水煎提取及濃縮工藝對感冒退熱顆粒有效成分的影響

楊貝貝，王寶華，李萍，季文琴，孟慶卿，施金鈸，李麗娟

1.北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京 100102；2.涉縣中醫(yī)院，河北 涉縣 056400

水煎提取及濃縮工藝對感冒退熱顆粒有效成分的影響

楊貝貝1，王寶華1，李萍1，季文琴1，孟慶卿1，施金鈸1，李麗娟2

1.北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京 100102；2.涉縣中醫(yī)院，河北 涉縣 056400

目的 考察感冒退熱顆粒處方藥材在水煎提取、減壓濃縮、常壓濃縮過程中有效成分表告依春、連翹酯苷A、連翹苷轉移率的變化。方法 感冒退熱顆粒處方藥材水煎提取后，分別進行減壓濃縮和常壓濃縮，采用高效液相色譜法（HPLC）測定不同狀態(tài)下有效成分表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的含量，計算轉移率。結果 水煎提取后，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的轉移率分別為72.97%、29.27%、72.84%，減壓濃縮過程中3種指標性成分轉移率RSD＜2%，濃縮至相同狀態(tài)時，常壓濃縮表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的轉移率分別比減壓濃縮降低了13.51%、7.38%、4.24%。結論 本研究建立了同時檢測表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的HPLC方法，感冒退熱顆粒的制劑工藝應據此選擇合理的提取和濃縮工藝。

感冒退熱顆粒；水煎提??；濃縮；有效成分

感冒退熱顆粒由大青葉、板藍根、連翹及拳參4味中藥組成，具有清熱解毒、疏風解表功效，臨床用于上呼吸道感染、急性扁桃體炎、咽喉炎屬外感風熱、熱毒壅盛證[1]。藥理研究表明，板藍根中的表告依春，連翹中的連翹酯苷A、連翹苷為感冒退熱顆粒的主要抗菌和抗病毒成分[2-4]。本研究采用高效液相色譜法（HPLC）同時測定表告依春、連翹酯苷A、連翹苷含量，考察感冒退熱顆粒處方藥材在水煎提取、減壓濃縮、常壓濃縮過程中3種有效成分轉移率的變化，以期為感冒退熱顆粒的工藝生產及優(yōu)化提供依據。

1 儀器與試藥

島津LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）：SPD-20A二級陣列檢測器（PDA），SIL-20A自動進樣器，DGU-20A5在線脫氣機，CTO-10ASvp柱溫箱和島津LC-solution工作站；KQ-300DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；RE-2000A旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；Sartorious BT 125D型電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；YP6001型電子天平（上海佑科儀器儀表有限公司）；SHZ-Ⅲ循環(huán)水真空泵（上海亞榮生化儀器廠）；0.45 μm微孔濾膜（天津市津騰實驗設備有限公司）。

表告依春、連翹酯苷A、連翹苷對照品（成都曼思特生物科技有限公司，批號分別為MUST-14111807、MUST-14060118、MUST-14052103，純度≥98%），甲醇（色譜純，Fisher公司），磷酸（分析純，北京北化精細化學品有限責任公司），娃哈哈純凈水，自制高純水，其他試劑均為分析純。板藍根、大青葉、連翹、拳參飲片購于北京同仁堂健康藥業(yè)股份有限公司，經北京中醫(yī)藥大學劉春生教授鑒定，分別為十字花科植物菘藍Isatis indigotica Fort.的干燥根、十字花科植物菘藍Isatis indigotica Fort.的干燥葉、木犀科植物連翹Forsythia suspensa（Thunb.）Vahl的干燥果實、蓼科植物拳參Polygonum bistorta L.的干燥根莖。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Purospher STAR C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.02%磷酸水溶液，梯度洗脫（0～17 min，9%A；19 min，32%A；29 min，34%A；39 min，35%A；44 min，40%A；54～60 min，54%A）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為227 nm；檢測溫度為30 ℃。色譜圖見圖1。

圖1 感冒退熱顆粒中3種有效成分HPLC圖

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取表告依春對照

品0.93 mg、連翹苷對照品9.40 mg于50 mL容量瓶中，連翹酯苷A對照品10.06 mg于10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容，即得對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取板藍根藥材粉

末（過四號篩）0.2 g、大青葉藥材粉末（過四號篩）0.2 g、連翹藥材粉末（過五號篩）0.1 g、拳參藥材粉末（過四號篩）0.1 g，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇40 mL，稱定質量，超聲處理（功率400 W，頻率40 kHz）60 min，放冷，靜置10 h，再稱定質量，補足減失的質量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 水煎液、濃縮液供試品溶液的制備按感冒

退熱顆粒處方比例取大青葉、板藍根、連翹、拳參，加8倍量水，煎煮2次，每次1.5 h，合并煎煮液，過濾[1]，得感冒退熱顆粒水煎液，測量準確體積，留取一定量原水煎液，取500 mL水煎液稱重，分別于70 ℃不同程度減壓濃縮、100 ℃常壓濃縮，稱重，將濃縮液用容量瓶稀釋定容至500 mL，精密吸取5 mL上述溶液于25 mL容量瓶中，用50%甲醇定容，靜置10 h，過濾，取續(xù)濾液，作為感冒退熱顆粒處方水煎液、減壓濃縮液和常壓濃縮液的供試品溶液。

2.3 線性關系考察

分別精密吸取表告依春、連翹苷對照品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.8、2.6 mL于10 mL容量瓶中，精密吸取連翹酯苷A對照品溶液0.4、0.8、1.2、2.5、5.0、8.0 mL于10 mL容量瓶中，用50%甲醇定容，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進行HPLC分析，進樣10 μL。以峰面積為縱坐標，對照品進樣量（μg）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，結果見表1。表告依春、連翹酯苷A、連翹苷3種成分在線性范圍內與峰面積均呈良好的線性關系。

表1 線性關系考察結果

2.4 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液10 μL，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的RSD分別為1.59%、0.14%、1.43%，表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗

精密稱取同一批次板藍根、大青葉、連翹、拳參6份，按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，進樣10 μL，測定峰面積，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的RSD分別為1.52%、0.45%、2.01%，表明方法重復性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液10 μL，分別在0、3、6、12、24 h測定峰面積，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的RSD分別為1.57%、0.88%、1.41%，說明供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.7 加樣回收率試驗

稱取板藍根粉末0.2 g、大青葉粉末0.2 g、連翹粉末0.1 g、拳參粉末0.1 g，精密稱定6份，每份精密加入一定量表告依春、連翹酯苷A、連翹苷，制成供試品溶液，測定峰面積，計算加樣回收率。結果表明表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的平均加樣回收率分別為98.24%、99.43%、99.21%，RSD分別為2.41%、2.84%、2.40%，加樣回收率符合要求。

2.8 藥材含量測定

按“2.2.2”項下方法制備6份供試品溶液，進樣10 μL，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，計算表告依春、連翹酯苷A、連翹苷含量分別為0.37、110.30、7.07 mg/g，符合《中華人民共和國藥典》規(guī)定。

2.9 水煎液、濃縮液含量測定

分別取“2.2.3”項下水煎液及濃縮液供試品，進樣10 μL，按“2.1”項下色譜條件測定峰面積，計算表告依春、連翹酯苷A、連翹苷含量及轉移率[水煎液（濃縮液）中該成分含量÷藥材中該成分含量× 100%]，結果見表2。

表2 水煎液、濃縮液中3種成分的含量及轉移率（n＝3）

3 討論

根據表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的極性和溶解度，本試驗考察了甲醇、50%甲醇、水等溶劑的回流提取和超聲提取，發(fā)現用50%甲醇超聲提取較為充分。經紫外全波長掃描，在227 nm下，3個成分有較高吸收。本試驗考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.02%磷酸水溶液、乙腈-0.02%磷酸水溶液等多種溶劑洗脫系統，結果發(fā)現甲醇-0.02%磷酸水溶液作為流動相梯度洗脫時3個有效成分的峰形和分離度均較好。

文獻報道不同廠家不同批次的感冒退熱顆粒中表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的含量差異較大[5-7]，原因可能是藥材來源或生產工藝的差異。本試驗建立了同時檢測表告依春、連翹酯苷A、連翹苷3個有效成分的HPLC方法，并考察了感冒退熱顆粒處方水煎液及濃縮液中有效成分的轉移率，結果顯示，水煎提取后，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的轉移率分別為72.97%、29.27%、72.84%，各成分尤其是連翹酯苷A在提取過程中損失較大，可能與水煎提取不完全及提取溫度較高、時間較長有關。原水煎液由502.1 g減壓濃縮至360.9、189.8、11.9 g的過程中，表告依春、連翹酯苷A、連翹苷的轉移率RSD＜2%，因此，在減壓濃縮過程中3種有效成分幾乎沒有變化；減壓濃縮和常壓濃縮均濃縮至11.9 g時，常壓濃縮時表告依春、連翹酯苷A、連翹苷轉移率分別比減壓濃縮降低了13.51%、7.38%、4.24%，故減壓濃縮較常壓濃縮有利于防止有效成分的損失。本研究對中成藥感冒退熱顆粒的工藝優(yōu)化及質量控制有一定的參考價值。當然，由于樣品量較少，對于大工業(yè)生產是否有同樣的規(guī)律，還有待于今后進一步研究。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2010：1185.

[2] 徐麗華,黃芳,陳婷,等.板藍根中的抗病毒活性成分[J].中國天然藥物,2005,3(6)：359-360.

[3] 胡克杰,徐凱建,王躍紅,等.連翹酯苷體外抗病毒作用的實驗研究[J].中國中醫(yī)藥科技,2001,8(2)：89.

[4] 李雙,王東強,李志軍.連翹主要有效成分的提取與藥理作用[J].黑龍江中醫(yī)藥,2011,40(2)：46-48.

[5] 鄒耀華,劉宇文.HPLC測定感冒退熱顆粒中(R,S)-告依春含量[J].中國現代應用藥學,2011,28(11)：1035-1037.

[6] 李丹,閆靜.HPLC法測定感冒退熱顆粒中表告依春和連翹苷[J].哈爾濱商業(yè)大學學報：自然科學版,2014,30(2)：164-167.

[7] 張煒,張漢明,郭美麗,等.HPLC法測定感冒退熱顆粒(沖劑)中連翹酯苷A的含量[J].中草藥,1999,30(4)：268-270.

Effects of Water-extracting and Concentration Process on Active Ingredients of Ganmao Tuire Granules

YANG Bei-bei1, WANG Bao-hua1, LI Ping1, JI Wen-qin1, MENG Qing-qing1, SHI Jin-bo1,

LI Li-juan2(1. School of Chinese Materia Medica, Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100102, China; 2. Shexian Chinese Medicine Hospital, Shexian 056400, China)

Objective To observe the changes in transfer rates of epigoitrin, forsythoside A and forsythin in Ganmao Tuire Granules prescription medicinal materials by water decoction extraction, vacuum concentration and atmospheric concentration. Methods Prescription medicinal materials from Ganmao Tuire Granules were decocted in water and the decoction was condensed by vacuum and atmospheric concentration process. The contents of epigoitrin, forsythoside A and forsythin at different states were measured by HPLC for transfer rates. Results The transfer rates of epigoitrin, forsythoside A and forsythin were 72.97%, 29.27%, 72.84%, respectively after decocted in water. The RSD of epigoitrin, forsythoside A and forsythin were less than 2% in the process of vacuum concentration. The transfer rates of epigoitrin, forsythoside A and forsythin by atmospheric concentration decreased by 13.51%, 7.38% and 4.24% respectively compared with vacuum concentration when concentrated to the same state. Conclusion The method for simultaneous determination of epigoitrin, forsythoside A and forsythin by HPLC has been established. A more suitable extraction and concentration process should be chosen for the preparation of Ganmao Tuire Granules.

Ganmao Tuire Granules; water decoction extraction; concentration; active ingredients

10.3969/j.issn.1005-5304.2016.01.022

R283.5

A

1005-5304(2016)01-0093-03

2015-04-13）

（

2015-05-05；編輯：陳靜）

王寶華，E-mail：wbaohua1@163.com