零售肉品中產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢測(cè)與定型：以陜西關(guān)中地區(qū)為例

姜艷芬，王清愛

(1 西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2 陜西鎮(zhèn)巴縣畜牧獸醫(yī)工作站， 陜西 鎮(zhèn)巴 723600)

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零售肉品中產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢測(cè)與定型：以陜西關(guān)中地區(qū)為例

姜艷芬1，王清愛2

(1 西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，陜西 楊凌 712100；2 陜西鎮(zhèn)巴縣畜牧獸醫(yī)工作站， 陜西 鎮(zhèn)巴 723600)

【目的】 檢測(cè)陜西關(guān)中地區(qū)肉品中的產(chǎn)氣莢膜梭菌，并進(jìn)行血清型和產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒素(CPE)基因型鑒定，初步掌握該地區(qū)肉品中產(chǎn)氣莢膜梭菌的污染狀況?！痉椒ā?從陜西西安、楊凌、武功等地的超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、肉食品小攤隨機(jī)采集新鮮生熟雞、豬肉及其制品，共計(jì)314份，經(jīng)細(xì)菌分離純化、染色鏡檢、生化試驗(yàn)和單重PCR檢測(cè)確定分離菌株為產(chǎn)氣莢膜梭菌，應(yīng)用多重PCR檢測(cè)分離菌株的血清型并進(jìn)行cpe毒素基因檢測(cè)。【結(jié)果】 樣品中產(chǎn)氣莢膜梭菌檢出率為45.86%，且均為A型cpe產(chǎn)氣莢膜梭菌，其中熟肉制品、生鮮肉檢出率分別為50.91%和43.14%；雞肉、豬肉檢出率分別為53.06%和33.90%。【結(jié)論】 陜西關(guān)中地區(qū)的肉品中存在產(chǎn)氣莢膜梭菌污染，建議針對(duì)可能引起產(chǎn)氣莢膜梭菌污染和大量繁殖的環(huán)節(jié)采取更有效的預(yù)防措施。

產(chǎn)氣莢膜梭菌；多重PCR；零售肉品檢測(cè)；菌株血清型

產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)是一種條件性致病菌，廣泛存在于自然界的水源、土壤及人和動(dòng)物腸道之中,它主要引起人的食物中毒[1-2]、抗生素相關(guān)性腹瀉(Antibiotic-associated diarrhea，AAD)及動(dòng)物的腹瀉[1]和猝死癥等，嚴(yán)重威脅動(dòng)物及人類公共衛(wèi)生安全。產(chǎn)氣莢膜梭菌感染家禽后主要引發(fā)壞死性腸炎(Necrotic enteritis，NE)，該病是雞的一種非常重要的經(jīng)濟(jì)性疾病，發(fā)病率可達(dá)30%以上，病死率18%～31%，世界范圍內(nèi)所有的家禽生產(chǎn)國(guó)均有報(bào)道，估計(jì)每年能造成國(guó)際家禽業(yè)損失約20億美元[3-4]。產(chǎn)氣莢膜梭菌腸毒素(CPE)主要由A 型產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生，部分C 型、D 型、E型也能產(chǎn)生[5-6]，是該菌非常重要的一種致病毒素，可致人食物中毒及多種動(dòng)物的腹瀉(ADD)和非食物中毒性胃腸道疾病[1,7]。目前在西方國(guó)家，由 A 型cpe+產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的食物中毒病例已位居食物中毒病例的第2 位[1]，占總病例的10%，在美國(guó)約占細(xì)菌性食物中毒的30%，每年因該菌引起的食物中毒約近10 000人[8]。

國(guó)內(nèi)鮮有產(chǎn)氣莢膜梭菌引起食物中毒的相關(guān)報(bào)道[9]，肉品中產(chǎn)氣莢膜梭菌的污染[10-11]及該菌與食物中毒關(guān)系的系統(tǒng)研究也較少[12]。尤其隨著社會(huì)的發(fā)展，人們生活節(jié)奏的加快和生活方式的變化，以及衛(wèi)生條件和飲食習(xí)慣等因素的影響，有必要對(duì)肉品中產(chǎn)氣莢膜梭菌對(duì)人類健康的危險(xiǎn)性進(jìn)行評(píng)估。因此，了解和掌握生鮮雞、豬肉類及其制品中產(chǎn)氣莢膜梭菌的污染狀況，對(duì)改善我國(guó)畜禽養(yǎng)殖和保證肉類產(chǎn)品質(zhì)量安全性，進(jìn)而保護(hù)人類健康有重要意義。本研究隨機(jī)采集不同地區(qū)、不同來(lái)源、不同種類生熟肉品，進(jìn)行產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離和純化，并應(yīng)用多重PCR對(duì)菌型進(jìn)行鑒定，以初步了解和掌握肉類產(chǎn)氣莢膜梭菌的菌型、動(dòng)態(tài)分布以及攜帶的毒素基因，從而預(yù)測(cè)肉制品引起人類食物中毒的可能性，為產(chǎn)氣莢膜梭菌引起疾病的流行病學(xué)研究提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)菌株 產(chǎn)氣莢膜梭菌B型菌(CVCC56)、 C型菌(CVCC59)、 D型菌(CVCC84)、E型菌(CVCC90)均購(gòu)于中國(guó)獸醫(yī)微生物菌種保藏中心；產(chǎn)氣莢膜梭菌A型菌由西北農(nóng)林科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 試劑及培養(yǎng)基 10×buffer (含Mg2+)、TaqDNA聚合酶、dNTPs、DL2000 DNA Ladder均為中國(guó)Thermo Scientific公司產(chǎn)品，Tris Base為美國(guó)Angus chemical公司產(chǎn)品，EDTA為美國(guó)Amresco公司產(chǎn)品，AN025A厭氧產(chǎn)氣袋為英國(guó)OXOID公司產(chǎn)品。

液體巰基乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTG)、TSC瓊脂(Tryptose Sulfite-Tyloserine Agar )、營(yíng)養(yǎng)瓊脂，均為北京奧博星生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；5%鮮血-葡萄糖-瓊脂平板、牛乳發(fā)酵試驗(yàn)培養(yǎng)基等，均按常規(guī)方法制備。

1.1.3 儀器設(shè)備 YQX-Ⅱ厭氧培養(yǎng)箱，寧波江南儀器廠；AG0025A厭氧罐，英國(guó)OXOID公司；50i顯微成像系統(tǒng)，上海光學(xué)儀器進(jìn)出口有限公司；C1000 PCR擴(kuò)增儀，德國(guó)Bio-RAD公司；EPS-300電泳儀和DYY-1型水平電泳槽，北京六一儀器廠；Gene genius凝膠成像系統(tǒng)，美國(guó)SYNGENE公司；GNP 9080電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海景宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；AUY220分析天平，Sartorius公司；微量移液器3111，德國(guó)Eppendorf公司。

1.2 方 法

1.2.1 樣品采集 2013-03-2014-06分別從陜西楊凌區(qū)、武功縣、西安市等地連鎖超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、肉食品小攤無(wú)菌隨機(jī)采集鮮肉和冷鮮肉(雞肉、豬肉)及臘腸、臘肉、鹵雞爪等生熟肉制品共計(jì)314份，每個(gè)攤點(diǎn)、每種樣品僅采集1份，樣品密封并放至冰盒保存，盡快送至實(shí)驗(yàn)室。

1.2.2 細(xì)菌的分離與純化 分別無(wú)菌稱取約25 g樣品，將樣品用滅菌后的手術(shù)剪剪碎置于無(wú)菌均質(zhì)袋，按照(1∶5)～(1∶10) 的比例(質(zhì)量體積比)加入液體巰基乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTG)，用拍擊式均質(zhì)器拍打1～2 min制成樣品勻液，37 ℃厭氧培養(yǎng)24 h，然后在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下將有氣泡產(chǎn)生的培養(yǎng)物劃線接種至含有體積分?jǐn)?shù)5%鮮血-葡萄糖-瓊脂平板上，37 ℃厭氧培養(yǎng)24～48 h。挑取在5%鮮血-葡萄糖-瓊脂平板上呈灰色的有典型雙溶血環(huán)現(xiàn)象的特征菌落涂片、革蘭氏染色、鏡檢。將鏡檢疑似產(chǎn)氣莢膜梭菌再劃線接種于TSC瓊脂培養(yǎng)基，42 ℃厭氧培養(yǎng)24 h后挑取典型的黑色菌落，1/2接種在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上，置于37 ℃有氧條件下培養(yǎng)24 h，檢測(cè)該菌是否純化；另1/2接種于5%鮮血-葡萄糖-瓊脂平板，43 ℃厭氧培養(yǎng)24 h，取出后置于有氧環(huán)境1 h，染色鏡檢并觀察菌落特征。每個(gè)樣品選擇2～3個(gè)純化菌株用于試驗(yàn)。無(wú)菌挑取已純化的菌落接種于含鐵牛乳培養(yǎng)基,37 ℃培養(yǎng)8～10 h后，觀察并記錄結(jié)果。

1.2.3 分離菌株的單一PCR檢測(cè) 引物序列參考文獻(xiàn)[13]，cpa-F：5′-ATGAGCTTCAATTAGGTTCTACT-3′；cpa-R：5′-ATCAGCATAAAAATCCTCATT-3′。引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成，預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為398 bp。分別以分離純化菌株的單個(gè)菌落的1/2作為PCR反應(yīng)模板。PCR反應(yīng)體系為25 μL：10×PCR buffer 2.5 μL，25 mmol/L MgCl22 μL，2.5 mmol/L dNTPs 2 μL，上、下游引物各0.5 μL(10 μmol/L)，Taq酶0.3 μL，分別挑取各純化菌株的單個(gè)菌落的1/2溶于PCR反應(yīng)體系作為模板，加滅菌ddH2O補(bǔ)至25 μL。PCR擴(kuò)增程序：先在PCR管中加入除Taq酶以外的其他成分94 ℃預(yù)變性10 min；冰浴2 min之后加入Taq酶繼續(xù)以下循環(huán)，94 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，30個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)滅菌ddH2O作模板為陰性對(duì)照，A型產(chǎn)氣莢膜梭菌標(biāo)準(zhǔn)菌株菌落為陽(yáng)性對(duì)照。取10 μL PCR產(chǎn)物與2 μL 6×loading buffer混合,在2%瓊脂糖凝膠中以90 V的電壓電泳40 min，用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果并拍照。

1.2.4 產(chǎn)氣莢膜梭菌分離菌株血清型鑒定 將經(jīng)單一PCR檢測(cè)確定為產(chǎn)氣莢膜梭菌菌落的另1/2無(wú)菌接種于5%鮮血-葡萄糖-瓊脂平板或FTG培養(yǎng)基，37 ℃ 培養(yǎng)24 h，應(yīng)用西北農(nóng)林科技大學(xué)獸醫(yī)公共衛(wèi)生與畜禽產(chǎn)品安全實(shí)驗(yàn)室已建立的多重PCR方法[14]進(jìn)行菌株的血清型鑒定。根據(jù)產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生α、β、ε、ι 4種致死性毒素(編碼基因分別為cpa、cpb、etx、ia)的能力，將其分為5種血清型，即A、B、C、D、E型。其中，A型產(chǎn)生α毒素，B型產(chǎn)生α、β和ε毒素，C型產(chǎn)生α和β毒素，D型產(chǎn)生α和ε毒素，E型產(chǎn)生α和ι毒素。分別以cpa、cpb、etx、ia毒素基因的特異性基因序列為目標(biāo)片段，參考文獻(xiàn)[14-17]設(shè)計(jì)并合成引物(表1)。 多重PCR反應(yīng)體系為25 μL：10×PCR buffer 2.5 μL，25 mmol/L MgCl22 μL，2.5 mmol/L dNTPs 3 μL，上、下游混合引物(cpa、cpb、etx、ia)各為 2.15 μL，Taq酶0.5 μL，分別挑取經(jīng)單一PCR鑒定為產(chǎn)氣莢膜梭菌的單個(gè)菌落(或1 μL 24 h培養(yǎng)的FTG菌液)溶于PCR體系作為反應(yīng)模板，滅菌ddH2O 補(bǔ)至25 μL。PCR擴(kuò)增程序：先在PCR管中加入除Taq酶以外的其他成分94 ℃預(yù)變性10 min；冰浴2 min之后加入Taq酶繼續(xù)以下循環(huán)，94 ℃ 1 min，52 ℃ 1 min 30 s，72 ℃ 1 min 50 s，30個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。試驗(yàn)設(shè)滅菌ddH2O作模板為陰性對(duì)照，B+E型產(chǎn)氣莢膜梭菌標(biāo)準(zhǔn)菌株菌落為陽(yáng)性對(duì)照。取10 μL PCR產(chǎn)物與2 μL 6×loading buffer混合,在2%瓊脂糖凝膠中以90 V的電壓電泳40 min，用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果并拍照。

表 1 PCR引物序列

1.2.5cpe毒素基因的檢測(cè) 引物序列參考文獻(xiàn)[17](表1)，由南京金斯瑞生物科技有限公司合成，預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為233 bp。PCR反應(yīng)體系為25 μL：10×PCR buffer 2.5 μL，25 mmol/L MgCl22 μL，2.5 mmol/L dNTPs 2 μL，10 μmol/L上、下游引物各1 μL，Taq酶1 μL，分別挑取各菌株單個(gè)菌落作為PCR反應(yīng)模板，滅菌ddH2O補(bǔ)至25 μL。PCR擴(kuò)增程序：先在PCR管中加入除Taq酶以外的其他成分94 ℃預(yù)變性5 min；冰浴 2 min之后加入Taq酶繼續(xù)以下循環(huán)，94 ℃ 50 s，56 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，30 個(gè)循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。試驗(yàn)同時(shí)設(shè)滅菌ddH2O為陰性對(duì)照，PCR產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠中以90 V的電壓電泳40 min，用凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果并拍照。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

所有樣品的產(chǎn)氣莢膜梭菌的檢出率均運(yùn)用IBM SPSS Statistics 21.0χ2檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 分離菌株的培養(yǎng)特征

鏡檢可見G+呈粗桿狀，兩端鈍圓，單個(gè)、成雙或短鏈，有莢膜的梭菌，橫徑稍大于菌體，呈卵圓形梭狀芽胞桿菌(圖1-a)。5%鮮血-葡萄糖-瓊脂平板上呈灰色、邊緣整齊、表面光滑的圓形菌落；在空氣中暴露一段時(shí)間后，菌落變?yōu)闇\綠色，菌落周圍呈大小不一的單環(huán)或雙環(huán)溶血(圖1-b)。TSC瓊脂平板上形成黑色菌落，且菌落周圍有乳白色濁環(huán)(圖1-c)。牛乳“暴烈發(fā)酵”試驗(yàn)陽(yáng)性(圖1-d)。初步從314份樣品中分離鑒定出396株疑似產(chǎn)氣莢膜梭菌菌株。

a.顯微鏡下的形態(tài)特征(10×100)；b.5%鮮血-葡萄糖-瓊脂平板上的菌落特征；c.TSC瓊脂平板上的菌落特征；d.牛乳“暴烈發(fā)酵”(左為陰性對(duì)照，右為陽(yáng)性)

2.2 分離菌株的單一PCR檢測(cè)結(jié)果

所有分離菌株均擴(kuò)增出了與陽(yáng)性對(duì)照片段長(zhǎng)度一致的約398 bp的目的條帶(圖2)，確定這些分離菌株均為產(chǎn)氣莢膜梭菌。

M.DL2000 DNA Ladder;1.A型標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)氣莢膜梭菌菌株Standard Clostridium perfringens type A;

2.3 產(chǎn)氣莢膜梭菌分離菌株的血清型鑒定結(jié)果

產(chǎn)氣莢膜梭菌分離菌株的血清型鑒定結(jié)果顯示，以B+E型產(chǎn)氣莢膜梭菌標(biāo)準(zhǔn)菌株(攜帶α、β、ε、ι)為陽(yáng)性對(duì)照，396株分離菌株均僅擴(kuò)增出1條325 bp的特異性條帶(圖3)，確定本研究分離到的菌株均為A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。

2.4cpe毒素基因檢測(cè)結(jié)果

cpe毒素基因檢測(cè)結(jié)果表明，396株A型菌均未擴(kuò)增出預(yù)期目的條帶，僅陽(yáng)性對(duì)照E型參考菌株擴(kuò)增出了與預(yù)期目的條帶長(zhǎng)度(約233 bp)一致的條帶(圖4)，說(shuō)明所有的分離菌株均為cpe-菌。

1～2.分離菌株;M.DL2000 DNA Ladder(從上至下依次為2 000，1 000，750，500，250，100 bp);3.E型菌株1-2.Isolates;M.DL2000 DNA Ladder (from top to bottom:2 000,1 000,750,500,250,100 bp);3.Clostridium perfringens type E

本研究從314份生熟鮮肉及肉制品中共分離鑒定出396株產(chǎn)氣莢膜梭菌，檢出率達(dá)45.86%。雞肉樣品的檢出率為53.06%(104/196)，其中雞翅樣品的檢出率最高，為62.50%(30/48)，雞脯樣品的檢出率最低，為46.81%(22/47)，但雞翅、雞脯、雞腿、雞爪的檢出率之間均無(wú)顯著性差異(表2)。豬肉檢出率33.90%(40/118)，其中臘肉檢出率為0，鮮肉檢出率為31.43%，臘腸檢出率為50.0%(29/58)；臘肉與鮮肉和臘腸檢出率之間差異極顯著(P<0.01)，但是鮮肉與臘腸之間的檢出率差異不顯著(P>0.05)。雞肉與豬肉檢出率差異極顯著(P<0.01)(表2)。熟肉制品檢出率為50.91%(56/110)，生鮮肉樣品檢出率為43.14%(88/204)，二者無(wú)顯著性差異(P>0.05)。

表 2 肉品中產(chǎn)氣莢膜梭菌分離與鑒定結(jié)果

注：同列數(shù)據(jù)后標(biāo)不同大寫字母表示χ2檢驗(yàn)有極顯著性差異(P<0.01)。

Note:Different capitalization superscripts in each column mean significant difference by chi-squared test (P<0.01).

3 討 論

本研究通過(guò)對(duì)314份肉樣進(jìn)行細(xì)菌分離純化、血清型鑒定和cpe毒素基因的檢測(cè)，初步明確了陜西關(guān)中部分地區(qū)日常肉品中產(chǎn)氣莢膜梭菌菌型的污染情況。從肉品種類來(lái)看，雞肉檢出率為53.06%，其中以雞翅檢出率最高(62.50%)，雞脯檢出率最低(46.81%)；豬肉檢出率為33.90%，其中臘腸、鮮豬肉、臘肉的檢出率分別為50.0%，31.43%和0，由此看來(lái)，無(wú)論豬肉還是雞肉都存在產(chǎn)氣莢膜梭菌的污染，這可能是由于生雞和生豬的屠宰加工、運(yùn)輸貯藏以及肉制品加工過(guò)程受到了不同程度的污染。

產(chǎn)氣莢膜梭菌的芽孢耐熱性很強(qiáng)，90 ℃、30 min才能將其殺死，理論上講，熟肉制品檢出率應(yīng)該小于生肉，因?yàn)榻?jīng)過(guò)烹飪、蒸煮等處理微生物會(huì)被完全或部分殺死，但本研究檢測(cè)結(jié)果顯示熟肉污染率(50.91%)高于生肉(43.14%)，這可能是熟肉在蒸煮加工過(guò)程中并未完全殺死肉品中產(chǎn)氣莢膜梭菌，肉品加工成熟后儲(chǔ)藏時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或存放在較高溫度使得細(xì)菌能夠繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖，以及盛放的容器或包裝受到污染等原因所致。值得注意的是，臘肉樣品中未能分離到產(chǎn)氣莢膜梭菌，這可能與臘肉的加工方法有關(guān)。因此，食品加工過(guò)程中應(yīng)當(dāng)采取更加嚴(yán)格的控制措施，降低加工后期污染的可能性。

本研究結(jié)果表明，關(guān)中地區(qū)的雞肉中產(chǎn)氣莢膜梭菌污染較為嚴(yán)重，檢出率為53.06%(104/196)，比梁光軍等[10]檢測(cè)的鮮雞肉中該菌的分離率25%(7/28)高，但比國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道該菌的分離率66%～100%[17-19]低，說(shuō)明我國(guó)零售雞肉的產(chǎn)氣莢膜梭菌的污染程度與西方國(guó)家相比較低，這可能與我國(guó)目前還普遍將抗生素作為預(yù)防用藥添加在飼料中長(zhǎng)期使用的飼養(yǎng)管理方式有關(guān)。本研究分離到的產(chǎn)氣莢膜梭菌均為A型產(chǎn)氣莢膜梭菌，未發(fā)現(xiàn)其他各型(B、C、D、E型)產(chǎn)氣莢膜梭菌，結(jié)果與前期的報(bào)道[10,17-18]相吻合。

A型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的人類食物中毒與CPE毒素有關(guān)[20]，約0～5%的產(chǎn)氣莢膜梭菌攜帶cpe基因[2,21]，美國(guó)[22]、日本[23]、土耳其[18]的產(chǎn)氣莢膜梭菌分離cpe基因攜帶率分別為1/147，1/55和1/545。但是本研究在分離到的396株產(chǎn)氣莢膜梭菌中并未檢測(cè)到cpe基因。這與Nowell等[17]在零售雞肉樣品中未檢測(cè)到cpe基因陽(yáng)性菌株，Cooper等[19]在零售雞肉的肝臟分離菌株中也未檢測(cè)到cpe基因結(jié)果吻合，說(shuō)明cpe基因在雞肉的分離菌株中不常見。本研究結(jié)果與cpe基因在雞源性菌株較少見的研究結(jié)果相符。說(shuō)明雞肉不是引起人類食物中毒的產(chǎn)氣莢膜梭菌的主要來(lái)源。

本研究中鮮豬肉產(chǎn)氣莢膜梭菌檢出率為31.43%(11/35)，與江蘇省的結(jié)果(37.9%)[10]較為相近，但高于貴陽(yáng)市的分離率(6.25%)[11]。梁光軍等[10]在熟豬肉制品和熟魚制品中共檢出了2株cpe+-A型產(chǎn)氣莢膜梭菌，檢出率為2.1%。而本研究中并未在豬肉樣品中檢測(cè)到攜帶cpe基因的A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。本試驗(yàn)在E型菌株中檢測(cè)到cpe基因，證明E型菌也能產(chǎn)生CPE毒素[5-6,24]。

產(chǎn)氣莢膜梭菌作為一種重要的致人食物中毒的病原菌，其危害不容小覷，疾控和衛(wèi)生監(jiān)督人員在食物中毒處置工作中對(duì)此菌應(yīng)引起足夠的重視。建議衛(wèi)生行政部門及政府決策機(jī)構(gòu)針對(duì)可能引起產(chǎn)氣莢膜梭菌污染和大量繁殖的環(huán)節(jié)采取更有效的預(yù)防措施，以保證廣大民眾的身心健康。

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Detection and typing ofClostridiumperfringensfrom retail meat in Guanzhong,Shaanxi

JIANG Yanfen1,WANG Qing’ai2

(1CollegeofVeterinaryMedicine,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China；2ZhenbaAnimalHusbandryandVeterinaryStation,Zhenba,Shaanxi723600,China)

【Objective】 To understand the contamination and distribution ofClostridiumperfringens(C.perfringens) in raw or cooked retailed meat in Guanzhong,Shaanxi,C.perfringensstrains were isolated from collected retailed meat samples,and serotyped using established multi-PCR. 【Method】 A total of 314 samples including fresh raw meat (chicken and pork),cooked chicken claws,sausage and preserved pork were purchased randomly from supermarkets,farmer’s markets and food stands in Xi’an,Yangling and Wugong.Samples were isolated and purified as suspectC.perfringensstrains.The isolates ofC.perfringenswere then confirmed using Gram staining,biochemical test,PCR amplification and serotyped by the developed multiplex PCR and genotyped bycpegene detection.【Result】 The isolation rate ofC.perfringenswas 45.86% and all isolates were classified ascpe-type A.C.perfringensidentification rates in cooked meat samples and raw fresh meat samples were 50.91% and 43.14%,while the rates in chicken and pork were 53.06% and 33.90%,respectively.【Conclusion】 This study demonstrated the presence ofC.perfringensin meat products in Guanzhong,Shaanxi,and it is suggested to take more effective preventive measures to control contamination and mass proliferation ofC.perfringens.

Clostridiumperfringens;multi-PCR;retail meat detection;strain serotype

時(shí)間:2016-10-09 10:08

10.13207/j.cnki.jnwafu.2016.11.008

網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20161009.1008.016.html

2015-06-02

西北農(nóng)林科技大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)創(chuàng)新專項(xiàng)(QN2012019)

姜艷芬(1972-)，女，陜西米脂人，副教授，博士，主要從事分子病原學(xué)與免疫學(xué)研究。E-mail:jyf1111@nwsuaf.edu.cn

S855.1

A

1671-9387(2016)11-0055-06