玉米中介體亞基ZmMED7基因的克隆及表達分析

王 晶, 趙 軍, 宗 娜*

1.中國農(nóng)業(yè)科學院生物技術研究所, 作物基因組與遺傳改良研究室玉米功能基因組創(chuàng)新團隊, 北京 100081;2.中國農(nóng)業(yè)科學院, 農(nóng)作物基因資源與基因改良國家重大科學工程, 北京 100081

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玉米中介體亞基ZmMED7基因的克隆及表達分析

王 晶1,2, 趙 軍1,2, 宗 娜1,2*

1.中國農(nóng)業(yè)科學院生物技術研究所, 作物基因組與遺傳改良研究室玉米功能基因組創(chuàng)新團隊, 北京 100081;2.中國農(nóng)業(yè)科學院, 農(nóng)作物基因資源與基因改良國家重大科學工程, 北京 100081

為了研究玉米中介體亞基ZmMED7基因的功能，通過熒光定量PCR技術,研究ZmMED7-1和ZmMED7-2在玉米不同組織中的表達及在ABA處理、鹽害和滲透脅迫等逆境條件下的應答反應，并將ZmMED7-1和ZmMED7-2轉入擬南芥中研究其基因功能。結果顯示，ZmMED7在玉米不同發(fā)育時期的組織器官中均有表達，ZmMED7-1和ZmMED7-2分別在V1和V5期的葉片中表達量最高。ABA、鹽害和滲透脅迫等處理都能夠抑制ZmMED7-1和ZmMED7-2 基因的表達。過表達ZmMED7-1導致擬南芥在種子萌發(fā)時期對鹽脅迫的耐受能力減弱。研究結果說明：ZmMED7基因作為負調(diào)控因子參與了植物逆境脅迫應答反應。

轉錄中介體；表達分析；逆境脅迫

玉米是世界上除小麥和水稻外最重要的糧食作物和飼料來源，也是全世界總產(chǎn)量最高的糧食作物。在自然環(huán)境中，玉米生產(chǎn)常會受到冷、熱、旱、澇和鹽等非生物逆境的影響[1]。在各種環(huán)境脅迫中，干旱和高鹽對植物生長發(fā)育的影響最大，為適應環(huán)境改變，植物進化出了一系列應答機制[1,2]。轉錄中介體(mediator)是由多個蛋白亞基組成的復合體，是一種重要的轉錄輔助因子,它將接收的各種生理和發(fā)育信號從特定轉錄因子傳遞給RNA聚合酶Ⅱ[3,4]，從而調(diào)控下游基因的表達。研究表明，在植物生長發(fā)育的多個階段包括胚胎發(fā)育、花和根的發(fā)育及籽粒形成[5]過程中，轉錄中介體都起到非常重要的作用。此外，轉錄中介體通過激活植物自身的防衛(wèi)機制參與抗病信號途徑和非生物脅迫應答反應[6,7]。

MED7是轉錄中介復合體中間模塊的一個重要組成亞基[8]，在不同物種中具有高度保守性。轉錄中介復合體中間模塊一般由MED1、MED4、 MED7、 MED9、 MED10、 MED21和MED31等7種亞基組成，該模塊對于激活子和核心轉錄機制的連接是必須的。其中，MED7的N端與高度保守的MED31組成了具有獨特結構和功能的子模塊，Med7N/31二聚體在體內(nèi)對蛋氨酸代謝及鐵運輸基因具有正調(diào)控功能[9]。在釀酒酵母中，Med7突變引發(fā)位于亞端粒X元件附近中介復合體的缺失，從而導致亞端?；虻某聊琜10]。有研究表明，在正常培養(yǎng)條件下，C.albicansCaMed7缺失并不會導致白色念珠菌活力的喪失，但顯著影響了白色念珠菌在不同碳源中的存活能力及菌絲和生物膜形成的能力[11]。

植物中關于MED7功能的報道并不多。研究發(fā)現(xiàn)，在水稻中，OsMED7通過SA介導的信號轉導途徑負向調(diào)控對白葉枯病菌的防衛(wèi)反應[12]。水稻和擬南芥中的研究表明，轉錄中介體不僅可以作為基因表達的基礎調(diào)節(jié)子，在植物發(fā)育和非生物脅迫中也扮演了特定角色[8]。ZmMED7是否參與植物發(fā)育和對非生物脅迫逆境的應答反應，到目前為止還沒有相關報道。本課題組通過同源搜索發(fā)現(xiàn)玉米基因組中有2個MED7基因，并且從玉米自交系齊319中克隆得到了ZmMED7-1和ZmMED7-2基因，然后對ZmMED7基因在玉米組織中的表達，及其在ABA、鹽害和滲透脅迫等逆境處理下的表達進行了分析。最后構建了ZmMED7基因過表達的轉基因擬南芥，并分析了轉基因擬南芥在鹽脅迫下的萌發(fā)情況，以期為進一步研究玉米ZmMED7基因的功能打下基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 反轉錄試劑盒、TaqDNA Polymerase 購自北京全式金生物有限公司；實時定量PCR試劑盒購自TaKaRa公司；ABA、NaCl和PEG均購自Sigma公司；其他試劑均為國產(chǎn)試劑；引物和測序均由北京博愛永華有限公司完成。

1.1.2 植物材料 以玉米自交系齊319和擬南芥Columbia-0為材料。

1.2 方法

玉米材料種植于溫室中，溫室條件為：白天：26℃，夜晚：18℃，光照16 h，黑暗8 h。采用盆栽的方法，蛭石∶營養(yǎng)土∶黃土=1∶1∶3混和。選取剛萌發(fā)的種子，V1、V5時期的葉片、根，吐絲期的雌穗和剛抽雄的雄穗，授粉4 d、8 d和12 d后的籽粒作為研究材料。

1.2.1 ABA激素、鹽害和滲透脅迫處理方法 將催芽的玉米齊319種子播種到蛭石中，待其長到一葉一心期(一片真葉一片子葉)開始處理，用不同濃度(0、0.1 μmol/L、0.5 μmol/L、1 μmol/L、5 μmol/L和10 μmol/L)的ABA溶液噴施葉片，然后在不同時間點取材(0、0.25 h、0.5 h、1 h、3 h、6 h、12 h)，以噴施水的處理作為對照。鹽害和滲透脅迫處理: 將一葉一心期的玉米從蛭石中取出，用自來水沖洗根部，然后將根部浸泡于不同濃度的NaCl(0、100 μmol/L、200 μmol/L、250 μmol/L和300 μmol/L)和PEG(0.5%、10%、15%和20%)溶液中，在不同時間點(0、0.25 h、0.5 h、1 h、3 h、6 h、12 h)取材，以浸泡水的處理作為對照。每一個處理取5株幼苗地上部分混合后迅速凍于液氮中，放于-80℃冰箱中備用。

1.2.2 玉米總RNA提取及反轉錄 用RNAprep pure Plant Kit(北京天根生物技術有限公司)提取玉米RNA，提取方法參照說明書；RNA的反轉錄參考北京全式金反轉錄試劑盒EasyScript One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix。

1.2.3ZmMED7-1和ZmMED7-2基因的克隆 根據(jù)擬南芥MED7蛋白的氨基酸序列，在玉米數(shù)據(jù)庫MaizeGDB中搜索到2個同源性較高的cDNA序列，根據(jù)序列的堿基信息，設計了擴增ZmMED7-1和ZmMED7-2基因全長的引物：ZmMED7-1-F/ZmMED7-1-R和ZmMED7-2-F/ZmMED7-2-R(引物序列見表1)。

1.2.4 實時定量RT-PCRZmMED7-1基因和ZmMED7-2基因引物分別為：MED7-1-F/MED7-1-R和MED7-2-F/MED7-2-R，以玉米Q-mACTIN1(GenBank登錄號J0123)作為內(nèi)標基因，引物為Q-mACTIN1-Fw/Q-mACTIN1-Rv(引物序列見表1)。使用ABI公司7500進行反應?；虮磉_量以2-ΔΔCt方法分析。

1.2.5 過表達載體構建、擬南芥轉化和抗逆性鑒定 將ZmMED7-1和ZmMED7-2基因擴增產(chǎn)物和pCAMBIA1300質(zhì)粒分別用KpnⅠ和BstBⅠ酶切，純化回收酶切產(chǎn)物，通過T4 DNA連接酶將基因酶切回收產(chǎn)物和質(zhì)粒酶切回收產(chǎn)物進行連接，將ZmMED7-1和ZmMED7-2分別構建到pCAMBIA1300表達載體上，測序獲得正確的重組子。將構建好的pCAMBIA1300-ZmMED7-1和pCAMBIA1300-ZmMED7-2表達載體轉化農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞GV3101。

表1 基因克隆及實時定量引物

Table 1 The primers of gene cloning and Real-time quantitative.

引物名稱引物序列(5'→3')退火溫度(℃)ZmMED7-1-F5'-ATGGCAATGGCCACATCAGCATCG-3'57ZmMED7-1-R5'-CTAGTTAGTTTGACTTCCATC-3'57ZmMED7-2-F5'-ATGGCAATGGCCACATCATCATCT-3'57ZmMED7-2-R5'-CTAGTTAGCTTGGCTTGCATC-3'57MED7-1-F5'-ATCAGCATCGTACCCTCCACCT-3'57MED7-1-R5'-CTTGAAGTCAATATTGGGAC-3'57MED7-2-F5'-ATCATCATCTTACCCTCCACCA-3'57MED7-2-R5'-CTTGAAGTCAATATTGGGAC-3'57Q-mACTIN1-Fw5'-ACCTCACCGACCACCTAATG-3'57Q-mACTIN1-Rv5'-CTGAACCTTTCTGACCCAAT-3'57

消毒后的擬南芥種子種植于含有或者不含有200 mmol/L NaCl的1/2 MS平板上，避光置于4℃，春化48 h后培養(yǎng)于植物培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(白天22℃，黑暗19℃，光照16 h,黑暗：8 h)。利用花序侵染法[13]將玉米ZmMED7-1和ZmMED7-2基因過表達載體轉入擬南芥。將收獲的擬南芥種子消毒后播種于含有潮霉素(50 mg/mL)的1/2 MS培養(yǎng)基中篩選，生長7 d 后將存活的擬南芥轉移至不含抗生素的1/2 MS培養(yǎng)基中恢復培養(yǎng)7 d，再轉移至營養(yǎng)缽(蛭石∶營養(yǎng)土為1∶1)中，PCR鑒定篩選出陽性株系。按照此方法，直至篩選出純合株系。

2 結果與分析

2.1ZmMED7-1和ZmMED7-2基因的克隆

由圖1A所示，擴增得到的ZmMED7-1(GRMZM2G061672)和ZmMED7-2(GRMZM2G-066981)PCR產(chǎn)物均為500 bp左右的特異性條帶，切膠回收后連接pEASY-BLUNT載體，測序發(fā)現(xiàn)，兩基因編碼的氨基酸同源性高達96%。

由圖1B所示，從齊319自交系中克隆的ZmMED7序列和B73中ZmMED7 CDS相似度高達99%，僅僅有幾個核苷酸的差異。從齊319中擴增的ZmMED7-1與B73相比，齊319中+63位點A(腺嘌呤)取代了T(胸腺嘧啶)，+101位點的T取代了C(胞嘧啶)，+477位點的2個A取代了G(鳥嘌呤)；從齊319中擴增的ZmMED7-2與B73相比，齊319中+84位點及+327位點的T取代了C。

圖1 玉米齊319中ZmMED7-1和ZmMED7-2基因的 克隆(A)及其在B73和齊319兩個自交系中的序 列差異分析(B)Fig.1 Cloning of ZmMED7-1 and ZmMED7-2 in maize Qi319 (A) and two genes alignment results of the coding sequence of in B73 and Qi319 (B)注：A:M:分子質(zhì)量標準；1、2：分別代表了ZmMED7-1和ZmMED7-2 PCR產(chǎn)物。

2.2 不同物種間MED7蛋白的同源性比較

利用克隆得到的ZmMED7-1和ZmMED7-2蛋白的氨基酸序列與已經(jīng)發(fā)表的MED7蛋白的氨基酸序列進行比對，結果顯示玉米MED7蛋白與擬南芥AtMED7(NP_195970.2)、葡萄VvMED7(XP_002281390.1)、大豆GmMED7(NP_001241256.1) 等MED7具有高度同源性，同源性分別為67%、71%、74%，而且這些MED7蛋白都含有多聚脯氨酸區(qū)域，這說明MED7在不同物種間具有高度保守性。

圖2 不同物種中MED7蛋白氨基酸序列比對分析Fig.2 Amino acid sequence alignment of MED7 in different species.

2.3 齊319中ZmMED7-1和ZmMED7-2的表達分析

2.3.1ZmMED7-1和ZmMED7-2的組織表達特異性分析 實時定量PCR研究結果表明，在齊319中ZmMED7-1和ZmMED7-2基因在不同發(fā)育階段的組織中均有表達。如圖3所示，ZmMED7-1在營養(yǎng)生長初期階段V1時期的葉片中表達最高，是萌發(fā)種子表達量的5倍，吐絲的雌穗中表達次之，在V5時期的根中表達最低；ZmMED7-2在V5時期的葉片中表達最高，是萌發(fā)種子表達量的2.5倍，抽雄期的雄穗中表達次之，授粉12 d的籽粒中表達最低。

圖3 ZmMED7-1(A)和ZmMED7-2(B)在玉米不同發(fā)育階段不同組織中的表達Fig.3 The expression ZmMED7-1(A) and ZmMED7-2(B) in different tissues of maize at different development stage.注：1：萌發(fā)種子；2：V1期葉；3：V1期根；4：V5期葉；5：V5期根；6：抽雄期雄穗；7：吐絲期雌穗；8：授粉后4 d的籽粒；9：授粉后8 d的籽粒；10：授粉后12 d的籽粒。

2.3.2ZmMED7-1和ZmMED7-2對不同濃度ABA、NaCl和PEG處理的應答分析 研究選取了一葉一心時期(V1期)的玉米材料進行不同濃度的ABA、NaCl和PEG處理，處理時間為2 h。如圖4所示，不同濃度的ABA、NaCl和PEG處理都能夠導致ZmMED7-1的表達量下調(diào)。其中在0.1 μmol/L ABA，250 mmol/L NaCl和20% PEG處理下ZmMED7-1的表達量最低；ZmMED7-2的表達在不同濃度ABA、NaCl和PEG的處理下也同樣受到抑制，其中在0.1 μmol/L ABA，300 mmol/L NaCl和20% PEG處理下ZmMED7-2的表達最低。

2.3.3ZmMED7-1和ZmMED7-2對ABA、NaCl和PEG處理不同時間點的應答分析 為了進一步驗證ZmMED7-1和ZmMED7-2基因對ABA、NaCl和PEG處理的響應情況，分別選取1 μmol/L ABA、250 mmol/L NaCl 和20% PEG連續(xù)處理V1時期的玉米12 h，然后在不同的時間點取樣，分析這兩個基因的表達水平。

如圖5A所示，1 μmol/L ABA處理下，ZmMED7-1和ZmMED7-2的表達量均表現(xiàn)為下調(diào)， 在0.25 h表達量均開始下降，在1 h時表達量均達到最低，隨著處理時間增加，表達量開始上升。如圖5B所示，250 mmol/L NaCl處理條件下，ZmMED7-1和ZmMED7-2的表達均受到抑制，在3 h時表達量都達到最低，隨后表達量開始上升；如圖5C所示，20% PEG處理條件下，ZmMED7-1基因的表達表現(xiàn)為下調(diào)，在1 h時表達量上升，隨著處理時間的增加，表達量隨即開始下降，在6 h時達到最低；ZmMED7-2基因的表達量表現(xiàn)為下調(diào)表達，在0.5 h和1 h時表達量最低,隨著處理時間的增加，表達量上升到未處理水平。

圖4 不同濃度 ABA、NaCl和PEG處理下ZmMED7-1和ZmMED7-2基因的表達Fig.4 The expression of ZmMED7-1 and ZmMED7-2 under treatments with ABA、NaCl and PEG. A: 不同濃度ABA處理下ZmMED7-1的表達量；B：不同濃度ABA處理下ZmMED7-2的表達量；C: 不同濃度NaCl處理下ZmMED7-1的表達量；D：不同濃度NaCl處理下ZmMED7-2的表達量；E: 不同濃度PEG處理下ZmMED7-1的表達量；F：不同濃度PEG處理下ZmMED7-2的表達量。

2.4 轉基因擬南芥的分子鑒定和NaCl的敏感性分析

2.4.1 轉基因擬南芥的分子鑒定 經(jīng)過T1代抗性篩選共得到ZmMED7-1轉基因擬南芥綠色抗性苗123株，ZmMED7-2轉基因擬南芥綠色抗性苗150株。隨機選取14株進行PCR檢測，結果如圖4.2所示，陽性率均達到85%，單株收種標記為T2代種子。按照此方法，繼續(xù)篩選直至篩選出轉基因純合株系。最終選取ZmMED7-1轉基因擬南芥純合株系1-15、3-4和10-2，ZmMED7-2轉基因擬南芥純合株系6-12、9-7和11-6作為實驗材料進行NaCl的敏感性鑒定，并利用實時定量PCR檢測不同轉基因擬南芥株系中ZmMED7-1和ZmMED7-2的表達量 (圖6)。

2.4.2 轉基因擬南芥對NaCl的敏感性分析 如圖7(彩圖見封三圖版)所示，野生型擬南芥、ZmMED7-1轉基因擬南芥及ZmMED7-2轉基因擬南芥在含NaCl的培養(yǎng)皿中的萌發(fā)率均比不含NaCl的培養(yǎng)皿中的萌發(fā)率低。在含有NaCl的培養(yǎng)皿中，ZmMED7-1轉基因擬南芥的萌發(fā)率與對照組相比顯著降低，萌發(fā)率由90%左右降至20%左右；ZmMED7-2轉基因擬南芥萌發(fā)率較對照組相比萌發(fā)率沒有顯著差異。

圖5 1 μmol/L ABA、250 mmol/L NaCl 和20% PEG處理下ZmMED7-1、ZmMED7-2基因在不同時間點的表達量Fig.5 The expression of ZmMED7-1 and ZmMED7-2 for different time under treatments with 1 μmol/L ABA、 250 mmol/L NaCl and 20% PEG. A: 1 μmol/L ABA處理下ZmMED7-1基因在不同處理時間的表達；B: 1 μmol/L ABA處理下的ZmMED7-2基因在不同處理時間的表達；C: 250 mmol/L NaCl處理下的ZmMED7-1基因在不同處理時間的表達；D: 250 mmol/L NaCl處理下的ZmMED7-2基因在不同處理時間的表達；E: 20% PEG處理下的ZmMED7-1基因在不同處理時間的表達；F: 20% PEG處理下的ZmMED7-2基因在不同處理時間的表達。

圖6 轉基因擬南芥不同株系中ZmMED7-1和 ZmMED7-2的表達量Fig.6 The expression of ZmMED7-1 and ZmMED7-2 in transgenic Arabidopsis thaliana. A.轉基因擬南芥各個株系中ZmMED7-1的表達量; B.轉基因擬南芥各個株系中ZmMED7-2的表達量; Col-0:陰性對照。1-15、3-4、10-2為轉ZmMED7-1基因株系；6-12、9-7、11-6為轉ZmMED7-2基因株系。

3 討論

本研究中我們克隆了齊319中的ZmMED7-1和ZmMED7-2。ZmMED7-1和ZmMED7-2基因編碼的蛋白含有2個多聚脯氨酸區(qū)域，這種結構特征證明了MED7亞基在植物結構上的保守性。

ZmMED7-1在V1時期的葉片中表達最高，在未成熟的雄穗、吐絲的雌穗及授粉4d的籽粒中表達次之,暗示其可能在玉米營養(yǎng)生長早期和生殖發(fā)育早期中發(fā)揮重要作用。ZmMED7-2在V5時期葉片中的表達較強，在其他不同組織中表達呈現(xiàn)組成型表達模式。ZmMED7-1和ZmMED7-2組織表達模式的差異可能是二者在進化過程中功能分化引起的。水稻OsMED7和玉米ZmMED7-2的組織表達模式相似，水稻OsMED7在授粉6d的胚和胚乳中有較強的表達，在幼苗、莖頂端分生組織、根、成熟葉片、花序生長不同階段及授粉5～10 d、11～20 d和21～30 d的籽粒等多種組織中表達

圖7 轉基因擬南芥的耐鹽性鑒定(A)及 萌發(fā)率統(tǒng)計(B)Fig.7 The salt resistance of transgenic Arabidopsis thaliana in plate (A) and the survival rates (B).注：WT:野生型；1-15、3-4、10-2為轉ZmMED7-1基因株系；6-12、9-7、11-6為轉ZmMED7-2基因株系。星號表示不同轉基因株系的萌發(fā)率與對照相比差異顯著(*P<0.05,**P<0.01)。 (彩圖見封三圖版)

特異性不強，表現(xiàn)出組成型表達的規(guī)律[14]。這也進一步驗證了MED7亞基在植物進化過程中功能的保守性。

水稻OsMED7能夠參與對白葉枯病菌的應答反應。在本研究中ZmMED7-1和ZmMED7-2基因受到ABA、鹽害和滲透脅迫的處理后表達下調(diào)，ZmMED7-1過表達擬南芥對鹽的敏感度降低，說明MED7不僅可以參與對生物脅迫的響應，也可以參與對非生物脅迫的響應。植物生長常受到土壤鹽堿化的影響。MED25是目前研究最多的能夠參與鹽脅迫應答的中介體亞基，Atmed25突變體種子在萌發(fā)期對鹽脅迫敏感度增加且Med25a突變使得小立碗蘚菌株對鹽敏感顯著增加[15]。ZmMED7-1過表達擬南芥對鹽的敏感度明顯下降，而ZmMED7-2過表達擬南芥對鹽的敏感度沒有明顯變化，推測這是由兩基因表達量差異引起的。

在植物生長發(fā)育及對逆境脅迫響應的過程中要依賴多種激素[16]及不同轉錄因子的參與。在本研究中僅對ZmMED7基因在ABA和非生物逆境處理下的表達做了初步分析，但對于玉米MED7基因是如何參與植物發(fā)育及對逆境脅迫應答反應還不清楚，有待進一步驗證。不同中介體亞基能夠與特定的轉錄因子結合參與特定的發(fā)育過程[5]，ZmMED7-1和ZmMED7-2也可能通過與生長發(fā)育類相關轉錄因子互作參與生長發(fā)育調(diào)節(jié)。這些都為進一步研究ZmMED7基因功能提出了研究思路。

ZmMED7-1及ZmMED7-2編碼的MED7蛋白均含有多聚脯氨酸區(qū)域，在不同物種中具有高度保守性。ZmMED7-1及ZmMED7-2在萌發(fā)種子、V1和V5時期葉片和根中、抽雄的雄穗、吐絲的雌穗，授粉4 d、8 d、12 d的籽粒中均有表達，ZmMED7-1及ZmMED7-2分別在V1時期的葉片和V5時期的葉片中表達量最高。ZmMED7-1及ZmMED7-2受 ABA、NaCl、PEG的誘導表達量下調(diào)。與非轉基因野生型相比ZmMED7-1過表達的轉基因擬南芥對NaCl敏感性增強；ZmMED7-2過表達的轉基因擬南芥的鹽敏感性沒有顯著改變。

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Cloning and Expression Analysis of Maize Mediator Subunit GeneZmMED7

WANG Jing1,2, ZHAO Jun1,2, ZONG Na1,2*

1.FacultyofMaizeFunctionalGenomics,DepartmentofCropGenomeResearchandGeneticImprovement,BiotechnologyResearchInstitute,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Beijing100081,China;2.NationalKeyFacilityforCropGeneResourcesandGeneticImprovement,CAAS,Beijing100081,China

To study the function of maize mediator subunitZmMED7 gene. We used Real-time Quantitative PCR analysis to study the gene expression levels ofZmMED7-1 andZmMED7-2 in different tissues and under the conditions of abiotic stress, such as ABA、NaCl and PEG treatment. Results showed that: The expressions ofZmMED7-1 andZmMED7-2 could be detected in all the tissues sampled at different development stages, but expression ofZmMED7-1 andZmMED7-2 were highest at the leaves of V1 and V5 stage. Treated by ABA、NaCl and PEG all lead to decreased expression ofZmMED7-1 andZmMED7-2. The germination ofZmMED7-1 over-expression transgenicArabidopsisseeds showed more sensitive to salt stress treatment.ZmMED7 play negative regulator roles in the process of plants responding to salt stress treatment.

mediator complex; expression analysis; abiotic stress

2016-04-25; 接受日期：2016-06-03

國家自然科學基金項目(31170235) 資助。

王晶，碩士研究生，研究方向為植物抗逆分子生物學研究。E-mail:13051524392@163.com。*通信作者：宗娜，副研究員，博士，研究方向為植物抗逆性和籽粒發(fā)育分子生物學和分子育種研究。E-mail:zongna@caas.cn

10.3969/j.issn.2095-2341.2016.05.04