肥大細胞浸潤密度與浸潤性乳腺癌分子分型關系的初步研究

黃韜，伊丹丹，桑劍鋒

(南京醫(yī)科大學鼓樓臨床醫(yī)學院 甲乳外科，江蘇 南京 210008)

?

·論 著·

肥大細胞浸潤密度與浸潤性乳腺癌分子分型關系的初步研究

黃韜，伊丹丹，桑劍鋒

(南京醫(yī)科大學鼓樓臨床醫(yī)學院 甲乳外科，江蘇 南京 210008)

目的:探討浸潤性乳腺癌(非特殊類型)各個預后影響因素及新輔助化療對乳腺癌組織中肥大細胞密度(MCD)的影響，進一步分析肥大細胞浸潤與乳腺癌新輔助化療的相關性及臨床意義。方法：(1) 采用甲苯胺藍特殊染色法檢測195例浸潤性乳腺癌(非特殊類型)癌巢內(nèi)肥大細胞浸潤情況，由兩名病理專科醫(yī)師閱片并計數(shù)MCD，應用統(tǒng)計分析軟件SPSS 22.0分析MCD與乳腺癌臨床病理特征的關系。(2) 58例浸潤性乳腺癌(非特殊類型)患者接受新輔助化療，同樣的方法分別計數(shù)新輔助化療前后癌巢內(nèi)MCD，并應用統(tǒng)計分析軟件SPSS 22.0進行分析對比。結果：(1) 在195例浸潤性乳腺癌(非特殊類型)中，ER陽性癌巢中MCD較ER陰性癌巢中高，PR陽性癌巢中MCD較PR陰性癌巢中高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；浸潤性小葉癌癌巢中MCD高于浸潤性導管癌，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。MCD與年齡、腫塊大小、區(qū)域淋巴結狀況、Her- 2及Ki67等因素無關(P>0.05)。Luminal各型之間相互比較，Luminal A、Luminal B型者癌巢中MCD較Her- 2過表達型及三陰型者高，但是僅Luminal B型者與三陰型者之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其余各型之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。(2) 新輔助化療后患者癌巢內(nèi)MCD明顯高于新輔助化療前，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論：激素受體陽性乳腺癌癌巢內(nèi)肥大細胞浸潤程度較激素受體陰性者高，提示肥大細胞可能通過ER、PR影響乳腺癌預后，乳腺癌患者化療后癌巢中肥大細胞增多，從而可能發(fā)揮抗腫瘤作用。

浸潤性乳腺癌； 肥大細胞； 輔助化療

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，也是導致女性死亡的最主要的惡性腫瘤之一。乳腺癌的發(fā)病率現(xiàn)已超過子宮頸癌，躍居女性惡性腫瘤首位，占全部惡性腫瘤死亡率的14%[1]，已成為女性健康的主要威脅之一。另一方面，除手術、化療、放療等造成的身體創(chuàng)傷外，女性性征的缺失導致的心理創(chuàng)傷同樣值得我們關注[2]。隨著近年來對本病認識的逐漸深入以及宣傳的逐漸普及，加之診斷技術的不斷提高，乳腺癌的早期診斷率已明顯提高，而化療方案的改進和內(nèi)分泌治療藥物、靶向治療藥物的應用及升級使乳腺癌的預后更加樂觀。保乳手術、微創(chuàng)手術的開展在治愈疾病的同時，也大大減輕了患者的生理、心理創(chuàng)傷。盡管如此，復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移仍是乳腺癌患者的主要死亡原因[3]，因此乳腺癌的復發(fā)與遠處轉(zhuǎn)移一直是研究的熱點之一，尋找一個新的治療靶點對乳腺癌復發(fā)、轉(zhuǎn)移的預防和治療均具有十分重要的意義。

肥大細胞于1878年首次被發(fā)現(xiàn)，很長一段時間以來被認為是一種炎癥反應相關細胞。近年來，肥大細胞與惡性腫瘤的關系越來越受到研究者的重視。眾多研究顯示，癌組織中肥大細胞聚集在多種惡性腫瘤如黑色素瘤[4]、霍奇金淋巴瘤[5]、胰腺癌[6]、前列腺癌[7]、食管癌[8]、慢性淋巴細胞性白血病[9- 10]等的病程中與預后不良、遠隔轉(zhuǎn)移等不良轉(zhuǎn)歸密切相關，提示肥大細胞在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中很可能起到了促進作用。另一方面，研究者們同樣發(fā)現(xiàn)肥大細胞存在抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用[11- 15]。鑒于現(xiàn)有研究結論矛盾眾多，肥大細胞與惡性腫瘤之間的關系暫無定論，仍需進一步深入研究。

肥大細胞與乳腺癌之間的關系同樣尚不明確，數(shù)項關于肥大細胞浸潤程度與乳腺癌預后關系的研究結果相悖[16- 18]。本研究通過檢測乳腺癌組織內(nèi)肥大細胞密度(MCD)，結合患者的臨床病理特征，分析肥大細胞浸潤與乳腺癌分子分型及預后之間的關系，為今后乳腺癌的診斷、治療提供有意義的生物學指標，探究新輔助化療對乳腺癌組織中MCD的影響，進一步分析肥大細胞浸潤與乳腺癌化療的相關性及臨床意義。

1 材料與方法

在取得患者知情同意后，收集整理南京鼓樓醫(yī)院、江蘇省中醫(yī)院2014年1月1日至2015年12月31日間經(jīng)手術切除或粗針穿刺活檢確診的浸潤性乳腺癌(非特殊類型)患者195例及南京鼓樓醫(yī)院、江蘇省中醫(yī)院2014年1月1日至2015年12月31日間經(jīng)粗針穿刺活檢確診后行新輔助化療患者58例的臨床資料，用甲苯胺藍染色法檢測乳腺癌組織內(nèi)肥大細胞的浸潤密度，分析其與臨床病理參數(shù)之間的關系。所有結果均由兩名副高職稱以上病理科專科醫(yī)師依照指南規(guī)范[19]判定。甲苯胺藍染色時肥大細胞呈紅紫色，而背景則為藍色，以HE染色片為陰性對照，以已知的陽性片作為陽性對照。每一切片隨機選取5個低倍視野(×100)，在高倍鏡(×400)下計數(shù)20個高倍視野內(nèi)的肥大細胞總數(shù)，取平均數(shù)作為每個高倍視野下肥大細胞計數(shù)值。數(shù)據(jù)均采用SPSS 22.0 for Windows統(tǒng)計軟件進行分析，根據(jù)不同資料類型和統(tǒng)計目的采用不同類型的秩和檢驗(rank test)，計量資料均用平均秩次表示。兩組間差異比較采用兩樣本比較的秩和檢驗，配對比較的數(shù)據(jù)采用Wilcoxon符號秩和檢驗，3組及以上總體比較用多個樣本比較的秩和檢驗。均以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 肥大細胞在乳腺癌組織中的浸潤情況觀察

肥大細胞陽性細胞呈紫紅色，其內(nèi)含多量異染顆粒，多呈局灶狀分布于癌巢與正常組織分界處，少量散布于間質(zhì)及癌巢內(nèi)，而背景呈廣泛藍色(圖1)。

圖1 乳腺癌組織中的肥大細胞(箭頭處，甲苯胺藍染色，×400)

2.2 MCD與浸潤性乳腺癌臨床病理參數(shù)之間的關系

在195例浸潤性乳腺癌(非特殊類型)中，ER陽性癌巢中MCD較ER陰性癌巢中高，PR陽性癌巢中MCD較PR陰性癌巢中高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；MCD與年齡、腫塊大小、組織學類型、區(qū)域淋巴結狀況、Her- 2及Ki67等因素無關(P>0.05)。不同腫塊長徑之間相互比較，各組間MCD差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；Luminal各型之間相互比較，Luminal A、Luminal B型者癌巢中MCD較Her- 2過表達型及三陰型者高，但是僅Luminal B型者與三陰型者之間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其余各型之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

2.3 MCD與新輔助化療之間的關系

共58例患者術前接受新輔助化療，方案均為3周期TEC三周方案，即多西他賽(docetaxel，T)+表柔比星(epirubicin，E)+環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide，C)，劑量分別為75、50、500 mg·m-2體表面積。3個周期化療完成后行病情評估，其中無完全緩解(complete remission，CR)病例，部分緩解(partial remission，PR)者49例，疾病穩(wěn)定(stable disease，SD)者8例，疾病進展(progression of disease，PD)1例。新輔助化療前后癌巢內(nèi)MCD比較結果見表2。

3 討 論

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，我國雖屬乳腺癌低發(fā)區(qū)域，但近年來發(fā)病率不斷上升，且乳腺癌發(fā)病趨向年輕化，已成為現(xiàn)代女性健康的主要威脅之一，局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移則是乳腺癌患者死亡的主要原因[20]。因此乳腺癌的綜合治療顯得尤其重要[21]，尋求一個新的治療靶點成為乳腺癌精準治療的關鍵。本研究發(fā)現(xiàn)癌巢內(nèi)MCD與激素受體狀態(tài)有關，ER陽性、PR陽性者分別高于ER陰性、PR陰性者，差異有統(tǒng)計學意義，而與患者年齡、腫塊大小、區(qū)域淋巴結有無轉(zhuǎn)移、Her- 2、Ki67等其他預后影響因素無關，提示激素受體陽性可能促進肥大細胞聚集，這一點與Rovere等[22]的研究結果一致。ER陽性、PR陽性乳腺癌對內(nèi)分泌治療敏感，預后相對較好。本實驗結果顯示ER陽性、PR陽性乳腺癌中MCD明顯升高，肥大細胞浸潤密度高者似乎預后較好，肥大細胞浸潤密度與乳腺癌預后可能有一定相關性，但是仍需要進一步隨訪證實。

我們的研究同樣發(fā)現(xiàn)，Luminal A型、Luminal B型浸潤性乳腺癌癌巢中MCD高于Her- 2過表達型及三陰型，但僅Luminal B型與三陰型間MCD差異有統(tǒng)計學意義。結合MCD與ER、PR的關系，推測Luminal A型浸潤性乳腺癌癌巢中MCD也應當高于三陰型，然而本研究中兩者MCD差異雖然與推測相符，但差異并無統(tǒng)計學意義，考慮與樣本量較少有關，希望后續(xù)研究可以增大樣本量，明確兩者的關系。另一方面，浸潤性小葉癌癌巢中MCD明顯高于浸潤性導管癌，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，亦與先前研究結論[23]相符，差異無統(tǒng)計學意義考慮與浸潤性小葉癌僅8例有關，如能擴大樣本量，應能證實其差異性。

表1 MCD與乳腺癌預后影響因素之間的關系

影響因素例數(shù)平均秩次P值年齡0.207 <50歲79104.16 ≥50歲11693.81腫塊長徑0.469 <2cm91102.41 2～5cm9895.07 >5cm679.00 <2cm與2～5cm比較0.67 <2cm與>5cm比較0.62 2～5cm與>5cm比較0.79組織學類型0.164 浸潤性導管癌18796.84 浸潤性小葉癌8125.06淋巴結轉(zhuǎn)移0.633 有11296.34 無83100.23ER0.001 陽性138106.86 陰性5776.54PR0.012 陽性134104.84 陰性6182.97Her-20.479 陽性4692.87 陰性14999.58Ki670.693 <15%39101.18 ≥15%156101.18分型0.011 LuminalA型3098.97 LuminalB型120106.12 Her-2過表達型2186.83 三陰型2465.96 LuminalA型與LuminalB型比較0.390.82 LuminalA型與Her-2過表達型比較0.580.75 LuminalA型與三陰型比較4.600.10 LuminalB型與Her-2過表達型比較2.100.35 LuminalB型與三陰型比較10.210.01 Her-2過表達型與三陰型比較1.540.46

表2 新輔助化療前后MCD對比

時 間n平均秩次Z值P值新輔助化療前5813.86新輔助化療后5829.89-4.8990.001

值得關注的是，本研究發(fā)現(xiàn)新輔助化療后的乳腺癌組織內(nèi)MCD較新輔助化療前升高，差異有統(tǒng)計學意義。其機制可能為癌細胞在化療藥物作用下壞死，釋放大量炎癥介質(zhì)，引起局部炎癥，肥大細胞作為早期炎癥反應細胞進入癌組織，釋放多種細胞因子及酶類，招募其他炎癥反應細胞，擴大炎癥反應，同時亦招募成纖維細胞，促進其膠原合成功能的活化及維持[24]，啟動組織纖維修復，而最終纖維化、膠原化。

Rovere等[22]觀察到在肥大細胞浸潤密度較高的乳腺癌組織中肥大細胞吞噬癌細胞的現(xiàn)象，而本研究無論肥大細胞浸潤密度高低，我們并未發(fā)現(xiàn)有肥大細胞吞噬的現(xiàn)象，可能與肥大細胞吞噬能力較弱，主要以脫顆粒釋放炎癥介質(zhì)及抗腫瘤物質(zhì)為作用機制有關，有待進一步實驗觀察。另一方面，Ueshima等[25]發(fā)現(xiàn)：若乳腺癌組織中肥大細胞內(nèi)的KIR2DL4(killer- cell Ig- like receptor 2DL4，即CD158d)表達升高，其發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移的概率亦相應升高，提示肥大細胞與乳腺癌的關系可能并非簡單的浸潤密度關系，這一點值得我們深入探究。

本研究表明乳腺癌新輔助化療后癌組織內(nèi)MCD高于新輔助化療前，差異有統(tǒng)計學意義。新輔助化療后較化療前升高，原因可能為癌細胞在化療藥物作用下壞死，釋放大量炎癥介質(zhì)，引起局部炎癥，肥大細胞作為早期炎癥反應細胞進入癌組織，可能招募成纖維細胞促進組織纖維修復，同時通過釋放炎癥介質(zhì)起到輔助抑制腫瘤的作用。如能在發(fā)揮肥大細胞抗乳腺癌作用的同時，抑制類胰蛋白酶的作用，則可為乳腺癌的治療提供新的預后判斷因素與治療靶點。

[1] AHMEDIN J，F(xiàn)REDDIE B，MELISSA M，et al.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin，2011，61(2):69- 90．

[2] 蔡雁，施曉群，金艷.乳腺癌患者術后乳房缺失心理體驗的質(zhì)性研究[J].中華護理雜志，2006，41(2):105- 108．

[3] JOSE R，HYE- JUNG H，YOSHINORI K，et al.New advances in breast cancer metastasis[J].Womens Health(Lond Engl)，2008，4(6):547- 549．

[4] RIBATTI D，ENNAS M G，VACCA A，et al.Tumor vascularity and tryptase- positive mast cells correlate with a poor prognosis in melanoma[J].Eur J Clin Invest，2003，33(5):420- 425．

[5] GLIMELIUS I，EDSTR?M A，F(xiàn)ISCHER M，et al.Angiogenesis and mast cells in Hodgkin lymphoma[J].Leukemia，2005，19(12):2360- 2362．

[6] STROUCH M J，CHEON E C，SALABAT M R，et al.Crosstalk between mast cells and pancreatic cancer cells contributes to pancreatic tumor progression[J].Clin Cancer Res，2010，16(8):2257- 2265．

[7] NONOMURA N，TAKAYAMA H，NISHIMURA K，et al.Decreased number of mast cells infiltrating into needle biopsy specimens leads to a better prognosis of prostate cancer[J].Br J Cancer，2007，97(7):952- 956．

[8] ELPEK G O，GELEN T，AKSOY N H，et al.The prognostic relevance of angiogenesis and mast cells in squamous cell carcinoma of the oesophagus[J].J Clin Pathol，2001，54(12):940- 944．

[9] MOLICA S，VITELLI G，LEVATO D，et al.Increased serum levels of matrix metalloproteinase- 9 predict clinical outcome of patients with early B- cell chronic lymphocytic leukaemia[J].Eur J Haematol，2003，70(6):373- 378．

[10] MOLICA S，VACCA A，CRIVELLATO E，et al.Tryptase- positive mast cells predict clinical outcome of patients with early B- cell chronic lymphocytic leukemia[J].Eur J Haematol，2003，71(2):137- 139．

[11] TAN S Y，F(xiàn)AN Y，LUO H S，et al.Prognostic significance of cell infiltrations of immunosuveillance in colorectal cancer[J].World J Gastroenterol，2005，11(8):1210- 1214．

[12] 王先松，阮幼冰，武忠弼，等.肥大細胞對肝癌細胞毒性作用的體外實驗研究[J].中華腫瘤雜志，1996，18(4):276- 278．

[14] OLDFORD S A，HAIDL I D，HOWATT M A，et al.A critical role for mast cells and mast cell- derived IL- 6 in TLR2- mediated inhibition of tumor growth[J].J Immunol，2010，185(11):7067- 7076．

[15] MALTBY S，KHAZAIE K，MCNAGNY K M.Mast cells in tumor growth:angiogenesis，tissue remodelling and immune- modulation[J].Biochim Biophys Acta，2009，1796(1):19- 26．

[16] AALTOMAA S，LIPPONEN P，PAPINAHO S，et al.Mast cells in breast cancer[J].Anticancer Res，1993，13(3):785- 788．

[17] HARTVEIT F，THORESEN S，TANGEN M，et al.Mast cell changes and tumour dissemination in human breast carcinoma[J].Invasion Metastasis，1984，4(3):146- 155．

[18] FISHER E R，SASS R，WATKINS G，et al.Tissue mast cells in breast cancer[J].Breast Cancer Res Treat，1985，5(3):285- 291．

[19] 中國抗癌協(xié)會乳腺癌專業(yè)委員會.中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范(2015版)[J].中國癌癥雜志，2015，25(9):692- 754．

[20] 黃韜，伊丹丹，桑劍鋒.肥大細胞在疾病發(fā)生發(fā)展預后中的作用[J].東南大學學報:醫(yī)學版，2016，35(3):443- 448．

[21] 高小康，孫鶴慶.新輔助化療對乳腺癌Cerb- B2表達的影響及其臨床意義[J].現(xiàn)代醫(yī)學，2013，41(11):787- 791．

[22] ROVERE F D，GRANATA A，MONACO M，et al.Phagocytosis of cancer cells by mast cells in breast cancer[J].Anticancer Res，2009，29(8):3157- 3162.

[23] KASHIWASE Y，MORIOKA J，INAMURA H，et al.Quantitative analysis of mast cells in benign and malignant breast lesions.Immunohistochemical study on formalin- fixed，paraffin- embedded tissues[J].Int Arch Allergy Immunol，2004，134(3):199- 205．

[24] HILL P B，MARTIN R J.A review of mast cell biology[J].Vet Derm，1998，9(3):145- 166．

[25] UESHIMA C，KATAOKA T R，HIRATA M，et al.The killer cell Ig- like Receptor 2DL4 expression in human mast cells and its potential role in breast cancer invasion[J].Cancer Immunol Res，2015，3(8):871- 880．

The preliminary study of the relationship between mast cell infiltratingdensity and Luminal types of invasive breast cancer

HUANG Tao，YI Dan- dan，SANG Jian- feng

(DepartmentofThyroidandBreastSurgery，DrumTowerClinicalCollegeAffiliatedofNanjingMedicalUniversity，Nanjing210008，China)

Objective： To investigate the mast cell density(MCD)in carcinoma nest of patients with invasive breast cancer(non- specific types)， and analyze the correlation between MCD and clinical prognosis factors of breast cancer. Methods: (1) The MCD was calculated in 195 cases of invasive breast cancer(non- specific types)by two pathologists. Toluidine blue dyeing was used to examine the infiltration of mast cell. SPSS 22.0 statistic software was applied to analyze the data. (2) 58 cases of invasive breast cancer(non- specific types)accepted neo- adjuvant chemotherapy before surgery. We used the same procedure to calculate the MCD in cancer nest before and after neo- adjuvant chemotherapy. SPSS 22.0 statistic software was applied to analyze the data. Results: (1) The MCD were higher in invasive breast cancer nest with ER+and PR+than those with ER-and PR-respectively， the difference was significant(P<0.05). MCD were higher in invasive lobular carcinoma than in invasive ductal carcinoma, but the difference was not significant(P>0.05). The MCD were higher in Luminal A type and Luminal B type breast cancer nest than those in Her- 2 overexpression type and triple- negative type， but only the difference between Luminal B type and triple- negative type was significant(P<0.05)， there was no differences between any other Luminal types(P>0.05). There were not enough evidences to prove that MCD was related to age， diameter of the mass， histological type， regional lymph nodes situation， Her- 2 and Ki67. (2) The MCD was lower in breast cancer nest before neo- adjuvant chemotherapy than that after neo- adjuvant chemotherapy. The difference was significant(P<0.05). Conclusion: The MCDs in hormone receptors positive breast cancers’ nest are higher than those in negative， which indicates that mast cell may have positive effect on breast cancer prognosis by ER and PR. MCD increases in cancer nest after neo- adjuvant chemotherapy， which may play a part in anti- cancer system．

invasive breast cancer; mast cell; neo- adjuvant chemotherapy

2016- 06- 21

2016- 08- 23

黃韜(1990-)，男，江蘇連云港人，在讀碩士研究生。E- mail:lyghuangtao@163.com

桑劍鋒 E- mail:drsangjianfeng@163.com

黃韜，伊丹丹，桑劍鋒.肥大細胞浸潤密度與浸潤性乳腺癌分子分型關系的初步研究[J].東南大學學報:醫(yī)學版，2016，35(6)：956- 960.

R655.8

A

1671- 6264(2016)06- 0956- 05

10.3969/j.issn.1671- 6264.2016.06．026