• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    RNAi技術(shù)研究現(xiàn)狀及其在柞蠶基礎(chǔ)應(yīng)用研究的前景

    2016-12-17 20:23:53諶苗苗趙春山王鳳成冀萬(wàn)杰李喜升
    北方蠶業(yè) 2016年2期
    關(guān)鍵詞:基因功能注射法柞蠶

    諶苗苗 鐘 亮 趙春山 王鳳成 冀萬(wàn)杰 張 博 李喜升

    (遼寧省蠶業(yè)科學(xué)研究所,遼寧鳳城 118100)

    ?

    RNAi技術(shù)研究現(xiàn)狀及其在柞蠶基礎(chǔ)應(yīng)用研究的前景

    諶苗苗鐘亮趙春山王鳳成冀萬(wàn)杰張博李喜升*

    (遼寧省蠶業(yè)科學(xué)研究所,遼寧鳳城 118100)

    RNAi 技術(shù)目前已在昆蟲基因研究中得到廣泛應(yīng)用,它是由雙鏈 RNA誘發(fā)并最終導(dǎo)致同源 mRNA特異性沉默的過(guò)程。本文對(duì)國(guó)內(nèi)外dsRNA 的設(shè)計(jì)、導(dǎo)入方法及 RNAi 技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)行了綜述,對(duì) RNAi技術(shù)在柞蠶基礎(chǔ)研究中的應(yīng)用作一展望。

    殺螨劑朱砂葉螨卵孵化率毒力

    RNAi (RNA interference) 主要指的是由dsRNA(或siRNA)誘導(dǎo)的對(duì)靶標(biāo)基因mRNA降解,從而導(dǎo)致相應(yīng)蛋白表達(dá)量減少甚至停止的基因沉默現(xiàn)象。它廣泛存在于真菌、植物和動(dòng)物等真核生物中,即參與細(xì)胞防御與分化調(diào)控,還可以抵御病毒和其他外來(lái)核酸的入侵,使生物體自身處于遺傳穩(wěn)定的狀態(tài)。

    RNAi除了具有高特異性及抑制基因表達(dá)的高效性,還具有操作簡(jiǎn)便、實(shí)驗(yàn)成本相對(duì)較低的特點(diǎn)。此外,Bellés發(fā)現(xiàn)在昆蟲中,特別是遺傳操作較難的非模式昆蟲的功能基因研究中可以采用這一技術(shù)輔助研究[1]。 近年來(lái)諸多科學(xué)研究人員采用 RNAi 技術(shù)在昆蟲的基因功能研究、RNAi介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因抗蟲植物以及益蟲疾病控制等方面取得了較顯著的成果[2-5]。

    2001年《Science》雜志將RNAi技術(shù)列為年度科學(xué)十大突破之一??梢?jiàn)作為基因表達(dá)調(diào)控的重要機(jī)制,RNAi已得到科學(xué)界的認(rèn)同和高度重視。最近科學(xué)家已發(fā)現(xiàn)了許多參與RNAi的基因和蛋白質(zhì),這表明RNAi 與細(xì)胞分化及生物發(fā)育密切相關(guān),并且在基因表達(dá)調(diào)控和基因功能研究中發(fā)揮重要的作用[6]。

    1 RNA干擾可能的分子機(jī)制

    目前已知RNAi的作用機(jī)制由siRNA、miRNA、piRNA等small RNA引發(fā),其作用機(jī)制也有所不同[7]。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,對(duì)RNAi作用機(jī)理的研究也取得了一定的進(jìn)展。研究人員發(fā)現(xiàn)RNAi現(xiàn)象在基因轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平、翻譯水平等多個(gè)不同的水平都存在。RNAi可以用兩種分子機(jī)制進(jìn)行解釋,一種機(jī)制是抑制靶mRNA的翻譯,使靶蛋白表達(dá)受阻;另一種機(jī)制是通過(guò)誘導(dǎo)靶基因的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)改變,使靶基因的轉(zhuǎn)錄受阻[6]。RNAi作用過(guò)程大致可以分為起始、效應(yīng)、擴(kuò)增三個(gè)階段,這三個(gè)階段都需要一系列中間物質(zhì)的參與[8]。

    1.1起始階段

    起始階段主要包括dsRNA 的形成和siRNA的產(chǎn)生關(guān)鍵步驟。

    1.1.1dsRNA 的形成

    在RNAi研究中誘導(dǎo)靶標(biāo)基因mRNA沉默的關(guān)鍵分子是相對(duì)于小片段siRNA的長(zhǎng)dsRNA[9],外源DNA、RNA序列均可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生相應(yīng)的dsRNA,但產(chǎn)生的方式有所不同[6]。細(xì)胞可以通過(guò)特定轉(zhuǎn)座子的反向重復(fù)序列產(chǎn)生dsRNA,細(xì)胞中正義和反義RNA的同時(shí)轉(zhuǎn)錄也可產(chǎn)生dsRNA。而RNA病毒需要在RNA聚合酶(RNAdependent RNApolymerases,RdRP)的幫助下,與合成的病毒RNA序列互補(bǔ)鏈結(jié)合形成dsRNA[10]。線蟲可以通過(guò)直接注射或浸泡溶液中等方式引入外源dsRNA[6]。對(duì)某一基因進(jìn)行研究前提是獲得相應(yīng)的mRNA序列信息,因?yàn)楫?dāng)dsRNA進(jìn)入昆蟲細(xì)胞內(nèi)會(huì)被 Dicer 酶切割成siRNA,而作用靶標(biāo)分子必須為mRNA的形式[9]。

    1.1.2siRNA的產(chǎn)生

    siRNA(short interfering RNA, siRNA)也被稱為向?qū)NA(guide RNA),RNAi反應(yīng)由siRNA啟動(dòng)。當(dāng)dsRNA進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)時(shí),長(zhǎng)dsRNA會(huì)被核酸酶RNaseⅢ家族中的Dicer酶,逐步切割成約21-23 nt的由正、反義鏈組成的雙鏈小分子干擾RNA片斷[6]。使靶標(biāo)基因沉默的siRNA長(zhǎng)度一般為19~25 nt,而在這個(gè)階段中RNaseⅢ起著核心作用[10]。作為切割工具的Dicer參與RNaseⅢ的作用必須要結(jié)合dsRNA 的末端才能發(fā)揮作用,一旦這種末端結(jié)合被阻斷,Dicer 的核酸內(nèi)切酶作用將大大削弱。

    1.2效應(yīng)階段

    效應(yīng)階段是指siRNA雙鏈解開(kāi)變成單鏈,反義siRNA和相應(yīng)的蛋白結(jié)合形成具有活性的RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA induced silencing complex, RISC)。RISC能夠識(shí)別與siRNA具有完全互補(bǔ)序列的mRNA,特異地降解mRNA。因此RISC的形成與作用是這一階段的關(guān)鍵。

    1.3擴(kuò)增階段

    從線蟲和植物細(xì)胞RNAi研究得到的經(jīng)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)在 RNA聚合酶的參與下,以第1次dsRNA的降解得到的siRNA的反義鏈為引物,靶mRNA作模板,形成新的dsRNA,再次被內(nèi)切酶Dicer識(shí)別并切斷,形成新的siRNA再作用于另外的靶向mRNA。這樣依次循環(huán)進(jìn)行使RNAi作用信號(hào)在生物體中可以不斷放大。

    2 昆蟲RNAi的導(dǎo)入方法

    柞蠶基礎(chǔ)應(yīng)用研究起步相對(duì)滯后,各種基因功能研究工作開(kāi)展難度較大,現(xiàn)階段RNAi技術(shù)在柞蠶上的應(yīng)用實(shí)例少之又少。但是放眼昆蟲綱,RNAi技術(shù)已經(jīng)取得了顯著的成績(jī)。尤其是對(duì)昆蟲RNAi的導(dǎo)入方法的探索已經(jīng)相對(duì)明朗。

    要利用 RNAi技術(shù)對(duì)昆蟲靶標(biāo)基因進(jìn)行功能分析,實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵技術(shù)就是將dsRNA或siRNA 導(dǎo)入昆蟲體內(nèi)。目前可以通過(guò)傳統(tǒng)微注射磷酸鈣法、電穿孔轉(zhuǎn)染法、脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染等方法將獲得的dsRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞,也可以通過(guò)顯微注射法、壓力滲透導(dǎo)入等方法對(duì)靶基因沉默[6]?,F(xiàn)在昆蟲RNAi導(dǎo)入的環(huán)節(jié)廣泛采用注射和飼喂兩種途徑。

    2.1注射法

    在大部分昆蟲 RNAi研究之中,利用注射法導(dǎo)入dsRNA是常用且有效的方法之一。大多數(shù)人認(rèn)為,只要將dsRNA或siRNA注入到靶標(biāo)細(xì)胞內(nèi),干擾的效果就會(huì)發(fā)生。但事實(shí)上,干涉效率僅取決于可用性的核心干涉RNA[11-12]。

    注射法屬于系統(tǒng)性RNA干擾。首先選取適當(dāng)發(fā)育時(shí)期的研究昆蟲,對(duì)于活動(dòng)能力強(qiáng)的昆蟲進(jìn)行適當(dāng)?shù)氖`。根據(jù)昆蟲血液循環(huán)規(guī)律選取合適注射部位。通過(guò)對(duì)一般昆蟲中進(jìn)行的RNAi試驗(yàn)比較發(fā)現(xiàn),相同dsRNA濃度下齡期相對(duì)小的蟲子誘導(dǎo)RNAi效果更佳一些。但不是對(duì)所有昆蟲的所有基因都是這樣,必須要根據(jù)自己的研究進(jìn)行試驗(yàn)才能明確[9]。不同的昆蟲對(duì)于系統(tǒng)RNA的沉默所需dsRNA或siRNA的劑量存在很大的差異。在大多數(shù)的報(bào)道中,這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)范圍一般都在1~100 μg之間[11]。但這種是多數(shù)情況,有些昆蟲對(duì)雙鏈 RNA有著很強(qiáng)的抵抗力,即使加大劑量,也起不到沉默效果。例如Tabunoki等[13]對(duì)家蠶腸道注射dsRNA發(fā)現(xiàn),但標(biāo)靶蛻皮基因受體沒(méi)有任何的系統(tǒng)沉默效果。此外,注射壓力和注射造成的傷口不可避免的會(huì)激發(fā)昆蟲的免疫反應(yīng),因此研究昆蟲免疫反應(yīng)不宜采取注射方式進(jìn)行RNAi[14]。

    2.2飼喂法

    飼喂法屬于非系統(tǒng)性 RNAi,對(duì)于一些難以采用注射導(dǎo)入dsRNA的昆蟲而言是一種有效的RNAi研究方法,通過(guò)喂食的途徑可以達(dá)到沉默的效果。與直接注射的方法相比,采用喂食的方法使機(jī)體不受損傷,在未來(lái)試驗(yàn)中將得到更好的利用,尤其在轉(zhuǎn)基因植物研究中能夠起到相當(dāng)大的幫助。同時(shí)飼喂法也是一種快速的篩選靶基因的途徑。飼喂法操作相對(duì)簡(jiǎn)單,但是由于研究昆蟲的個(gè)體大小、個(gè)體習(xí)性,以及食下后作用部位、時(shí)間等原因?qū)ξ故车牧?、喂食時(shí)間、喂食次數(shù)的確定還是一個(gè)有待于亟需解決的難題。因此相對(duì)于注射法的直接作用,飼喂法在RNAi研究的的早期的相對(duì)成功率較低,但是現(xiàn)已在多個(gè)昆蟲上取得了明顯的成功。Tian等[15]采用飼喂法再甜菜夜蛾上獲得了很好的試驗(yàn)效果。同時(shí)也有試驗(yàn)證明,對(duì)昆蟲喂食dsRNA后24 h內(nèi)不再喂食,最后取得的干擾效果會(huì)大大加強(qiáng),原因可能是昆蟲處于饑餓狀態(tài)時(shí),吸收的效率會(huì)大大提高[11]。

    3 昆蟲 RNAi的研究現(xiàn)狀

    RNAi作為基因功能的一個(gè)研究手段從問(wèn)世以來(lái)受到多方關(guān)注。隨著RNAi技術(shù)可行性的提高以及操作的簡(jiǎn)單化,RNAi技術(shù)得到廣泛的應(yīng)用。目前在昆蟲上的RNAi技術(shù)也相對(duì)成熟,但是在鱗翅目大蠶蛾科的柞蠶的基礎(chǔ)研究中該技術(shù)應(yīng)用相對(duì)較少,也正因?yàn)槿绱俗跣Q的功能基因的研究還處于起步階段,已知功能的基因數(shù)量較少。所以可以借鑒RNAi技術(shù)在其他昆蟲綱物種取得的經(jīng)驗(yàn)結(jié)合自身特點(diǎn)加以應(yīng)用。

    3.1在基因功能研究上的應(yīng)用

    之前研究人員采用RNAi技術(shù)通過(guò)注射法將類鈣粘蛋白基因?qū)?yīng)的dsRNA導(dǎo)入到小菜蛾幼蟲體內(nèi),48 h后試驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),基因表達(dá)量顯著下降,但到72 h后表達(dá)量逐漸恢復(fù)。 采用免疫印跡法進(jìn)行驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),注射dsRNA 48 h后幼蟲刷狀緣膜囊泡中的類鈣粘蛋白含量明顯下降。此試驗(yàn)結(jié)果為RNAi分析技術(shù)在小菜蛾乃至其他鱗翅目昆蟲基因的功能的研究上提供了參考依據(jù)[14]。Benencourt等在對(duì)天蠶蛾和家蠶研究發(fā)現(xiàn),將dsRNA注射蛹到中發(fā)現(xiàn),RNAi即使可以使卵巢的卵母細(xì)胞呈現(xiàn)出很好的吸收效果,并且影響胚胎表型的生長(zhǎng)[15]。

    RNAi技術(shù)可以作為研究基因功能的一個(gè)手段,科研人員采用RNAi技術(shù)克隆了家蠶Caspase家族基因BmCaspase-X,并對(duì)該基因的功能進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)家蠶BmCaspase-X含有Caspase家族基因所特有的結(jié)構(gòu)位點(diǎn),屬于家族中的一員。但對(duì)該基因的干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明其沒(méi)有表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象[16]。

    3.2生物防治方面應(yīng)用

    現(xiàn)階段在對(duì)新型藥物和農(nóng)藥的研究上已經(jīng)采用了更為先進(jìn)的技術(shù)。這些技術(shù)中有通過(guò)利用昆蟲細(xì)胞、胚胎、幼蟲和成蟲借助RNAi技術(shù)在昆蟲細(xì)胞或個(gè)體模型中直接沉默目標(biāo)基因,從分子水平尋找藥物靶標(biāo)、開(kāi)發(fā)新型農(nóng)藥[17]。Baum利用RNAi和轉(zhuǎn)基因技術(shù)成功培育了能夠表達(dá)與美國(guó)西部玉米根蟲 (western corn rootworm,WCR) 液泡 ATPase編碼基因同源的dsRNA的轉(zhuǎn)基因玉米,增強(qiáng)了玉米對(duì)WCR的抗性,減輕了WCR對(duì)玉米的危害,進(jìn)一步提高玉米產(chǎn)量和質(zhì)量[18]。蜜蜂有在自然養(yǎng)殖條件下容易受 IAPV(Israeli acute paralysis virus以色列急性麻痹病毒)干擾而導(dǎo)致的死亡現(xiàn)象。Hunter等[4]通過(guò)對(duì)蜜蜂的野外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)了與IAPV同源dsRNA,以此推斷通過(guò)RNAi技術(shù)可以幫助減少蜜蜂野外因IAPV的意外死亡,提高蜜蜂自然養(yǎng)殖的數(shù)量。

    4 前景

    柞蠶屬于鱗翅目大蠶蛾科柞蠶屬,其基礎(chǔ)研究相對(duì)于家蠶和果蠅等模式昆蟲較為落后。對(duì)于柞蠶的基因研究比較滯后,基因組還處于研究過(guò)程,各個(gè)基因的功能作用還不完全明確。

    RNAi作為一種在動(dòng)物植物界廣泛應(yīng)用的基因沉默的手段,已經(jīng)在昆蟲多個(gè)物種的基因功能,病蟲害防護(hù)等領(lǐng)域取得可喜的結(jié)果。而柞蠶采用這項(xiàng)技術(shù)研究的報(bào)道相對(duì)較少,因此應(yīng)該將這項(xiàng)技術(shù)應(yīng)用于柞蠶的研究中去。

    昆蟲上應(yīng)用RNAi技術(shù)的示例相對(duì)較多,也取得了較好的結(jié)果。但是依然存在一些關(guān)鍵的問(wèn)題需要解決,例如對(duì)于dsRNA的合成,這是RNAi技術(shù)應(yīng)用的前提,對(duì)于不同的基因結(jié)構(gòu),并不是 dsRNA片段的長(zhǎng)度越長(zhǎng)或者越短沉默效果越好。有研究人員證實(shí)dsRNA長(zhǎng)度在300~520bp之間沉默效果最佳[19],這需要具體昆蟲具體分析參考,借鑒前人的研究結(jié)果設(shè)計(jì)柞蠶最適宜的dsRNA長(zhǎng)度。而siRNA同樣也可以達(dá)到基因沉默的效果,但是合成費(fèi)用相對(duì)較高,因此一般都采用dsRNA進(jìn)行相關(guān)試驗(yàn)。昆蟲介導(dǎo)方式的選擇,注射法認(rèn)為是效果較好的方法,dsRNA可以注射到昆蟲的任何部位,通常選擇在昆蟲的前胸和腹部,相對(duì)于不同的昆蟲注射的部位,注射的時(shí)期,注射的量會(huì)稍有不同。柞蠶四個(gè)不同時(shí)期通??梢赃x擇老熟幼蟲和蛹期進(jìn)行注射。對(duì)于柞蠶的研究要進(jìn)行一系列嘗試性試驗(yàn),弄清時(shí)間、部位、注射劑量的最佳范圍。注射法操作相對(duì)復(fù)雜,需要相關(guān)技術(shù)人員應(yīng)具有一定的試驗(yàn)基礎(chǔ),飼喂法相對(duì)操作簡(jiǎn)單,一般飼喂法是將合成的dsRNA加入到飼料中,但效率不及注射法。因此需要以量取勝,對(duì)于試驗(yàn)的花費(fèi)相對(duì)會(huì)增加。如果選用飼喂法,對(duì)于飼喂的時(shí)間,飼喂的量,其作用時(shí)間等關(guān)鍵的問(wèn)題的研究同樣需要潛心進(jìn)行嘗試。無(wú)論是注射法還是飼喂法在昆蟲上都有大量的成功案例,可以加以借鑒與引用。RNAi在基因功能,信號(hào)傳導(dǎo)通路,基因表達(dá)調(diào)控等多個(gè)領(lǐng)域都能起到一定的基礎(chǔ)的作用,通過(guò)將特定的基因沉默,結(jié)合基因結(jié)構(gòu)研究了解基因的功能,同時(shí)結(jié)合載體連接、精子介導(dǎo)等技術(shù)完成轉(zhuǎn)基因的一部分實(shí)驗(yàn),因此RNAi技術(shù)只是一個(gè)基礎(chǔ)的工具,它可以為后續(xù)的試驗(yàn)以及結(jié)果夯實(shí)基礎(chǔ)。

    柞蠶的基因研究領(lǐng)域必然要采用這一技術(shù),且隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展,該技術(shù)的操作會(huì)越來(lái)越成熟,需要的經(jīng)費(fèi)會(huì)逐漸減少,關(guān)鍵問(wèn)題也會(huì)迎刃而解,今后在柞蠶基礎(chǔ)研究、應(yīng)用研究等多方面肯定會(huì)取得喜人的成績(jī)。

    [1]Bellés X, Beyond Drosophila: RNAi in vivo and functional genomics in insects[J].Annu.Rev.Entomol.2010,55 (1):111-128.

    [2]Baum JA, Bogaert T, Clinton W, et al.Control of coleopteran insect pests through RNA interference[J].Nat.Biotech.2007,25(11):1322-1326.

    [3]Tian H, Peng H, Yao Q, et al.Developmental control of a lepidopteran pest Spodoptera exigua by ingestion of bacteria expressing dsRNA of a non-midgut gene[J].PLoS ONE.2009, 4(7): e6225.

    [4]Hunter W, Ellis J, Hayes J, et al.Large-scale field application of RNAi technology reducing israeli acute paralysis virus disease in honey bees (Apis mellifera, Hymenoptera: Apidae)[J].PLoS Pathog.2010,6(12): e1001160.

    [5]Yao Q, Zhang D, Tang B, et al.Identification of 20-hydroxyecdysone late-response genes in the chitin biosynthesis pathway[J].PLoS ONE.2010,5 (11): e14058.

    [6]葉秋霞.RNAi轉(zhuǎn)基因家蠶抑制BmNPV的抗性研究[D].蘇州大學(xué).2011.

    [7]陳敏.RNAi干涉家蠶AGO蛋白家族的表達(dá)研究[D].河南大學(xué), 2012.

    [8]Dai H, Jiang R, Wang J, et al.Development of a heat shock inducible and inheritable RNAi system in silkworm[J].Biomolecular engineering.2007,24(6):625-630.

    [9]田宏剛,劉同先,張文慶.昆蟲RNAi技術(shù)與方法[J].應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào).2013,50(5):1453-1457.

    [10]張永鳳, 程備久.RNA干涉機(jī)制研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào).2006,12(5):47-49.

    [11]李良德, 劉婕, 姜春來(lái),等.昆蟲RNA效率的影響因素研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)通報(bào),2012(11):38-42.

    [12]Liu QN,Zhu BJ,Dai LS, et al.Overexpression of small heat shock protein 21 protects the Chinese oak silkworm Antheraea pernyi against thermal stress[J].Journal of Insect Physiology.2013,59(8):848-854.

    [13]Tabunoki H, Higurashi S, Ninagi O, et al.A carotenoid-binding protein (CBP) plays a crucial role in cocoon pigmentation of silkworm (Bombyx mori) larvae[J].FEBS Letters.2004,567(2-3):175-178.

    [14]楊廣,尤民生,趙伊英,劉春輝.昆蟲的RNA干擾.2009, 52(10), 1156-1162.

    [15]Tian H, Peng H, Yao Q, et al.Developmental control of a lepidopteran pest Spodoptera exigua by ingestion of bacteria expressing dsRNA of a non-midgut gene[J].PLOS ONE.2009, 4: 225.

    [16]楊中俠, 吳青君, 王少麗, 等.利用RNAi技術(shù)沉默小菜蛾類鈣粘蛋白基因[J].昆蟲學(xué)報(bào).2009 ,52(8): 832-837.

    [17]Betteneourt R, Terenius O, Faye I.Hemolin gene silencing by dsRNA injected into Cecropia pupae is lethal to next generation embryos[J].Insect Molecular Biology.2002, 11(3):267-271.

    [18]張金葉, 趙元莙, 潘敏慧, 等.家蠶Caspase家族基因BmCaspase-X的克隆與功能分析[J].昆蟲學(xué)報(bào),?2015,58(8):919-925.

    [19]何正波, 陳斌, 馮國(guó)忠.昆蟲RNAi技術(shù)及其應(yīng)用[J].昆蟲知識(shí).2009,46(4):525-532.

    [20]Baum JA, Bogaert T, Clinton W, et al.Control of coleopteran insect pests through RNA interference[J].Nature Biotechnology.2007,25(11) : 1322-1326.

    [21]Shakesby AJ, Wallace IS, Isaacs HV, et al.A water specific aquaporin involved in aphid osmoregulation[J].Insect Biochemistry and Molecular Biology.2009,39:1-10.

    Research Status of RNA Interference and its Prospect for Tussah Basic Application Research

    CHEN Miaomiao,ZHONG Liang,ZHAO Chunshan,WANG Fengcheng,JI Wanjie,ZHANG Bo,LI Xisheng*

    (Liaoning Provincial Sericultural Institute, 118100, Fengcheng, Liaoning ,China)

    RNA interference has been widely used in the study of insect genes, which is induced by double-stranded RNA and eventually led to the silence of homogenous mRNA.This paper mainly summarized the design of dsRNA, import methods, applications of RNAi both in domestic and overseas, and prospected the application of RNAi in tussah basic research.

    RNAi; dsRNA; Antheraea pernyi

    諶苗苗(1988—),女,碩士,研究實(shí)習(xí)員,從事柞蠶品種資源保護(hù)。

    李喜升(1970—),男,博士,研究員。

    * 資助項(xiàng)目:現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)(CARS-22);遼寧省科技攻關(guān)項(xiàng)目

    猜你喜歡
    基因功能注射法柞蠶
    板栗外生菌根誘導(dǎo)基因CmNRT3的表達(dá)及功能研究
    吉林省柞蠶產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及發(fā)展對(duì)策思考
    柞蠶繭系統(tǒng)分形研究
    遼寧絲綢(2022年1期)2022-03-29 00:58:38
    柞蠶新品種“川柞3號(hào)”選育報(bào)告
    流動(dòng)注射法測(cè)定水中揮發(fā)酚影響因素探討
    西瓜噬酸菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)hrcQ基因功能分析
    巴中市柞蠶3項(xiàng)地方標(biāo)準(zhǔn)正式實(shí)施
    基因組編輯系統(tǒng)CRISPR—Cas9研究進(jìn)展及其在豬研究中的應(yīng)用
    藥用植物萜類生物合成β—AS基因研究進(jìn)展
    穴位注射法治療血虛受風(fēng)型產(chǎn)后身痛52例臨床探討
    成人黄色视频免费在线看| 青春草视频在线免费观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲成人精品中文字幕电影| 18禁在线播放成人免费| 亚洲成人久久爱视频| 97在线人人人人妻| 熟女电影av网| 99久久中文字幕三级久久日本| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 97精品久久久久久久久久精品| 99热这里只有是精品50| 亚洲欧美精品自产自拍| 大片电影免费在线观看免费| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 久久99热这里只频精品6学生| 免费黄色在线免费观看| 赤兔流量卡办理| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚州av有码| 亚洲va在线va天堂va国产| 高清毛片免费看| 久久鲁丝午夜福利片| 2021天堂中文幕一二区在线观| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国内精品宾馆在线| 久久这里有精品视频免费| 人妻夜夜爽99麻豆av| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲综合精品二区| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 老司机影院毛片| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲色图综合在线观看| 国产91av在线免费观看| 成人免费观看视频高清| 亚洲美女视频黄频| 国产在视频线精品| 成年女人在线观看亚洲视频 | 日本黄色片子视频| 亚洲性久久影院| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产亚洲最大av| 久久久久国产精品人妻一区二区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 国产伦在线观看视频一区| 2022亚洲国产成人精品| 日本av手机在线免费观看| 欧美3d第一页| 国产成人一区二区在线| 国产老妇女一区| 国产精品一区二区在线观看99| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 麻豆国产97在线/欧美| 精品少妇久久久久久888优播| 午夜爱爱视频在线播放| 最近最新中文字幕大全电影3| 麻豆成人av视频| 国产黄色免费在线视频| 大码成人一级视频| 久久久国产一区二区| 国产亚洲91精品色在线| 男男h啪啪无遮挡| 成人二区视频| 美女被艹到高潮喷水动态| 免费观看av网站的网址| 日韩欧美精品v在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 久久久久精品久久久久真实原创| a级毛片免费高清观看在线播放| 大香蕉97超碰在线| 乱码一卡2卡4卡精品| av专区在线播放| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲色图综合在线观看| 久久久久网色| 99热全是精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 18+在线观看网站| 成年女人看的毛片在线观看| 日韩大片免费观看网站| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 一本色道久久久久久精品综合| 又大又黄又爽视频免费| 在线观看三级黄色| 午夜免费鲁丝| 成年人午夜在线观看视频| 国产精品蜜桃在线观看| 天堂网av新在线| 搞女人的毛片| 两个人的视频大全免费| 国产精品无大码| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 国产精品人妻久久久久久| 插逼视频在线观看| 免费看a级黄色片| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频 | 蜜臀久久99精品久久宅男| 一级二级三级毛片免费看| 极品教师在线视频| 亚洲第一区二区三区不卡| 日韩av免费高清视频| 欧美xxxx性猛交bbbb| 中国美白少妇内射xxxbb| 欧美日韩视频精品一区| 精品久久久精品久久久| 97超碰精品成人国产| 中文欧美无线码| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲精品国产av蜜桃| 欧美最新免费一区二区三区| 夫妻午夜视频| 女人被狂操c到高潮| 成人免费观看视频高清| 色哟哟·www| 麻豆乱淫一区二区| 欧美+日韩+精品| 一区二区av电影网| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲综合精品二区| 中国美白少妇内射xxxbb| 3wmmmm亚洲av在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲自拍偷在线| 91精品伊人久久大香线蕉| av在线老鸭窝| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久久久久久久大av| 一本一本综合久久| 内射极品少妇av片p| 亚洲怡红院男人天堂| 日本一二三区视频观看| 色5月婷婷丁香| 精品国产乱码久久久久久小说| 欧美成人一区二区免费高清观看| 久久久欧美国产精品| 哪个播放器可以免费观看大片| 一个人观看的视频www高清免费观看| 高清毛片免费看| 国产成人精品久久久久久| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美最新免费一区二区三区| 青春草亚洲视频在线观看| 高清毛片免费看| 亚洲av日韩在线播放| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 中文字幕亚洲精品专区| 国产永久视频网站| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品国产三级国产专区5o| 国产乱来视频区| 中文欧美无线码| 免费观看a级毛片全部| 日韩大片免费观看网站| 青青草视频在线视频观看| 最近手机中文字幕大全| 香蕉精品网在线| 人人妻人人看人人澡| 国产高潮美女av| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日韩亚洲欧美综合| 直男gayav资源| 日韩国内少妇激情av| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 黑人高潮一二区| videossex国产| 高清毛片免费看| 网址你懂的国产日韩在线| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 久久亚洲国产成人精品v| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产亚洲av嫩草精品影院| 97超碰精品成人国产| eeuss影院久久| 免费观看的影片在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 美女被艹到高潮喷水动态| 成人黄色视频免费在线看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 赤兔流量卡办理| 成人国产麻豆网| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产亚洲5aaaaa淫片| 六月丁香七月| 欧美+日韩+精品| 最近最新中文字幕免费大全7| 最近的中文字幕免费完整| 大香蕉久久网| 在线观看三级黄色| 日本三级黄在线观看| 22中文网久久字幕| videossex国产| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲怡红院男人天堂| 久久久久国产精品人妻一区二区| 全区人妻精品视频| 国产精品精品国产色婷婷| av在线app专区| 蜜臀久久99精品久久宅男| 午夜老司机福利剧场| 人人妻人人看人人澡| 最新中文字幕久久久久| 亚洲成人久久爱视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 一级a做视频免费观看| 欧美极品一区二区三区四区| av在线观看视频网站免费| 最后的刺客免费高清国语| 久久久欧美国产精品| 国产成人免费观看mmmm| 久久久久性生活片| 三级国产精品欧美在线观看| 国精品久久久久久国模美| 成年女人在线观看亚洲视频 | 中文字幕久久专区| 亚洲国产av新网站| 久久人人爽人人片av| av福利片在线观看| 久久久久久久精品精品| 亚洲av成人精品一区久久| 欧美日韩在线观看h| 禁无遮挡网站| 伦精品一区二区三区| 亚洲av福利一区| 亚洲精品国产av蜜桃| 日韩一本色道免费dvd| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | av在线播放精品| 精品视频人人做人人爽| 草草在线视频免费看| 久久精品夜色国产| 免费观看av网站的网址| 亚洲高清免费不卡视频| 天天一区二区日本电影三级| 深爱激情五月婷婷| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲怡红院男人天堂| 国产视频内射| 亚洲av日韩在线播放| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 成人午夜精彩视频在线观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 免费看日本二区| 欧美精品一区二区大全| 丰满少妇做爰视频| 成人免费观看视频高清| 国产黄片视频在线免费观看| 91狼人影院| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 中文字幕亚洲精品专区| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| www.av在线官网国产| 成人特级av手机在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 中文欧美无线码| av女优亚洲男人天堂| 久久女婷五月综合色啪小说 | 成年女人在线观看亚洲视频 | 亚洲av中文字字幕乱码综合| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产v大片淫在线免费观看| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲国产最新在线播放| 女人久久www免费人成看片| 日韩强制内射视频| 久久久精品免费免费高清| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美日韩亚洲高清精品| av在线观看视频网站免费| 成年人午夜在线观看视频| .国产精品久久| 午夜免费鲁丝| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 交换朋友夫妻互换小说| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 日本熟妇午夜| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产一级毛片在线| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产色爽女视频免费观看| 久久99精品国语久久久| 少妇熟女欧美另类| 久久久久久九九精品二区国产| 婷婷色综合www| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 视频区图区小说| 国产69精品久久久久777片| 男的添女的下面高潮视频| 久久久久九九精品影院| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 男女下面进入的视频免费午夜| 春色校园在线视频观看| 日日啪夜夜爽| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 各种免费的搞黄视频| 日韩亚洲欧美综合| 午夜免费男女啪啪视频观看| 日本午夜av视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 午夜精品一区二区三区免费看| 男人舔奶头视频| 国精品久久久久久国模美| 99热这里只有是精品50| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美性感艳星| 涩涩av久久男人的天堂| 91久久精品电影网| 黄色怎么调成土黄色| tube8黄色片| freevideosex欧美| 国模一区二区三区四区视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 久久久a久久爽久久v久久| 国产伦精品一区二区三区视频9| 简卡轻食公司| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 黄片无遮挡物在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲国产精品国产精品| av在线观看视频网站免费| 亚洲综合精品二区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 国产黄a三级三级三级人| 高清毛片免费看| 久久热精品热| 色视频在线一区二区三区| 男女那种视频在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 国产中年淑女户外野战色| 九九在线视频观看精品| av国产精品久久久久影院| 99久久精品一区二区三区| 亚洲综合色惰| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 国内精品宾馆在线| 免费大片黄手机在线观看| 高清av免费在线| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲天堂av无毛| 日韩亚洲欧美综合| .国产精品久久| 在线观看美女被高潮喷水网站| a级一级毛片免费在线观看| 美女国产视频在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产精品精品国产色婷婷| av在线老鸭窝| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 三级国产精品片| av在线蜜桃| 国产免费一区二区三区四区乱码| 看黄色毛片网站| 国产精品人妻久久久影院| 久热久热在线精品观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 99热这里只有精品一区| 国产高潮美女av| 美女内射精品一级片tv| 人妻 亚洲 视频| 久久99热这里只有精品18| 韩国av在线不卡| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品女同一区二区软件| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲天堂av无毛| 水蜜桃什么品种好| 国产黄片美女视频| 我要看日韩黄色一级片| 观看免费一级毛片| 国产真实伦视频高清在线观看| 五月天丁香电影| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| av在线天堂中文字幕| 欧美一级a爱片免费观看看| 日韩精品有码人妻一区| 久久人人爽人人片av| 亚洲成人av在线免费| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产 一区 欧美 日韩| 精品久久久久久久久亚洲| 免费黄色在线免费观看| 久久女婷五月综合色啪小说 | 欧美3d第一页| 亚洲av欧美aⅴ国产| 人妻少妇偷人精品九色| 日日啪夜夜撸| 成人鲁丝片一二三区免费| 日本色播在线视频| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久久久久久久大av| 国产一区有黄有色的免费视频| 国产亚洲91精品色在线| 97超碰精品成人国产| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产一区二区三区综合在线观看 | 亚洲av不卡在线观看| 少妇丰满av| 久久久久久久久久久丰满| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 男女那种视频在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 久久久欧美国产精品| 国产精品女同一区二区软件| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 97超视频在线观看视频| 男女无遮挡免费网站观看| 一级毛片电影观看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 嫩草影院新地址| 黄色日韩在线| 大香蕉97超碰在线| 男人舔奶头视频| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲自拍偷在线| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产乱人视频| 国产 一区精品| 亚洲国产精品成人综合色| 中文字幕久久专区| 日韩av免费高清视频| 男人添女人高潮全过程视频| 午夜激情久久久久久久| 九九爱精品视频在线观看| 美女主播在线视频| 热re99久久精品国产66热6| 国产黄色免费在线视频| 亚洲av免费高清在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 丰满少妇做爰视频| 免费av不卡在线播放| 久久韩国三级中文字幕| 岛国毛片在线播放| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 波多野结衣巨乳人妻| 大片电影免费在线观看免费| 国产成人精品一,二区| 日韩制服骚丝袜av| 日本av手机在线免费观看| 日日啪夜夜爽| 亚洲av日韩在线播放| 精品久久久久久久久亚洲| 久久久久国产精品人妻一区二区| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久久久久久精品精品| 国产精品国产av在线观看| 欧美国产精品一级二级三级 | 嘟嘟电影网在线观看| 日本wwww免费看| 国产免费又黄又爽又色| 国产精品精品国产色婷婷| 少妇高潮的动态图| 老司机影院成人| 天堂中文最新版在线下载 | 色哟哟·www| 亚洲欧美一区二区三区国产| 男人舔奶头视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 最新中文字幕久久久久| 啦啦啦啦在线视频资源| 神马国产精品三级电影在线观看| 少妇 在线观看| 亚洲精品视频女| 少妇人妻精品综合一区二区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久网色| 免费观看av网站的网址| 色播亚洲综合网| 国产精品99久久久久久久久| 一级a做视频免费观看| 男人添女人高潮全过程视频| 日韩三级伦理在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| www.色视频.com| 久久精品国产a三级三级三级| 成人国产麻豆网| 熟妇人妻不卡中文字幕| 少妇被粗大猛烈的视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲成人一二三区av| 国产一区二区三区av在线| 国产精品伦人一区二区| 国产一区二区三区av在线| 久久精品久久久久久久性| 国产精品偷伦视频观看了| videos熟女内射| 美女国产视频在线观看| 国产乱人偷精品视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲精品一区蜜桃| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久精品国产自在天天线| 一级爰片在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 大陆偷拍与自拍| 一级黄片播放器| 亚洲美女视频黄频| 久热这里只有精品99| 午夜亚洲福利在线播放| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 99热6这里只有精品| 亚洲美女视频黄频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 91精品伊人久久大香线蕉| 91久久精品电影网| 亚洲精品国产av蜜桃| av又黄又爽大尺度在线免费看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 精华霜和精华液先用哪个| 在线观看人妻少妇| 舔av片在线| 最近中文字幕2019免费版| 国产中年淑女户外野战色| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 成人午夜精彩视频在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲国产欧美在线一区| 天天一区二区日本电影三级| 在线 av 中文字幕| 少妇被粗大猛烈的视频| 美女被艹到高潮喷水动态| 卡戴珊不雅视频在线播放| 午夜福利高清视频| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久久精品94久久精品| 国产男女超爽视频在线观看| 久久久久性生活片| 日韩大片免费观看网站| 伦精品一区二区三区| 亚洲四区av| 婷婷色综合大香蕉| 成人欧美大片| 大片免费播放器 马上看| 午夜福利高清视频| 久久久久久久久久久丰满| 国产精品爽爽va在线观看网站| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 51国产日韩欧美| 免费av毛片视频| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 禁无遮挡网站| 亚洲自拍偷在线| 欧美97在线视频| 69av精品久久久久久| 22中文网久久字幕| 久久久久久久久久久丰满| 久久ye,这里只有精品| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 精品人妻熟女av久视频| 亚洲怡红院男人天堂| 在线播放无遮挡| 免费观看的影片在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲高清免费不卡视频| 久久99精品国语久久久| 黄色欧美视频在线观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 男人舔奶头视频| 国产综合懂色| av国产精品久久久久影院| 中文字幕av成人在线电影| 极品少妇高潮喷水抽搐| 综合色丁香网| 在线观看av片永久免费下载| av在线app专区| 黄色怎么调成土黄色| 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 国产av不卡久久| 一个人看的www免费观看视频| 麻豆乱淫一区二区| 国产成年人精品一区二区| 日本熟妇午夜| 国产美女午夜福利| 一级毛片 在线播放| 亚洲欧美日韩东京热| 国产精品99久久99久久久不卡 | 联通29元200g的流量卡| 天天躁日日操中文字幕| 黄片无遮挡物在线观看| 成人一区二区视频在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品无大码| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲综合精品二区| 美女主播在线视频| 免费看不卡的av| 日韩亚洲欧美综合| 久久久成人免费电影| 免费看光身美女|