細(xì)胞塊石蠟包埋切片鑒別良惡性胸腹腔積液的應(yīng)用價(jià)值

羅政權(quán) 王寶軍 杜秀杰 逯娟 鄭宏江

(1.河北邯鄲峰峰集團(tuán)總醫(yī)院病理科，河北 邯鄲 056200；2.邯鄲市第四醫(yī)院病理科，河北 邯鄲 056200)

?

細(xì)胞塊石蠟包埋切片鑒別良惡性胸腹腔積液的應(yīng)用價(jià)值

羅政權(quán)1王寶軍1杜秀杰2逯娟1鄭宏江1

(1.河北邯鄲峰峰集團(tuán)總醫(yī)院病理科，河北 邯鄲 056200；2.邯鄲市第四醫(yī)院病理科，河北 邯鄲 056200)

目的 研究細(xì)胞塊石蠟包埋切片鑒別良惡性胸腹腔積液的應(yīng)用價(jià)值。方法 連續(xù)選擇68份高度懷疑惡性胸腹腔積液標(biāo)本，分別進(jìn)行細(xì)胞塊石蠟包埋切片和細(xì)胞脫落病理學(xué)檢查，對(duì)比診斷敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值的差異性。結(jié)果 細(xì)胞涂片診斷惡性胸、腹腔積液的陽(yáng)性率明顯低于最終結(jié)果，也明顯低于石蠟包埋，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；石蠟包埋與最終結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05). 細(xì)胞涂片診斷惡性胸、腹腔積液的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值明顯低于石蠟包埋。結(jié)論 細(xì)胞塊石蠟包埋切片鑒別良惡性胸腹腔積液具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

細(xì)胞塊石蠟包埋切片； 胸腹腔積液； 細(xì)胞脫落病理學(xué)檢查

一直以來(lái)，細(xì)胞脫落病理學(xué)檢查被認(rèn)為診斷胸腹腔積液性質(zhì)的“金標(biāo)準(zhǔn)”[1]，然而H.Motherby[2]研究指出，其診斷惡性積液的陽(yáng)性率僅為17.5%。對(duì)已知惡性積液的陽(yáng)性診斷率為56%～65%，之所以出現(xiàn)較高假陰性原因可能與細(xì)胞學(xué)的制片技術(shù)有關(guān)[3]。常規(guī)細(xì)胞制片易受標(biāo)本質(zhì)量、涂片厚度、染色技術(shù)等影響[4]。細(xì)胞塊石蠟包埋切片利用組織團(tuán)塊，聚集病變細(xì)胞，有效染色進(jìn)行觀察，主要應(yīng)用在組織病理學(xué)診斷中[5]。本研究通過(guò)比較這兩種技術(shù)在鑒別胸腹腔積液性質(zhì)的價(jià)值，為臨床診斷提供新思路。

注：A、B為腺癌細(xì)胞；C、D為鱗癌細(xì)胞；A、C為石蠟包埋HE染色；B、D為細(xì)胞涂片巴氏染色。圖1 兩種檢測(cè)技術(shù)診斷惡性胸腹腔積液(400×)

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源 連續(xù)選擇2014年1月至2016年1月入我院行病理診斷，高度懷疑惡性胸腹腔積液標(biāo)本共68份，標(biāo)本無(wú)污染，采集后立即送檢。標(biāo)本來(lái)源男性41例，女性27例；年齡37～76歲，平均(52.5±13.3)歲；胸腔積液35份，腹腔積液33份。

1.2 標(biāo)本處理 52A 型醫(yī)用低速離心機(jī)(北京六一機(jī)械廠)，脫水機(jī)(ASP300，LEICA，德國(guó))，包埋機(jī)(EG1160，LEICA，德國(guó))，切片機(jī)(RM2235，LEICA，德國(guó))，Olympus 光學(xué)顯微鏡(BX51，Olympus，日本)。

1.2.1 細(xì)胞脫落病理學(xué)檢查 預(yù)處理：標(biāo)本至少100 mL、靜置15 min、棄上清、取沉淀2 500 r/min離心5 min、棄上清、取沉淀；涂片：取中間層細(xì)胞；固定：95%乙醇固定 15 min；巴氏染色：蒸餾水水洗2 min×2次、蘇木素染色5 min、流水沖洗1 min，放置鹽酸酒精中5 s、流水沖洗分色，放置飽和碳酸鋰溶液中返藍(lán)，梯度酒精脫水，放置橘黃 G6 中 10 s、95%乙醇迅速?zèng)_洗 3 次、放置EA50 中2min、95%乙醇沖洗2min×2 次，無(wú)水乙醇2 min×2 次脫水、二甲苯透明、中性樹脂封片。

1.2.2 細(xì)胞塊石蠟包埋切片 預(yù)處理同上、取沉淀震蕩與離心管分離、兩層擦鏡紙包裹放入脫水盒中，10%福爾馬林浸泡 3～4 h固定，梯度酒精脫水、酒精和二甲苯透明、浸入純石蠟2次、每次 2～3 h、溫度54～56 ℃，包埋、切片、蘇木素伊紅染色。染色步驟：脫蠟、水化、染核(蘇木精液染色 5 min、流水2～4 s，鹽酸乙醇 2～4 s、稍水洗 15～30 s、流水 11～16 min、蒸餾水 2～4 s)、染漿(0.5%伊紅液染色 1～5 min、蒸餾水快速?zèng)_洗 1～2 s)、脫水、透明、封片。

1.3 光學(xué)顯微鏡下閱片 均采用雙盲法，由兩名細(xì)胞病理學(xué)醫(yī)師同時(shí)閱片，并做出一致性診斷。依據(jù)《漿膜腔積液細(xì)胞病理學(xué)診斷》標(biāo)準(zhǔn)，診斷報(bào)告采用3 級(jí)分類法，即找到惡性細(xì)胞(鱗狀細(xì)胞癌、腺癌、小細(xì)胞未分化癌、大細(xì)胞未分化癌、腺鱗癌、癌型未定)，可疑惡性細(xì)胞和未找到惡性細(xì)胞。綜合多種檢查方法如生化、影像、臨床表現(xiàn)為最終確診結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計(jì)數(shù)資料采用%表示，組間比較采用(校正)χ2檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 惡性胸腹腔積液陽(yáng)性率的比較 35例惡性胸腔積液中，細(xì)胞涂片診斷出陽(yáng)性20例，陰性15例，陽(yáng)性率為57.1%，而最終確診結(jié)果為陽(yáng)性30例，陰性5例，陽(yáng)性率為857.1%，石蠟包埋診斷出陽(yáng)性28例，陰性7例，陽(yáng)性率為80.0%，細(xì)胞涂片診斷的陽(yáng)性率低于最終診斷結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.000，P=0.008)，也明顯低于石蠟包埋(χ2=4.242，P=0.039)，石蠟包埋與最終確診結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.402，P=0.526)；33例惡性腹腔積液中，細(xì)胞涂片診斷出陽(yáng)性21例，陰性12例，陽(yáng)性率為63.6%，而最終確診結(jié)果為陽(yáng)性30例，陰性5例，陽(yáng)性率為90.9%，石蠟包埋診斷出陽(yáng)性28例，陰性5例，陽(yáng)性率為84.8%，細(xì)胞涂片診斷的陽(yáng)性率低于最終診斷結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.988，P=0.008)，也明顯低于石蠟包埋(χ2=3.882，P=0.049)，石蠟包埋與最終確診結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.142，P=0.706)。見圖1。

2.2 診斷敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值的比較 細(xì)胞涂片診斷惡性胸腔積液的敏感性為62.5%、特異性為53.8%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為82.6%、陰性預(yù)測(cè)值為52.9%，診斷惡性腹腔積液的敏感性為66.9%、特異性為57.2%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為87.4%、陰性預(yù)測(cè)值為62.3%。石蠟包埋診斷惡性胸腔積液的敏感性為86.3%、特異性為72.9%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為88.4%、陰性預(yù)測(cè)值為72.0%，診斷惡性腹腔積液的敏感性為89.9%、特異性為80.1%、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為88.6%、陰性預(yù)測(cè)值為83.3%。[敏感性=真陽(yáng)性人數(shù)/(真陽(yáng)性人數(shù)+假陰性人數(shù))×100%，特異性=真陰性人數(shù)/(真陰性人數(shù)+假陽(yáng)性人數(shù)))×100%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值=真陽(yáng)性人數(shù)/(真陽(yáng)性人數(shù)+假陽(yáng)性人數(shù))×100%，陰性預(yù)測(cè)值=真陰性人數(shù)/(真陰性人數(shù)+假陰性人數(shù))×100%]。

3 討 論

目前臨床中用于鑒別良惡性積液的檢查方法主要有影像學(xué)如CT、PET，惡性積液 CT 常見結(jié)節(jié)狀增后的胸腹膜，增厚常達(dá) 10 mm，多為不規(guī)則，若伴器官腫塊及淋巴結(jié)腫大，多提示為惡性[6]；常規(guī)生化檢查，如顏色、透明度、比重、凝固性、蛋白的定性與定量、糖、積液中的細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞分類、pH 測(cè)定等[7]；腫瘤標(biāo)志物，如糖類蛋白為廣譜腫瘤標(biāo)志物，癌胚抗原多見于肺癌、結(jié)腸癌和乳腺癌等[8]；細(xì)胞 DNA 倍體分析可測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的 DNA 含量，是一種可靠的檢測(cè)手段；細(xì)胞脫落病理學(xué)檢查等[9]。

胸、腹腔積液中細(xì)胞成分較為復(fù)雜，良性積液中常見細(xì)胞主要有間皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞等，惡性積液中可見腺癌細(xì)胞(89.2%)、鱗癌細(xì)胞(5.7%)或惡性淋巴瘤細(xì)胞(3.1%)，偶見未分化癌和惡性間皮瘤[10]。細(xì)胞脫落病理學(xué)檢查優(yōu)點(diǎn)是省時(shí)、費(fèi)用低、方法簡(jiǎn)單，但影響因素多、可控性差、診斷陽(yáng)性率低，使之不能成為鑒別惡性積液的唯一手段[11]。石蠟包埋切片技術(shù)通過(guò)離心沉淀、聚集更多病變細(xì)胞，經(jīng)甲醛固定液形成細(xì)胞塊、然后經(jīng)石蠟包埋、切片和染色[12]。通過(guò)該研究得出：細(xì)胞涂片診斷惡性胸、腹腔積液的陽(yáng)性率明顯低于最終結(jié)果，也明顯低于石蠟包埋，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；石蠟包埋與最終結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞涂片診斷惡性胸、腹腔積液的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值明顯低于石蠟包埋。

(本文圖1見封三)

[1] 林靜, 周英瓊. 脫落細(xì)胞學(xué)的細(xì)胞塊制作及應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2014,20(15)：2739-2740.

[2] Motherby H, Nadjari B, Friegel P, et al. Diagnostic accuracy of effusion cytology[J]. Diagn Cytopathol 1999，20:350-357.

[3] 張婉儀，羅麗花，劉惠娟，等.胸腹水細(xì)胞塊制作技術(shù)及應(yīng)用[J]. 臨床醫(yī)學(xué)工程，2014,21(1):147-150.

[4] 孫亞軍，李梅，吳建農(nóng)，等.細(xì)胞塊技術(shù)聯(lián)合免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)漿膜腔積液中腺癌細(xì)胞的價(jià)值[J].實(shí)用醫(yī)技雜志,2013,20(9):933-935.

[5] 黃金長(zhǎng)，張功亮，郭廣秀，等.細(xì)胞塊石蠟包埋及免疫細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)在胸腹水細(xì)胞病理學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2013,31(5):489-490.

[6] 虞紅珍,吳強(qiáng).漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查中制片技術(shù)應(yīng)用的現(xiàn)狀與進(jìn)展[J].臨床與試驗(yàn)病理學(xué)雜志,2014,30(4):434-435.

[7] 王炳淑,劉友斌,卜平鳳,等. 細(xì)胞沉渣石蠟包埋、免疫組織化學(xué)染色病理檢查對(duì)漿膜腔積液的定性診斷價(jià)值[J]. 山東醫(yī)藥,2015,55(28):98-99.

[8] 劉蘊(yùn)霞,劉玉俠,鐘政榮,等.惡性漿膜腔積液200例細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)的臨床分析[J]. 中華全科醫(yī)學(xué),2012,10(1):111-112.

[9] 楊紅,王影,覃勝,等.漿膜腔積液細(xì)胞塊對(duì)提高細(xì)胞學(xué)診斷及開展基因檢測(cè)的價(jià)值[J].中華臨床醫(yī)師雜志,2013,7(21):71-73.

[10] 李慶國(guó).細(xì)胞塊石蠟切片檢查對(duì)惡性漿膜腔積液的診斷價(jià)值[J]. 中國(guó)醫(yī)療設(shè)備,2015,30(3):111-113.

[11] 茅育蕾,傅江河. 細(xì)胞塊石蠟切片在胸腹水病理診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 全科醫(yī)學(xué)臨床與教育,2016,14(1):100-101.

[12] 龔建化,何麗，周茂林.細(xì)胞塊技術(shù)在肺腺癌胸腔轉(zhuǎn)移診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)醫(yī)師進(jìn)修雜志,2012,35(4):41-43.

R730.4

B

1000-744X(2016)11-1197-03

2015-06-27)