自制燒傷膏治療燒燙傷的實(shí)驗(yàn)研究*

高麗萍 李榮振

(1. 泰安市公安消防支隊(duì)后勤處衛(wèi)生隊(duì)，山東 泰安 271000； 2. 泰安市口腔醫(yī)院，山東 泰安 271000)

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自制燒傷膏治療燒燙傷的實(shí)驗(yàn)研究*

高麗萍1李榮振2

(1. 泰安市公安消防支隊(duì)后勤處衛(wèi)生隊(duì)，山東 泰安 271000； 2. 泰安市口腔醫(yī)院，山東 泰安 271000)

目的 觀察自制燒傷膏在治療燒燙傷過程中的臨床藥效學(xué)作用。方法 通過建立小鼠燒燙傷耳腫脹模型、熱板致痛法模型觀察自制燒傷膏的作用，通過體外抑菌試驗(yàn)觀察其抑菌作用以及通過制備Wistar燒傷模型大鼠，觀察其對(duì)在體腸道菌群的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果 自制燒傷膏能明顯改善燒傷模型大鼠腸黏膜損傷情況，對(duì)致病菌的生長有明顯抑制作用，并具有明顯的消炎鎮(zhèn)痛作用(P<0.05)。結(jié)論 自制燒傷膏具有明顯的消炎鎮(zhèn)痛抑菌作用，對(duì)于燒傷模型大鼠能明顯改善腸黏膜的損傷，其機(jī)制可能與糾正腸道菌群失調(diào)有關(guān)。

自制燒傷膏；腸道菌群；藥效學(xué)

燒燙傷是一種外科常見病，在臨床上有較高的發(fā)病率，其原因通常是由熱力因素作用人體而致傷。根據(jù)燒傷病情一般分為三度，即I度、Ⅱ度(淺Ⅱ度、深Ⅱ度)、Ⅲ度燒燙傷。本研究自制燒傷膏為山東中醫(yī)藥大學(xué)自制膏藥，其主要成分包括黃芩、黃柏、大黃、紫草、茯苓等。經(jīng)過多年的臨床檢驗(yàn)，對(duì)各種程度的燒傷患者均具有一定療效，為明確其機(jī)制，進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，20±2 g，Wistar大鼠，200±20 g，均購自山東中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 實(shí)驗(yàn)材料

自制燒傷膏、濕潤燒傷膏(汕頭市美寶制藥有限公司)、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌，由山東中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.3.1 小鼠耳腫脹炎癥模型

昆明種小鼠40只，隨機(jī)分為模型組、基質(zhì)組(凡士林)、陽性對(duì)照組(濕潤燒傷膏，0.64 g生藥/g浸膏)、自制燒傷膏治療組(0.4 g生藥/g浸膏)，每組10只，在小鼠右耳前后涂抹100%二甲苯0.02 g/只。30 min后，在腫脹處涂抹相應(yīng)的藥物，每只0.2 g，左耳做對(duì)照，4 h后處死動(dòng)物，用8 mm打孔器取相同部位耳片，稱重，以右耳片重量減左耳片重量為腫脹度，(右耳重—左耳重)/右耳重為腫脹率[1]。

1.3.2 小鼠熱板致痛模型

熱板儀溫度調(diào)至55 ℃，預(yù)熱10 min，取昆明種小鼠40只，分組同上，在小鼠四肢足跖處涂抹相應(yīng)藥物，將小鼠置于熱板上，記錄小鼠自放上后出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間。分別于給藥前和給藥后60 min、90min、120 min測(cè)量小鼠痛閾[2]。

1.3.3 自制燒傷膏體外抑菌試驗(yàn)

將自制燒傷膏(0.4 g生藥/g浸膏)和濕潤燒傷膏(1 g)用肉體培養(yǎng)基倍比稀釋成1∶2、1∶4、1∶8……1∶512，另設(shè)菌液對(duì)照，藥液對(duì)照和空白對(duì)照組。每管定量1 ml，每管加入0.1 ml菌液，置37 ℃培養(yǎng)24 h，對(duì)各管培養(yǎng)基進(jìn)行等倍稀釋(1∶100， 1∶1000，1∶10000)，置37 ℃再培養(yǎng)24 h，取0.1 ml培養(yǎng)物加入直徑3 cm瓊脂平板，置37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察菌落數(shù)及自制燒傷膏和濕潤燒傷膏對(duì)大腸桿菌、綠膿桿菌和金黃色葡萄球菌的最大抑菌濃度(MIC)和最大殺菌濃度(MBC)[3]

1.3.4 自制燒傷膏對(duì)大鼠腸道組織及菌群影響

取Wistar大鼠24只，雌雄各半，3%戊巴比妥鈉按35 mg/kg腹腔注射麻醉,固定，8%硫化鈉制劑背部脫毛，3%凝固汽油涂抹背部燃燒18 s，確認(rèn)致30%體表總面積燒傷，燒傷面積(cm2)=體表總面積(cm2)×擬燒傷面積百分比(%)，體表總面積(cm2)=K×體重(kg)×2/3 K[4]。燒傷后立刻平衡鹽溶液腹腔注射50 ml/kg，更換墊料，單籠飼養(yǎng)。隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組，另取6只大鼠作為正常對(duì)照組。于造模后第3天處死動(dòng)物，自大鼠屈氏韌帶下取小腸組織制作石蠟切片[5]，同時(shí)無菌鑷子取腸內(nèi)容物進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，將腸內(nèi)容物0.1 g加滅菌生理鹽水稀釋至10-8，選擇合適的稀釋度分別接種在培養(yǎng)基上，分別按步驟進(jìn)行需氧和厭氧培養(yǎng)，其中腸桿菌、腸球菌在37 ℃下培養(yǎng)48 h，雙歧桿菌、乳酸桿菌選用厭氧罐培養(yǎng)法，37 ℃下培養(yǎng)72 h，根據(jù)細(xì)菌的形態(tài)學(xué)特性進(jìn)行鑒定(具體培養(yǎng)方法及鑒定見表1)。[6]

表1 腸道主要菌群培養(yǎng)及鑒定方法

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用單因素方差分析檢測(cè)組間差異，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 自制燒傷膏對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

與模型組、基質(zhì)組相比，陽性對(duì)照組與自制燒傷膏可明顯減輕小鼠右耳腫脹率(P<0.05)，燒傷膏與陽性對(duì)照組相比無明顯差異(見表2)。

表2 燒傷膏對(duì)二甲苯致小鼠耳腫脹的影響

與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01

2.2 自制燒傷膏對(duì)小鼠熱板致痛實(shí)驗(yàn)的影響

與模型組、基質(zhì)組相比，陽性對(duì)照組和自制燒傷膏治療組可明顯增加給藥60 min后小鼠的痛閾值(P<0.05)，對(duì)90 min、120 min后痛閾值影響無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，自制燒傷膏治療組與陽性對(duì)照組相比，對(duì)痛閾值的影響無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(見表3)。

2.3 自制燒傷膏體外抑菌試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)菌濃度：大腸桿菌1.5×106CFU/ml，綠膿桿菌4.5×106CFU/ml，金黃色葡萄球菌2.6×106CFU/ml。結(jié)果表明自制燒傷膏與濕潤燒傷膏對(duì)大腸桿菌、綠膿桿菌和金黃色葡萄球菌均有一定的抑菌作用，自制燒傷膏對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用好于濕潤燒傷膏(見表4)。

2.4 自制燒傷膏對(duì)燒傷模型大鼠腸粘膜形態(tài)學(xué)影響

正常組大鼠黏膜層、黏膜下層結(jié)構(gòu)清晰，黏膜上皮細(xì)胞完整，絨毛結(jié)構(gòu)清晰(見圖1)。與正常對(duì)照組相比，燒傷模型組大鼠腸黏膜損傷較明顯，上皮細(xì)胞局灶性壞死，絨毛破壞，黏膜下血管可見擴(kuò)張，嚴(yán)重者黏膜上皮細(xì)胞片狀脫落形成潰瘍(見圖2)。燒傷治療組大鼠腸黏膜損傷明顯減輕，腸上皮細(xì)胞壞死不明顯，未見局部潰瘍形成，絨毛結(jié)構(gòu)較完整，上皮細(xì)胞排列整齊(見圖3)。

表3 復(fù)方燒傷膏對(duì)小鼠熱板致痛的影響

與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01

表4 自制燒傷膏對(duì)大腸桿菌、綠膿桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用(g/L)

表5 燒傷膏對(duì)燒傷模型大鼠腸道腸桿菌、腸球菌數(shù)量的影響

與正常對(duì)照組相比，△P<0.05，△△P<0.01；與模型組相比，*P<0.05，**P<0.01。

正常對(duì)照組 燒傷模型組 燒傷治療組

2.5 自制燒傷膏對(duì)腸道菌群的影響

模型組與正常對(duì)照組相比，乳酸菌和雙歧桿菌數(shù)量明顯減少，腸球菌和腸桿菌數(shù)量明顯增加(P<0.05)，自制燒傷膏治療組可明顯增加燒傷大鼠乳酸桿菌和雙歧桿菌的數(shù)量，減少腸球菌和腸桿菌的數(shù)量(P<0.05)。

3 討 論

本文自制燒傷膏是山東中醫(yī)藥大學(xué)自制膏藥，為更好地檢驗(yàn)燒傷膏藥效設(shè)計(jì)本次實(shí)驗(yàn)。通過實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)說明，自制燒傷膏對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹以及小鼠熱板致痛實(shí)驗(yàn)均有明顯的抑制作用，體外抑菌實(shí)驗(yàn)中對(duì)大腸桿菌、綠膿桿菌和金黃色葡萄球菌也具有一定的抑制作用，對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用好于濕潤燒傷膏。同時(shí)，對(duì)燒傷模型大鼠腸道菌群失調(diào)也具有一定的調(diào)節(jié)作用，并對(duì)腸黏膜損傷具有改善作用，這一作用是否是由于改善腸道菌群失調(diào)所導(dǎo)致的尚需進(jìn)一步研究，但本實(shí)驗(yàn)說明自制燒傷膏具有一定的鎮(zhèn)痛消炎抑菌的作用，為后續(xù)的開發(fā)研究奠定了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。通過實(shí)驗(yàn)研究得出燒傷膏藥效明顯，對(duì)臨床應(yīng)用有指導(dǎo)意義。

[1] 付殿彬，劉佳，李麗靜.鎮(zhèn)痛散部分藥效學(xué)研究.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2015,11(6)：34-35.

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Pharmacodynamical Investigation on Burn ointment for Treatment of Burn healing

GAO Li-ping LI Rong-zhen

(1.Tai'an City, Shandong Province Armed Police Fire Brigade Rear Service Department of health,Taian 271000,China; 2.Tai'an Oral Hospital,Taian 271000,China)

Objective: In the process of observation of homemade burn cream in the treatment of burn clinical pharmacodynamics effect. Methods: by establishing mice ear swelling model burn, hot plate to observe the effect of self-made burn cream pain model, through in vitro bacteriostasis experiment observe its bacteriostasis and through the preparation of Wistar burn model in rats, observe its effect on the regulation of intestinal flora in vivo. Results: the self-made burn cream can obviously improve burn model rat intestinal mucosa damage, have obvious inhibition on the growth of pathogenic bacteria, and has obvious anti-inflammatory analgesic effect (P< 0.05). Conclusion: The self-made burn cream has obvious anti-inflammatory analgesic bacteriostasis, with burn model can obviously improve the intestinal mucosa injury in rats and its mechanism may be related to correct the imbalance of intestinal flora.

homemade burn cream; intestinal flora; pharmacodynamics

高麗萍(1976—)，女，山東泰安人，主治醫(yī)師，本科，從事臨床治療工作。

李榮振(1976—)，男，山東泰安人，副主任醫(yī)師，本科，從事臨床工作。E-mail：ok9579@163.com。

R965

A

1004-7115(2016)12-1364-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2016.12.016

2016-10-15)