不同炮制方法對(duì)延胡索中延胡索乙素含量的影響

肖輝

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，湖南 長沙 410007）

不同炮制方法對(duì)延胡索中延胡索乙素含量的影響

肖輝

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，湖南 長沙 410007）

目的 比較醋煮、醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法對(duì)延胡索有效成分含量的影響，為優(yōu)化延胡索炮制方法提供參考。方法 采用醋煮、醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法對(duì)延胡索生品進(jìn)行炮制，通過高效液相色譜法測(cè)定延胡索乙素含量。結(jié)果 延胡索乙素含量在0．10～1．35 g范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均回收率為84．05%，RSD為1．94%（n＝6）；醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品含量有所上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝3．265～6．342，P＜0．05）。結(jié)論 高效液相色譜法檢測(cè)延胡索乙素具有線性關(guān)系良好、精密度穩(wěn)定、可重復(fù)檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法能增加延胡索有效成分含量。

延胡索；延胡索乙素；炮制；高效液相色譜法

延胡索（Corydalis Rhizoma）為多年生罌粟科草本植物，具有活血、理氣、止痛的功效，廣泛應(yīng)用于跌打損傷、胸悶痹痛、血瘀痛經(jīng)等癥。其主要有效成分為生物堿，包括延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素，大多以結(jié)合態(tài)的生物堿鹽形式存在[1]。延胡索多以炮制后入藥，醋煮、醋烘、醋炙、酒炙均為2010年版《中國藥典(一部)》收載的炮制延胡索飲片經(jīng)典方法[2]。國內(nèi)學(xué)者有關(guān)這幾種炮制方法的文獻(xiàn)報(bào)道不多[3－4]。故筆者采用高效液相色譜（HPLC）法，以延胡索主要有效成分延胡索乙素含量為參考指標(biāo)，探討醋煮、醋烘、醋炙、酒炙炮制方法對(duì)延胡索有效成分含量的影響，旨在為優(yōu)化延胡索炮制工藝提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

烘箱購自湖北黃石醫(yī)療器械廠（HDG78－1型）；色譜系統(tǒng)為美國康諾（CoMetro）高效液相色譜儀（高壓梯度系統(tǒng)、能用于編程紫外檢測(cè)器、數(shù)字全系統(tǒng)控制工作站等）；超聲波清洗器購自昆山市超聲儀器有限公司；電子天平選用美國梅特勒天平公司（ME203E型）。延胡索產(chǎn)地浙江東陽，購自浙江凱潤制藥有限公司（批號(hào)為140305）；參照品由中國食品藥品生物制品檢定所提供（批號(hào)為141210）；色譜醇為甲醇；陳醋購于北京陳醋廠，黃酒購自浙江紹興黃酒集團(tuán)；試驗(yàn)用水為自制雙蒸水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：美國安杰倫公司 Agilent TC－C18柱（250 mm×4．5 mm，55μm）；流動(dòng)相：乙腈－0．1%磷酸溶液（28∶72）；流速：1m L／min；色譜柱溫：35℃；波長：280 nm。根據(jù)延胡索乙素峰計(jì)算出理論板數(shù)大于3 000，且延胡索乙素峰色譜與相鄰組分色譜峰分離度大于1．5。提示本次系統(tǒng)試驗(yàn)設(shè)備條件無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 延胡索乙素對(duì)照品高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

樣品制備：參照曹柳等[5]的文獻(xiàn)資料，采用醋煮、醋烘、醋炙、酒炙等方法對(duì)延胡索進(jìn)行炮制。醋煮延胡索，取適量延胡索，加20%陳醋，加適量水沒過藥面，武火煮沸，文火煎煮，至醋液被完全吸收，干燥留置備用；醋烘延胡索，取適量延胡索，加20%陳醋完全浸潤藥物4 h，取出置入烘箱內(nèi)，于120℃溫度下烘烤 45 min；醋炙延胡索，取適量延胡索，加20%陳醋完全浸潤4 h，文火炒干備用；酒炙延胡索，取適量延胡索，加黃酒完全浸潤4 h，文火炒干備用。

對(duì)照品溶液制備：稱取延胡乙索對(duì)照品2．25mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至10 mL，取2mL，置另一10m L容量瓶中，加甲醇定容至10m L，配制延胡乙索質(zhì)量濃度為0．045 g／L的混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液制備：稱取醋煮、醋烘、醋炙、酒炙炮制延胡索及生品延胡索各0．5 g，分別置三角瓶中，加水25m L，超聲提取25min，取上清液。稱重補(bǔ)足減失質(zhì)量，重復(fù)上述步驟1次，共提取2次，合并2次濾液，過0．45μm濾膜，取濾液即得供試品溶液。用2%氫氧化鈉溶液制備硅膠G薄層板，將供試品溶液點(diǎn)于硅膠薄層板上，展開劑使用甲苯－丙酮，展距7 cm。取出薄層板，晾干后置于密閉碘缸約5min，取出揮盡薄層板上吸附碘，置365 nm紫外光燈下檢視，得不同炮制方法延胡索色譜圖，見圖2。

圖2 不同炮制方法延胡索薄層色譜圖

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別吸取延胡索乙素對(duì)照品溶液0．1，0．2，0．3，0．4，0．6，0．8，1．0 m L，置10 m L容量瓶中，加甲醇溶液定容至 10 m L，得 2．0，4．0，6．0，8．0，12．0，16．0，20．0mg／L系列對(duì)照品溶液。吸取上述溶液分別進(jìn)樣10μL，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y＝2．385×10－8X－0．002 4，r＝0．999 8(n＝7)。結(jié)果表明，延胡索乙素含量在0．10～1．35μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液，在相同色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，分別測(cè)定延胡索乙素峰面積，代入回歸方程。結(jié)果延胡索乙素峰面積的 RSD為0．54%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品，精密稱定，按2．2項(xiàng)下供試品溶液制備方法，制備6份供試品溶液，測(cè)定延胡索乙素峰面積，計(jì)算延胡索乙素含量。結(jié)果延胡索乙素含量的 RSD為0．23%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于0，1，2，4，8，12，24 h時(shí)進(jìn)樣。結(jié)果延胡索乙素峰面積的 RSD為1．28%（n＝7），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：稱取6份已知含量樣品各0．20 g，分別加入適宜延胡索乙素對(duì)照品溶液，按2．2項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備供試品溶液，各進(jìn)樣20μL，測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 延胡索乙素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)

2．4 樣品含量測(cè)定

分別取醋煮、醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品與延胡索生品供試品溶液各20μL，在相同的色譜條件下測(cè)定延胡索乙素峰面積，并計(jì)算延胡索乙素含量。結(jié)果表明，與延胡索生品比較，除醋煮炮制法含量有所降低外，醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品延胡索乙素含量有所上升，見表2。

表2 不同炮制方法延胡索乙素含量測(cè)定結(jié)果（s）

表2 不同炮制方法延胡索乙素含量測(cè)定結(jié)果（s）

注：與延胡索生品比較，t＝3．265～6．342，aP＜0．05。

樣品延胡索生品醋煮延胡索醋烘延胡索醋炙延胡索酒炙延胡索含量（mg／g）0．040 1±0．000 3 0．039 8±0．000 4 0．048 6±0．000 5a0．049 8±0．000 7a0．048 5±0．000 6a與延胡索增減率（%）－0．748 1±0．003 2 21．197 0±3．123 0 24．189 5±3．456 2 20．947 6±2．456 2

3 討論

炮制延胡索為臨床常用中藥，有活血、行氣、止痛的功效[3]。延胡索主要化學(xué)成分為異喹啉型生物堿，以結(jié)合態(tài)與游離態(tài)兩種形式存在，游離態(tài)生物堿難溶于水，醋酒炮制能使生物堿與醋、酒結(jié)合，提高煎出率，從而增加療效。同時(shí)在延胡索總生物堿中，延胡索乙素鎮(zhèn)痛效力最強(qiáng)，故關(guān)于延胡索炮制的研究多集中于延胡索乙素的研究。

延胡索乙素測(cè)定方法有紫外法和薄層法等。徐皓等[6]研究顯示，HPLC法專屬性最好，靈敏度最高，且簡便易行。馬月光等[7]則通過對(duì)不同pH條件下延胡索乙素保留時(shí)間進(jìn)行研究，結(jié)果pH為6．24時(shí)保留時(shí)間最長，pH在6．09時(shí)分離度最好。本研究中參照上述文獻(xiàn)進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，擬訂的HPLC法線性關(guān)系試驗(yàn)、精密度試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)均表現(xiàn)出良好的相關(guān)性、穩(wěn)定性與可重復(fù)性，與李榮等[8]的報(bào)道基本一致。

在不同炮制方法對(duì)延胡索有效成分影響的研究中，徐捷[9]報(bào)道，醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法均可提高延胡索乙素的有效成分，但其研究中缺少對(duì)不同炮制品溶液劑量的介紹，且無比較研究，結(jié)論稍顯牽強(qiáng)。本研究中嚴(yán)格設(shè)計(jì)了劑量，且在隨后的比較研究中，發(fā)現(xiàn)與延胡索生品比較，除醋煮炮制法延胡索乙素含量有所降低外，醋烘、醋炙、酒炙延胡索炮制品延胡索乙素含量有所上升。醋煮延胡索有效成分下降的原因可能與延胡索中生物堿游離態(tài)含量有關(guān)，醋煮時(shí)間過長，可能還會(huì)破壞生物堿結(jié)構(gòu)，從而使延胡索角質(zhì)化[10]。這與馬月光等[7]的文獻(xiàn)報(bào)道相左，提示醋煮能否增加延胡索有效成分有待進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果表明，HPLC法在檢測(cè)延胡索乙素峰面積與含量時(shí)，具有精密度高、可重復(fù)檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法能增加延胡索有效成分含量。

[1]鄭 弘，許紅瑋．延胡索不同炮制方法的薄層色譜鑒別對(duì)比研究[J]．中醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，28（5）：695－696．

[2]國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：130－131．

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[4]楊 帆．改良高效液相色譜法測(cè)定元胡止痛滴丸和膠囊中延胡索乙素含量[J]．中國藥業(yè)，2014，23（13）：24－25．

[5]曹 柳，竇志英，王 萍，等．不同炮制方法對(duì)延胡索中有效成分含量的影響[J]．中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（6）：42－44．

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[10]魯春梅，張春森，姜立勇．延胡索化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J]．中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2011，5（15）：126－127．

In fluence of Different Processing M ethods on Tetrahyd ropalm atine in Corydalis Rhizom a

Xiao Hui
（Department of Medicine，The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，Changsha，Hunan，China 410007）

Ob jective To compare the influence of vinegar boiling，vinegar baking，vinegar stir－frying，wine stir－frying on the active ingredients of corydalis rhizoma．M ethods Corydalis rhizoma was processed by vinegar boiling，vinegar baking，vinegar stir－frying；wine stir－frying；HPLC method was used to determine the content of tetrahydropalmatine．Resu lts The content of tetrahydropalmatine showed good linear relationship wasa the peak area in the range of 0．10－1．35μg；the average recovery rate was 84．05%，RSD was 1．94%(n＝6)；the main content of tetrahydropalmatine improved after vinegar boiling，vinegar baking，vinegar stir－frying，and wine stir－frying，and there were statistically difference in the 4 methods（t＝3．265－6．342，P＜0．05）．Conclusion HPLC method for detection of tetrahydropalmatine has a good linear relationship，stable precision，repeatable testing；the processing methods of vinegar baking，vinegar stir－frying and wine stir－frying can increase the effective composition content in corydalis rhizoma．

corydalis rhizoma；tetrahydropalmatine；processing；HPLC

R283；R284．1；R282．71

A

1006－4931(2016)04－0029－03

肖輝（1973－），女，湖南漣源人，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴帉W(xué)，（電子信箱）582638192＠qq．com。

2015－04－09；

2015－09－30)