• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    簡(jiǎn)單靈敏的GO-RRS-ET法測(cè)定氨基酸

    2016-12-22 02:47:51黎小椿李燕唐小閑羅楊合何星存
    食品研究與開(kāi)發(fā) 2016年24期
    關(guān)鍵詞:茚三酮藍(lán)紫色馬蹄

    黎小椿,李燕,唐小閑,羅楊合,*,何星存

    (1.賀州學(xué)院食品科學(xué)與工程技術(shù)研究院,廣西賀州542899;2.大連工業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,遼寧大連116034)

    簡(jiǎn)單靈敏的GO-RRS-ET法測(cè)定氨基酸

    黎小椿1,2,李燕2,唐小閑1,2,羅楊合1,2,*,何星存1,2

    (1.賀州學(xué)院食品科學(xué)與工程技術(shù)研究院,廣西賀州542899;2.大連工業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,遼寧大連116034)

    在pH 7.2KH2PO4-NaOH緩沖液和85℃水浴加熱的條件下,氨基酸與茚三酮生成藍(lán)紫色的產(chǎn)物羅曼紫(RP),使氧化石墨烯(GO)在400 nm處產(chǎn)生的RRS峰強(qiáng)度降低,這是由于作為供體的GO與作為受體的RP之間發(fā)生了RRS能量轉(zhuǎn)移(RRS-ET)所致。隨著氨基酸濃度增加,生成的RP增加,RRS-ET增強(qiáng),400 nm處RRS峰強(qiáng)度線性降低,其降低值在1.33μmol/L~200μmol/L氨基酸濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,據(jù)此建立一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏、選擇性高的測(cè)定痕量氨基酸的RRS-ET新方法,檢測(cè)限1.0μmol/L。該方法用于馬蹄中氨基酸的檢測(cè),測(cè)得馬蹄果肉氨基酸含量為2.847mg/g,馬蹄皮氨基酸含量為1.094mg/g,可為馬蹄深加工提高有益參考。

    氧化石墨烯;共振瑞利散射;能量轉(zhuǎn)移;茚三酮;氨基酸

    自然界中的氨基酸有二十幾種,存在于大多數(shù)食品和糧食中。氨基酸的分析檢測(cè)對(duì)食品質(zhì)量監(jiān)控、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、疾病診斷和治療等具有重要意義,比如測(cè)定羥脯氨酸含量可鑒別牛奶是否為皮革水解蛋白“皮革奶”。當(dāng)前,利用分子光譜分析氨基酸的主要方法包括分光光度法、熒光法、共振瑞利散射(RRS)法、表面增強(qiáng)拉曼散射(SERS)法、化學(xué)發(fā)光法等,其中,RRS法是一種簡(jiǎn)便、快速、高靈敏度的光譜分析方法,已用于痕量金屬、非金屬、小分子藥物、蛋白質(zhì)、核酸等分析[1-3]。當(dāng)RRS光譜較強(qiáng)能量較高的物質(zhì)與RRS光譜較弱能量較低的物質(zhì)接觸時(shí),若前者的RRS光譜與后者的吸收光譜有重疊,兩者就會(huì)發(fā)生共振瑞利散射能量轉(zhuǎn)移(RRS-ET),導(dǎo)致前者RRS光譜減弱,由此建立的RRS-ET新方法已實(shí)現(xiàn)了對(duì)痕量茶多酚、碘酸根、過(guò)氧化氫等物質(zhì)的檢測(cè)[4-5]。

    氧化石墨烯(GO)是石墨烯的重要衍生物,具有較強(qiáng)的RRS光譜,它不但價(jià)格低廉,原料易得,而且具有單層石墨平面結(jié)構(gòu),含有豐富的含氧活性基團(tuán),如羥基、羧基、環(huán)氧基,易溶于水,其特殊的結(jié)構(gòu)使其具有高效的吸附性、兩親性、熒光猝滅性和拉曼散射性,已被廣泛用于生化分析[6],但鮮見(jiàn)基于GO的RRSET測(cè)定痕量氨基酸的研究報(bào)道。氨基酸與茚三酮反應(yīng)生成的藍(lán)紫色化合物羅曼紫(RP)的RRS光譜較弱,吸收光譜與GO的RRS光譜有一定的重疊。本文利用GO與RP之間發(fā)生RRS-ET導(dǎo)致GO的RRS減弱,建立一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏、選擇性高的測(cè)定痕量氨基酸的新方法,并用于馬蹄中氨基酸含量的檢測(cè),結(jié)果令人滿意。

    1 材料與方法

    1.1 主要儀器和試劑

    F-7000型熒光分光光度計(jì):日立公司;TU-1901型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;FEIQuanta 200 FEG場(chǎng)發(fā)射掃描電子顯微鏡:荷蘭飛利浦公司;納米粒度和Zeta電位儀:英國(guó)馬爾文儀器有限公司;SK 1200H超聲波反應(yīng)器:上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司。

    50mmol/L pH 7.2磷酸鹽緩沖液(PBS):上海鵬彩精細(xì)化工有限公司;20 g/L茚三酮溶液:上海國(guó)藥集團(tuán);1mmol/L甘氨酸(Gly):石家莊東華金龍化工有限公司。

    0.1 g/L氧化石墨烯(GO,南京先豐納米材料科技有限公司):準(zhǔn)確稱量0.1000 g GO,加水超聲溶解后轉(zhuǎn)移至容量瓶,定容至100mL,得到1 g/LGO,使用時(shí)以水稀釋10倍得到0.1 g/LGO,使用前超聲15min。

    試驗(yàn)所用試劑均為分析純級(jí)試劑,試驗(yàn)所用水均為亞沸水。

    1.2 方法

    在試管中依次加入90μLpH 7.2PBS、70μL 20 g/L的茚三酮溶液,分別加入一定量的氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液[甘氨酸(Gly)、谷氨酸(Glu)、賴氨酸(Lys)、天門冬氨酸(Asp)、苯丙氨酸(Phe)],85℃水浴加熱10min,流水冷卻后,加入400μL 0.1 g/LGO,用亞沸水定容到1.5mL。在電壓450 v、激發(fā)狹縫和發(fā)射狹縫均為5 nm、發(fā)射濾波器為1%T衰減器、λex-λem=Δλ=0的條件下,用熒光分光光度計(jì)同步掃描獲得共振瑞利散射(RRS)光譜。測(cè)量溶液的RRS強(qiáng)度I,以不加氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液做試劑空白的RRS值為I0,計(jì)算ΔI400nm=I0-I值。

    7.2.2梨小食心蟲(chóng)①誘殺越冬幼蟲(chóng)。4月中旬開(kāi)始在樹(shù)干上綁誘蟲(chóng)帶,誘殺越冬幼蟲(chóng)。②誘捕成蛾。梨小食心蟲(chóng)具趨味性,4月至采摘結(jié)束在果園里用廣口瓶裝糖醋液或者幼蟲(chóng)凈誘捕成蟲(chóng)。③噴藥防治。第1代在4月上旬防治,9月份集中防治第4代害蟲(chóng),用藥與桃小食心蟲(chóng)相同。④果實(shí)套袋,也能避免危害。梨小食心蟲(chóng)在貴州長(zhǎng)順縣蘋果園的最佳防治措施是從4月中旬開(kāi)始,每畝果園用30~35套迷向管進(jìn)行迷向防治,每40~50天更換1次迷向劑,直至蘋果采摘結(jié)束。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 方法原理

    非金屬納米材料GO具有較強(qiáng)的RRS效應(yīng)。在pH 7.2PBS和水浴加熱的條件下,氨基酸與茚三酮生成藍(lán)紫色的配合物羅曼紫(RP),其RRS光譜較弱,能量較低,其吸收光譜與GO的RRS光譜有一定的重疊。當(dāng)兩者接近時(shí),GO將RRS能量轉(zhuǎn)移給RP,導(dǎo)致體系的RRS強(qiáng)度降低。隨著氨基酸濃度增加,生成的RP增多,GO轉(zhuǎn)移給RP的RRS能量也隨之增多,體系400 nm處的RRS強(qiáng)度線性降低(圖1)。據(jù)此可建立一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏、選擇性高的測(cè)定痕量氨基酸的RRS-ET新方法。

    圖1 氧化石墨烯-氨基酸-茚三酮體系RRS-ET原理圖Fig.1 RRS-ET principleof grapheneOxide-am ino acidsninhydrin system

    2.2 RRS光譜

    Gly-茚三酮-GO體系的RRS光譜如圖2所示。

    圖2 G ly-茚三酮-GO體系的RRS光譜Fig.2 RRSspectra of theG ly-ninhydrin-GO system

    GO具有較強(qiáng)的RRS效應(yīng),當(dāng)體系中加入pH 7.2 PBS和茚三酮時(shí),其RRS光譜無(wú)明顯變化。在pH 7.2PBS和85℃水浴加熱條件下,以甘氨酸(Gly)為代表的氨基酸與茚三酮反應(yīng)生成藍(lán)紫色化合物羅曼紫(RP),其RRS光譜極弱。當(dāng)GO與RP共存時(shí),體系的RRS光譜強(qiáng)度隨著氨基酸濃度的增加而減弱,其中400 nm處RRS減弱最多,并出現(xiàn)了一個(gè)峰谷,故本文選擇GO體系400 nm RRS峰降低值測(cè)量痕量氨基酸含量。

    2.3 吸收光譜

    在pH 7.6 PBS中,茚三酮的吸收光譜很弱,在350 nm~700 nm沒(méi)有吸收峰;甘氨酸與茚三酮反應(yīng)生成的藍(lán)紫色產(chǎn)物羅曼紫在400、565 nm處有2個(gè)強(qiáng)度相當(dāng)?shù)奈辗澹译S著甘氨酸濃度增大,體系的吸收光譜增強(qiáng)。GO的吸收光譜較弱,當(dāng)體系中加入pH 7.2 PBS和茚三酮時(shí),亦無(wú)明顯變化。當(dāng)GO與甘氨酸(Gly)跟茚三酮反應(yīng)生成的藍(lán)紫色化合物羅曼紫(RP)共存時(shí),體系原來(lái)強(qiáng)度相當(dāng)?shù)?00 nm吸收峰便強(qiáng)于565 nm吸收峰(圖3)。這證明了GO與RP之間發(fā)生了能量轉(zhuǎn)移,是導(dǎo)致GO的RRS光譜強(qiáng)度減弱且400 nm處減弱最多的原因。

    圖3 Gly-茚三酮-GO體系的吸收光譜Fig.3 Absorption spectra of the G ly-ninhydrin-GO system

    2.4 SEM圖

    由圖4(a)和圖4(b)可知,GO的粒徑在加入Glu前后未發(fā)生改變,說(shuō)明體系RRS光譜強(qiáng)度減弱不是由于體系中納米粒子粒徑的改變引起的,而是由于發(fā)生了RRS-ET。

    2.5 分析條件的優(yōu)化

    圖4 氧化石墨烯的SEM圖Fig.4 SEM im agesof GO

    以Glu為代表優(yōu)化了GO-RP體系RRS-ET法測(cè)定氨基酸的條件。考察了PBS的pH和濃度、茚三酮溶液濃度、反應(yīng)溫度和時(shí)間、GO濃度對(duì)RRS光譜的影響。結(jié)果表明,當(dāng)PBS的pH為7.2、濃度為3mmol/L,茚三酮溶液濃度為0.93 g/L,反應(yīng)溫度為85℃、時(shí)間10 min,GO濃度為26.7 mg/L,ΔI400nm=I0-I值達(dá)到最大。

    2.6 工作曲線

    在3 mmol/L pH 7.2 PBS、0.93 g/L茚三酮溶液、85℃水浴加熱10min、26.7mg/LGO的最優(yōu)條件下,按試驗(yàn)方法繪制了甘氨酸(Gly)的RRS工作曲線(圖5),回歸方程ΔI400nm=4.72C+12,R2=0.995 8,Gly濃度線性范圍1.33μmol/L~200μmol/L,檢測(cè)限1.0μmol/L。

    圖5 G ly-茚三酮-GO的RRS工作曲線Fig.5 RRSworking cureof theG ly-ninhydrin-GO system

    2.7 共存物質(zhì)的影響

    按試驗(yàn)方法考察了測(cè)定3.33μmol/LGly時(shí)其它共存物質(zhì)的干擾情況,結(jié)果表明,在相對(duì)誤差不超過(guò)± 10.0%的范圍內(nèi),10 000倍的尿素、NO2-、NO3-,500倍的Cl-、Br-、S2-、SO32-、Pb2+和100倍的Mg2+、Ba2+、Cu2+、Fe3+、Zn2+、SO42-等常見(jiàn)物質(zhì)不干擾測(cè)定。對(duì)于含有氨基可以與茚三酮反應(yīng)生成藍(lán)紫色化合物羅曼紫的多肽、蛋白質(zhì)等干擾物質(zhì),可以通過(guò)簡(jiǎn)單的沉淀分離方法除去。因此,本方法具有較好的選擇性。

    2.8 樣品分析

    將從市場(chǎng)采購(gòu)的馬蹄洗凈,分開(kāi)馬蹄果皮和果肉。稱取29.785 0 g馬蹄皮于燒杯中,加150mL沸水煮沸15min,抽濾后將濾液轉(zhuǎn)移至容量瓶,定容至250mL。稱取68.850 1 g馬蹄果肉,用研缽研碎后轉(zhuǎn)移至燒杯中,加150mL沸水煮沸15min,抽濾后將濾液轉(zhuǎn)移至容量瓶,定容至250mL。取適量的馬蹄皮和馬蹄果肉提取液進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 樣品分析結(jié)果(n=5)Table2 Results for detection of samples

    由表2可知:1)馬蹄果肉氨基酸含量為2.847mg/g,馬蹄皮氨基酸含量為1.094mg/g;2)該方法回收率在91.7%~101%之間,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.7%~4.2%之間,說(shuō)明靈敏度較高。

    3 結(jié)論

    本文利用氨基酸與茚三酮在85℃水浴加熱條件下反應(yīng)生成的藍(lán)紫色物質(zhì)羅曼紫,與非金屬納米材料氧化石墨烯發(fā)生共振瑞利散射能量轉(zhuǎn)移(RRS-ET),導(dǎo)致體系400 nm處的共振瑞利散射強(qiáng)度隨著氨基酸濃度的增大而線性減弱,據(jù)此建立了一種簡(jiǎn)便、快速、靈敏、選擇性高的測(cè)定痕量氨基酸的RRS-ET新方法,氨基酸濃度線性范圍1.33μmol/L~200μmol/L,檢測(cè)限1.0μmol/L。該方法用于馬蹄中氨基酸含量的檢測(cè),測(cè)得馬蹄果肉氨基酸含量為2.847mg/g,馬蹄皮氨基酸含量為1.094mg/g,可為馬蹄深加工提高有益參考。

    [1]LUOYH,ZHANGX H,YAODM,etal.Resonance Rayleigh scattering detection of trace PDGF based on catalysis of an aptamermodified nanogold probe in the Fehling reaction[J].RSCAdvances, 2014,4(53):28052-28055

    [2]LUOY H,XU L L,LIANGAH,etal.A highly sensitive resonance Rayleigh scattering assay for detection of Hg (II)using immunonanogold as probe[J].RSC Advances,2014,4(37):19234-19237

    [3] LUO Y H,WANG P F,LIT S,et al.A highly sensitive enzyme catalytic method for the detection of ethanol based on resonance scattering effect of gold particles[J].Plasmonics,2013,8(2):307-312

    [4]LIANG A H,WANG Y H,WENG Q,et al.A silver nanorod resonance rayleigh scattering-energy transfer analytical platform for trace tea polyphenols[J].Food Chemistry,2016,197(Part A):395-399

    [5]WANG Y H,ZHANG X H,LIU Q Y,et al.A simple and sensitive graphene oxide/gold nanoparticle surface plasmon resonance Rayleigh scattering-energy transfer analyticalplatform for detection of iodideand H2O2[J].RSCAdvances,2015,5(12):9272-9277

    [6]LIU ZB,LIUBW,DING JS,etal.Fluorescentsensorsusing DNA-functionalizedgrapheneoxide[J].Analyticaland BioanalyticalChemistry,2014,406(27):6885-6902

    A Sim ple and Sensitive Graphene Oxide Resonance Rayleigh Scattering-energy Transfer M ethod for Detection of Am ino Acids

    LIXiao-chun1,2,LIYan2,TANGXiao-xian1,2,LUOYang-he1,2,*,HEXing-cun1,2
    (1.Institute of Food Scienceand Technology,Hezhou University,Hezhou 542899,Guangxi,China;2.School of Food Science and Technology,Dalian Polytechnic University,Dalian 116034,Liaoning,China)

    Nonmetallic nanomaterialgraphene oxide(GO)hasstrong RRSeffect thatexhibited a strong RRS peak at400 nm.In the presence ofpH 7.2 KH2PO4-NaOH buffer solution and 85℃water bath heating,ninhydrin reacted with aminoacids to form blue-violetcomplex Ruhemann'spurple(RP)that reduced the RRSpeak at400 nm due to the RRS-energy transfer(RRS-ET)from the GO as donors to the RPas receptors.With the increase of amino acids concentration,the formed RP increased,and the RRS intensity quenched linearly at 400 nm due to the RRS-ETenhancing.The quenched intensity responds linearlywith amino acids concentration in the range of 1.33μmol/L-200μmol/L.Thus,a new RRS-ETmethod for the determination of trace amino acidswasestablished with the detection limitof1.0μmol/L.Themethod used in the detection ofamino acids in water chestnut,and the amino acid contentof the peeland fleshwere 2.847mg/g and 1.094mg/g respectively.It could bea useful reference for the processing ofwater chestnut.

    grapheneoxide;ResonanceRayleigh Scattering;energy transfer;ninhydrin;aminoacids

    10.3969/j.issn.1005-6521.2016.24.023

    2016-04-19

    國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(21365011;21367012)

    黎小椿(1987—),女(漢),在讀碩士研究生,研究方向:食品分析。

    *通信作者:羅楊合(1969—),男(漢),教授,博士,研究方向:食品分析。

    猜你喜歡
    茚三酮藍(lán)紫色馬蹄
    8種藍(lán)紫色月季引種栽培比較試驗(yàn)
    藍(lán)紫色的天空是突然出現(xiàn)的
    馬蹄子與北海道男人的選擇
    吃“馬蹄”
    最美藍(lán)花楹
    海峽科學(xué)(2016年10期)2017-01-13 07:36:00
    馬蹄島(男中音獨(dú)唱)
    草原歌聲(2016年1期)2016-11-15 05:46:54
    藍(lán)紫野生花卉在園林中的應(yīng)用
    綠色科技(2016年5期)2016-05-14 13:04:24
    紙張上汗?jié)撌钟〉娘@現(xiàn)研究
    法制博覽(2016年19期)2016-02-01 05:11:07
    河口動(dòng)物 馬蹄蟹
    欧美不卡视频在线免费观看 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 日韩人妻精品一区2区三区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产又色又爽无遮挡免费看| 人成视频在线观看免费观看| bbb黄色大片| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产野战对白在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲午夜理论影院| 亚洲全国av大片| 在线永久观看黄色视频| 欧美午夜高清在线| 他把我摸到了高潮在线观看| www.999成人在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 亚洲伊人色综图| 在线观看舔阴道视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 女同久久另类99精品国产91| 涩涩av久久男人的天堂| 国产淫语在线视频| 在线天堂中文资源库| 国产伦人伦偷精品视频| 两性夫妻黄色片| 女人精品久久久久毛片| 最新在线观看一区二区三区| 最新在线观看一区二区三区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 欧美国产精品一级二级三级| 最新在线观看一区二区三区| 久久这里只有精品19| 午夜精品久久久久久毛片777| 夜夜夜夜夜久久久久| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 丁香六月欧美| 欧美国产精品va在线观看不卡| 动漫黄色视频在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲精华国产精华精| 久久久国产一区二区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲av熟女| 成年女人毛片免费观看观看9 | 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲五月天丁香| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产亚洲av高清不卡| 国产精品久久久人人做人人爽| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 水蜜桃什么品种好| 欧美黄色片欧美黄色片| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 窝窝影院91人妻| 欧美激情久久久久久爽电影 | 欧美国产精品一级二级三级| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 午夜福利影视在线免费观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产精品综合久久久久久久免费 | 国产成人精品无人区| 在线看a的网站| 视频在线观看一区二区三区| 三级毛片av免费| 黄色丝袜av网址大全| 在线观看免费高清a一片| 手机成人av网站| 纯流量卡能插随身wifi吗| 一a级毛片在线观看| 日本黄色日本黄色录像| 亚洲av熟女| 免费在线观看黄色视频的| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 美女福利国产在线| 欧美成人午夜精品| 欧美午夜高清在线| 女警被强在线播放| 亚洲av成人一区二区三| 村上凉子中文字幕在线| 视频在线观看一区二区三区| 高清av免费在线| 国产高清videossex| 91老司机精品| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲美女黄片视频| 天天影视国产精品| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 亚洲七黄色美女视频| av福利片在线| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 欧美日韩精品网址| 极品少妇高潮喷水抽搐| a级片在线免费高清观看视频| 免费观看人在逋| 香蕉国产在线看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 黄色毛片三级朝国网站| 又紧又爽又黄一区二区| 精品久久久久久,| 国产成人精品在线电影| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 麻豆成人av在线观看| 精品电影一区二区在线| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲专区中文字幕在线| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲黑人精品在线| 在线观看免费午夜福利视频| 高清在线国产一区| 国产成+人综合+亚洲专区| 美女视频免费永久观看网站| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 久久久久视频综合| av国产精品久久久久影院| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 自线自在国产av| 亚洲视频免费观看视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 麻豆乱淫一区二区| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲国产精品sss在线观看 | 中文亚洲av片在线观看爽 | 成人三级做爰电影| 亚洲成人手机| 中文亚洲av片在线观看爽 | 精品午夜福利视频在线观看一区| 黄色毛片三级朝国网站| 婷婷成人精品国产| 国产淫语在线视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 精品一区二区三区四区五区乱码| 激情在线观看视频在线高清 | 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 两个人免费观看高清视频| 欧美日韩视频精品一区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 99精品欧美一区二区三区四区| 一进一出抽搐动态| 99国产精品一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三| 久久午夜亚洲精品久久| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| avwww免费| 亚洲一区二区三区欧美精品| 亚洲av片天天在线观看| 欧美激情 高清一区二区三区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 欧美 日韩 精品 国产| 女性生殖器流出的白浆| 欧美色视频一区免费| 亚洲成国产人片在线观看| 制服诱惑二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 午夜福利影视在线免费观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲视频免费观看视频| 久久久久久久久久久久大奶| 操美女的视频在线观看| 午夜日韩欧美国产| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产精品二区激情视频| 亚洲人成电影观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久久久久免费高清国产稀缺| videosex国产| 搡老乐熟女国产| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 男女下面插进去视频免费观看| 亚洲情色 制服丝袜| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 女性被躁到高潮视频| 18禁国产床啪视频网站| 十分钟在线观看高清视频www| 又紧又爽又黄一区二区| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品电影一区二区三区 | 91老司机精品| 久久亚洲精品不卡| 女人被狂操c到高潮| 久久久精品区二区三区| 精品福利永久在线观看| 午夜日韩欧美国产| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 两人在一起打扑克的视频| 国产精品一区二区精品视频观看| 香蕉丝袜av| 男女高潮啪啪啪动态图| 波多野结衣av一区二区av| 国产精品成人在线| 又黄又爽又免费观看的视频| 日韩视频一区二区在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 波多野结衣av一区二区av| 在线观看免费日韩欧美大片| 757午夜福利合集在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 人妻久久中文字幕网| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 亚洲精品国产区一区二| 亚洲全国av大片| 黄片小视频在线播放| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲欧美激情综合另类| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久国产精品大桥未久av| 国产麻豆69| a级毛片在线看网站| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产精品.久久久| 国产成人精品无人区| 久久久久视频综合| 香蕉久久夜色| 亚洲国产精品sss在线观看 | 乱人伦中国视频| 国产精品一区二区在线观看99| 91在线观看av| 久久国产乱子伦精品免费另类| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 一进一出抽搐动态| 咕卡用的链子| 啦啦啦 在线观看视频| 国产激情久久老熟女| 日韩免费av在线播放| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产精品一区二区免费欧美| 99re在线观看精品视频| 99久久精品国产亚洲精品| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 亚洲专区国产一区二区| 日韩欧美免费精品| 亚洲午夜理论影院| 国产精品.久久久| 搡老乐熟女国产| 日韩成人在线观看一区二区三区| 午夜老司机福利片| 飞空精品影院首页| 国产精品成人在线| 久久香蕉精品热| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品国产av在线观看| av片东京热男人的天堂| www.自偷自拍.com| 欧美在线一区亚洲| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产成人精品在线电影| 免费观看a级毛片全部| 免费在线观看日本一区| 麻豆成人av在线观看| 黄片小视频在线播放| 欧美乱妇无乱码| 老司机亚洲免费影院| 国产欧美亚洲国产| 黄色怎么调成土黄色| 人妻 亚洲 视频| 色婷婷av一区二区三区视频| 老熟女久久久| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 一二三四在线观看免费中文在| 日韩欧美免费精品| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 99国产精品免费福利视频| 国产精品 欧美亚洲| 男女午夜视频在线观看| 日本wwww免费看| 天堂俺去俺来也www色官网| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 啦啦啦在线免费观看视频4| 在线永久观看黄色视频| 日韩欧美在线二视频 | 99久久国产精品久久久| 丝袜在线中文字幕| 久久九九热精品免费| 老司机在亚洲福利影院| 51午夜福利影视在线观看| 窝窝影院91人妻| 涩涩av久久男人的天堂| 免费人成视频x8x8入口观看| 色综合婷婷激情| tube8黄色片| 国产精品 国内视频| 亚洲专区字幕在线| 女人久久www免费人成看片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 精品一区二区三卡| 99热网站在线观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 又紧又爽又黄一区二区| 色精品久久人妻99蜜桃| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日韩欧美免费精品| 一本综合久久免费| 午夜福利在线免费观看网站| 丝袜美足系列| 午夜福利免费观看在线| 中文字幕av电影在线播放| a级片在线免费高清观看视频| 国产亚洲欧美精品永久| 在线视频色国产色| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲伊人色综图| 99香蕉大伊视频| 一区二区三区激情视频| 大香蕉久久成人网| 午夜两性在线视频| 亚洲人成电影观看| 午夜两性在线视频| 国产色视频综合| 一边摸一边做爽爽视频免费| a在线观看视频网站| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久久国产精品麻豆| 欧美日韩一级在线毛片| 久久精品91无色码中文字幕| 窝窝影院91人妻| 精品国产一区二区三区四区第35| 99riav亚洲国产免费| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 欧美日本中文国产一区发布| 国产高清videossex| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲五月婷婷丁香| netflix在线观看网站| 人妻 亚洲 视频| 欧美色视频一区免费| 日韩免费高清中文字幕av| 美女午夜性视频免费| 热99re8久久精品国产| 12—13女人毛片做爰片一| 国产色视频综合| 亚洲成人免费电影在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 宅男免费午夜| 精品一区二区三区av网在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产高清国产精品国产三级| 深夜精品福利| 国产激情欧美一区二区| 色94色欧美一区二区| 国产成人av激情在线播放| 成年动漫av网址| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 天堂√8在线中文| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲成人手机| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 69av精品久久久久久| 757午夜福利合集在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 不卡av一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久5区| 欧美日韩国产mv在线观看视频| videosex国产| 欧美精品av麻豆av| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 精品久久久久久,| 国产黄色免费在线视频| 亚洲av成人一区二区三| 欧美日韩乱码在线| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久中文字幕人妻熟女| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 色老头精品视频在线观看| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 欧美 日韩 精品 国产| 欧美日韩一级在线毛片| 午夜免费成人在线视频| 久久久久久久精品吃奶| 少妇 在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 亚洲av熟女| 欧美日韩av久久| 亚洲精品自拍成人| 亚洲精品中文字幕在线视频| 热99re8久久精品国产| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 女人精品久久久久毛片| 久久狼人影院| 欧美精品av麻豆av| 国产精品二区激情视频| 男男h啪啪无遮挡| 国产男女超爽视频在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 最近最新免费中文字幕在线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 69精品国产乱码久久久| av天堂在线播放| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产精品免费一区二区三区在线 | 久热这里只有精品99| 色尼玛亚洲综合影院| 久久天堂一区二区三区四区| 国产99久久九九免费精品| 国产亚洲欧美在线一区二区| 一本大道久久a久久精品| 大型av网站在线播放| 欧美精品亚洲一区二区| 一区二区三区精品91| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲国产精品sss在线观看 | 免费一级毛片在线播放高清视频 | 久久久水蜜桃国产精品网| 欧美日韩成人在线一区二区| 激情视频va一区二区三区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 丁香欧美五月| 欧美大码av| 欧美日本中文国产一区发布| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产精品一区二区精品视频观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 久久人人97超碰香蕉20202| 日本vs欧美在线观看视频| 搡老岳熟女国产| 成人18禁在线播放| 亚洲熟妇熟女久久| 无限看片的www在线观看| 一级片免费观看大全| 亚洲精品在线美女| 很黄的视频免费| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产精品永久免费网站| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 丝袜美足系列| 精品福利永久在线观看| 丝袜在线中文字幕| 女人被狂操c到高潮| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲 欧美一区二区三区| 极品教师在线免费播放| 国产精品1区2区在线观看. | 黄网站色视频无遮挡免费观看| 在线观看日韩欧美| 国产亚洲精品第一综合不卡| 日韩欧美在线二视频 | 香蕉久久夜色| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 美女视频免费永久观看网站| 欧美黄色淫秽网站| 久久狼人影院| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产欧美日韩一区二区三| 99热国产这里只有精品6| 亚洲精品在线观看二区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 身体一侧抽搐| 亚洲人成电影观看| 亚洲五月色婷婷综合| a级毛片在线看网站| a级毛片黄视频| 51午夜福利影视在线观看| 国产亚洲精品一区二区www | 国产aⅴ精品一区二区三区波| 精品国产美女av久久久久小说| 国产精品 欧美亚洲| 国产不卡一卡二| 在线免费观看的www视频| av国产精品久久久久影院| 亚洲精品粉嫩美女一区| 91在线观看av| 99国产综合亚洲精品| 午夜福利影视在线免费观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 精品福利观看| 99riav亚洲国产免费| 妹子高潮喷水视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 18禁观看日本| 免费不卡黄色视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产97色在线日韩免费| 新久久久久国产一级毛片| 99久久综合精品五月天人人| 午夜福利欧美成人| 亚洲欧美激情综合另类| 精品亚洲成a人片在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 久久久国产一区二区| 国产精品影院久久| 又大又爽又粗| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 两性夫妻黄色片| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 91国产中文字幕| 国产成人欧美| av福利片在线| 久久久久久久国产电影| 在线观看免费日韩欧美大片| 麻豆乱淫一区二区| 欧美日韩视频精品一区| 中文字幕制服av| 国产麻豆69| 色在线成人网| 国产激情久久老熟女| 欧美在线黄色| svipshipincom国产片| 欧美黄色片欧美黄色片| 久久久久久久久免费视频了| 国产三级黄色录像| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 国产精品影院久久| 亚洲免费av在线视频| 在线视频色国产色| 免费av中文字幕在线| 国产高清激情床上av| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 亚洲精品在线美女| 免费在线观看亚洲国产| 美女午夜性视频免费| 99久久综合精品五月天人人| 一进一出好大好爽视频| 久久久久久久久免费视频了| 视频区欧美日本亚洲| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 9191精品国产免费久久| 性色av乱码一区二区三区2| 水蜜桃什么品种好| 18禁美女被吸乳视频| 九色亚洲精品在线播放| 欧美日韩成人在线一区二区| 999久久久国产精品视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 新久久久久国产一级毛片| 国产精品久久电影中文字幕 | 99热只有精品国产| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 天天操日日干夜夜撸| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲人成电影免费在线| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久这里只有精品19| 99re在线观看精品视频| 欧美久久黑人一区二区| 捣出白浆h1v1| 真人做人爱边吃奶动态| 久久精品国产亚洲av高清一级| 欧美性长视频在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 91字幕亚洲| 一二三四社区在线视频社区8| 国产精品一区二区免费欧美| 视频区欧美日本亚洲| 国产精品国产高清国产av | 精品国产乱子伦一区二区三区| 大香蕉久久网| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 激情视频va一区二区三区| 热99re8久久精品国产| 男女午夜视频在线观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 黄片小视频在线播放| 精品高清国产在线一区| а√天堂www在线а√下载 | 国产av又大| 久久久国产欧美日韩av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 日本黄色日本黄色录像| 老司机深夜福利视频在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲精品一二三| 一级毛片精品| 亚洲av熟女| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美精品一区二区免费开放| av中文乱码字幕在线| www.精华液| 日韩欧美三级三区| 美女福利国产在线| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产亚洲一区二区精品| 在线观看免费午夜福利视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 夫妻午夜视频| 美女高潮到喷水免费观看| 午夜福利影视在线免费观看| 十八禁人妻一区二区|