• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    循環(huán)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性及其意義

    2016-12-16 20:16:21張凱莉高小妹綜述欽倫秀1審校

    張凱莉 高小妹(綜述) 欽倫秀1,2,△(審校)

    (1復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院普外科 上?!?00040; 2復(fù)旦大學(xué)腫瘤轉(zhuǎn)移研究所 上海 200040; 3復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院 上?!?00032)

    ?

    循環(huán)腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性及其意義

    張凱莉3高小妹3(綜述)欽倫秀1,2,3△(審校)

    (1復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院普外科上海200040;2復(fù)旦大學(xué)腫瘤轉(zhuǎn)移研究所上海200040;3復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院上海200032)

    【摘要】循環(huán)腫瘤細(xì)胞 (circulating tumor cells,CTCs)是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要因素。近10年隨著CTCs檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步,發(fā)現(xiàn)CTCs的數(shù)目與患者預(yù)后密切相關(guān);根據(jù)CTCs的生物學(xué)特性進(jìn)行亞群分型能夠更合理地指導(dǎo)個(gè)體化治療方案的選擇。

    【關(guān)鍵詞】循環(huán)腫瘤細(xì)胞;腫瘤轉(zhuǎn)移;腫瘤治療

    腫瘤細(xì)胞的播散是腫瘤發(fā)展進(jìn)程中的重要特征[1],腫瘤細(xì)胞從原發(fā)病灶脫落,浸潤基底膜,穿過血管壁進(jìn)入血液循環(huán)形成循環(huán)腫瘤細(xì)胞 (circulating tumor cells,CTCs),隨著血液循環(huán)到達(dá)并定植在遠(yuǎn)端器官或重新定植到原發(fā)病灶,導(dǎo)致原位復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)端器官轉(zhuǎn)移病灶的形成[2-3]。早在1869年Thomas Ashworth首次發(fā)現(xiàn)腫瘤患者外周血中存在CTCs[4]。CTCs作為轉(zhuǎn)移病灶的種子前體,在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中扮演了十分重要的作用。近10年,由于其分離和鑒定技術(shù)的發(fā)展,CTCs再次成為腫瘤轉(zhuǎn)移研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。2015年至今關(guān)于CTCs的研究平均以每周25篇的速度呈現(xiàn)在PubMed,同時(shí)ClinicalTrials.gov上顯示近720項(xiàng)以CTCs作為腫瘤生物學(xué)標(biāo)記物的臨床試驗(yàn)。越來越多的研究結(jié)果表明CTCs數(shù)目和其生物學(xué)特性與腫瘤轉(zhuǎn)移緊密相關(guān),且具有極為重要的臨床指導(dǎo)意義。本文就CTCs的富集分離檢測(cè)技術(shù)、生物學(xué)特征及潛在的臨床應(yīng)用這三方面對(duì)CTCs的研究現(xiàn)狀作一綜述。

    CTCs的富集分離及鑒定的方法

    CTCs的富集分離的方法主要基于CTCs不同于血細(xì)胞的生物學(xué)和物理學(xué)的特征。

    基于生物學(xué)的分離方法在免疫磁珠富集分離方法問世之前,最常用的CTCs檢測(cè)方法是基于CTCs表面標(biāo)記物的流式細(xì)胞分選技術(shù) (FACS),然而流式細(xì)胞分選技術(shù)靈敏度低、假陽性高,成為CTCs后續(xù)分析的一大障礙。之后免疫磁珠富集分離法是根據(jù)CTCs和血細(xì)胞差異表達(dá)的蛋白標(biāo)志物進(jìn)行陽性富集和陰性富集。首先根據(jù)CTCs和血細(xì)胞在胚胎發(fā)育過程中來源于不同的胚層。CTCs來源內(nèi)胚層具有上皮樣特性,高表達(dá)表皮標(biāo)志物,如胞質(zhì)上皮細(xì)胞角蛋白家族 (cytokeratins,CKs)和上皮細(xì)胞黏附分子 (epithelial cell adhesion molecule,EpCAM),其中EpCAM在CTCs中特異性高表達(dá)而在血細(xì)胞中不表達(dá),能夠有效地將完整的CTCs從血細(xì)胞中分離出來?;谶@一原理將抗EpCAM抗體偶聯(lián)到磁珠上,在磁場(chǎng)力的作用下將EpCAM高表達(dá)的CTCs從血細(xì)胞中分離出來。2004年研發(fā)的CellSearch system (Veridex)運(yùn)用這一原理富集晚期乳腺癌、前列腺癌和結(jié)直腸癌患者外周血中的CTCs,然后用CK8、CK18、CK19的混合抗體進(jìn)行熒光染色鑒定,同時(shí)對(duì)僅在白細(xì)胞中高表達(dá)的CD45熒光染色,排除白細(xì)胞對(duì)CTCs判定的干擾。但CellSearch system (Veridex)檢測(cè)到CTCs的數(shù)量極少,最近基于陽性選擇而研發(fā)的MagSweeper[5],IsoFlux[6],VerIFAST[7]這3項(xiàng)技術(shù)極大地提高了CTCs的檢測(cè)速度和效率。

    美國麻省總院Toner教授等聯(lián)合CTCs的生物學(xué)特性和物理學(xué)特性建立一個(gè)微流控裝置平臺(tái)CTC-chip,如抗原依賴性的免疫磁珠分離的Herringbone-chip[8]。然而,大量的研究證明腫瘤在發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的過程中會(huì)發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化 (epithelial mesenchymal-transition,EMT),即上皮樣標(biāo)志物如EpCAM、E-cadherin的下調(diào),N-cadherin的上調(diào)?;贓pCAM的富集方法在檢測(cè)CTCs可能存在細(xì)胞群體的限制,所以還有學(xué)者用器官特異性的細(xì)胞表面標(biāo)志物或干細(xì)胞標(biāo)志物來富集CTCs,如在乳腺癌中,除了通用的EpCAM,常用的標(biāo)記物還有CK19、HER2、ER、PR和MUC1等,前列腺癌的標(biāo)志物有AR、EGR和PTEN。肝細(xì)胞癌的常用標(biāo)記物有Cytokeratins、EpCAM、ASGPR1、N-cadherin、Vimentin、Gpc3、AFP和albumin等[9]。此外,Toner組根據(jù)流體確定的側(cè)向位移,慣性聚焦和磁導(dǎo)入研發(fā)的CTC-iChip[10],可直接從全血中分離出具有活性的CTCs,回收效率較CellSearch system (Veridex)由1/107顯著提高到1/105。最近,這個(gè)研究團(tuán)隊(duì)又研發(fā)出用于分離CTCs團(tuán)簇的的微流控裝置[11]。對(duì)于CTCs的富集分離不僅吸引生物學(xué)家和物理學(xué)家的興趣,同時(shí)材料科學(xué)家也積極參與CTCs富集分離的研究中。值得一提的是Tseng HR課題組研發(fā)的系列NanoVelcro chips,可通過改變反應(yīng)溫度收集芯片中捕獲的CTCs[12]。

    基于物理學(xué)的富集分離的方法依據(jù)CTCs不同于血細(xì)胞的物理特性如細(xì)胞大小[13]、密度、形變性[14]及載電量進(jìn)行富集分離。

    Vona等[15]根據(jù)HepG2、Hep3B、MCF7、HeLa和LNCaP的大小參數(shù)設(shè)計(jì)了ISET (isolation by size of epithelial tumor cells),可對(duì)1 mL全血中的CTCs進(jìn)行計(jì)數(shù),免疫形態(tài)學(xué)鑒定和分子表征的分析。根據(jù)腫瘤細(xì)胞與白細(xì)胞的密度差異,可進(jìn)行密度梯度離心法進(jìn)行分離,主要用試劑盒OncoQuick plus和Ficoll。這兩種方法要求的血量比較大,一般需要15~30 mL,CTC團(tuán)簇在該方法中可能沉降入紅細(xì)胞層而丟失。物理學(xué)方法分離獲得的CTCs通常會(huì)存在較大的白細(xì)胞污染,直接影響對(duì)CTCs的分子生物學(xué)特性的分析。

    富集分離之后的CTCs的鑒定方法主要根據(jù)腫瘤細(xì)胞基因組的異倍性、轉(zhuǎn)錄組的特異性及標(biāo)志性的蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行最終確定。經(jīng)典的方法集中在染色體的比較基因組雜交 (comparative genomic hybrid,CGH)/DNA或RNA熒光原位雜交 (fluorescenceinsituhybridization,FISH)、實(shí)時(shí)定量PCR (Real-time PCR,RT-PCR),以及CTCs在蛋白質(zhì)水平通過免疫熒光進(jìn)行亞群的分子分型。目前比較成熟的體外CTC富集檢測(cè)系統(tǒng)有CellSearch?system、MagSweeperTM、EPHESIA CTC-chip、CTC-chip、Velcro-like device;體內(nèi)CTC富集系統(tǒng)有CellCollector?、Photoacoustic和Nanodetector。

    CTCs的臨床應(yīng)用及其潛在應(yīng)用價(jià)值2004年,經(jīng)美國FDA認(rèn)證的CellSearch system (Veridex)系統(tǒng)對(duì)轉(zhuǎn)移性乳腺癌[16]、前列腺癌[17]和結(jié)直腸癌[18]患者7.5 mL血樣中進(jìn)行CTCs檢測(cè)計(jì)數(shù),并與患者預(yù)后作相關(guān)分析,發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)治療之前的CTCs可作為預(yù)測(cè)患者預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)。此后,在小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肝癌和肝膽管癌中[19-22],以CellSearch system (Veridex)系統(tǒng)為平臺(tái)檢測(cè)治療前CTCs數(shù)目并分析與患者的預(yù)后相關(guān)性,進(jìn)一步證明CTCs可作為腫瘤預(yù)測(cè)患者預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)。同時(shí),對(duì)外周血單核細(xì)胞通過RT-PCR分析CTCs特異性的EpCAM[23]、Snail[24]的mRNA表達(dá)水平發(fā)現(xiàn),EpCAM或Snail的mRNA豐度也可以作為預(yù)測(cè)肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)。同時(shí)作為患者預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志的血清蛋白標(biāo)志物和CTCs之間是否具有相關(guān)性呢?在前列腺癌中發(fā)現(xiàn),基線CTCs數(shù)目與腫瘤大小,常規(guī)的血清蛋白質(zhì)標(biāo)志物如PSA沒有明顯的相關(guān)性[25-26]。在患者體內(nèi),CTCs不斷從原發(fā)病灶或者是轉(zhuǎn)移病灶進(jìn)入血液循環(huán)[27],所以CTCs的數(shù)目存在時(shí)空的異質(zhì)性。目前,CTCs的數(shù)目被認(rèn)為在治療期間的變化有可能作為評(píng)判治療效果的指標(biāo)。Bidard等[28]開展關(guān)于CTCs在轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者臨床應(yīng)用中的有效性的多中心研究再次證實(shí)治療前CTCs大于5的患者比小于5的患者具有更短的無進(jìn)展生存期和總體生存期,開展治療后,對(duì)患者CTCs實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),相較于治療前的CTCs數(shù)目,在3~5周時(shí)CTCs數(shù)目增加的患者比6~8周CTCs數(shù)目增加的患者的預(yù)后要差,而同一時(shí)間點(diǎn)癌胚抗原和腫瘤抗原濃度變化與患者臨床預(yù)后的相關(guān)性不如CTCs數(shù)目的變化理想。綜上,CTCs數(shù)目的多少及其在治療中數(shù)目的k變化可用于判斷患者的預(yù)后生存情況和治療方案的有效性,但CTCs數(shù)目并不能精準(zhǔn)地指導(dǎo)治療方案的選擇,故在CTCs計(jì)數(shù)的臨床意義研究之后,科學(xué)家將研究方向轉(zhuǎn)向CTCs的生物學(xué)特性研究。

    CTCs的生物學(xué)特性研究在CTC富集分離的技術(shù)日漸成熟后,隨著單細(xì)胞研究技術(shù)的不斷革新,關(guān)于CTC 的研究逐步由探尋某種實(shí)體瘤中CTC數(shù)目與患者預(yù)后的關(guān)系以及藥物療效的監(jiān)測(cè)方面轉(zhuǎn)向CTC的生物學(xué)特征與腫瘤轉(zhuǎn)移。腫瘤細(xì)胞離開原發(fā)瘤,進(jìn)入血液循環(huán),成為單個(gè)細(xì)胞,失去細(xì)胞間相互作用而發(fā)生失巢凋亡。最近在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中發(fā)現(xiàn)抗凋亡蛋白BCL-2在CTCs中高表達(dá),但結(jié)果與預(yù)期相反,具有高表達(dá)BCL-2的CTCs的患者預(yù)后好[29],這一現(xiàn)象需要進(jìn)一步的研究結(jié)果來解釋。

    現(xiàn)有的研究表明腫瘤具有極大的異質(zhì)性。在其發(fā)生發(fā)展過程中,腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells,CSCs)是腫瘤持續(xù)生長(zhǎng)的主要原因。而EMT與腫瘤轉(zhuǎn)移緊密相關(guān),科學(xué)家大膽猜測(cè)并驗(yàn)證原發(fā)瘤來源的CTCs是一個(gè)異質(zhì)性極高的群體,該群體中可能包含不同表型的亞群。不同亞群的CTCs可能具有不同的生物學(xué)特征,如EMT樣CTCs、CSCs樣CTCs和轉(zhuǎn)移起始細(xì)胞(metastasis initiate cells,MIC)樣CTCs。器官靶向性轉(zhuǎn)移的CTCs和耐藥相關(guān)CTCs直接與腫瘤轉(zhuǎn)移及耐藥相關(guān)。

    2012年,關(guān)于胰腺癌的研究發(fā)現(xiàn),在胰腺原位癌形成之前,腫瘤細(xì)胞發(fā)生EMT進(jìn)入血液循環(huán),定植在肝臟中,最終形成轉(zhuǎn)移灶[30],說明EMT在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要的作用。對(duì)EMT的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),間質(zhì)型的腫瘤細(xì)胞容易進(jìn)入血管但是不易發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移[31-32],大家逐漸認(rèn)為介于上皮性和間質(zhì)型的腫瘤細(xì)胞可能具有腫瘤干細(xì)胞樣的特征[33]。那么,是否可以根據(jù)E型或M型標(biāo)記物來鑒定CTCs亞群呢?2013年Yu等[34]對(duì)11個(gè)乳腺癌患者CTCs進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)很少有細(xì)胞同時(shí)表達(dá)E-M型,在跟蹤一例患者治療過程中CTC表型的動(dòng)態(tài)變化時(shí),發(fā)現(xiàn)E-M表型的比例隨著患者疾病狀態(tài)發(fā)生改變。其中間質(zhì)型CTCs在患者疾病進(jìn)展期比例明顯增高,在間質(zhì)細(xì)胞團(tuán)簇中發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的TGF-β,血小板分泌TGF-β促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向間質(zhì)型轉(zhuǎn)變,而血小板在腫瘤的著床黏附的過程中發(fā)揮重要的作用; 這提示在腫瘤進(jìn)展中M-型的CTCs可作為耐藥標(biāo)志物和新的治療靶點(diǎn)。Baccelli等[35]發(fā)現(xiàn)在與乳腺癌患者預(yù)后更具相關(guān)性的是EpCAM+CD44+CD47+MET+CTCs,而不是所有的EpCAM+CTCs,同時(shí)在小鼠模型中證實(shí)EpCAM+CD44+CD47+MET+CTCs具有更強(qiáng)的腫瘤形成能力和遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移能力。前期研究表明,腫瘤的轉(zhuǎn)移具有器官偏好性,CTCs的分群將來可用于轉(zhuǎn)移病灶的確定。2013年,Zhang[36]從乳腺癌患者的CTCs中鑒定出EpCAM-HER2+/EGFR+/HPSE+/Notch1+CTCs具有特異性腦部轉(zhuǎn)移。2015年,在結(jié)直腸癌中,發(fā)現(xiàn)CD110+的腸癌干細(xì)胞有非常強(qiáng)的靶向轉(zhuǎn)移到肝臟的潛能[37]。

    在CTC的基因水平上,對(duì)轉(zhuǎn)移性前列腺癌的CTCs進(jìn)行全外顯子測(cè)序發(fā)現(xiàn)CTCs中僅70%的突變發(fā)生在原發(fā)瘤和淋巴轉(zhuǎn)移樣本,而在CTCs中可發(fā)現(xiàn)原發(fā)瘤和淋巴轉(zhuǎn)移樣本中90%的驅(qū)動(dòng)突變和轉(zhuǎn)移相關(guān)突變,提示CTCs可能作為新的治療靶點(diǎn)[38]。同年Yu等[39]在乳腺癌中也發(fā)現(xiàn)CTCs比原發(fā)腫瘤具有更多的新增突變,根據(jù)突變結(jié)果進(jìn)行藥物敏感測(cè)試發(fā)現(xiàn),CTCs細(xì)胞系的藥物敏感程度與患者一致,不同的突變特征對(duì)同一治療方案的敏感程度不同,提示CTCs的基因突變信息可指導(dǎo)腫瘤患者的治療方案的選擇。在非小細(xì)胞肺癌和轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌中均發(fā)現(xiàn)CTCs的突變位點(diǎn)能夠很大程度上覆蓋原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移病灶的突變。

    根據(jù)患者CTCs的DNA信息可以指導(dǎo)精準(zhǔn)醫(yī)療,那么根據(jù)RNA的信息是否能起到相同的作用?2012年在小鼠胰腺癌模型的外周血CTCs中發(fā)現(xiàn)Wnt2高表達(dá),抑制細(xì)胞的失巢凋亡,促進(jìn)細(xì)胞的非依賴性增長(zhǎng)[40]。最近Miyamoto等[41]通過對(duì)前列腺癌患者CTCs單細(xì)胞RNA測(cè)序發(fā)現(xiàn),Wnt5a異常高表達(dá)減弱了AR抑制劑的抗增殖效應(yīng),從而引發(fā)AR陽性細(xì)胞耐藥,導(dǎo)致患者治療失敗。

    結(jié)語綜上,相較于常規(guī)的腫瘤診斷途徑包括組織病理學(xué)分析和高分辨率在體成像技術(shù),CTCs的檢測(cè)可無創(chuàng)取樣,并可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)患者病情。目前除了對(duì)CTCs的檢測(cè)技術(shù)和生物學(xué)特性的研究外,還有體外創(chuàng)建CTCs細(xì)胞系[42],利用CTCs來源的小鼠腫瘤模型和類器官模型[43]進(jìn)行藥物敏感性的預(yù)臨床試驗(yàn)和藥物敏感性分析[44]的探索。對(duì)CTCs的檢測(cè)與生物學(xué)特性的分析將有助于腫瘤患者早期轉(zhuǎn)移的診斷、輔助精確臨床分期、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)術(shù)后患者腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移、評(píng)估預(yù)后及合理地選擇個(gè)體化的治療策略。

    參考文獻(xiàn)

    [1]TALMADGE JE,FIDLER IJ.AACR centennial series:the biology of cancer metastasis:historical perspective[J].CancerRes,2010,70 (14):5649-5669.

    [2]PANTEL K,ALIX-PANABIERES C,RIETHDORF S.Cancer micrometastases[J].NatRevClinOncol,2009,6 (6):339-351.

    [3]KIM MY,OSKARSSON T,ACHARYYA S,etal. Tumor self-seeding by circulating cancer cells[J].Cell,2009,139 (7):1315-1326.

    [4]BIDARD FC,FERRAND FR,HUGUET F,etal.Disseminated and circulating tumor cells in gastrointestinal oncology[J].CritRevOncolHematol,2012,82 (2):103-115.

    [5]TALASAZ AH,POWELL AA,HUBER DE,etal.Isolating highly enriched populations of circulating epithelial cells and other rare cells from blood using a magnetic sweeper device[J].ProcNatlAcadSciUSA,2009,106 (10):3970-3975.

    [6]HARB W,FAN A,TRAN T,etal.Mutational analysis of circulating tumor cells using a novel microfluidic collection device and qPCR assay[J].TranslOncol,2013,6 (5):528-538.

    [7]CASAVANT BP,GUCKENBERGER DJ,BERRY SM,etal.The VerIFAST:an integrated method for cell isolation and extracellular/intracellular staining[J].LabChip,2013,13 (3):391-396.

    [8]STOTT SL,HSU CH,TSUKROV DI,etal.Isolation of circulating tumor cells using a microvortex-generating herringbone-chip[J].ProcNatlAcadSciUSA,2010,107 (43):18392-18397.

    [9]LIANIDOU ES,STRATI A,MARKOU A.Circulating tumor cells as promising novel biomarkers in solid cancers[J].CritRevClinLabSci,2014,51 (3):160-171.

    [10]KARABACAK NM,SPUHLER PS,FACHIN F,etal.Microfluidic,marker-free isolation of circulating tumor cells from blood samples[J].NatProtoc,2014,9 (3):694-710.

    [11]SARIOGLU AF,ACETO N,KOJIC N,etal.A microfluidic device for label-free,physical capture of circulating tumor cell clusters[J].NatMethods,2015,12 (7):685-691.

    [12]LIN M,CHEN JF,LU YT,etal.Nanostructure embedded microchips for detection,isolation,and characterization of circulating tumor cells[J].AccChemRes,2014,47 (10):2941-2950.

    [13]ZHENG S,LIN H,LIU JQ,etal.Membrane microfilter device for selective capture,electrolysis and genomic analysis of human circulating tumor cells[J].JChromatogrA,2007,1162 (2):154-161.

    [14]TAN SJ,YOBAS L,LEE GY,etal.Microdevice for the isolation and enumeration of cancer cells from blood[J].BiomedMicrodevices,2009,11 (4):883-892.

    [15]VONA G,SABILE A,LOUHA M,etal.Isolation by size of epithelial tumor cells:a new method for the immunomorphological and molecular characterization of circulatingtumor cells[J].AmJPathol,2000,156 (1):57-63.

    [16]CRISTOFANILLI M,BUDD GT,ELLIS MJ,etal.Circulating tumor cells,disease progression,and survival in metastatic breast cancer[J].NEnglJMed,2004,351 (8):781-791.

    [17]DE BONO JS,SCHER HI,MONTGOMERY RB,etal.Circulating tumor cells predict survival benefit from treatment in metastatic castration-resistant prostate cancer[J].ClinCancerRes,2008,14 (19):6302-6309.

    [18]COHEN S J,ALPAUGH R K,GROSS S,etal.Isolation and characterization of circulating tumor cells in patients with metastatic colorectal cancer[J].ClinColorectalCancer,2006,6 (2):125-132.

    [19]SUN YF,XU Y,YANG XR,etal.Circulating stem cell-like epithelial cell adhesion molecule-positive tumor cells indicate poor prognosis of hepatocellular carcinoma after curative resection[J].Hepatology,2013,57 (4):1458-1468.

    [20]YANG JD,CAMPION MB,LIU MC,etal.Circulating tumor cells are associated with poor overall survival in patients with cholangiocarcinoma[J].Hepatology,2016,63(1):148-158.

    [21]HOU JM,KREBS MG,LANCASHIRE L,etal.Clinical significance and molecular characteristics of circulating tumor cells and circulating tumor microemboli in patients with small-cell lung cancer[J].JClinOncol,2012,30 (5):525-532.

    [22]KREBS MG,SLOANE R,PRIEST L,etal.Evaluation and prognostic significance of circulating tumor cells in patients with non-small-cell lung cancer[J].JClinOncol,2011,29 (12):1556-1563.

    [23]GUO W,YANG XR,SUN YF,etal.Clinical significance of EpCAM mRNA-positive circulating tumor cells in hepatocellular carcinoma by an optimized negative enrichment and qRT-PCR-based platform[J].ClinCancerRes,2014,20 (18):4794-4805.

    [24]MIN AL,CHOI JY,WOO HY,etal.High expression of Snail mRNA in blood from hepatocellular carcinoma patients with extra-hepatic metastasis[J].ClinExpMetastasis,2009,26 (7):759-767.

    [25]STOTT SL,LEE RJ,NAGRATH S,etal.Isolation and characterization of circulating tumor cells from patients with localized and metastatic prostate cancer[J].SciTranslMed,2010,2 (25):23r-25r.

    [26]SCHER HI,JIA X,DE BONO JS,etal.Circulating tumour cells as prognostic markers in progressive,castration-resistant prostate cancer:a reanalysis of IMMC38 trial data[J].LancetOncol,2009,10 (3):233-239.

    [27]MENG S,TRIPATHY D,FRENKEL EP,etal.Circulating tumor cells in patients with breast cancer dormancy[J].ClinCancerRes,2004,10 (24):8152-8162.

    [28]BIDARD FC,PEETERS DJ,FEHM T,etal.Clinical validity of circulating tumour cells in patients with metastatic breast cancer:a pooled analysis of individual patient data[J].LancetOncol,2014,15 (4):406-414.

    [29]SMERAGE JB,BUDD GT,DOYLE GV,etal.Monitoring apoptosis and Bcl-2 on circulating tumor cells in patients with metastatic breast cancer[J].MolOncol,2013,7 (3):680-692.

    [30]RHIM AD,MIREK ET,AIELLO NM,etal.EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation[J].Cell,2012,148 (1-2):349-361.

    [31]LABELLE M,BEGUM S,HYNES RO.Direct signaling between platelets and cancer cells induces an epithelial-mesenchymal-like transition and promotes metastasis[J].CancerCell,2011,20 (5):576-590.

    [32]KANG Y,PANTEL K.Tumor cell dissemination:emerging biological insights from animal models and cancer patients[J].CancerCell,2013,23 (5):573-581.

    [33]ALIX-PANABIERES C,PANTEL K.Challenges in circulating tumour cell research[J].NatRevCancer,2014,14 (9):623-631.

    [34]YU M,BARDIA A,WITTNER BS,etal.Circulating breast tumor cells exhibit dynamic changes in epithelial and mesenchymal composition[J].Science,2013,339 (6119):580-584.

    [35]BACCELLI I,SCHNEEWEISS A,RIETHDORF S,etal.Identification of a population of blood circulating tumor cells from breast cancer patients that initiates metastasis in xenograft assay[J].NatBiotechnol,2013,31(6):539-544.

    [36]ZHANG L,RIDGWAY LD,WETZEL MD,etal.The identification and characterization of breast cancer CTCs competent for brain metastasis[J].SciTranslMed,2013,5 (180):148r-180r.

    [37]WU Z,WEI D,GAO W,etal.TPO-induced metabolic reprogramming drives liver metastasis of colorectal cancer CD110+ tumor-initiating cells[J].CellStemCell,2015,17 (1):47-59.

    [38]LOHR JG,ADALSTEINSSON VA,CIBULSKIS K,etal.Whole-exome sequencing of circulating tumor cells provides a window into metastatic prostate cancer[J].NatBiotechnol,2014,32 (5):479-484.

    [39]YU M,BARDIA A,ACETO N,etal.Cancer therapy.Exvivoculture of circulating breast tumor cells for individualized testing of drug susceptibility[J].Science,2014,345 (6193):216-220.

    [40]YU M,TING DT,STOTT SL,etal.RNA sequencing of pancreatic circulating tumour cells implicates WNT signalling in metastasis[J].Nature,2012,487 (7408):510-513.

    [41]MIYAMOTO DT,ZHENG Y,WITTNER BS,etal.RNA-Seq of single prostate CTCs implicates noncanonical Wnt signaling in antiandrogen resistance[J].Science,2015,349 (6254):1351-1356.

    [42]CAYREFOURCQ L,MAZARD T,JOOSSE S,etal.Establishment and characterization of a cell line from human circulating colon cancer cells[J].CancerRes,2015,75 (5):892-901.

    [43]GAO D,VELA I,SBONER A,etal.Organoid cultures derived from patients with advanced prostate cancer[J].Cell,2014,159 (1):176-187.

    [44]HODGKINSON CL,MORROW CJ,LI Y,etal.Tumorigenicity and genetic profiling of circulating tumor cells in small-cell lung cancer[J].NatMed,2014,20 (8):897-903.

    The biological characteristics and significance of circulating tumor cells in patients with solid malignancies

    ZHANG Kai-li2,GAO Xiao-mei2,QIN Lun-xiu1,2,3△

    (1DepartmentofGeneralSurgery,HuashanHospital,FudanUniversity,Shanghai200040,China;2CancerMetastasisInstitute,FudanUniversity,Shanghai200040,China;3InstituteofBiomedicalSciences,FudanUniversity,Shanghai200032,China)

    【Abstract】Circulating tumor cells (CTCs) are necessary for tumor recurrence and distal metastasis.With the development and progress in the detection technologies of CTCs,more and more attentions have been focused on the biological characteristics and their potential clinical application of CTCs.Cumulating evidence suggests that CTCs are closely related to the prognosis of cancer patients,and may be used in personized cancer treatment.

    【Key words】circulating tumor cell;tumor metastasis;cancer therapy

    【中圖分類號(hào)】R 730

    【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B

    doi:10.3969/j.issn.1672-8467.2016.01.017

    (收稿日期:2015-11-06;編輯:張秀峰)

    △Corresponding authorE-mail:qinlx@fudan.edu.cn

    老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲一区二区三区色噜噜| svipshipincom国产片| 在线观看午夜福利视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 99久久99久久久精品蜜桃| 91麻豆av在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲成人国产一区在线观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 首页视频小说图片口味搜索| 午夜福利在线观看吧| 国产黄a三级三级三级人| 午夜福利18| 亚洲欧美日韩东京热| 校园春色视频在线观看| 日本一二三区视频观看| 亚洲av电影在线进入| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 亚洲电影在线观看av| 中文字幕高清在线视频| 成人亚洲精品av一区二区| 午夜福利视频1000在线观看| 国产亚洲精品av在线| 91av网站免费观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 悠悠久久av| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 国产真实乱freesex| 我要搜黄色片| 美女黄网站色视频| 亚洲真实伦在线观看| 久久国产精品影院| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲av电影不卡..在线观看| 久久久国产成人免费| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 亚洲男人天堂网一区| 男女午夜视频在线观看| 一区二区三区激情视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 丁香六月欧美| 精品久久久久久成人av| 免费在线观看黄色视频的| 人成视频在线观看免费观看| 久久精品影院6| 99re在线观看精品视频| 两个人的视频大全免费| 国内精品一区二区在线观看| 一级毛片精品| www.精华液| 国产成人av教育| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲无线在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 91字幕亚洲| 久久国产精品影院| 成人永久免费在线观看视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲欧美精品综合久久99| 麻豆成人午夜福利视频| 欧美在线一区亚洲| 黄色视频不卡| 婷婷六月久久综合丁香| 国产高清视频在线播放一区| 超碰成人久久| 一级毛片女人18水好多| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 精品熟女少妇八av免费久了| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲人成77777在线视频| 国产精品久久久久久精品电影| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 欧美极品一区二区三区四区| 午夜精品在线福利| 欧美zozozo另类| 久久精品综合一区二区三区| 国产精品av视频在线免费观看| 男人舔女人的私密视频| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲国产精品合色在线| 91在线观看av| 免费观看精品视频网站| 免费在线观看日本一区| 怎么达到女性高潮| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| www.www免费av| 18禁美女被吸乳视频| 国产一区二区在线av高清观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 精品久久久久久,| 午夜福利高清视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 无限看片的www在线观看| 黄色a级毛片大全视频| 国产单亲对白刺激| 免费在线观看亚洲国产| 国产熟女午夜一区二区三区| 精品久久久久久久末码| 岛国在线免费视频观看| 91成年电影在线观看| 18禁国产床啪视频网站| 欧美高清成人免费视频www| 日韩欧美国产在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 在线观看日韩欧美| 老司机午夜福利在线观看视频| 麻豆成人午夜福利视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 日韩av在线大香蕉| 免费看美女性在线毛片视频| 国产午夜精品久久久久久| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲真实伦在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 看免费av毛片| 欧美中文综合在线视频| 成人三级做爰电影| 两人在一起打扑克的视频| 午夜老司机福利片| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| a级毛片在线看网站| 国产三级黄色录像| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产欧美日韩一区二区三| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产在线观看jvid| 2021天堂中文幕一二区在线观| 大型黄色视频在线免费观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 又紧又爽又黄一区二区| 久久国产精品影院| 欧美成人午夜精品| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久香蕉精品热| 久久国产精品影院| 中文亚洲av片在线观看爽| 在线观看免费视频日本深夜| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲最大成人中文| 手机成人av网站| 又黄又爽又免费观看的视频| 手机成人av网站| 国产精品免费视频内射| 变态另类成人亚洲欧美熟女| av福利片在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 久久婷婷成人综合色麻豆| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产一区二区三区视频了| 久久久久久人人人人人| 神马国产精品三级电影在线观看 | 成年人黄色毛片网站| 制服诱惑二区| 国产麻豆成人av免费视频| 99久久精品国产亚洲精品| 女人被狂操c到高潮| 欧美中文日本在线观看视频| 成熟少妇高潮喷水视频| 成人18禁在线播放| 欧美久久黑人一区二区| 看免费av毛片| 亚洲av成人一区二区三| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 欧美日韩瑟瑟在线播放| av福利片在线观看| 亚洲精品在线美女| 免费在线观看影片大全网站| 日韩欧美国产一区二区入口| 久久久国产欧美日韩av| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久这里只有精品中国| 色噜噜av男人的天堂激情| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 婷婷精品国产亚洲av| 99国产精品一区二区三区| 免费在线观看日本一区| 国产人伦9x9x在线观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久久国产成人精品二区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 亚洲人成电影免费在线| 午夜福利视频1000在线观看| 在线观看午夜福利视频| 中亚洲国语对白在线视频| 高清毛片免费观看视频网站| 免费搜索国产男女视频| 午夜亚洲福利在线播放| 国产精品av久久久久免费| 动漫黄色视频在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 午夜两性在线视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 久热爱精品视频在线9| 婷婷精品国产亚洲av| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲av五月六月丁香网| 99国产精品一区二区三区| 国产精品98久久久久久宅男小说| 免费无遮挡裸体视频| 成人国产综合亚洲| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲国产欧美网| 一级毛片精品| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产野战对白在线观看| 精品国产亚洲在线| 国产99白浆流出| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲专区中文字幕在线| 国产爱豆传媒在线观看 | 99久久久亚洲精品蜜臀av| 激情在线观看视频在线高清| 熟女电影av网| 久久香蕉精品热| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 婷婷精品国产亚洲av在线| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 久久久久久人人人人人| 久久精品人妻少妇| 又粗又爽又猛毛片免费看| 久久精品人妻少妇| 午夜福利在线在线| 久久精品人妻少妇| 2021天堂中文幕一二区在线观| 两个人免费观看高清视频| 婷婷六月久久综合丁香| 国产av一区二区精品久久| 国产私拍福利视频在线观看| 88av欧美| 国产成年人精品一区二区| 岛国视频午夜一区免费看| 欧美在线黄色| 男女床上黄色一级片免费看| 哪里可以看免费的av片| 国产亚洲欧美在线一区二区| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久久久久久精品吃奶| av超薄肉色丝袜交足视频| 国产精品 国内视频| 操出白浆在线播放| 成年免费大片在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品久久电影中文字幕| √禁漫天堂资源中文www| 波多野结衣巨乳人妻| 一本综合久久免费| 亚洲av五月六月丁香网| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| ponron亚洲| 久久人人精品亚洲av| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲av美国av| 日韩三级视频一区二区三区| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 精品乱码久久久久久99久播| 极品教师在线免费播放| 岛国在线免费视频观看| 99riav亚洲国产免费| 亚洲人与动物交配视频| 无人区码免费观看不卡| 国产区一区二久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久热在线av| 天天一区二区日本电影三级| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲专区中文字幕在线| 搡老岳熟女国产| 亚洲国产欧美人成| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 制服诱惑二区| 日韩高清综合在线| 成年女人毛片免费观看观看9| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 1024香蕉在线观看| 国产精品九九99| a级毛片a级免费在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 一级a爱片免费观看的视频| 国产精品九九99| 18禁美女被吸乳视频| 一本久久中文字幕| 操出白浆在线播放| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 一进一出抽搐动态| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品第一国产精品| 91在线观看av| 午夜视频精品福利| 亚洲国产精品999在线| 久久久久久久久久黄片| 丝袜美腿诱惑在线| 久久久国产成人免费| 精品欧美一区二区三区在线| 国产亚洲精品av在线| 欧美乱色亚洲激情| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| www.999成人在线观看| 岛国在线免费视频观看| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产单亲对白刺激| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲av成人一区二区三| 国产精品1区2区在线观看.| 一区二区三区高清视频在线| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 日韩欧美免费精品| 午夜免费激情av| 欧美色欧美亚洲另类二区| 中文字幕最新亚洲高清| 人人妻人人看人人澡| 国产爱豆传媒在线观看 | 亚洲黑人精品在线| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 精品午夜福利视频在线观看一区| 在线观看舔阴道视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 99国产极品粉嫩在线观看| 岛国视频午夜一区免费看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产亚洲欧美98| 欧美一级a爱片免费观看看 | 国产精品九九99| 免费搜索国产男女视频| 老司机午夜十八禁免费视频| 男男h啪啪无遮挡| 麻豆成人av在线观看| 日本五十路高清| 欧美黑人欧美精品刺激| 日本一二三区视频观看| 国产v大片淫在线免费观看| 国产精品野战在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 97碰自拍视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 两性夫妻黄色片| 成人三级做爰电影| 国产精品国产高清国产av| 久久欧美精品欧美久久欧美| 欧美性猛交黑人性爽| 桃红色精品国产亚洲av| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲电影在线观看av| 亚洲国产看品久久| 嫩草影院精品99| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 黑人欧美特级aaaaaa片| 又黄又爽又免费观看的视频| 一a级毛片在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 成人手机av| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲最大成人中文| 久久久久亚洲av毛片大全| 十八禁网站免费在线| 最近最新中文字幕大全免费视频| 99精品久久久久人妻精品| 国产片内射在线| 国内精品一区二区在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产精品精品国产色婷婷| 久久香蕉激情| 亚洲在线自拍视频| ponron亚洲| 日本精品一区二区三区蜜桃| 久久精品91无色码中文字幕| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 全区人妻精品视频| 国产高清激情床上av| av超薄肉色丝袜交足视频| 欧美一级毛片孕妇| 男男h啪啪无遮挡| 一区二区三区高清视频在线| 91成年电影在线观看| 久9热在线精品视频| 观看免费一级毛片| 在线观看66精品国产| 美女黄网站色视频| 国产精品久久视频播放| 欧美极品一区二区三区四区| 在线观看66精品国产| 国内揄拍国产精品人妻在线| 床上黄色一级片| 99久久国产精品久久久| 精品国内亚洲2022精品成人| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 男女视频在线观看网站免费 | 婷婷精品国产亚洲av| 欧美性猛交黑人性爽| av福利片在线| 国产精品一区二区免费欧美| 在线观看www视频免费| 国产精品免费一区二区三区在线| 日日干狠狠操夜夜爽| 夜夜夜夜夜久久久久| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产成人系列免费观看| 日本a在线网址| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 97碰自拍视频| 岛国在线免费视频观看| 99久久综合精品五月天人人| 中文资源天堂在线| 国产野战对白在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 亚洲天堂国产精品一区在线| 小说图片视频综合网站| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美中文日本在线观看视频| 香蕉久久夜色| 久久这里只有精品中国| a级毛片在线看网站| 久久 成人 亚洲| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲成a人片在线一区二区| 老汉色∧v一级毛片| 中文字幕熟女人妻在线| 欧美日韩福利视频一区二区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品久久久av美女十八| 最近最新中文字幕大全免费视频| 老司机福利观看| 亚洲精品在线美女| 波多野结衣高清作品| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 黑人操中国人逼视频| 久久国产乱子伦精品免费另类| 精品国产乱码久久久久久男人| x7x7x7水蜜桃| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产免费av片在线观看野外av| 麻豆av在线久日| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产三级中文精品| 日韩欧美免费精品| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 欧美日韩黄片免| 国产精品一区二区三区四区久久| 午夜精品在线福利| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲专区中文字幕在线| 色综合站精品国产| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 老司机在亚洲福利影院| 国产私拍福利视频在线观看| 久久久久性生活片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 久久亚洲精品不卡| 精品久久久久久久末码| 制服人妻中文乱码| 一区二区三区高清视频在线| 亚洲一码二码三码区别大吗| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产私拍福利视频在线观看| 久久九九热精品免费| 国产激情欧美一区二区| www日本黄色视频网| 国产精品 国内视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 99热这里只有是精品50| 美女大奶头视频| 麻豆av在线久日| 免费观看精品视频网站| 欧美一区二区精品小视频在线| 床上黄色一级片| 欧美黄色淫秽网站| 日本黄大片高清| 国产精品一区二区三区四区久久| 一a级毛片在线观看| 午夜老司机福利片| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久中文看片网| 在线观看免费日韩欧美大片| 中文字幕高清在线视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产av一区在线观看免费| 成人特级黄色片久久久久久久| 欧美日韩乱码在线| 欧美大码av| www日本黄色视频网| 久久精品成人免费网站| 在线国产一区二区在线| 免费看a级黄色片| 亚洲av美国av| 99riav亚洲国产免费| 校园春色视频在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 大型av网站在线播放| 中文字幕av在线有码专区| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 麻豆av在线久日| 脱女人内裤的视频| 国产在线观看jvid| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| www日本在线高清视频| 日本 av在线| 成人国语在线视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 久热爱精品视频在线9| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久热在线av| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 久久九九热精品免费| 成人永久免费在线观看视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 在线观看日韩欧美| 岛国在线观看网站| 淫秽高清视频在线观看| 一进一出好大好爽视频| 欧美日韩一级在线毛片| 又黄又爽又免费观看的视频| 一进一出好大好爽视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 99热这里只有精品一区 | 99久久国产精品久久久| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲九九香蕉| 亚洲在线自拍视频| 亚洲真实伦在线观看| 久久久久国内视频| 国产高清videossex| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 久久精品影院6| 一进一出抽搐动态| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 在线观看午夜福利视频| 婷婷精品国产亚洲av| 免费搜索国产男女视频| 婷婷亚洲欧美| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 91成年电影在线观看| 国产1区2区3区精品| 国产午夜精品久久久久久| 看免费av毛片| 免费高清视频大片| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产91精品成人一区二区三区| 国产成人啪精品午夜网站| 色噜噜av男人的天堂激情| 婷婷丁香在线五月| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲欧美精品综合久久99| 美女免费视频网站| 欧美成人免费av一区二区三区| 美女免费视频网站| 欧美成人免费av一区二区三区| 一级a爱片免费观看的视频| 精品久久蜜臀av无| av国产免费在线观看| 婷婷丁香在线五月| 日韩精品免费视频一区二区三区| 欧美极品一区二区三区四区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 99久久精品国产亚洲精品| 国产视频一区二区在线看| 成人午夜高清在线视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 色综合欧美亚洲国产小说| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 在线永久观看黄色视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 欧美黄色片欧美黄色片| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 黄色视频不卡| 人人妻人人看人人澡| 99国产综合亚洲精品| 国产免费男女视频| 欧美zozozo另类| 在线a可以看的网站| 禁无遮挡网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产精品影院久久| 国产97色在线日韩免费| 巨乳人妻的诱惑在线观看|