湖南永州地區(qū)豬弓形蟲病的血清學(xué)調(diào)查

廖光宇，劉 成，肖建華，陳名海，李陽(yáng)玉，陳名鋒

（1.湖南永州市藍(lán)山縣畜牧水產(chǎn)局動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖南 永州 425800；2.湖南永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物科學(xué)技術(shù)系，湖南 永州 425000；3.湖南永州市藍(lán)山縣楠市鎮(zhèn)動(dòng)物防疫站，湖南 永州 425800）

試驗(yàn)研究

湖南永州地區(qū)豬弓形蟲病的血清學(xué)調(diào)查

廖光宇1，劉 成2，肖建華3，陳名海1，李陽(yáng)玉1，陳名鋒1

（1.湖南永州市藍(lán)山縣畜牧水產(chǎn)局動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，湖南 永州 425800；
2.湖南永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物科學(xué)技術(shù)系，湖南 永州 425000；
3.湖南永州市藍(lán)山縣楠市鎮(zhèn)動(dòng)物防疫站，湖南 永州 425800）

為掌握湖南永州地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)豬弓形蟲的感染情況及流行趨勢(shì)，2015年3月至2016年2月分別采集湖南永州地區(qū)9縣2區(qū)豬血清樣本共1302份，其中:冷水灘區(qū)182份，零陵區(qū)130份，祁陽(yáng)縣186份，東安縣168份，雙牌縣66份，道縣140份，江永縣46份，江華縣76份，寧遠(yuǎn)縣138份，藍(lán)山縣92份,新田縣78份。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清中的弓形蟲抗體。結(jié)果顯示:1302份豬血清中，陽(yáng)性樣本351份，弓形蟲感染陽(yáng)性率為26.96%，其中規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)感染率較低19.39%，散養(yǎng)戶感染率較高36.37%，表明湖南永州地區(qū)豬弓形蟲病感染具有一定的普遍性。且從不同季節(jié)豬的感染情況看，弓形體感染率為夏秋＞冬春；從不同飼養(yǎng)階段豬的感染情況看，弓形體感染率為育肥豬＞肥豬＞哺乳仔豬。

弓形蟲??；血清學(xué)；調(diào)查；豬

弓形蟲病又稱弓形體病，是由剛地弓形蟲在人體內(nèi)寄生而導(dǎo)致的人畜共患寄生性原蟲病。弓形蟲最早于1908年由Nieolle和Manceaux在北非突尼斯的嚙齒類動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)廣泛分布于南極洲以外的世界各地。自1955年我國(guó)人獸共患病專家于思庶等從豬體內(nèi)發(fā)現(xiàn)弓形蟲以后，全國(guó)各地陸續(xù)報(bào)道了豬群感染本病的情況。據(jù)國(guó)外報(bào)道，人群的平均感染率大約為25%～50%，有人推算全世界約有至少5億人感染弓形蟲。弓形蟲病能造成廣泛的人畜損害，對(duì)免疫抑制的個(gè)體和孕婦可造成嚴(yán)重的后果，亦是艾滋病（AIDS）患者的死亡原因 之一。近年來，隨著我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,交通便利、運(yùn)輸頻繁、犬貓泛濫等因素,該病流行越來越普遍,并逐漸成為危害養(yǎng)豬業(yè)和人畜健康的重要疫病之一。據(jù)國(guó)外報(bào)道,弓形蟲病多發(fā)于乳豬階段,死亡率約30%～40%，成年豬急性發(fā)病較少，多數(shù)呈隱性感染。到目前為止，我國(guó)已發(fā)現(xiàn)豬、羊、牛、馬、駱駝、兔、雞等均有感染弓形蟲病的可能，尤以豬弓形蟲病感染最嚴(yán)重，多發(fā)于25kg以上的架子豬和育肥豬，乳豬則較為少見。為查明豬弓形蟲病在湖南永州地區(qū)的流行情況，筆者于2015年3月至2016年2月運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法（以下簡(jiǎn)稱ELISA法）對(duì)湖南永州地區(qū)豬弓形蟲進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查，目的是為防控該病提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 主要儀器及器材 酶標(biāo)儀（MULTISKAN MK3），購(gòu)自Thermo公司；臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（5810R），購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司。洗滌器，50μL、100μL精確微量移液器，一次性移液器吸頭，稀釋樣品的U型96孔稀釋板等。

1.1.2 主要試劑 豬弓形蟲IgG抗體診斷試劑盒，購(gòu)自上海邦奕商貿(mào)有限公司，批號(hào)為20150108。

1.1.3 待檢血清 對(duì)湖南永州地區(qū)的冷水灘區(qū)、零陵區(qū)、祁陽(yáng)縣、東安縣、雙牌縣、道縣、江永縣、江華縣、寧遠(yuǎn)縣、藍(lán)山縣和新田縣共9縣2區(qū)的52個(gè)豬場(chǎng)隨機(jī)采集1302頭豬的血樣，用臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（5810R）離心血樣，分離血清，血清樣品清亮，無溶血，置冰箱4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 檢測(cè)方法

1.2.1 樣品稀釋 用診斷試劑盒樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如5μL血清加入495μL樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。

1.2.2 洗滌液配制 診斷試劑盒濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫（25℃左右），并搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

1.2.3 加樣反應(yīng) 每次試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性及空白對(duì)照各1孔（分別加入陰性、陽(yáng)性對(duì)照及樣本稀釋液100μL）。樣品檢測(cè)孔每孔加已稀釋血清樣本100μL。37℃避光反應(yīng)30min后，甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿洗滌液洗滌3次，每次均需停留1min后再甩凈，拍干。

1.2.4 加酶反應(yīng) 除空白對(duì)照孔外，每孔加酶結(jié)合物1滴。37℃避光反應(yīng)30min后，甩去孔內(nèi)液體，按1.2.3洗滌操作步驟進(jìn)行，拍干。

1.2.5 顯色反應(yīng) 加底物液和顯色劑各1滴，混勻，37℃避光顯色10min，加終止液1滴，終止反應(yīng)。觀察并用酶標(biāo)儀（MULTISKAN MK3）測(cè)定。

1.3 結(jié)果判定

用空白孔調(diào)零，于450nm（630nm作參比波長(zhǎng)）測(cè)定各孔吸光值（A450nm）。正常情況下，陰性對(duì)照孔A450nm值≤0.10；正常情況下，陽(yáng)性對(duì)照孔A450nm值≥0.3；樣品A450nm值大于0.18，判為陽(yáng)性；樣品A450nm值小于0.18，判為陰性。

2 結(jié)果

2.1 調(diào)查的縣（區(qū)）及豬場(chǎng)豬弓形蟲的感染情況

對(duì)湖南永州地區(qū)的冷水灘區(qū)、零陵區(qū)、祁陽(yáng)縣、東安縣、雙牌縣、道縣、江永縣、江華縣、寧遠(yuǎn)縣、藍(lán)山縣和新田縣共9 縣2區(qū)的52個(gè)豬場(chǎng)血樣進(jìn)行了檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見表1。結(jié)果顯示，湖南永州地區(qū)9縣2區(qū)的豬場(chǎng)生豬均有豬弓形蟲的不同程度感染，其中感染程度較高區(qū)域?yàn)?2.96%，平均感染率為26.96%。

表1 永州地區(qū)豬弓形蟲的感染情況

2.2 不同季節(jié)豬弓形蟲血清抗體陽(yáng)性率

在1302份豬血樣中，不同季節(jié)采集的豬血清弓形蟲抗體陽(yáng)性率變化較大，檢測(cè)結(jié)果見表2。結(jié)果顯示，夏季弓形蟲陽(yáng)性率最高為41.43%，陽(yáng)性率最低的冬季為12.81%，從不同季節(jié)豬的感染情況看，弓形體感染率為夏秋＞冬春。

表2 不同季節(jié)豬血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 不同飼養(yǎng)階段豬的感染情況

在1302份豬場(chǎng)血樣中，不同飼養(yǎng)階段豬采集的豬血清弓形蟲抗體陽(yáng)性率變化較大，檢測(cè)結(jié)果見表3。結(jié)果顯示，育肥豬高達(dá)39.55%，肥豬24.72%，哺乳仔豬13.04%。從不同飼養(yǎng)階段豬的感染情況看，豬弓形體感染率為育肥豬＞肥豬＞哺乳仔豬。

表3 不同飼養(yǎng)階段豬血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

2.4 不同規(guī)模的豬場(chǎng)感染情況

在1302份豬場(chǎng)血樣中，不同規(guī)模的豬場(chǎng)采集的豬血清弓形蟲抗體陽(yáng)性率變化較大，檢測(cè)結(jié)果見表4。結(jié)果顯示，規(guī)模豬場(chǎng)的豬弓形體感染率明顯比散養(yǎng)戶低下，規(guī)模戶感染率平均為19.39%，散養(yǎng)戶感染率平均為36.37%。

表4 不同規(guī)模豬場(chǎng)血清弓形蟲抗體檢測(cè)結(jié)果

3 小結(jié)與討論

3.1 通過豬弓形蟲IgG抗體診斷試劑盒檢測(cè)，目前湖南永州地區(qū)豬弓形蟲感染陽(yáng)性率為26.96%,表明湖南永州地區(qū)豬弓形蟲病感染具有一定的普遍性。夏季弓形蟲陽(yáng)性率最高為41.43%，陽(yáng)性率最低的冬季為12.81%，從不同季節(jié)豬的感染情況看，弓形蟲感染率為夏秋＞冬春。不同飼養(yǎng)階段豬采集的豬血清弓形蟲抗體陽(yáng)性率育肥豬高達(dá)39.55%，肥豬24.72%，哺乳仔豬13.04%，豬弓形體感染率為育肥豬＞肥豬＞哺乳仔豬。不同規(guī)模豬場(chǎng)之間的抗體陽(yáng)性率有一定差異，規(guī)模戶感染率平均為19.39%，散養(yǎng)戶感染率平均為36.37%，規(guī)模豬場(chǎng)的豬弓形體感染率明顯比散養(yǎng)戶低下。上述結(jié)果與國(guó)內(nèi)外的報(bào)道基本一致，表明湖南永州地區(qū)豬弓形體病感染在比較普遍，并且感染率極高，給湖南永州地區(qū)養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展和人民健康帶來了嚴(yán)重的危害和威脅。

3.2 豬弓形蟲在豬群中的感染率很高，隱性率較高，而發(fā)病率較低，大多數(shù)發(fā)病死亡豬都有不同度的繼發(fā)感染。本檢測(cè)結(jié)果表明，湖南永州地區(qū)豬弓形蟲的感染率較高，可能與不少區(qū)域的養(yǎng)豬業(yè)出現(xiàn)了將一個(gè)完整的詞養(yǎng)管理過程人為地分割成母豬和仔豬飼養(yǎng)，仔豬和架子豬育肥異地進(jìn)行的多個(gè)階段飼養(yǎng)，從而多出了仔豬和架子豬長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)囊粋€(gè)應(yīng)激環(huán)節(jié)，是本地區(qū)豬弓形蟲病發(fā)生大量增加的一個(gè)重要原因。因此，豬場(chǎng)采用全進(jìn)全出的科學(xué)飼養(yǎng)方式，豬的應(yīng)激減少，衛(wèi)生條件良好，飼養(yǎng)管理比較有序，豬生活比較有規(guī)律，豬的自身免疫力也大大增強(qiáng)，這樣使規(guī)模豬場(chǎng)感染率明顯比散養(yǎng)戶降低。

3.3 生的鮮肉等是人類弓形蟲病的傳染來源，特別是家養(yǎng)犬、貓是不容忽視的傳染來源。鑒于弓形蟲病對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失以及先天性弓形蟲病對(duì)人類優(yōu)生優(yōu)育的重要影響和獲得性弓形蟲病對(duì)免疫功能低下病人的嚴(yán)重危害，有必要對(duì)弓形蟲病加強(qiáng)防控工作。

[1]詹希美.人體寄生蟲學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：86.

[2]于恩庶.弓形蟲病學(xué)[M].福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1992，3-6.

[3]劉德純，等.艾滋病合并弓形蟲感染[J].中國(guó)人獸共患病雜志，2001，17（6）：64-67.

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[5]陳永軍，等.上海市豬弓形蟲流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2010，18（5）:54-58.

10．3969/J.ISSN．1671-6027．2016．07.012

作者筒介：廖光宇（1958～），湖南省永州市藍(lán)山縣人，大專，獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物養(yǎng)殖與疫病防控和動(dòng)物疫病檢疫