一例奶牛子宮內(nèi)膜炎的細(xì)菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

傅曉雪

（肇慶農(nóng)業(yè)學(xué)校，廣東　肇慶　526000）

一例奶牛子宮內(nèi)膜炎的細(xì)菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

傅曉雪

（肇慶農(nóng)業(yè)學(xué)校，廣東肇慶526000）

從廣東省肇慶市某奶牛場采集3頭患有子宮內(nèi)膜炎的奶牛的子宮分泌物，通過細(xì)菌培養(yǎng)鏡檢及生化試驗(yàn)鑒定，初步篩查其主要致病菌為金黃色葡萄球菌。對其進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，結(jié)果表明新霉素及氟苯尼考具有較好的抑菌作用，可作為此次治療的選擇參考。

奶牛；子宮內(nèi)膜炎；病原菌；藥敏試驗(yàn)

子宮內(nèi)膜炎為奶牛常見疾病，是造成不孕癥的重要原因之一，而奶牛不孕癥又已成為一個(gè)主要的世界經(jīng)濟(jì)問題。本病若不及時(shí)治療，往往會(huì)導(dǎo)致奶牛不育而被淘汰。每年國內(nèi)外奶牛不孕癥所造成的經(jīng)濟(jì)損失都相當(dāng)大。奶牛子宮內(nèi)膜炎的直接病因是病原微生物的感染，據(jù)資料報(bào)道，已發(fā)現(xiàn)引起子宮內(nèi)膜炎的病原微生物包括細(xì)菌、真菌、支原體、霉形體、病毒及寄生蟲等，而病原性細(xì)菌在奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生中起著最重要的作用。

1　材料與方法

1.1材料

（1）主要儀器及設(shè)備。高壓滅菌鍋、冰箱、DHU-9246A型電熱恒溫培養(yǎng)箱、SW-CJ-JBu型單人單面無菌操作臺(tái)等。

（2）培養(yǎng)基與試劑。微量生化鑒定管：北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司

常用藥敏試紙：杭州天和微生物試劑有限責(zé)任公司。自制藥敏試紙。

（3）病例選擇。根據(jù)奶牛臨床型子宮內(nèi)膜炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選自奶牛場病牛3頭，臨床表現(xiàn)為精神沉郁，體溫稍升高，食欲弱，產(chǎn)奶量下降，從陰門流出少量黏性或膿性分泌物，帶有污紅色，陰道開殖器打開引導(dǎo)檢查，子宮頸稍張開，從子宮頸內(nèi)有分泌物排出。

1.2方法

（1）病料采取。病牛陰戶用溫水清洗，0.2%新潔爾滅消毒滅菌后，按直腸把握法將事先已裝有輸精管的輸精槍插入子宮內(nèi)，粘取子宮分泌物放入無菌試管中，密封后盡快送回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)鑒定。

（2）細(xì)菌培養(yǎng)鑒定。采取病牛的子宮內(nèi)分泌物，進(jìn)行涂片或觸片用革蘭氏染色法鏡檢，觀察細(xì)菌形態(tài)，同時(shí)接種于普通瓊脂培養(yǎng)基、血培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，37℃恒溫培養(yǎng)24～48h，對細(xì)菌生長情況及菌落特征進(jìn)行觀察，并染色鏡檢。挑取單個(gè)菌落接種于鞋面培養(yǎng)基上，普通肉湯中37℃恒溫培養(yǎng)24～48h，再進(jìn)行涂片染色鏡檢，若為純培養(yǎng)，則置于4℃的冰箱中保持備用。

另取已純化的試驗(yàn)菌種，分別接種于葡萄糖半固體培養(yǎng)基、麥芽糖、蔗糖、尿素硝酸鹽，甘露醇等微量管中以及葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（3）藥敏試驗(yàn)。將上述分離病原菌在無菌條件下用涂布棒均勻再普通瓊脂培養(yǎng)基上，將自制藥敏試紙片（頭孢呋辛、先鋒霉素V、氧氟沙星、泰樂菌素、氟苯尼考、恩諾沙星、新生霉素、環(huán)丙沙星）以及公司生產(chǎn)的青霉素、慶大霉素、紅霉素、新霉素試紙等藥敏試紙進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，置于置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)24～48h，根據(jù)其抑菌圈直徑的大小判定其結(jié)果。抑菌圈直徑小于10mm為耐藥，10～15mm為中度敏感，15mm以上為高度敏感。

2　結(jié)果

2.1細(xì)菌鑒定結(jié)果

通過細(xì)菌分離培養(yǎng)、革蘭氏染色鏡檢及生化試驗(yàn)鑒定，判斷該致病菌主要為金黃色葡萄球菌。

2.2藥敏試驗(yàn)結(jié)果

本試驗(yàn)應(yīng)用常用的12種藥敏試紙測定，結(jié)果見表1。

表1　藥敏試驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該菌對新霉素及氟苯尼考最敏感，先鋒霉素V、環(huán)丙沙星、氧氟沙星對該菌高度敏感，而該菌對慶大霉素、新生霉素中度敏感，對其他耐藥或不敏感。因此，新霉素及氟苯尼考可作為此次治療的選擇參考。

3　討論

3.1感染細(xì)菌

正常奶牛子宮是一個(gè)相對無菌的環(huán)境，自凈能力很強(qiáng)，只有受到強(qiáng)烈機(jī)械刺激、抵抗力下降和微生物感染時(shí)才會(huì)有大量微生物滋生，引起子宮內(nèi)膜炎。據(jù)報(bào)道，產(chǎn)后2周子宮受細(xì)菌污染極為常見，隨后多數(shù)自動(dòng)清除。本實(shí)驗(yàn)中，子宮受到單一菌金黃色葡萄球菌的感染比例較高，這可能是由于我們的采樣期大部分集中在產(chǎn)后2～3周的緣故。此期子宮菌由多種混合菌感染變成單一菌感染，其中金黃色葡萄球菌抑制了其他菌的生長。

另外，該病的發(fā)生也與人為因素、營養(yǎng)因素和遺傳因素等有關(guān)。本試驗(yàn)受時(shí)間和條件的限制沒有進(jìn)行厭氧菌的分離培養(yǎng)，但是不能排出尚有厭氧菌感染的可能。另外，值得注意的是本試驗(yàn)從患病奶牛實(shí)際分離到了多種細(xì)菌，但這并不一定意味著它們都是子宮內(nèi)膜炎的直接致病因子。它們中多數(shù)為環(huán)境中常見菌，有些可能只是繼發(fā)性感染。至于具體哪種或哪幾種細(xì)菌是子宮內(nèi)膜炎的直接致病菌，有待進(jìn)一步研究。

3.2細(xì)菌對藥物的敏感性

藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，新霉素、氟苯尼考等藥物對幾種試驗(yàn)菌均高度敏感，可作為此次治療的首選藥物。慶大霉素等的抑菌效果較差，青霉素類亦產(chǎn)生耐藥或根本無效。我們所得的結(jié)論與其他研究者有一定的差別，這可能是由于臨床長期不合理使用抗生素，導(dǎo)致細(xì)菌對常用抗生素的耐藥性，降低了細(xì)菌對藥物的敏感性。如長期不合理使用青霉素，金黃色葡萄球菌對青霉素產(chǎn)生了耐藥性，同時(shí)對新生霉素也產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。因此，用藥時(shí)需要合理配伍，不隨意加大劑量，以免產(chǎn)生耐藥菌株，使藥物失去治療效果。為了減少細(xì)菌的抗藥性，提高治療效果，建議避免使用上述藥敏試驗(yàn)中對致病菌株耐藥或效果較差的抗生素。

近年來，應(yīng)用子宮內(nèi)接種有益微生物及中西結(jié)合治療奶牛子宮內(nèi)膜炎等已有不少成功的報(bào)道，因此在治療時(shí)不妨考慮使用多種治療手段，起到有效治療。

綜上所述，我們深刻體會(huì)到，藥敏試驗(yàn)對指導(dǎo)獸醫(yī)臨床用藥具有十分重要的意義，不僅提高療效，而且可以節(jié)約藥物成本，增加效益。建議有條件的奶牛場可進(jìn)行定期的臨床藥敏試驗(yàn)，有利于指導(dǎo)獸醫(yī)臨床用藥。

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10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．12.018