趨化因子1在胃癌中的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

趙敏　郭運(yùn)生　肖芳

[摘要] 目的 探討趨化因子1（CXCL1）在胃癌中的表達(dá)及胃癌微血管生成的關(guān)系。 方法 選擇2013年10月～2014年10月于秦皇島市第一醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理確診的79例胃癌組織和18例癌旁正常胃黏膜組織，采用免疫組織化學(xué)EnVision法檢測各組織中CD34和CXCL1的表達(dá)情況，分析CXCL1和CD34-MVD的相關(guān)性。 結(jié)果 與癌旁正常胃黏膜組織比較，胃癌組織中CXCL1呈過表達(dá)（P < 0.05），且有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P < 0.05）；胃癌組織中CXCL1的表達(dá)和CD34-MVD呈正相關(guān)（r = 0.715，P < 0.05）。 結(jié)論 胃癌組織中CXCL1的高表達(dá)可能通過參與胃癌微血管生成進(jìn)而影響胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移。

[關(guān)鍵詞] 趨化因子1；胃癌；血管再生

[中圖分類號(hào)] R73 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2016）10（b）-0091-03

[Abstract] Objective To investigate the expression of CXCL1 and the relationship between CXCL1 and angiogenesis in gastric cancer carcinoma. Methods Seventy-nine tissues of gastric carcinoma and 18 tissues of non-neoplastic gastric from October 2013 to October 2014 confirmed by pathological diagnosis in the Qinhuangdao First Hospital were collected， the expression patterns of CXCL1 and CD34 in all gastric tissues were determined by immunohistochemical staining analysis and the correlation between CXCL1 and CD34-MVD was analyzed. Results Compared with normal gastric mucosa tissues adjacent to carcinoma， the expression of CXCL1 was higher in the gastric carcinoma （P < 0.05）， and the positive expression was significantly higher in the tissues with metastasis than that in the tissues without metastasis （P < 0.05）. The expression of CD34-MVD was positively correlated with CXCL1 in gastric carcinoma （r = 0.715， P < 0.05）. Conclusion The high expression of CXCL1 plays an important role in metastasis of gastric through participating in tumor angiogenesis.

[Key words] CXCL1； Gastric carcinoma； Angiogenesis

血管生成可以為腫瘤生長提供必要的養(yǎng)分，是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的必要條件，CXC家族趨化因子是具有多種功效的細(xì)胞因子超家族，它們可以趨化白細(xì)胞的遷移，調(diào)節(jié)血管生成和血管重構(gòu)，是腫瘤發(fā)病過程中重要的促血管生成因子。近年來，趨化因子/受體生物軸作為腫瘤血管的調(diào)控分子已成為腫瘤轉(zhuǎn)移研究的熱點(diǎn)[1]，CXCL1是CXC類趨化因子的一員，能夠通過其特異性受體CXCR2直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)血管生成，介導(dǎo)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移[2]。本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測胃癌中CXCL1的表達(dá)，探討CXCL1與胃癌血管生成的關(guān)系。現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2013年10月～2014年10月秦皇島市第一醫(yī)院確診為胃癌的手術(shù)切除組織79例，配對(duì)手術(shù)切緣正常胃黏膜組織18例，其中男52例，女27例；年齡48～79歲，中位年齡63.5歲；低分化34例，中高分化45例。所有患者均有詳細(xì)的臨床病理資料，術(shù)前均未接受放化療，標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化 采用EnVision方法，鼠抗人CXCL1購自武漢博士德公司，鼠抗人CD34和試劑盒購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，將所有組織分別行CXCL1和CD34免疫組化染色，抗體滴度均為1∶100，染色步驟按試劑盒說明書進(jìn)行，用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色后蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片。

1.2.2 免疫組織結(jié)果判讀 陽性表達(dá)定位細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，呈棕黃色陽性，無棕黃色染色或陽性細(xì)胞數(shù)<10%為陰性，陽性細(xì)胞率≥10%為陽性表達(dá)；CD34標(biāo)記的胃癌組織微血管密度（MVD）計(jì)數(shù)：CD34主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞膜，微血管染色呈棕黃色，分布不均，主要位于癌灶邊緣，癌細(xì)胞密集區(qū)，首先在低倍鏡下觀察切片，確定新生血管密集的3個(gè)視野（即新生血管熱點(diǎn)區(qū)），然后在高倍鏡下計(jì)數(shù)視野內(nèi)染色陽性的微血管數(shù)，取3個(gè)視野計(jì)數(shù)結(jié)果的均數(shù)作為該切片的MVD。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CXCL1蛋白的表達(dá)與胃癌臨床病理關(guān)系

CXCL1在胃癌組織和正常胃黏膜組織中均有表達(dá)，且在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)（0.2954±0.0126），與正常胃黏膜組織（0.1208±0.0027）比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），并且CXCL1在低分化胃癌組織中的表達(dá)高于中高分化癌組織（P < 0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P < 0.05），而在不同性別、年齡中的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）。

2.2 MVD的表達(dá)與胃癌的臨床病理關(guān)系

在正常胃黏膜組織中的MVD計(jì)數(shù)為（23.38±7.51）個(gè)/視野；在胃癌組織中MVD為（43.52±9.34）個(gè)/視野，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。且CD34-MVD在低分化胃癌組織中計(jì)數(shù)高于中高分化胃癌組織（P < 0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)VD計(jì)數(shù)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），但在不同性別、年齡的計(jì)數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）。

2.3 胃癌組織CXCL1和CD34-MVD表達(dá)的相關(guān)性

Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示，在胃癌中CXCL1與CD34-MVD的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r = 0.715，P < 0.05）。

3 討論

血管生成是惡性腫瘤生長的必要條件，在腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[3]。Folkman等[4]首先在20世紀(jì)70年代提出腫瘤血管生成理論，指出腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于腫瘤血管的生成。實(shí)體腫瘤在沒有血管生成時(shí)腫瘤只能長到1～3 mm，不會(huì)發(fā)生轉(zhuǎn)移，當(dāng)腫瘤直徑超過2 mm時(shí)，就需要新生血管提供營養(yǎng)物質(zhì)，腫瘤新生血管生成以后，腫瘤呈指數(shù)倍增，隨之增加轉(zhuǎn)移機(jī)會(huì)[5]。近年來諸多學(xué)者圍繞腫瘤血管生成進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)研究，探究腫瘤血管生成的相關(guān)因子及受體可以為抑制腫瘤血管生成的靶向治療提供有效的理論基礎(chǔ)[6]。

CXCL1最初在黑色素瘤中發(fā)現(xiàn)，在巨噬細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和上皮細(xì)胞中有表達(dá)，因其結(jié)構(gòu)功能區(qū)第一個(gè)半胱氨酸前有ELR[谷氨酸-亮氨酸-精氨酸（Glu-Leu-Arg）]結(jié)構(gòu)，CXCL1屬于ELR+CXC趨化因子，與其他含有ELR結(jié)構(gòu)的CXC家族成員一樣，CXCL1具有促血管生成作用[7]。近年來，學(xué)者們?cè)趯?duì)結(jié)直腸癌、卵巢癌、膀胱癌等多項(xiàng)實(shí)體惡性腫瘤的研究中發(fā)現(xiàn)CXCL1高表達(dá)[8-10]，在對(duì)基因工程小鼠的研究中，Scapini等[11]發(fā)現(xiàn)，CXCL1能夠通過募集中性粒細(xì)胞并引起中性粒細(xì)胞分泌VEGF-A介導(dǎo)血管生成。Shintani等[12]在關(guān)于CXCL1與口腔鱗狀上皮細(xì)胞癌關(guān)系的研究中發(fā)現(xiàn)，MVD檢測顯示CXCL1的表達(dá)與腫瘤血管形成關(guān)系密切，提示CXCL1是高效的促血管生長因子[13-14]。

近年來的研究通過比較胃癌及癌旁正常組織的基因表達(dá)發(fā)現(xiàn)，CXCL1在胃癌組織中高表達(dá)，并且與腫瘤進(jìn)展和患者的不良預(yù)后呈正相關(guān)[15-18]。同時(shí)Xu等[19]發(fā)現(xiàn)CXCL1的特異性受體CXCR2在胃癌組織中也呈高表達(dá)。在本次研究中，CXCL1在胃癌組織中表達(dá)上調(diào)，且腫瘤分化程度低，CXCL1表達(dá)上調(diào)明顯，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽性表達(dá)高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示CXCL1的高表達(dá)可能與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。

CD34在微血管中的表達(dá)良好，特異性較高，在有關(guān)腫瘤血管的研究中多采用CD34來標(biāo)記微血管，目前MVD值是評(píng)估腫瘤血管生成狀態(tài)的金標(biāo)準(zhǔn)[20]。在本次研究中CD-MVD值在胃癌組織中明顯高于正常胃黏膜組織，而且低分化組高于中高分化組，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，統(tǒng)計(jì)分析提示胃癌組織中CXCL1的表達(dá)上調(diào)和MVD值呈正相關(guān)，MVD顯示CXCL1可能與胃癌血管生成有關(guān)，CXCL1可能通過促血管生成從而參與胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移。

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（收稿日期：2016-07-10 本文編輯：任 念）