0.9994。

2.4.3 精密度的測定

用同一樣品在規(guī)定色譜條件下進(jìn)行多次測定，其結(jié)果如表1所示：

表1 精密度測定結(jié)果數(shù)據(jù)表

2.4.4 回收率的實(shí)驗(yàn)

用綠谷隆標(biāo)樣加入到已知含量的綠谷隆的樣品中，在規(guī)定的色譜條件下測定其回收加入率。結(jié)果如表2所示：

由23可知綠谷隆的回收率在98.8-100.4之間，說明方法的準(zhǔn)確度較好。

3 結(jié)束語

利用反相高效液相色譜的外標(biāo)法測定了綠谷隆的含量。該方法簡便、快速，具有較高的精密度和準(zhǔn)確度，是一種較好的優(yōu)化方案，可以作為綠谷隆產(chǎn)品的質(zhì)量分析。

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