FOXM1在食管鱗癌中的表達(dá)及對其放射敏感性的影響

劉瑯?gòu)至_愛武陳科良谷蒙蒙

肖倍倍2鄒士濤3何 超3周俊東3黃 波1

1（南華大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 衡陽 421001）

2（蘇州大學(xué)放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)學(xué)院 蘇州 215123）

3（南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州市立醫(yī)院 南京 215001）

FOXM1在食管鱗癌中的表達(dá)及對其放射敏感性的影響

劉瑯?gòu)?,2羅愛武1陳科良1谷蒙蒙2

肖倍倍2鄒士濤3何 超3周俊東3黃 波1

1（南華大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院 衡陽 421001）

2（蘇州大學(xué)放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)學(xué)院 蘇州 215123）

3（南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州市立醫(yī)院 南京 215001）

采用Real-time PCR檢測40例食管鱗狀細(xì)胞癌及相對應(yīng)癌旁組織中FOXM1(Forkhead box M1) mRNA表達(dá)情況；免疫組織化學(xué)方法檢測94例食管鱗狀細(xì)胞癌組織中FOXM1蛋白的表達(dá)情況，分析其與鱗狀細(xì)胞癌臨床病理之間的關(guān)系；采用針對FOXM1的siRNA沉默ECA-109、TE-1細(xì)胞中FOXM1基因表達(dá)水平，通過免疫熒光染色、克隆形成實驗檢測 FOXM1對食管鱗狀細(xì)胞癌放射敏感性的影響。結(jié)果表明，F(xiàn)OXM1 mRNA表達(dá)水平在食管癌組織中顯著高于癌旁組織(p<0.01)，其蛋白表達(dá)水平與病人生存期負(fù)相關(guān)。siRNA能有效干擾ECA-109細(xì)胞中的FOXM1表達(dá)水平，F(xiàn)OXM1沉默細(xì)胞中X-射線誘發(fā)的γH2AX焦點顯著多于對照細(xì)胞，F(xiàn)OXM1沉默細(xì)胞電離輻射后克隆形成能力顯著低于對照細(xì)胞。結(jié)果提示，F(xiàn)OXM1在食管鱗癌中的表達(dá)增加，其表達(dá)水平與病人預(yù)后負(fù)相關(guān)；FOXM1基因沉默可顯著增強(qiáng)細(xì)胞放射敏感性，因此，F(xiàn)OXM1有可能成為食管鱗癌的治療靶點。

食管鱗癌，F(xiàn)OXM1不良預(yù)后，輻射敏感性，DNA損傷修復(fù)

食管鱗癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率均較高的惡性腫瘤之一[1]。目前，臨床上主要的治療手段為手術(shù)切除治療、化學(xué)治療和放射治療等[1]。據(jù)統(tǒng)計，70%以上的食管癌患者都會接受放射治療，然而單純放療5年生存率只有10%~30%，腫瘤局部未控率和復(fù)發(fā)率達(dá)60%~80%[2]。因此，尋找新的反映腫瘤敏感性的分子標(biāo)志物，并對其機(jī)理進(jìn)行深入研究，對于制定食管鱗癌放射治療策略具有重要意義，同時可開發(fā)放療增敏的新途徑。

FOXM1又稱MMP-2或FKHL-16，其基因由10個外顯子組成，蛋白中翼型螺旋DNA結(jié)合域位于第三個外顯子，含有110個氨基酸[3]。FOXM1通過此區(qū)域與多種基因的啟動子結(jié)合、調(diào)控下游基因轉(zhuǎn)錄，從而在G1/S、G2/M轉(zhuǎn)換和有絲分裂進(jìn)程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[4]。另外，F(xiàn)OXM1的靶分子同時參與DNA損傷修復(fù)和染色質(zhì)組裝等重要生命過程，因此，F(xiàn)OXM1蛋白表達(dá)水平與細(xì)胞電離輻射敏感性密切相關(guān)[5]。

近年來的研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXM1在肺癌、乳腺癌、宮頸癌等多種惡性腫瘤中高表達(dá)[6]。為進(jìn)一步探討FOXM1與食管鱗癌的關(guān)系，本研究通過Real-time PCR和免疫組織化學(xué)方法檢測FOXM1蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)情況并分析其與各臨床病理參數(shù)和病人預(yù)后之間的關(guān)系；同時通過 RNA干擾的方法下調(diào)食管癌細(xì)胞中的 FOXM1的表達(dá)，進(jìn)一步探討FOXM1對食管鱗癌細(xì)胞放射敏感性的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1組織標(biāo)本及細(xì)胞

人食管鱗癌組織94例及其中癌旁組織標(biāo)本40例均取自在2008年12月至2009年12月間在南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院胸外科實施手術(shù)的患者，術(shù)前均有胃鏡病理確診為“鱗狀細(xì)胞癌”，所有患者均在腫瘤切除后進(jìn)行了預(yù)防性放射治療。以上所有患者均簽名同意其組織標(biāo)本被用于科學(xué)研究。94例食管鱗癌患者中，年齡小于60歲54例，大于等于60歲40例。男性75例，女性19例，T1期3例、T2期17例、T3期74例，所有標(biāo)本均保存于蘇州市立醫(yī)院。人食管鱗癌ECA-109、TE-1細(xì)胞由蘇州市立醫(yī)院腫瘤實驗室保存。

1.1.2主要試劑

DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清購于 HyClone公司；Trizol 購于美國Life Technologies公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒、Real-time PCR 反應(yīng)試劑盒均購自 Ta Ka Ra 公司；FOXM1-si RNA 片段、陰性對照均由廣州銳博生物科技有限公司合成。兔抗人 FOXM1單克隆抗體購于 Cell Signaling Technology公司；鼠抗人b-actin單克隆抗體購于南通碧云天生物公司；辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG、山羊抗鼠IgG二抗購于南通碧云天生物公司。

1.2方法

1.2.1RT-PCR法檢測組織中 FOXM1基因mRNA表達(dá)水平

按照 Trizol試劑盒說明，抽提組織標(biāo)本的總RNA，用 Thermo Gene company limited NANO DROP2000 Spectrophotometer 測RNA濃度。使用軟件Primer premier 5.0設(shè)計引物序列，并由上海捷瑞生物公司合成。PCR引物序列b-actin正向5’-AGCGAGCATCCCCCAAAGTT-3’；反向5’-GGGCACGAAGGCTCATCATT-3’；FOXM1正向5’-CGCGTCAGTTGGGACTTAAG-3；反向5’-ACTATCGCCAACCTCAATGC-3’采用RT-PCR試劑盒進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄及PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)參數(shù)：預(yù)變性95 ℃ 2 min、95 ℃ 15 s、60 ℃ 45 s；40循環(huán)；融解曲線95 ℃ 15 s、60 ℃ 1 min、95 ℃15 s、60 ℃ 15 s。采用?Ct法計算目的基因的表達(dá)值，以b-actin作為內(nèi)參基因，其中Ct值為基因反應(yīng)產(chǎn)物的熒光值達(dá)到設(shè)定域值時所用的反應(yīng)循環(huán)數(shù)。目的基因相對表達(dá)量為2Ct(β-actin)?Ct(目的基因)。

1.2.2免疫組織化學(xué)染色

取組織標(biāo)本，石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化，微波抗原修復(fù)，敷一抗二抗，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，分化、返藍(lán)，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封閉，光鏡下觀察結(jié)果。FOXM1陽性信號主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，呈現(xiàn)棕黃色，少量位于細(xì)胞核，根據(jù)其在細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核的染色程度及染色細(xì)胞百分率進(jìn)行評分：無染色或者陽性率<10%為 0分；>10%的輕度染色或者陽性率 10%~40%的中度染色為1分；>40%的中度染色或者10%~40%強(qiáng)染色為2分；>40%的強(qiáng)染色為3分。采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件分析所有統(tǒng)計數(shù)據(jù)。

1.2.3細(xì)胞培養(yǎng)

ECA-109、TE-1 細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含 10% 胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基中，置于 37 ℃、5% CO2飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)，每 2 d 換液1 次，每 3~4 d傳代1 次，取對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實驗。

1.2.4Western blot法

提取總蛋白，將提取的總蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳。電泳結(jié)束后，將蛋白移至 PVDF 膜上，以含 5% 脫脂奶粉的 TBST 液封閉 1 h，加入一抗，F(xiàn)OXM1，b-actin 4 ℃ 搖床孵育過夜，加入二抗，室溫孵育 1 h，將 PVDF 膜置于增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光試劑中反應(yīng) 1~3 min，于暗室中用 X膠片曝光，顯影、定影，觀察結(jié)果。

1.2.5FOXM1si-RNA合成及細(xì)胞轉(zhuǎn)染

轉(zhuǎn)染前將對數(shù)生長期的ECA-109細(xì)胞以3×105個/孔的密度接種在6孔板內(nèi)，使用含 10% 胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)，24 h后轉(zhuǎn)染。將細(xì)胞分FOXM1siNC組、FOXM1siRNA1組、FOXM1RNA2組、FOXM1siRNA3組等4組?；静僮靼凑照f明書進(jìn)行，雙鏈 siRNA 靶向 FOXM1基因的目的序列為：FOXM1siRNA1正向 5’GGACCACUUUCCCUACUUU dTdT 3’，反向3’ dTdT CCUGGUGAAAGGGAUGAAA 5’；FOXM1siRNA2正向5’ CGGAAAUGCUUGUGAUUCA dTdT 3’，反向3’ dTdT GCCUUUACGAACACUAAGU 5’；實驗組 FOXM1siRNA3 組 正 向 5’CCAGCUGGGAUCAAG AUUA dTdT 3’，反向3’dTdT GGUCGACCCUAGUUCUAAU 5’。24 h 后更換新的完全培養(yǎng)液。轉(zhuǎn)染后于24 h提細(xì)胞RNA 進(jìn)行 RT-PCR，48 h 提取細(xì)胞蛋白進(jìn)行 Western blot。

1.2.6免疫熒光

利用 X射線室溫下照射處于對數(shù)生長期的FOXM1siNC、FOXM1siRNA2、FOXM1siRNA3共3組ECA-109細(xì)胞，劑量為2 Gy。分別于輻照后0、0.5、1、2、8 h共5個時間點收集細(xì)胞，用4%的多聚甲醛固定30 min，固定后用PBS輕輕漂洗3次，每次5 min；用1% Triton X-100（PBS稀釋）室溫處理細(xì)胞30 min；用含有1% Triton X-100和10%胎牛血清的PBS封閉液封閉細(xì)胞30 min；用上述封閉液稀釋FOXM1抗體(1:1000)，4 ℃孵育過夜；PBS輕輕漂洗3次，每次5 min；加熒光二抗室溫孵育1 h。PBS輕輕漂洗3次，每次5 min；DAPI避光孵育5 min，對細(xì)胞進(jìn)行核染，PBS輕輕漂洗3次，每次5 min，洗去多余的DAPI；用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀察采集圖像。

1.2.7克隆形成實驗

取對數(shù)生長期的各組細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，按不同細(xì)胞數(shù)接種于6孔板中（0 Gy 200個/孔、2 Gy 800個/孔、4 Gy 2 000個/孔、6 Gy 10 000個/孔、8 Gy 20 000個/孔），每個劑量點設(shè)3個平行樣本， 37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，待細(xì)胞貼壁后，接受X線單次劑量照射。每3 d更換一次培養(yǎng)液，培養(yǎng)10~14 d，當(dāng)培養(yǎng)瓶中出現(xiàn)肉眼可見的克隆時終止培養(yǎng)，甲醇固定20 min后，結(jié)晶紫染色20 min，顯微鏡下計數(shù)多于50個細(xì)胞的克隆數(shù)，計算克隆形成率(Plating efficiency, PE)和不同劑量點的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)(Surviving fraction, SF)。

PE=未照射組克隆數(shù)/接種細(xì)胞數(shù)×100%，

SF=照射組克隆數(shù)/（接種細(xì)胞數(shù)×PE）。

2 結(jié)果

2.1 FOXM1在人食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)

采用Real-time PCR法檢測了40例食管鱗癌組織及相應(yīng)的癌旁組織中FOXM1 mRNA表達(dá)水平。由圖1可見，食管鱗癌組織中FOXM1mRNA相對表達(dá)水平明顯高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 FOXM1在食管鱗癌組織中的表達(dá)及與食管鱗癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

采用免疫組織化學(xué)方法對 94例食管鱗癌患者組織進(jìn)行染色，按FOXM1蛋白表達(dá)量高低將患者分為 FOXM1蛋白高表達(dá)組與低表達(dá)組；采用Kaplan-meier法分析食管鱗癌中FOXM1蛋白的表達(dá)對患者除瘤術(shù)后生存期的影響，結(jié)果表明，F(xiàn)OXM1蛋白高表達(dá)組患者術(shù)后生存期較低表達(dá)組更短，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)（見圖2和圖3）。

2.3 siRNA介導(dǎo)的FOXM1基因沉默

設(shè)計 3條針對FOXM1基因的 siRNA序列(FOXM1 siRNA1、siRNA2、siRNA 3)，與對照序列(siNC)分別轉(zhuǎn)染至 ECA-109細(xì)胞。48 h后，F(xiàn)OXM1siNC采用Real-time PCR法檢測不同組中FOXM1 mRNA表達(dá)水平，由圖4(a)所示，3條不同的針對 FOXM1基因的 siRNA處理細(xì)胞后，較FOXM1siNC組分別下降了 72%、83%、84%（圖4(a)）。選擇其中效果較好的兩條序列進(jìn)一步進(jìn)行Western blot檢測，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染siRNA2、siRNA3后ECA-109細(xì)胞中FOXM1蛋白表達(dá)水平明顯降低（圖4(b)）。

2.4 免疫熒光檢測電離輻射后γH2AX聚焦點動態(tài)變化

當(dāng)DNA損傷發(fā)生后，損傷位點附件的組蛋白變體H2AX在139位點發(fā)生磷酸化形成γH2AX，因此，γH2AX聚焦點被普遍認(rèn)為是雙鏈斷裂損傷(Double Strand Breaks, DSBs)分子標(biāo)志物。從圖5可以看出，在0 ~ 1 h 之間γH2AX焦點逐漸增加，0.5、1 h時間點γH2AX焦點最多，到2 h γH2AX焦點開始降低，至8 h時，焦點繼續(xù)降低，DNA損傷逐步恢復(fù)。其中，在0.5、1、2、8 h時間點FOXM1siNC組 中 γH2AX 焦 點 比 FOXM1siRNA2、FOXM1siRNA3組少（圖6），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。說明在相同的劑量下，在0.5、1、2、8 h時，下調(diào)FOXM1基因的食管鱗癌細(xì)胞DNA損傷更嚴(yán)重。

2.5 沉默F(xiàn)OXM1基因顯著增加食管癌細(xì)胞電離輻射敏感性

從圖7可以看出，在2、4、6、8 Gy劑量照射的情況下，F(xiàn)OXM1siNC組的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)顯著高于FOXM1siRNA2、FOXM1siRNA3組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。說明下調(diào)FOXM1的基因表達(dá)水平，能顯著增加ECA-109細(xì)胞電離輻射敏感性，降低其輻照后的存活能力。

3 討論

FOXM1是FOX轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，該轉(zhuǎn)錄因子家族已擁有超過50個以上的成員，分別參與調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖、代謝、凋亡等多種重要的生理過程。近年來研究發(fā)現(xiàn)FOXM1在許多腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，Yang等[7]通過研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXM1在肺鱗癌細(xì)胞中高表達(dá)；且其表達(dá)量跟細(xì)胞分化程度以及良惡性程度相關(guān)，F(xiàn)OXM1的表達(dá)量高的細(xì)胞，多低分化、惡性程度高，易轉(zhuǎn)移，預(yù)后差；FOXM1在大部分乳腺癌中過表達(dá)，且表達(dá)量跟乳腺癌的病期呈正相關(guān)，隨著癌癥的發(fā)展，F(xiàn)OXM1的表達(dá)量不斷增高；Yu等[8]發(fā)現(xiàn)FOXM1可以通過反式激活PDGF-A (Platelet-derived growth factor-A)從而激活PDGF/AKT信號通路，而該通路已經(jīng)被證實可以通過在EMT (Epithelial to mesenchymal transition)過程中，阻止腫瘤細(xì)胞凋亡從而促進(jìn)乳腺腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。其他的實驗表明，上調(diào)FOXM1表達(dá)水平能促進(jìn)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，增加不良預(yù)后[9]。本研究通過對食管鱗癌及癌旁組織檢測發(fā)現(xiàn)FOXM1mRNA表達(dá)水平在食管鱗癌組織中更高，進(jìn)一步證明了FOXM1在食管鱗癌中高表達(dá)。通過免疫組織化學(xué)結(jié)果得出，食管鱗癌組織中FOXM1蛋白的表達(dá)水平與患者術(shù)后生存期呈負(fù)相關(guān)性。

電離輻射可以引起不同形式的 DNA損傷，其中DNA雙鏈斷裂損傷是引起細(xì)胞死亡的主要原因，細(xì)胞對DNA雙鏈斷裂損傷修復(fù)能力是決定細(xì)胞放射敏感性的主要原因之一。有文獻(xiàn)報道，F(xiàn)OXM1敲除的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 (Mouse embryonic fibroblast, MEFs)中，電離輻射后gH2AX焦點較對照組野生型MEFs高[10]。在骨肉瘤U2OS細(xì)胞中，下調(diào)FOXM1后，同樣能檢測到高水平gH2AX焦點。在真核細(xì)胞中，DSB的修復(fù)機(jī)制主要有兩種，同源重組途徑(Homologous recombination, HR)和非同源末端 連 接途 徑 (Non-homologous end joining, NHEJ)[11]。FOXM1在HR中扮演著非常重要的角色。HR DSB修復(fù)蛋白BRIP (BRCA1-associated BACH1 helicase)被確認(rèn)為是FOXM1直接轉(zhuǎn)錄的作用靶點，上調(diào)BRIP蛋白可以減少細(xì)胞的DNA損傷[12]。HR DSB另一重要的修復(fù)蛋白RAD51在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中也被認(rèn)為是FOXM1直接轉(zhuǎn)錄的作用靶點[13]。除此之外，F(xiàn)OXM1的作用靶基因 CKS1在下調(diào)FOXM1的宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)量也同時下調(diào)[14]，而降低CKS1表達(dá)后DNA損壞修復(fù)蛋白RAD51降低[15]；在U2OS細(xì)胞中沉默F(xiàn)OXM1基因，DNA修復(fù)相關(guān)基因 XRCC1 (X-ray repair cross-complementing protein)、BRCA2 (Breast cancer associate gene2)蛋白表達(dá)量也明顯降低[15]；在乳腺癌細(xì)胞中沉默F(xiàn)OXM1后，細(xì)胞DNA損傷增多，但并未在蛋白和mRNA水平下調(diào)XRCC1、BRCA2的表達(dá)，表明FOXM1通過調(diào)控多種DNA雙鏈斷裂損傷修復(fù)蛋白參與DNA修復(fù)過程，但其具體修復(fù)途徑還需進(jìn)一步研究。

我們也通過免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)在FOXM1下調(diào)的食管癌細(xì)胞中 γH2AX 焦點明顯增加；且通過克隆形成實驗也進(jìn)一步證實了輻照后FOXM1下調(diào)后食管鱗癌細(xì)胞的增殖能力降低。因此，我們可以猜測FOXM1在食管鱗癌細(xì)胞的DNA修復(fù)中起到重要作用。因細(xì)胞的DNA修復(fù)的機(jī)制比較復(fù)雜，F(xiàn)OXM1在其中發(fā)揮作用的機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

FOXM1基因沉默可顯著增強(qiáng)食管鱗癌細(xì)胞的輻射敏感性。細(xì)胞輻射敏感性越強(qiáng)，則放療效果越好。放療能對腫瘤進(jìn)行局部有效控制，有利于控制病灶轉(zhuǎn)移，還可以擴(kuò)大手術(shù)適應(yīng)癥，且中晚期食管鱗癌患者術(shù)前放療可以提高手術(shù)切除率及術(shù)后生存率[16]。而術(shù)后放療能夠殺滅單純手術(shù)治療殘留的腫瘤細(xì)胞，以達(dá)到控制腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的目的，最終提高患者的生存[17]。研究所有患者在手術(shù)切除之后均進(jìn)行了預(yù)防性放療，那么FOXM1極有可能是通過對放射治療效果的影響，從而影響患者術(shù)后生存期的。

綜上所述，在臨床上可通過基因療法對FOXM1進(jìn)行干預(yù)，在行食管癌手術(shù)切除術(shù)之前，降低患者FOXM1基因表達(dá)量，從而增強(qiáng)食管鱗癌對放射的敏感性，達(dá)到控制病灶轉(zhuǎn)移、提高患者術(shù)后手術(shù)切除率的目的。也可以通過對食管癌病理組織FOXM1蛋白表達(dá)量的高低判斷，為食管癌患者術(shù)后預(yù)防性治療提供相關(guān)理論依據(jù)，并可以將其作為判斷預(yù)后的一個重要指針，通過加強(qiáng)對高表達(dá)患者的術(shù)后監(jiān)測，采取相應(yīng)的措施，提高患者的術(shù)后生存期。因此，F(xiàn)OXM1有望成為食管鱗癌的治療靶點。

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Expression of FOXM1 and its effects on radiation sensitivity in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC)

LIU Langhuan1,2LUO Aiwu1CHEN Keliang1GU Mengmeng2
XIAO Beibei2ZOU Shitao3HE Chao3ZHOU Jundong3HUANG Bo1
1(School of Public Health, University of South China, Hengyang 421001, China)
2(School of Radiation Medicine and Protection, Medical College of Soochow University, Suzhou 215123, China)
3(Nanjing Medical University Affiliated Suzhou Hospital, Suzhou 215001, China)

Real-time PCR was used to examine the expression of FOXM1 (Forkhead box M1) in 40 esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) tissues, and the adjacent normal tissues. Immunohistochemistry was used toexamine the expression of FOXM1 protein in 94 ESCC tissues, and to analyze the relationship between ESCC and clinic pathologic. A small interfering RNA targeting FOXM1 was designed to silence the endogenous FOXM1 expression of ECA-109 and TE-1 cells. The effect of FOXM1 on radiation sensitive in esophageal squamous cell was observed by immunofluorescence stain, and colony formation assay. The results showed that FOXM1 mRNA expression level in esophageal cancer tissues was significantly higher than that of the adjacent tissues (p<0.01), and the protein level expression of it has negative correlation with the survival times; the designed siRNA could dramatically silence FOXM1 expression in ECA-109 cells; γH2AX focus induced by X-rays in FOXM1 silent cells was significantly higher than that in control cells; the clone formation ability of the silent FOXM1 group was significantly lower than that in the control group. The content of FOXM1 is improved in ESCC, and is negatively correlated with the prognosis of patients; the cell radiation sensitive proliferation is significantly improved in the silent FOXM1 ECA-109 cells. In conclusion, FOXM1 has the potential to be the treatment of esophageal squamous carcinoma target.

Esophageal squamous cell carcinoma, FOXM1 poor prognosis, Radiation sensitivity, DNA damage repair

LIU Langhuan (female) was born in May 1987 and graduated from Hunan Normal University Medical College in June 2010. Now she is a master candidate in University of South China majoring in radiation protection agent as a doctor.

PH.D. HUANG Bo, assosiate professer, E-mail: huangbo930@163.com

TL71

10.11889/j.1000-3436.2016.rrj.34.060202

湖南省自然科學(xué)基金項目(2016JJ2115)、南華大學(xué)博士啟動基金(2015XQD31)、湖南省衛(wèi)生計生委科研計劃課題項目(C2015-17)資助

劉瑯?gòu)?，女?987年5月出生，2010年6月畢業(yè)于湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，現(xiàn)為南華大學(xué)在讀碩士研究生，研究方向為輻射防護(hù)劑研究，醫(yī)師

黃波，博士，副教授，E-mail: huangbo930@163.com

初稿2016-09-01；修回2016-10-30

Supported by the National Natural Science Foundation of Hunan Province (2016JJ2115), Doctor stand-up foundation of University of South China (2015XQD31), Health and Family Planning Commission Scientific Research of Hunan Province (C2015-17)

Received 1 September 2016; accepted 30 October 2016

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