高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定趕黃草中槲皮素和山柰酚含量

羅興平，楊玲霞

1.西北民族大學(xué)化工學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省食品藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅 蘭州 730070

高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定趕黃草中槲皮素和山柰酚含量

羅興平1，楊玲霞2

1.西北民族大學(xué)化工學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省食品藥品檢驗(yàn)研究院，甘肅 蘭州 730070

目的 建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定趕黃草中槲皮素和山柰酚含量的方法。方法 采用高效液相色譜法，色譜柱為Kromasil C18柱（4.0 mm×250 mm，5.0 μm），流動(dòng)相為甲醇-0.1％磷酸溶液（50∶50），流速1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)360 nm，檢測(cè)溫度為室溫。結(jié)果 槲皮素、山柰酚分別在0.105 6～2.112 0 μg和0.023 6～0.472 μg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，平均回收率分別為98.46％（RSD＝2.29％）和98.17％（RSD＝1.99％）。結(jié)論 該法準(zhǔn)確、靈敏，可用于趕黃草中槲皮素和山柰酚的含量測(cè)定。

趕黃草；槲皮素；山柰酚；高效液相色譜法；含量測(cè)定

趕黃草為虎耳草科Saxifragaceae扯根菜屬Penthorum植物扯根菜Penthorum chinense Pursh.的干燥地上部分，始載于明代《救荒本草》，苗族民間歷來作為藥食兩用植物，被譽(yù)為“神仙草”。其性溫、味甘、無毒，具有清熱解毒、活血散瘀、利水消腫、退黃、平肝的功效，主要分布于華北、華東、中南及陜西、甘肅、四川和貴州等地[1-2]，近年來逐漸馴化為家種，于四川省瀘州市古藺縣境內(nèi)大量種植。

目前關(guān)于趕黃草的化學(xué)、藥理、臨床研究已取得一定進(jìn)展[3-9]，以其為原料開發(fā)的肝蘇片、肝蘇顆粒、肝蘇膠囊已在臨床得到廣泛應(yīng)用[10-11]，有關(guān)趕黃草及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)多為單一的槲皮素、沒食子酸或總黃酮測(cè)定[12-15]。本研究采用高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定趕黃草中槲皮素和山柰酚的含量，為有效控制趕黃草及其制劑的質(zhì)量，促進(jìn)其進(jìn)一步開發(fā)應(yīng)用提供技術(shù)支持。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀，美國(guó)安捷倫公司；梅特勒XS205DU電子天平，瑞士Mettler toledo公司；B3200S-T型超聲波清洗器，上海必能信超聲有限公司；MILLI Q超純水系統(tǒng)，美國(guó)Millipore公司。

槲皮素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)100081-200406）；山柰酚對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110861-2004050）。趕黃草分別采自四川省古藺縣、四川省成都市新都區(qū)、甘肅省康縣、甘肅省天水市，由甘肅省食品藥品檢驗(yàn)所楊玲霞副主任藥師鑒定為虎耳草科扯根菜屬植物扯根菜Penthorum chinense Pursh.的干燥全草。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

表2　山柰酚加樣回收率試驗(yàn)

2.10 樣品測(cè)定結(jié)果

采用本試驗(yàn)所建立的方法對(duì)5批趕黃草樣品中槲皮素和山柰酚含量進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果見表3。

表3　樣品測(cè)定結(jié)果（mg/g，n＝3）

3 討論

趕黃草作為藥食兩用的藥材資源，自明代《救荒本草》至《全國(guó)中草藥匯編》均有收載，以其為原料研究開發(fā)的保健食品也因其解酒醒酒、保肝護(hù)肝作用日益受到重視。趕黃草野生資源遍及全國(guó)24個(gè)省市，但目前僅有四川省瀘州市古藺縣境內(nèi)有大量種植，這一寶貴的自然資源尚未被《中華人民共和國(guó)藥典》收載。因此，應(yīng)用現(xiàn)代科技手段，進(jìn)一步闡明趕黃草的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，提高趕黃草的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)該藥材的進(jìn)一步推廣應(yīng)用具有重要的意義。

趕黃草主要含有槲皮素、山柰酚及其苷等黃酮類化合物。本試驗(yàn)中曾以甲醇超聲提取后直接進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果槲皮素及山柰酚含量低，雜質(zhì)峰多，分離度差。采用本文方法，以甲醇-25％鹽酸溶液（4∶1）為溶劑加熱回流水解提取，槲皮素和山柰酚含量明顯提高，雜質(zhì)峰顯著減少，各成分分離度良好。

水解條件的選擇系參考2010年版《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）垂盆草項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，以甲醇-25％鹽酸溶液（4∶1）為溶劑加熱回流水解1 h。曾對(duì)提取時(shí)間進(jìn)行考察，采用四川省古藺縣1號(hào)樣品分別水解提取30、60、90、120 min，測(cè)定槲皮素含量分別為5.09、5.14、5.13、5.15 mg/g，山柰酚含量分別為0.87、0.92、0.93、0.90 mg/g，結(jié)果表明水解提取1 h即可提取完全。

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Simultaneous Content Determination of Quercetin and Kaempferol in Penthorum Chinense

Pursh by HPLC

LUO Xing-ping1, YANG Ling-xia2(1. Institute of Chemical Engineering, Northwest University

for Nationalities, Lanzhou 730000, China; 2. Institute for Food and Drug Control of Gansu Province, Lanzhou 730070, China)

Objective To establish an HPLC method for the simultaneous content determination of quercetin and kaempferol in Penthorum Chinense Pursh. Methods The HPLC analysis was carried out on Kromasil C18(250 mm× 4.0 mm, 5.0 μm) with a mixture of methanol-0.1％ phosphate (50:50) as the mobile phase. The determination wavelength was set at 360 nm with the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was set at room temperature. Results The quercetin and kaempferol showed good linearity in the range of 0.105 6–2.112 0 μg and 0.023 6–0.472 μg respectively. The average recovery rates of quercetin and kaempferol were 98.46％ (RSD=2.29％) and 98.17％ (RSD=1.99％) respectively. Conclusion The method is accurate and sensitive, which can be used for the content determination of quercetin and kaempferol in Penthorum Chinense Pursh.

Penthorum Chinense Pursh; quercetin; kaempferol; HPLC; content determination

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.03.021

R284.1

A

1005-5304(2016)03-0077-03

中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金項(xiàng)目(zyz2011058)；西北民族大學(xué)科研創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)計(jì)劃（2014年）

（2015-04-09）

（2015-05-06；編輯：陳靜）