超聲波輔助提取地榆總鞣質(zhì)工藝的優(yōu)化

彭誠+楊康+張世瑩

摘要：目的：本文通過正交設(shè)計優(yōu)選地榆總鞣質(zhì)的超聲輔助提取工藝。方法：指標(biāo)為地榆中總鞣質(zhì)含量，經(jīng)過單因素考察以及正交實驗對超聲輔助提取時間、溶劑濃度、超聲輔助提取次數(shù)、乙醇溶劑用量四因素進(jìn)行研究。結(jié)果：得到最佳提取工藝為超聲波輔助提取3次，每次60分鐘，溶劑為15倍量的料液比，濃度為70%的乙醇。結(jié)論：通過驗證性實驗，表明此方法提取工藝穩(wěn)定可行。

關(guān)鍵詞：地榆;總鞣質(zhì);正交設(shè)計;超聲輔助提取

中圖分類號： ?R284.2 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼： ?A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI編號： ? 10.14025/j.cnki.jlny.2016.24.080

地榆中藥材是以植物地榆根入藥，最早載于《神農(nóng)本草經(jīng)》中。植物地榆（Sanguisorba officinalis L.）為薔薇科地榆屬植物，為多年生草本，又名豬人參、血箭草、馬軟棗[1]。地榆屬植物大致分布于北溫帶周圍區(qū)域，現(xiàn)如今在全世界發(fā)現(xiàn)的大概有30多種[2]。我國地榆屬植物主要分布在東北、華北、西北、華東、中南及廣西[3]。中藥地榆其性微寒，酸、澀，味苦、歸肝、大腸經(jīng)。并且具有解毒斂瘡，涼血止血之功效，故在中醫(yī)臨床使用上多用于治療崩漏、血痢、便血、水火燙傷、胃出血、腸炎等病癥[4]。地榆屬植物中富含黃酮、皂苷、鞣質(zhì)及甾體類成分。鞣質(zhì)多具有抗腫瘤[5]、抗氧化[6]及降血脂及降血糖作用[7]等藥理活性。本研究對地榆中主要的化學(xué)活性成分——鞣質(zhì)提取工藝的優(yōu)化，有利于地榆資源進(jìn)一步的開發(fā)、利用，并為中藥材有效成分的富集提供理論依據(jù)。

1 儀器、材料

1.1 儀器

UV-754型紫外—可見分光光度計（上海有一儀器有限公司），HJ-M4磁力攪拌水浴鍋（金壇市城西春蘭實驗儀器廠），R-300旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（瑞士步琦），KQ-250B型超聲波清洗器（昆山舒美超聲儀器有限公司）。

1.2 材料

本藥材采于吉林省二道鄉(xiāng)水庫，經(jīng)過吉林大學(xué)藥學(xué)院王廣樹教授鑒定，確定本品為藥材地榆（Sanguisorba officinalis L.），沒食子酸對照品150毫克 （經(jīng)色譜分析，純度>98%，濟(jì)寧宏明化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1測定總鞣質(zhì)含量[8]

2.1.1 沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配備 精密稱定沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品25毫克，置于50毫升棕色容量瓶中，加水稀釋至刻度，量取10毫升，置于100毫升棕色容量瓶，加水再稀釋至刻度，搖勻，放置備用（濃度為0.05毫克/毫升）。

2.1.2 線性關(guān)系考察 依次精確量取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別為1毫升、2.0毫升、4.0毫升、6.0毫升、8.0毫升、10.0毫升，再各自置于50毫升容量瓶中，每組均加磷鉬鎢酸2毫升，加水23毫升、22毫升、20毫升、18毫升、16毫升、14毫升稀釋，加29%Na2CO3溶液至刻度后搖勻，放置30分鐘，依照（《中國藥典》2015年版第四部通則）所述，利用紫外可見分光光度法，在760納米波長處測定吸光度A，并以吸光度A為縱坐標(biāo)y，以濃度C為橫坐標(biāo)x，得回歸方程y=59.427x+0.0268，r=0.9997。結(jié)果表明，沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品（1.0～10.0μg/mL）濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。

2.1.3 ?供試品溶液 稱取地榆浸膏適量，充分干燥，稱重，置于500毫升容量瓶中，加水300毫升溶解，溶液過夜放置，超聲波處理20分鐘至充分溶解，于室溫下靜置冷卻，加水稀釋至刻度，搖勻靜置并濾過，棄去初濾液100毫升，取續(xù)濾液20毫升移至200毫升容量瓶中，并加水稀釋至容量瓶刻度，充分搖勻，得供試品溶液。

2.1.4 ?地榆總鞣質(zhì)含量測定法 總酚：量取供試品溶液1毫升，置于50毫升容量瓶中，依“2.1.2項下”方法測定吸光度A，即得。

未被吸收的多酚：量取供試品溶液30毫升，加入150毫升具塞錐形瓶中，再加入干酪素0.9克，置于30℃水浴下保溫1小時，時時振搖，取出之后放冷，搖勻后濾過，并棄初濾液，量取濾液4毫升，置于50毫升棕色容量瓶，依“2.1.2項下”方法測定吸光度， 地榆總鞣質(zhì)的含量計算公式為：M鞣質(zhì)得含量=M總酚含量-

M未被吸收的多酚含量

2.2 單因素考察

2.2.1 超聲輔助提取的次數(shù) 取干燥的地榆根粉末適量，加入15B/V的60% C2H5OH，分別提取1、2、3、4、5次，每次60分鐘。提取物經(jīng)測定吸光度，計算含量結(jié)果提取次數(shù)對的總鞣質(zhì)的提取量有一定差異，但3、4、5次差異不大，故而選定超聲次數(shù)1、2、3次作為正交試驗考察的因素水平，進(jìn)一步考察超聲輔助提取次數(shù)對提取工藝的影響。

2.2.2 超聲輔助提取的時間 取干燥的地榆根粉末適量，加入15B/V的60% C2H5OH溶液，并依此超聲提取20分鐘、40分鐘、60分鐘、80分鐘、100分鐘。提取物經(jīng)測定吸光度，計算含量結(jié)果表明20分鐘到60分鐘提取量逐漸上升，故而選定45分鐘，60分鐘，75分鐘作為正交實驗考察的因素水平，進(jìn)一步考察超聲輔助提取的時間對提取工藝的影響。

2.2.3 溶劑濃度 取干燥的地榆根粉末適量，分別加入15B/V的30%、40%、50%、60%、70%、80% C2H5OH，超聲提取60分鐘。提取物經(jīng)測定吸光度，計算含量結(jié)果表明70%、60% C2H5OH提取結(jié)果最好，故而選定50%、60%、70% C2H5OH溶液作為正交實驗考察的因素水平，進(jìn)一步考察溶劑濃度對提取工藝的影響。

2.2.4 溶劑用量 取干燥的地榆根粉末適量，分別加入5、10、15、20、25、30B/V的60%C2H5OH，超聲提取60分鐘。提取物經(jīng)測定吸光度，計算含量結(jié)果表明15B/V的60% C2H5OH提取結(jié)果最好，故而選擇10、15、20B/V的溶劑用量，作為正交實驗考察的因素水平，進(jìn)一步考察溶劑用量對提取工藝的影響。

2.3 ?L9（34）正交試驗設(shè)計

通過單因素實驗的結(jié)果考察，選擇超聲輔助提取次數(shù)A、超聲輔助提取時間B、溶劑濃度C、溶劑用量D為考察的四組因素，采用L9（34）正交試驗設(shè)計方法，確定地榆中總鞣質(zhì)的最佳提取工藝為A3C3B2D2，即為超聲波輔助提取3次，每次60分鐘，溶劑為15B/V的70%C2H5OH。通過顯著性檢驗及方法分析，得出各因素對地榆中總鞣質(zhì)提取效果影響的主次順序為A>C>B>D。依照正交試驗的結(jié)果重復(fù)試驗5次，計算得RSD為1.74%。結(jié)果表明，按此最佳提取工藝操作，工藝穩(wěn)定可行。

2.4 討論

本文根據(jù)《中國藥典》2015年版第四部通則，以沒食子酸作為標(biāo)準(zhǔn)品考察線性關(guān)系，并得出地榆總鞣質(zhì)含量。利用超聲波輔助提取，通過多個單因素的考察，確定選取超聲輔助提取次數(shù)（A）、超聲輔助提取時間（B）、溶劑濃度（C）、溶劑用量（D）等影響因素的各自三個水平條件，利用正交試驗設(shè)計，優(yōu)化地榆中總鞣質(zhì)的提取工藝，為超聲提取3次，每次60分鐘，溶劑為15B/V的70%C2H5OH。通過重復(fù)性考察，表明該結(jié)果的優(yōu)化工藝穩(wěn)定可行。

近些年，鞣質(zhì)類成分在國內(nèi)的研究的不斷加深，地榆中總鞣質(zhì)的生理活性受到了研究工作者廣泛的關(guān)注。本文對地榆藥材中總鞣質(zhì)的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，有利于今后對地榆藥材資源的開發(fā)利用，提高地榆總鞣質(zhì)的提取效率，對生物活性成分的富集提供一定理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 路洪順.地榆及其開發(fā)利用[J].中國林副特產(chǎn)，2000，（02）：50-52.

[2] 吳征錳.新華本草綱要（第三冊）[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1990：130-131.

[3] 中藥大辭海編寫組編.中藥大辭海（第一卷）[M]，北京：中國醫(yī)藥科學(xué)出版社，1993：1962-1963.

[4] 沈保安.中國常用中草藥[M].合肥：安徽科學(xué)技術(shù)出版社，2005.

[5] 金哲雄，齊典.刺玫果鞣質(zhì)預(yù)防腫瘤作用研究[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2007，25（04）：647-648.

[6] 曾偉成，蔡欽榕，楊輝，等.虎杖鞣質(zhì)抗脂質(zhì)過氧化作用研究[J]. 中藥藥理與臨床，2002，18（06）：18-19.

[7] 姚思宇，趙鵬，劉榮珍，等.鞣質(zhì)降血脂作用的動物實驗研究[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2004，4（06）：45-946.

[8] 國家藥典委員會.中國藥典（四部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015： 通則203.

作者簡介：彭誠，碩士，吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院，助教，研究方向：天然藥物活性成分研究。