甲苯磺酸索拉非尼在體單向腸灌流吸收研究

王琦

摘 要：研究甲苯磺酸索拉非尼在腸道吸收情況。

關(guān)鍵詞：甲苯磺酸索拉非尼；腸灌流；腸道吸收

甲苯磺酸索拉非尼是一種新型的多靶點(diǎn)抗腫瘤藥，主要用于無法手術(shù)治療的晚期腎細(xì)胞癌。此藥不僅抗癌效率高，而且副作用小，具有良好的臨床應(yīng)用前景。它是一種多激酶抑制劑，能同時(shí)抑制多種存在于細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞表面的激酶。包括血管內(nèi)皮生長因子受體-1（VEGFR-1）、血管內(nèi)皮生長因子受體-2（VEGFR-2）、血管內(nèi)皮生長因子受體-3（VEGFR-3）、血小板衍生生長因子受體-β（PDGFR-β）、KIT、MET、和FLT-3。由此可見，索拉非尼具有雙重抗腫瘤效應(yīng)，一方面，它可以通過抑制RAF/MEK/ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路，直接抑制腫瘤生長；另一方面，它又可通過抑制VEGFR和PDGFR而阻斷腫瘤新生血管的形成，間接抑制腫瘤細(xì)胞的生長。

1 儀器、試劑與動(dòng)物

1.1 儀器

1.2 試劑

K-R緩沖液，5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml的藥物灌流液，生理鹽水，甲醇。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠，雌雄兼用，200-250g （青龍山動(dòng)物養(yǎng)殖基地提供）。

2 研究方法

2.1 大鼠在體單向腸灌流實(shí)驗(yàn)方法[1，2，3]

實(shí)驗(yàn)前將大鼠禁食過夜（自由飲水），空腹注射0.2g/ml烏拉坦溶液麻醉（0.5ml/100g），固定，沿腹中線打開腹腔約3-4cm，取待考察的腸段，于兩端切口，用預(yù)熱至37℃的生理鹽水將腸內(nèi)容物沖洗干凈，切口處插管結(jié)扎，裝好裝置。紅外燈下保持37℃體溫，傷口處用浸有生理鹽水的脫脂棉覆蓋保溫。取預(yù)熱至37℃的供試液適量，以0.2ml/min的流速灌流平衡30min。更換供試液，進(jìn)口處用已稱量過質(zhì)量的裝有供試液的采樣管灌流，流速0.2ml/min。出口用已稱量質(zhì)量的收集管收集流出液并開始計(jì)時(shí)，每個(gè)15min更換供試液和收集采樣管。稱重，分別計(jì)算灌入的質(zhì)量Min和流出的質(zhì)量Mout。用HPLC法測(cè)定流出液的藥物濃度。實(shí)驗(yàn)持續(xù)時(shí)間為105min。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將大鼠處死，剪下被灌流的各腸段，測(cè)量其長度（l）和內(nèi)半徑（r）。

2.2 灌流液樣品的處理方法

取灌流液樣品500ul，加入500ul甲醇，渦旋30秒后，12000rpm高速離心10min，按2.2.1色譜條件檢測(cè)，得到A，帶入圖1的線性回歸方程，求得各流出液的藥物濃度。

2.3 數(shù)據(jù)分析方法

采用質(zhì)量法[4，5]計(jì)算藥物的吸收速率常數(shù)（Ka）和表觀吸收系數(shù)（Papp）。

式中：V in和V out分別為灌入和收集的供試液體積（mL）（假定供試液密度為1.0kg·L-1，根據(jù)測(cè)得質(zhì)量計(jì)算體積），Q 為灌流速度（0.2mLomin-1），Cin 、Cout分別為進(jìn)口和出口處緩沖液中藥物的質(zhì)量濃度（g·L-1），l 和r 分別為被灌流腸段的長度（cm）和橫截面半徑（cm）。

3 藥物不同腸段吸收特性的考察

3.1 實(shí)驗(yàn)方法

取大鼠3只，每只分別取以下腸段：十二指腸段為自幽門下1cm處開始；空腸段為自幽門15cm處開始；回腸段為自盲腸上行20cm處開始；結(jié)腸段為緊鄰盲腸至直腸。各腸段均取10cm左右，方法同“2.1”，取“1.2”配制的10ug/ml藥物溶液作為供試液，灌流速度為0.2mL·min-1，持續(xù)105min，每15min換液，計(jì)算并比較各腸段的Ka和Papp值，結(jié)果見表1。

3.2 結(jié)果與討論

3.2.1

通過大鼠各腸段藥物吸收的研究表明，甲苯磺酸索拉非尼在各腸段均具有較高的表觀吸收系數(shù)和藥物吸收速率常數(shù)。單因素方差分析進(jìn)行兩兩比較，十二指腸與結(jié)腸Ka無顯著差異（P>0.05），十二指腸與空腸Papp無顯著差異（P>0.05），其它參數(shù)比較均有顯著差異（P<0.05）。其吸收窗為全腸段，十二指腸和結(jié)腸吸收最好。

4 藥物濃度對(duì)藥物吸收的影響

4.1 試驗(yàn)方法

取大鼠6只，隨機(jī)分為2組，分別以“1.2.2” 配制的5ug/ml和20ug/ml的藥物溶液作為供試液，按3.2.1法，以空腸[9]為灌流部位，考察不同藥物濃度對(duì)吸收的影響。灌流速度0.2mLomin-1，每隔15min更換供試液，持續(xù)105min，比較3種不同藥物濃度下的ka和Papp值，以評(píng)價(jià)藥物濃度對(duì)藥物吸收的影響。結(jié)果見表2和表3。

4.2 結(jié)果與討論

單因素方差分析進(jìn)行兩兩比較，5ug/ml的Ka和Papp較高，且與10ug/ml和20ug/ml有顯著性差異，10ug/ml和20ug/mlKa和Papp無顯著性差異。表明藥物在大鼠空腸段的吸收存在自身濃度抑制現(xiàn)象即藥物在腸道的吸收存在飽和現(xiàn)象，提示其在體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)可能存在主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)或促進(jìn)擴(kuò)散作用，增大藥物與腸粘膜的接觸面積是提高藥物吸收程度的有效方法。

5 P-gp抑制劑維拉帕米對(duì)藥物吸收的影響

5.1 試驗(yàn)方法

取大鼠3只，以加入P-gp抑制劑維拉帕米的10ug/ml藥物溶液為灌流液，按3.2.1法，以空腸段作為灌流部位，考察P-gp抑制劑維拉帕米對(duì)吸收的影響。灌流速度0.2 mLomin-1，每隔15min更換供試液，持續(xù)105min，比較加入P-gp抑制劑維拉帕米和未加時(shí)的ka和Papp值，以評(píng)價(jià)P-gp抑制劑維拉帕米對(duì)藥物吸收的影響。結(jié)果見表4。

5.2 結(jié)果與討論

單因素方差分析進(jìn)行兩兩比較，Ka和Papp均無顯著性差異（P>0.05），表明藥物不是P-gp抑制劑的底物。

6 結(jié)果與討論

文獻(xiàn)報(bào)道[6]，大鼠Papp小于0.03×10e22

cm/s（即0.18×10-3cm·min-1）和大于0.2×10-4cm/s（即1.2×10-3cm·min-1）時(shí)，分別表示藥物難以吸收和易于吸收。本實(shí)驗(yàn)得出Papp大于1.2×10-3cm·min-1，表明甲苯磺酸索拉非尼在大鼠腸道內(nèi)易于吸收。

通過研究可認(rèn)為甲苯磺酸索拉非尼在腸道的吸收良好，因此不需考察吸收促進(jìn)劑的對(duì)其吸收的促進(jìn)作用。

參考文獻(xiàn)

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