塵肺患者血漿miR-222和纖維蛋白原水平檢測的臨床意義

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(安全監(jiān)管總局職業(yè)安全衛(wèi)生研究中心石龍醫(yī)院 北京 102308)

·臨床醫(yī)學·

塵肺患者血漿miR-222和纖維蛋白原水平檢測的臨床意義

劉其才*，閆凱

(安全監(jiān)管總局職業(yè)安全衛(wèi)生研究中心石龍醫(yī)院 北京 102308)

目的探討塵肺患者血漿miR-222、纖維蛋白原檢測的臨床意義。方法選擇塵肺患者91例(Ⅰ期42例，Ⅱ期24例，Ⅲ期25例；其中合并肺心病23例)和同期門診無塵肺健康體檢者40例。檢測其血漿miR-222、纖維蛋白原表達水平，比較塵肺不同分期之間以及塵肺患者與健康體檢者血漿miR-222、纖維蛋白原水平的差異。結(jié)果塵肺患者血漿miR-222、纖維蛋白原水平明顯高于健康體檢者(P均<0.05)；并發(fā)肺心病的塵肺患者血漿miR-222、纖維蛋白原水平高于單純塵肺患者(均P<0.05)；在91例塵肺患者中，Ⅱ期、Ⅲ期塵肺患者中血漿miR-222、纖維蛋白原水平均明顯高于Ⅰ期塵肺(P均<0.05)，兩者的表達水平隨著病情進展而表達增高；相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)在塵肺患者中miR-222表達與纖維蛋白原的表達呈顯著正相關(guān)(P<0.01)。結(jié)論miR-222、纖維蛋白原在塵肺患者血漿中表達增高，在塵肺合并肺心病患者中表達更高，并且隨著病情進展表達增高，且兩者在塵肺患者中的表達呈正相關(guān)，監(jiān)測血漿miR-222、纖維蛋白原水平對塵肺患者凝血狀態(tài)、抗凝治療以及并發(fā)癥的防治具有一定指導(dǎo)意義。

塵肺； 血漿miR-222； 纖維蛋白原

塵肺病目前是在中國發(fā)病率最高、危害最為嚴重的職業(yè)病[1]。肺細小動脈血栓形成以及栓塞是導(dǎo)致慢性肺源性心臟病的重要原因，靜脈血栓栓塞癥是塵肺病最嚴重的急性并發(fā)癥之一[2]。循環(huán)miRNA，也被稱為無細胞miRNA，極有希望成為新型的一類可靠的微創(chuàng)疾病生物標志物，能夠檢測出疾病的發(fā)病早期，因為它們在與疾病狀態(tài)相關(guān)的血清/血漿中是高度穩(wěn)定的，且敏感性和特異性的測量也相對簡單。此外，經(jīng)證實，miRNA在其他體液(如尿液，唾液，乳液和細胞培養(yǎng)上清液)中也是穩(wěn)定的[3]。研究表明在74例塵肺患者中血清miR-16表達相對較高，而血清miR-204表達相對較低[4]。最近研究發(fā)現(xiàn)在煤炭引起的塵肺患者中通過全基因組檢測發(fā)現(xiàn)miR-222，miR-18a*，miR-149以及miR-671-3p存在較大差異[5]。目前研究者發(fā)現(xiàn)的血漿miRNAs已有上百種，其中miR-222是一個重要的miRNA分子。研究顯示，miR-222在多種疾病和腫瘤中表達增高，包括有乳腺癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、膠質(zhì)母細胞瘤以及肺癌[6-9]，提示miR-222可能是一個潛在的致病因子。纖維蛋白原是一種由肝臟合成的具有凝血功能的蛋白質(zhì)。纖維蛋白原可特異性反映體內(nèi)血漿高凝狀態(tài)的重要指標。本研究對塵肺患者血漿miR-222、纖維蛋白原的水平進行了檢測。探討其與塵肺發(fā)展的關(guān)系，以便找出更好的診治與預(yù)后指標。

1 資料與方法

1.1臨床資料選擇本院在2012年1月～2014年12月期間住院治療的塵肺病患者91例(塵肺組)，年齡35～74(53.1±7.6)歲。根據(jù)患者是否合并慢性肺源性心臟病分為塵肺合并肺心病組以及單純塵肺組。塵肺合并肺心病組33例，單純塵肺組58例。其中Ⅰ期42例，Ⅱ期24例，Ⅲ期25例。另取門診或體檢無塵肺健康體檢者38例為對照組，其年齡、性別與塵肺組比較差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2方法

1.2.1 血漿纖維蛋白原水平檢測 所有患者在入院后次日清晨抽取空腹靜脈血5 mL，置于EDTA抗凝管中輕輕搖晃數(shù)下，然后室溫下1 000 rpm離心10 min，按說明書檢測血漿纖維蛋白原水平。

1.2.2 血漿miR-222水平檢測 血漿miR-222抽提試劑盒：mirVana PARIS Kit(美國Applied Biosystems公司)：血清樣品與等體積裂解液，震蕩混勻，冰上孵育5 min；加等量三氯甲烷，震搖60 s離心，吸取上層水相至一新試管；將上層水相吸至新試管，加入無水乙醇并充分混勻；將濾筒放置收集管之上，吸取上述樣品與乙醇的混合液至濾筒，不超過700 μL，將濾筒和收集管同時離心過濾，倒掉收集管中的濾液，用相同的方法將同一個樣品剩余的液體過濾；加700 μL miRNA至已結(jié)合樣品的濾筒，離心，倒去收集管內(nèi)的濾液；加入500 μL miRNA至濾筒，離心，倒去收集管內(nèi)的濾液；重復(fù)步驟1次；離心甩干濾筒內(nèi)殘余液體；在濾筒下接一新收集管，在濾筒加入95 ℃預(yù)熱的無酶水60 μL，立即蓋上蓋，靜置2 min將濾筒和收集管同時離心(8 000 g，室溫，2 min)，離心后收集管內(nèi)總RNA溶液，立即保存于-80 ℃。然后采用實時定量PCR進行檢測。

1.2.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件；計量資料用均數(shù)±標準差表示，組間比較采用單因素方差分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1塵肺合并肺心病組、單純塵肺組與對照組血漿miR-222、纖維蛋白原水平變化結(jié)果顯示，總的塵肺組血漿miR-222為(2.94±0.34)較對照組(1.08±0.17)水平均顯著升高(P<0.05)，塵肺合并肺心病組血漿miR-222(3.97±0.39)較單純塵肺組(2.11±0.26)水平明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)?？偟膲m肺組血漿纖維蛋白原表達值(3.33±0.41)較對照組(2.33±0.24)水平顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，塵肺合并肺心病組血漿纖維蛋白原表達值(4.99±0.53)較單純塵肺組(2.77±0.31)水平明顯升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1塵肺各組與對照組血漿miR-222、纖維蛋白原水平比較

組別nmiR-222纖維蛋白原總塵肺組912.94±0.34a3.33±0.41a對照組401.08±0.172.33±0.24塵肺合并肺心病組333.97±0.39ab4.99±0.53ab單純塵肺組582.11±0.262.77±0.31

與對照組比較，a:P<0.05；與單純塵肺組比較，b:P<0.05

2.2塵肺組不同分期血漿miR-222、纖維蛋白原水平Ⅱ期、Ⅲ期塵肺血漿miR-222水平分別為(2.07±0.24)、(3.75±0.47)，與Ⅰ期(1.52±0.17)比較，差異均有顯著性(均P<0.05)。Ⅱ期、Ⅲ期塵肺血漿纖維蛋白原水平分別為(3.77±0.34)、(4.92±0.61)，與Ⅰ期(2.85±0.21)比較，差異均有顯著性(均P<0.05)。見表2。塵肺患者中血漿miR-222、纖維蛋白原水平隨著病情進展而表達增高。

表2不同分期塵肺患者血漿miR-222和纖維蛋白原水平比較

分期nmiR-222纖維蛋白原(mg/L)Ⅰ期421.52±0.172.85±0.21Ⅱ期242.07±0.24a3.77±0.34aⅢ期253.75±0.47b4.92±0.61a

與Ⅰ期組比較，a:P<0.05，b:P<0.01

2.3塵肺組中miR-222和纖維蛋白原表達成正相關(guān)經(jīng)Spearman相關(guān)分析miR-222表達和纖維蛋白原呈顯著正相關(guān)(r=0.775，P=0.000)，見圖1。

圖1 Spearman相關(guān)分析miR-222表達和纖維蛋白原呈顯著正相關(guān)

3 討 論

塵肺病是目前我國常見職業(yè)病之一，具有發(fā)病率高、危害性大的特點[1]。肺內(nèi)長期大量存在的煤塵刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，釋放大量的炎癥細胞、炎癥因子。持續(xù)的慢性炎癥反應(yīng)、血液黏稠度的增高及血流速度減慢是血管內(nèi)皮損傷的重要因素，而血管內(nèi)皮損傷是血栓形成的重要誘因。miRNA是一類長約22～25 nt的非編碼單鏈小分子RNA。miRNA能夠調(diào)控癌基因和腫瘤抑制基因的轉(zhuǎn)譯，這提示著他們參與癌變的過程。研究表明[3]，人類血清及血漿中也存在miRNA，并且在其他體液(如唾液、尿液、乳液和細胞培養(yǎng)基上清液)中也是穩(wěn)定存在。循環(huán)miRNA目前作為一種具有前景的新型非侵入性生物標志物，在不同疾病中的表達具有重要的臨床意義。miR-222是特異性反應(yīng)體內(nèi)高凝狀態(tài)及纖溶亢進的一種生物標志物。血漿纖維蛋白原升高能引起機體紅細胞聚集，進而血小板活化而致血栓形成，常規(guī)用來判定血栓前狀態(tài)、氣道進行性炎癥及肺組織損傷的指標[10-12]。

本文研究證實了塵肺患者血漿miR-222、纖維蛋白原水平明顯升高，具有統(tǒng)計學意義，提示塵肺患者可能存在高凝狀態(tài)并伴有纖溶亢進；在塵肺患者中，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期之間miR-222、纖維蛋白原水平均有統(tǒng)計學意義，塵肺患者中血漿miR-222、纖維蛋白原水平隨著分期進展表達增高。提示塵肺患者的高凝狀態(tài)可能與塵肺分期相關(guān)，隨分期的越高而加重；在并發(fā)肺心病的塵肺患者血漿miR-222、纖維蛋白原水平明顯高于單純塵肺患者，提示兩者的表達增高可能與肺心病相關(guān)，肺心病發(fā)生了血管重構(gòu)、肺動脈高壓及慢性肺細動脈、小動脈原位血栓形成，引起通氣/血流比例失調(diào)，紅細胞代償性增生，導(dǎo)致血液黏稠、血流速度減慢，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細胞損傷，激活機體凝血系統(tǒng)，使得機體處于高凝狀態(tài)及纖溶亢進[13]。另外結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-222和纖維蛋白原成顯著正相關(guān)，聯(lián)合檢測二者將更有意義，因此結(jié)合miR-222、纖維蛋白原相關(guān)研究，塵肺患者血液存在高凝狀態(tài)，通過監(jiān)測血漿miR-222、纖維蛋白原水平對塵肺抗凝治療及預(yù)防肺微小動脈原位血栓形成有指導(dǎo)意義。

綜上所述，臨床工作中應(yīng)該注意檢測miR-222、纖維蛋白原的水平，有利于把握塵肺患者的凝血狀態(tài)，尤其在塵肺并發(fā)肺心病時，高凝狀態(tài)明顯加重，提示可能存在栓塞或血栓形成，積極檢測患者miR-222、纖維蛋白原的水平，可以及時予以抗凝治療，預(yù)防肺血栓栓塞癥的形成，可降低肺動脈高壓，減少肺血管重塑，減慢肺心病的進展，提高患者的生存期及生活質(zhì)量。因此，研究miR-222、纖維蛋白原水平的臨床價值對塵肺患者具有重要意義。

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R135.2

A

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.01.010

2015-10-8；

2015-12-29

*通訊作者，E-mail：13501390633@163.com.

蔣湘蓮)