過繼免疫聯(lián)合化療對晚期非小細(xì)胞肺癌的療效及免疫功能的影響

胡振紅 吳妍雯 劉海潮 張 波

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過繼免疫聯(lián)合化療對晚期非小細(xì)胞肺癌的療效及免疫功能的影響

胡振紅 吳妍雯 劉海潮 張 波

目的 探討過繼免疫聯(lián)合化療治療非小細(xì)胞肺癌的療效和對免疫功能的影響。方法選擇NSCLC患者112例按治療方式分為觀察組和對照組。觀察組42患者采用紫杉醇加奈達(dá)鉑(TP方案)化療，21 d為1個(gè)治療周期，第1個(gè)周期治療結(jié)束后10 d開始回輸DC-CIK細(xì)胞，1次/d，輸注4次為1個(gè)療程，每次回輸前給予苯海拉明20 mg肌注防止過敏反應(yīng)的發(fā)生，然后再進(jìn)行2個(gè)周期的化療。對照組70例患者僅給予TP方案化療3個(gè)周期。結(jié)果觀察組患者DCR為66.7%，對照組患者DCR為52.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。觀察組患者治療后外周血CD3+、D8+、D56+細(xì)胞比值的升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，CD4+/CD8+的比值降低，與治療前相比差異顯著，P<0.05。對照組患者治療后外周血CD3+、D8+、D56+細(xì)胞比值的降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，CD4+/CD8+的比值升高，與治療前相比差異顯著，P<0.05。觀察組患者治療后外周血IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平升高顯著，P<0.05。對照組患者治療后外周血IL-12、IFN-γ和TNF-α降低顯著，P<0.05。結(jié)論過繼免疫治療聯(lián)合化療治療NSCLC，可提高患者的疾病控制率，改善患者的免疫功能。

過繼免疫；樹突狀細(xì)胞；細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞；非小細(xì)胞肺癌；免疫功能

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:1466～1469)

肺癌是常見的惡性腫瘤之一，非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)的發(fā)病率居肺癌之首，占肺癌的80%左右[1]。隨著分子生物學(xué)及腫瘤免疫研究的進(jìn)展，腫瘤的免疫療法已成為繼傳統(tǒng)手術(shù)、放射治療和化療后的第4種治療手段[2]。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytoking induced killer，CIK)過繼免疫是新一代過繼免疫治療的首選方案，其具有殺瘤活性高、殺瘤譜廣、對多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感的優(yōu)點(diǎn)。CIK細(xì)胞免疫療法對于各種放化療間歇期的腫瘤患者，樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)-CIK不僅能緩解患者的病情，同時(shí)也有益于患者免疫力的提高。本科室自2010年5月至2013年5月采用自體外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)的DC-CIK過繼免疫聯(lián)合化療治療42例NSCLC患者，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2010年5月至2013年5月收治的NSCLC患者112例，將采用DC-CIK聯(lián)合化療治療的42例患者納入觀察組，將單純采用化療治療的70患者納入對照組。觀察組男性26例，女性16例；年齡32～78歲，平均(46.9±15.7)歲。對照組男性42例，女性28例；年齡22～80歲，平均(45.6±14.3)歲。所有患者均經(jīng)病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)診斷為Ⅲ、Ⅳ期NSCLC患者，未進(jìn)行放化療治療，排除嚴(yán)重心、肝、腎疾病患者，排除依從性差，不能配合試驗(yàn)的患者。所有入選患者或家屬簽署知情同意書，報(bào)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

DC細(xì)胞培養(yǎng)：患者經(jīng)造血動員后抽取外周血150～200 ml，常規(guī)分離收集單個(gè)核細(xì)胞。分析后的單個(gè)核細(xì)胞用pH的PBS溶液洗滌3次，用RPMI 1640完全培養(yǎng)基將細(xì)胞配置成2×109/L的細(xì)胞懸浮液，加入6孔板培養(yǎng)板中置37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 h。棄上清液，用預(yù)熱的培養(yǎng)基清洗2次，獲得貼壁的單核細(xì)胞。向每孔加入3 ml完全培養(yǎng)液(100 mg/ml rhGM-CSF、50 ng/ml rhIL-4)誘導(dǎo)DC，每2 d半量更換完全培養(yǎng)液，第5 d加入終濃度為10 ng/ml的IL-1β、10 μg/ml的PEG-2和20 ng/ml的TNF-α，置培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h獲得成熟DC。

CIK細(xì)胞制備：獲得貼壁單核細(xì)胞同DC細(xì)胞培養(yǎng)。向每個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)孔中加入3 ml RPMI1640培養(yǎng)基、1 000 U/ml IFN-γ、50 ng/ml anti-CD3單克隆抗體和1 000 U/ml IL-2誘導(dǎo)CIK，第7 d將DC和CIK按1∶10混合培養(yǎng)7 d產(chǎn)生DC-CIK，經(jīng)細(xì)菌和霉菌培養(yǎng)陰性后收集細(xì)胞。收集后的細(xì)胞經(jīng)生理鹽水洗滌3次后配成150 ml細(xì)胞懸浮液，靜脈回輸，1次/d，5 d一個(gè)療程，每個(gè)療程回輸細(xì)胞總數(shù)5～6×109個(gè)。

治療方法：觀察組患者采用紫杉醇加奈達(dá)鉑(TP方案)化療，21 d為1個(gè)治療周期，第1個(gè)周期治療結(jié)束后10 d開始回輸DC-CIK細(xì)胞，1次/d，輸注4次為1個(gè)療程，每次回輸前給予苯海拉明20 mg肌注防止過敏反應(yīng)的發(fā)生，然后再進(jìn)行2個(gè)周期的化療。對照組患者僅采用TP方案化療3個(gè)周期。

1.3 觀察指標(biāo)

兩組患者在治療前和治療后進(jìn)行T細(xì)胞亞群檢測，包括CD3+、CD4+、CD8+及CD56+，同時(shí)檢測細(xì)胞因子，包括IL-2、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α。兩組患者治療結(jié)束后4周行影響學(xué)檢查對腫瘤治療效果進(jìn)行評價(jià)，分為完全緩解(complete remission，CR)、部分緩解(partial remission，PR)、疾病穩(wěn)定(stable disease，SD)和疾病進(jìn)展(progression disease，PD)。疾病控制率(disease control rate，DCR)=(CR+PR+SD)/(CR+PR+SD+PD)，有效率(response rate，RR)=(CR+PR)/(CR+PR+SD+PD)。觀察并記錄兩組患者的不良反應(yīng)。按照《肺癌患者生活質(zhì)量評估測量表》評估兩組患者治療后的生活質(zhì)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者療效對比

觀察組中CR 1例，PR 20例，SD 7例，PD 14例，DCR為66.7%，RR為50.0%，對照組中CR 0例，PR 26例，SD 11例，PD 33例，DCR為52.9%，RR為37.1%。兩組患者PD率和DCR差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，其他指標(biāo)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05，見表1。

2.2 兩組患者治療前后T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果對比

觀察組患者治療后外周血CD3+、CD4+、D8+、D56+T細(xì)胞所占比值均有所升高，其中CD3+、D8+、D56+細(xì)胞比值的升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，CD4+/CD8+的比值降低，與治療前相比差異顯著，P<0.05；對照組患者治療后外周血CD3+、CD4+、D8+、D56+T細(xì)胞所占比值均有所降低，其中CD3+、D8+、D56+細(xì)胞比值的降低有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05，CD4+/CD8+的比值升高，與治療前相比差異顯著，P<0.05，見表2。

表1 兩組患者療效對比(例，%)

表2 兩組患者治療前后T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果對比(±s，%)

表2 兩組患者治療前后T細(xì)胞亞群檢測結(jié)果對比(±s，%)

項(xiàng)目治療前治療后tP觀察組CD3+52．1±9．759．6±10．36．3250．002CD4+32．2±8．933．3±9．22．1300．241CD8+20．9±8．727．4±4．88．6200．000CD56+18．4±5．222．6±5．15．6490．008CD4+/CD8+1．3±0．21．1±0．23．9850．035對照組CD3+52．3±8．544．9±9．24．1290．021CD4+32．0±8．729．0±8．51．8540．369CD8+21．6±9．619．8±6．56．6680．001CD56+20．9±5．718．0±4．33．4670．045CD4+/CD8+1．3±0．21．4±0．14．2630．017

2.3 兩組患者治療前后外周血細(xì)胞因子的變化

觀察組患者治療后外周血IL-2、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平均升高，以IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平升高顯著，P<0.05。對照組患者治療后外周血IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平降低，其中以IL-12、IFN-γ和TNF-α降低顯著，P<0.05。

表3 兩組患者治療前后外周血細(xì)胞因子的變化(pg/mg，±s)

表3 兩組患者治療前后外周血細(xì)胞因子的變化(pg/mg，±s)

項(xiàng)目治療前治療后tP觀察組IL-21．9±0．52．1±0．44．6250．012IL-101．9±0．41．8±0．41．0010．523IL-122．0±0．52．2±0．53．6200．042INF-γ1．8±0．42．0±0．56．6460．002TNF-α1．8±0．52．1±0．58．9850．000對照組IL-22．0±0．41．9±0．42．0200．265IL-102．0±0．42．0±0．51．8540．369IL-122．1±0．51．8±0．53．6680．040INF-γ1．9±0．61．7±0．54．6370．011TNF-α1．9±0．51．8±0．34．0100．019

2.4 兩組患者不良反應(yīng)對比

兩組患者主要不良反應(yīng)為胃腸道反應(yīng)和輕度骨髓抑制，消化道反應(yīng)主要表現(xiàn)在納差、惡心、嘔吐等，觀察組患者消化道反應(yīng)發(fā)生率為76.2%(32/42)，對照組為70.0%(49/70)。骨髓抑制主要表現(xiàn)在白細(xì)胞Ⅰ～Ⅱ度減少，觀察組患者骨髓抑制發(fā)生率為66.7%(28/42)，對照組為57.1%(40/70)。兩組不良反應(yīng)發(fā)生率無顯著性差異，P<0.05，經(jīng)對癥治療均有不同程度緩解。

3 討論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體免疫功能息息相關(guān)。肺癌患者的免疫功能低下，嚴(yán)重可能會出現(xiàn)細(xì)胞免疫功能下降，體液免疫功能增強(qiáng)，嚴(yán)重干擾機(jī)體的抗腫瘤免疫[3]，而且手術(shù)、放化療等治療手段會進(jìn)一步削弱患者免疫力，致使患者不能很好的完成治療療程，尤其是老年晚期患者。在不損傷患者免疫力的基礎(chǔ)上又能起到治療腫瘤作用的治療方法對患者來說尤為重要。隨著腫瘤免疫治療的發(fā)展，過繼免疫治療已成為繼手術(shù)、放化療之后腫瘤治療的重要輔助手段。過繼免疫治療是1種被動免疫治療方法，可以重建患者的免疫系統(tǒng)，能高效清除微小病變，為預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和提高患者的生存質(zhì)量提供有利條件。常見的細(xì)胞免疫治療方式有DC、CIK細(xì)胞、腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞、淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞、DC-CIK細(xì)胞等。本研究采用自體外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)的DC-CIK用于過繼免疫治療NSCLC患者。

DC廣泛分布于腦以為的各組織器官[4]，細(xì)胞免疫功能強(qiáng)大，在免疫應(yīng)答中處于重要地位，可引發(fā)機(jī)體啟動免疫應(yīng)答[5]，還可通過調(diào)控B細(xì)胞的增值從而啟動體液免疫應(yīng)答[6]。CIK是1種細(xì)胞毒性T細(xì)胞，有IFN-γ、CD3和IL-2等細(xì)胞因子誘導(dǎo)形成，具有增值迅速、殺腫瘤活性強(qiáng)等特點(diǎn)[7]。實(shí)驗(yàn)表明DC與CIK共培養(yǎng)后CIK細(xì)胞的增值和抗腫瘤活性明顯提高[8]。

大量研究證明DC-CIK在腫瘤的治療中取得了良好的效果，可以顯著改善患者的免疫功能和臨床癥狀，延長患者的生存期[9-11]。蔡俊霞等[12]采用DC-CIK過繼免疫治療43例NSCLC患者，結(jié)果顯示治療后患者CD3+、CD4+、CD56+等T效應(yīng)細(xì)胞均顯著增加，同時(shí)IL-2、IL-12、IFN-γ等細(xì)胞因子水平也顯著升高，可見DC-CIK用于治療NSCLC 患者可以顯著提高患者免疫力。張曼等[13]聯(lián)合DCs-CIK細(xì)胞免疫治療和化療治療136 NSCLC患者，結(jié)果顯示相比于單純化療組，聯(lián)合治療組患者外周血中CD3+、CD8+和自然殺傷細(xì)胞比例明顯升高，同時(shí)患者生活治療也明顯提高，可見DCs-CIK細(xì)胞免疫治療聯(lián)合化療可改善晚期NSCLC患者的免疫功能和生活質(zhì)量。本研究中過繼免疫治療聯(lián)合化療的患者疾病控制率明顯高于單純化療的患者，主要表現(xiàn)在疾病進(jìn)展率較低，可見過繼免疫治療的患疾病穩(wěn)定，可能過繼免疫能消除微小病變預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)的特點(diǎn)有關(guān)。而且本組患者中聯(lián)合治療的患者外周血中CD3+、CD4+、D8+、D56+T細(xì)胞所占比值均有所升高，同時(shí)IL-2、IL-10、IL-12、IFN-γ和TNF-α水平也出現(xiàn)升高，可見患者的免疫功能也得到改善，抵抗腫瘤的能力增強(qiáng)，也在一定程度上減慢了疾病的進(jìn)程。有研究顯示IL-2、IFN-γ和TNF-α能增強(qiáng)NK細(xì)胞的活性，能直接殺傷腫瘤細(xì)胞同時(shí)又能抑制腫瘤細(xì)胞的增值，減少腫瘤的轉(zhuǎn)移[14]，另外，IL-12與腫瘤的進(jìn)展關(guān)系密切，在出現(xiàn)腫瘤進(jìn)展的患者外周血中IL-12明顯降低[15]。

綜上所述，過繼免疫治療聯(lián)合化療治療NSCLC提高患者的疾病控制率，改善患者的免疫功能，不增加患者的不良反應(yīng)發(fā)生率，具有較好的安全性和有效性。

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(編輯：吳小紅)

Curative Effect of Adoptive Immunotherapy Combined with Chemotherapy for Advanced Non-small Cell Lung Cancer and Its Effect on Immune Function

HUZhenhong,WUYanwen,LIUHaichao,etal.WuhanGeneralHospitaofGuangzhouMilitaryRegion,Wuhan,430070

Objective To investigate the clinical efficacy of adoptive immunotherapy combined with chemotherapy for advanced non-small cell lung cancer and its effect on immune function.Methods 112 cases of NSCLC were divided into the observation group and the control group according to the treatment method.In the observation group,42 patients were treated with paclitaxel and nedaplatin (TP Regimen) chemotherapy,21 days for one period of treatment,10 days after the end of the first cycle of treatment,DC -CIK cells reinfusion started,1 times/D,4 times for a period of treatment.Before each transfusion,20 mg intramuscular injection of diphenhydramine hydrochloride was given to prevent the occurrence of allergic reactions,and 2 cycles of chemotherapy were performed.In the control group,70 patients were only treated with TP chemotherapy for 3 cycles.Results DCR was 66.7% in the observation group and 52.9% in the control group,the difference was statistically significant,P<0.05. CD3+,D56+ and D8+ cells in the peripheral blood of the observation group significantly increased after treatment,P<0.05. CD4+/CD8+ decreased significantly compared with before treatment,P<0.05. CD3+,D8+,D56+cells in the peripheral blood significantly decreased in the control group,and CD4+/CD8+ significantly increased,P<0.05.The levels of IL-2,IL-12,IFN-γand TNF-αwere significantly higher in the observation group after treatment,P<0.05.The levels of IL-12,IFN-γand TNF-α were significantly lower in the control group after treatment,P<0.05.Conclusion Adoptive immunotherapy combined with chemotherapy in the treatment of non-small cell lung cancer can improve disease control rate and immune function of patients.

Doptive immunotherapy；Dendritic cell(DC);Cytokine induced killer cell(CIK);Non-small cell lung cancer;Immune function

430070 廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.09.024

R734.2

A

1001-5930(2016)09-1466-04

2015-11-04

2016-04-25)